地肤子总黄酮对对乙酰氨基酚所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨地肤子总黄酮(FFK)对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法选取一月龄SPF级昆明种小鼠36只,体重(20±2)g,雌雄各半,按随机数字表法将其分为FFK低、中、高剂量组(75、150、300 mg/kg)和阳性药对照组(联苯双酯,150 mg/kg)、空白对照组(等量生理盐水)、对乙酰氨基酚模型组(等量生理盐水),每组6只。连续灌胃给药7 d后,空白对照组腹腔注射生理盐水(0.1 ml/10 g),其余各组腹腔注射对乙酰氨基酚(350 mg/kg)建立小鼠急性肝损伤模型。24 h后,检测各组血清中的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)及肝脏组织中的脂质过氧化物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组肝脏组织病理学变化。结果对乙酰氨基酚模型组GPT、GOT、MDA高于空白对照组,SOD低于空白对照组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。FFK低剂量组各指标与对乙酰氨基酚模型组比较,差异无统计学意义(P> 0.05)。FFK中、高剂量组GPT、GOT、MDA低于对乙酰氨基酚模型组和FFK低剂量组,SOD高于...     

ω-3多不饱和脂肪酸对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及机制。方法选取健康C57BL/6雌性野生型小鼠(WT组)和Fat-1转基因雌性小鼠(Fat-1组)各24只,采用腹腔注射APAP法建立小鼠急性肝损伤模型,分别于APAP腹腔注射后0、2、6、24 h应用CO_2法每组处死6只小鼠,采集小鼠肝组织和静脉血。应用丙氨酸转氨酶(ALT)检测试剂盒测定小鼠血清ALT水平,苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肝组织形态学变化,Western blot法检测小鼠肝组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化AMPK(p-AMPK)水平。取HepaRG细胞,应用APAP孵育6 h诱导HepaRG细胞凋亡,换培养液后将细胞分为APAP+二十二碳六烯酸(DHA)组和APAP+二甲基亚砜(DMSO)组,APAP+DHA组在培养基中加入DHA,APAP+DMSO组在培养基中加入DMSO;分别于处理0、3、6 h时收集HepaRG细胞,采用Western blot法检测HepaRG细胞中AMPK和p-AMPK表达水平。取HepaRG细胞并随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)+DHA组、PBS+DMSO组、APAP+DHA组和APAP+DMSO组,APAP+DHA组和APAP+DMSO组细胞应用APAP孵育6 h诱导HepaRG细胞凋亡,PBS+DHA组和PBS+DMSO组细胞加入PBS;换培养液后,APAP+DHA组和PBS+DHA组在培养基中加入DHA,APAP+DMSO组和PBS+DMSO组在培养基中加入DMSO;各组细胞继续温箱孵育6 h,收集细胞,采用流式细胞术检测各组HepaRG细胞凋亡情况。结果 2组小鼠腹腔注射APAP后2、6、24 h时血清ALT水平显著高于0 h时(P <0. 05);腹腔注射APAP后2、6、24 h时,Fat-1组小鼠血清ALT水平显著低于WT组(P <0. 05)。HE染色结果显示,腹腔注射APAP后24 h WT组小鼠肝细胞呈现不同程度的变性或坏死,细胞核溶解或固缩,肝细胞索正常形态被破坏并伴有明显的炎性细胞浸润;而Fat-1组小鼠肝脏组织病变较轻。腹腔注射APAP后2、6 h时Fat-1组小鼠肝组织中p-AMPK相对表达量显著高于WT组(P <0. 05); WT组小鼠腹腔注射APAP后2、6 h时肝组织中p-AMPK相对表达量显著低于0 h时(P <0. 05),Fat-1组小鼠腹腔注射APAP后0、2、6 h时肝组织中p-AMPK相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。腹腔注射APAP后0、2、6 h时2组小鼠肝组织中AMPK相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。APAP+DHA组HepaRG细胞处理3、6 h时p-AMPK相对表达量显著高于APAP+DMSO组(P <0. 05),APAP+DHA组和APAP+DMSO组HepaRG细胞处理3、6 h时p-AMPK相对表达量显著低于0 h时(P <0. 05); APAP+DHA组和APAP+DMSO组HepaRG细胞处理0、3、6 h时AMPK相对表达量比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。APAP+DMSO组、APAP+DHA组HepaRG细胞凋亡率均显著高于PBS+DMSO组和PBS+DHA组(P <0. 05),APAP+DHA组HepaRG细胞凋亡率显著低于APAP+DMSO组(P <0. 05),PBS+DMSO组与PBS+DHA组HepaRG细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论ω-3PUFA对APAP诱导的小鼠急性肝损伤有保护作用,其机制可能与ω-3PUFA促进AMPK通路活化有关。     

人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析

目的:构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻?重链表达载体,在293Free style 细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性?方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体pFUSE-CHIg-hG1和pFUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style 细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化?应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)?Western blot?免疫共沉淀?质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响?结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%?结论:重组全人源抗TLR4 IgG保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值?     

败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用

目的 败酱草是败酱科多年生草本植物黄花败酱、白花败酱的带根全草,具有多种药理活性.本文旨在探究败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用.方法 采用尾静脉注射对乙酰氨基酚将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、败酱草低剂量组、败酱草中剂量组、败酱草高剂量组、联苯双脂组.造模同时败酱草低、中、高剂量组每日灌胃败酱草...     

一种制备兔抗人IgG抗体的简易方法

目前,制备兔抗人ＩｇＧ的方法很多,但没有一个统一的具体方案,难以制备出理想的高效价抗体。我们根据抗体产生的基本原理,参照有关文献,探索出一种能得到高效价抗体的简易的方法,介绍如下：材料和方法１抗原制备参照文献［１、２］进行。选取多份健康人混合血清,新...     

鸡骨草提取物对对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤保护作用的研究

目的：研究鸡骨草提取物对对乙酰氨基酚（APAP）诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法：将40只健康的雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组（200 mg/kg N-乙酰-L-半胱氨酸）、鸡骨草提取物高、低剂量组（60 g/kg、30 g/kg）;连续给药8 d。末次给药5 h后,除正常组外,其余各组小鼠腹腔注射265 mg/kg APAP建立肝损伤模型,测定血清及肝脏组织相关生化指标,并对肝脏组织进行病理形态学检查;运用核磁共振氢谱（1H-NMR）代谢组学技术建立肝代谢物谱,分析鸡骨草提取物对APAP诱导小鼠急性肝损伤肝代谢轮廓变化和潜在生物标志物的影响。结果：与模型组比较,鸡骨草提取物各剂量组均能著降低谷草转氨酶（ALT）、谷丙转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）、白介素-6(IL-6)、一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达水平（P<0.05或P<0.01）,显著升高肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）水平（P<0.05或P<0.01）;鸡骨草提取物高剂量组显著降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL...     

蟛蜞菊内酯对对乙酰氨基酚致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探究蟛蜞菊内酯对对乙酰氨基酚引起的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用小鼠腹腔注射对乙酰氨基酚模拟肝损伤模型,观察蟛蜞菊内酯对肝的保护作用。将BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、蟛蜞菊内酯低剂量组和高剂量组(n=8)。通过检测小鼠血清中的丙氨酸转移酶(ALT)、天冬氨酸转移酶(AST);肝组织匀浆中的丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)指标,血清ELIA检测TNF-α、IL-6,结合肝的组织病理学检查,观察蟛蜞菊内酯对对乙酰氨基酚所致肝损伤的保护作用。结果模型组小鼠血清中的AST、ALT、GSH、MDA、IL-6以及TNF-α水平水平明显高于对照组(P0. 01),有统计学意义;蟛蜞菊内酯低剂量组和高剂量组的AST、ALT以及肝组织匀浆液中SOD和GSH-PX水平明显要高于模型组,且肝组织匀浆液中MDA、GSH水平以及小鼠血清中TNF-α、IL-6水平明显低于模型组(P0. 01),有统计学意义;模型组的GSH-PX和SOD水平明显低于对照组(P0. 01),有统计学意义。组织病理学苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)和细胞凋亡染色(Td T-mediated DUTP nick end labeling,TUNEL)显示蟛蜞菊内酯可明显减轻肝组织的坏死和凋亡。结论蟛蜞菊内酯对对乙酰氨基酚引起的急性肝损伤有明显的保护作用。     

外源性低浓度一氧化碳对小鼠急性肝损伤的保护作用研究

目的 研究外源性低浓度一氧化碳(CO)对D-氨基半乳糖(GAlN)和脂多糖(LPS)联合诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及机制.方法 将野生型C57BL/6小鼠分为正常对照组、CO对照组、肝损伤组和肝损伤+CO组(GalN/LPS+CO组),每组8只.肝损伤组小鼠经腹腔注射GalN(550 mg/kg)和LPS(15 mg/kg)造模.CO对照组:经腹腔注射纯品CO气体(15 ml/kg),6h后按8ml/kg剂量再注射一次,期间动态检测碳氧血红蛋白(HbCO)的水平变化.GalN/LPS+CO组:按同样方法注射CO气体,12h后再给予GalN/LPS染毒.染毒12h后检测各组小鼠的肝损伤指标、病理学指标、细胞凋亡和炎症因子(IL-1b、IL-6、IL-10和TNF-a)的水平变化.结果 小鼠给予GalN/LPS后发生严重急性肝损伤;与正常对照组或CO对照组相比,染毒组小鼠血浆ALT、AST和T-BIL水平均明显升高,大量肝细胞变性、坏死.小鼠腹腔注射低浓度CO使血HbCO的水平维持在8％～12％达12h以上,显著降低GalN/LPS染毒导致的ALT、AST和TBIL水平升高,同时明显减轻肝细胞凋亡和抑制炎症因子水平.结论 外源性低浓度CO可以减轻GalN/LPS诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与降低细胞凋亡和细胞因子的水平有关.     

黄芩苷对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤中蛋白质氧化及硝化的影响

目的：研究黄芩苷对对乙酰氨基酚（acetaminophen ,AAP）诱导小鼠肝损伤的保护作用及其可能的机制。方法采用腹腔注射AAP诱发小鼠肝损伤模型,检测血清谷丙转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性和肝匀浆中谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性;苏木精‐伊红（HE）染色观察肝脏病理形态学改变;免疫印迹法（Western blot）检测肝中羰基化蛋白（DNP）及硝化蛋白（3‐NT）的表达。结果与模型组比较,黄芩苷组血清ALT、AST活性明显低于模型组（P＜0.05或 P＜0.01）;肝匀浆SOD和GSH活性较模型组明显升高（均 P＜0.05）;光镜下显示黄芩苷组肝脏病理损伤有所减轻,高剂量组（100 mg/kg）与联苯双酯组效果相同;Western blot结果显示,随着黄芩苷剂量的增加,小鼠肝组织中分子量分别为100、45、34 kD的蛋白质羰基化水平降低;分子量分别为60、37、25 kD的3种蛋白质硝化程度下降。结论黄芩苷对AAP诱导小鼠肝损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制肝脏蛋白质氧化和硝化有关。     

人源抗Trop-2抗体Fab的制备及条件优化

目的:探讨人源抗Trop-2抗体片段Fab在大肠杆菌中的诱导表达,优化蛋白表达及纯化的条件?方法:将含有抗Trop-2 Fab 抗体基因的质粒转化宿主菌E.coli TOP10F ′大肠杆菌,比较诱导前培养液更换对抗Trop-2 Fab片段表达量的影响;比较不同诱导温度?诱导时间及诱导前加入葡萄糖对蛋白表达的影响;大量表达的抗Trop-2 Fab经亲和层析纯化后,用免疫荧光和流式细胞术检测其免疫学特性?结果:在培养液中加入5 g/L的葡萄糖,人源抗Trop-2抗体Fab片段的表达产量明显增加;16℃的诱导温度比其它温度能表达更多的Fab分子;加诱导剂12 h,目的蛋白的表达量至峰值?结论:本实验结果为在原核系统中大量制备抗Trop-2抗体片段及后续的肿瘤靶向治疗提供了基础?     

定量ELISA检测小鼠血清中抗LDH-C4IgG2b抗体的水平

用定量ELISA的方法检测背部携带分泌抗LDH -C4IgG2b抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b抗体浓度 ,结果表明 :本法稳定 ,批间变异系数为 7 0 4%～ 13 30 % ,批内变异系数为 3 6 1%～ 10 2 0 % ;标准曲线相关性良好 ,相关系数从 0 96 2 884～ 0 996 795 ;灵敏度较高 ,最低检出浓度为 0 0 1mg/L ;特异性亦较好     

甘利欣对对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的保护作用及其机制的初步探讨

目的 观察甘利欣对对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的保护作用.方法 用AP诱发小鼠肝损伤,再用甘利欣腹腔内注射,测定血清转氨酶水平、肝匀浆谷胱甘肽含量及观察肝脏病理学改变,评价甘利欣对对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的保护作用.结果 甘利欣能保护AP引起的小鼠肝损伤,使血清转氨酶水平降低,肝匀浆谷胱甘肽含量增加,肝脏形态的病理损伤减轻.结论 甘利欣对AP引起的小鼠肝损伤具有明显的保护作用.     

人源性抗EB病毒IgG/VCA抗体在SCID小鼠中的诱导

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴结淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，２个月后，小鼠血清内产生人源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ／ＶＣＡ）。比较结果显示，用Ｂ９５－８细胞作为ＶＣＡ来源所诱导的实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２）。ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度，在１４只ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠中为１∶１０８和（９６．２±５６．４）μｇ／Ｌ；在８只ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠为１∶７．８和（１３．８４±６．０）μｇ／Ｌ。该结果提示，ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠较ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠更适合用于人源性特异ＩｇＧ的诱导。     

定量ELISA检测小鼠血清中抗LDH—C4 IgG2b抗体的水平

用定量ELISA的方法检测背部携带分泌抗LDH－C4 IgG2b抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b抗体浓度,结果表明，批间变异系数为7.04％－13.30％，批内变异系数为3.61％－10.20％；标准曲线相关性良好，相关系数从0.962884－0.996795；灵敏度较高，最低检出浓度为0.01mg/L；特异性亦较好。     

抗人球蛋白卡在孕妇IgG抗-A、抗-B抗体检测中的应用

目的:评估抗人球蛋白卡(即抗人球蛋白微柱凝胶反应卡)在孕妇IgG抗-A、抗-B抗体检测中的有效性和技术优势。方法:采用DTT对孕妇血清处理后作倍比稀释,再用抗人球蛋白卡进行IgG抗-A和或/抗-B效价测定,同时用试管抗人球蛋白法进行对照。结果:在200例标本测定中,抗人球蛋白卡与抗人球蛋白试管法反应强度和抗体效价符合率为98.5%,抗人球蛋白微柱凝胶卡测定抗体效价高于抗人球蛋白试管法一个稀释度的3例,占1.5%。结论:抗人球蛋白卡与抗人球蛋白试管法对IgG抗体效价测定结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。但抗人球蛋白卡方法更简便、操作更规范、更加标准化,方法也更灵敏,结果判定更容易,减少了抗人球蛋白试管法中很多人为因素的影响。     

人源性抗EB病毒IgG／VCA抗体在SCID小鼠中的诱导

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，２个月后，小鼠血清内产生了源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ／ＶＣＡ），比较结果显示，用ＥＢ９５－８细胞作为ＶＣＡ来源实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２），ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度，在１４只ＳＣＩＤ－ＰＬＮ     

抗人BPI抗体对猪源BPI体外生物活性的增强作用

目的：确认抗人杀菌性／通透性增加蛋白（Bactericidal/permeability increasing protein,BPI)多克隆抗体和单克隆抗体对猪源BPI杀菌及结合内毒素活性的增强作用。方法：采用肉汤培养法测定BPI在有或无抗人BPI抗体存在情况下猪源BPI对大肠杆菌J5的杀菌率变化；采用鲎基质显色法测定BP1与抗体孵育30min后其结合内毒素能力的改变。结果：抗人BPI多克隆抗体和单克隆抗体加入后，猪源BPI的杀菌活性不仅不降低，反而增加，而抗体本身并不具有杀菌性，非抗BPI抗体也无此效应；同时抗人BPI多克隆抗体和单克隆抗体可增加猪源BPI的结合内毒素活性。结论：抗人BPI多抗或单抗不仅能增加猪源BPI的杀菌活性，而且能增加其结合内毒素活性。     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对C48/80诱导P815细胞脱颗粒的影响

目的观察抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体(TSP-2)对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响。方法用RT-PCR、免疫组化检测了小鼠肥大细胞瘤P815细胞在mRNA水平的表达及膜表面TLR2与抗体TSP-2的结合;利用激光共聚焦显微镜观察小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒的影响。结果P815细胞在mRNA水平以及膜表面均有TLR2表达,抗体TSP-2能有效抑制C48/80诱导的肥大细胞瘤P815细胞脱颗粒反应所致的形态学改变与钙流出。结论抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2可与P815细胞膜表面TLR2结合,并能抑制C48/80诱导的P815肥大瘤细胞脱颗粒。     

平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织TLR2和TLR4表达的影响

目的:观察平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)和TLR4表达的影响.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、平喘颗粒(31.2 g·kg-1)组,每组10只.除对照组外,采用腹腔注射加雾化卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液[100μgOVA...     

人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响

目的 :观察人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞生物学特性的影响。方法 :流式细胞术和免疫荧光检测宫颈癌Hela细胞表面Trop-2蛋白的表达;划痕实验和Transwell检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用;CCK-8(cell counting kit-8)检测人源抗Trop-2 Fab对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:Hela细胞表面有Trop-2蛋白表达,人源抗Trop-2 Fab能够抑制Hela细胞的增殖,有效降低Hela细胞的迁移和侵袭能力,同时能够诱导Hela细胞凋亡。结论:人源抗Trop-2 Fab能明显降低宫颈癌细胞的恶性生物学行为,Trop-2可作为宫颈癌治疗的潜在靶点。