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相似文献
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1.
荧光探针定量PCR技术   总被引:9,自引:7,他引:2  
何蕴韶 《中国医药导刊》2001,3(4):307-308,306
PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。  相似文献   

2.
荧光定量聚合酶反应(FQ-PCR)是国内外近年发展起来的核酸检测技术,它在常规PCR基础上,加入了一条用荧光基因标记的特异性探讨。能克服常规PCR易受污、不可定量、准确度低的缺点,能更好地用于乙型肝炎病毒(HBV)的检测。本文就FQ-PCR的原理,标本收集和处理以及在HBV诊断中的影响因数和临床意义进行综述。  相似文献   

3.
新型Taq Man-MGB探针实时荧光定量PCR检测人类mdr1基因   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的人类mdr1基因的新型实时荧光定量PCR检测新方法。方法用Primer Express 2.0引物设计软件设计引物和MGB探针,以Taq Man-MGB探针技术为基础,运用Taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果所建立方法的最低检测限度为15个基因拷贝/反应,在待扩增DNA浓度为3.061×103 cps/ml-3.061×109cps/ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,决定系数r2为0.988243。结论应用Taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确性高等优点。  相似文献   

4.
FQ-PCR(fluorescence quantifive polymerase chain reaction,荧光定量聚合酶链式反应)是一种基于荧光能量传递技术的体外基因扩增技术。它与传统的对抗原抗体进行定性或半定量的检测方法相比,具有检出率高、工作效率高的优点,它还克服了传统PCR技术假阳性率高和无法确定初始模板浓度等问题。在病毒性肝炎的诊断和治疗中,该技术可用于监测病情,为预后和用药提供较为可靠的参考。本文在阐明FQ—PCR技术的基础上,对其常规和新兴的应用领域进行了介绍。  相似文献   

5.
目的:制备用于Satb2基因实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)的标准品。方法:提取胚胎上颌突组织总RNA,行逆转录反应获得第一链的cDNA,再通过PCR回收获得预期Satb2基因片段;通过T-A克隆将该片段插入pGMT质粒载体;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。结果:重组质粒经PCR扩增及序列测定表明,pGMT/Satb2基因已成功克隆。结论:所构建的pGMT/Satb2基因实时荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此法可作为实时荧光定量PCR检测Satb2基因的标准方法。  相似文献   

6.
目的建立一种比现有方法敏感、特异性高、重复性好的实时荧光定量PCR检测的新方法检测人类mdr1基因。方法以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,用Primerexpress2.0引物设计软件设计引物和TaqMan-MGB探针,建立荧光定量PCR检测方法。结果当待扩增DNA浓度在3.601×103cps/ml~3.601×109cps/ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,相关系数r2大于0.98。结论应用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确度高等优点,可作为进一步研究人类mdr1基因的方法。  相似文献   

7.
目的:建立一种简便、灵敏、准确而快速定量检测幽门螺杆菌(Hp)的方法,为临床诊断和药物疗效动态观察提供科学依据。方法:随机选择慢性胃病患者164例,在胃镜下取胃液2-3ml,应用荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)扩增技术,对幽门螺杆菌16SrRNA基因进行定量检测;同时在胃镜下为164例患者取病变部位的粘膜组织,进行W—S银染色作为对照组。结果:FQ—PCR法和胃粘膜组织Warthin—Starry(W—S)银染检测Hp阳性率分别为47.56%(78/164)和40.85%(67/164),两者的符合率为91.5%。结论:FQ—PCR方法是一种简便、准确、无创伤性基因诊断Hp的方法,便于临床推广应用。  相似文献   

8.
目的 选择并优化博尔纳病病毒荧光定量PCR TaqMan探针法反应体系中的扩增缓冲液,使PCR反应体系对该病毒p24模板基因的扩增效率得到明显提高.方法 通过常规PCR比较选择3种常用酸(盐酸、磷酸和硫酸)所滴定的缓冲液体系,在其基础上选择适合浓度的硫酸铵配制TSS buffer,在TSS buffer中分别加入四甲基...  相似文献   

9.
目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒(HCV)的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物先进行基因克隆,而后制备病毒样颗粒做为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达100IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可定性检测血浆或血清样本及血液制品中的人丙型肝炎病毒HCV的基因型及含量,对于该疾病的研究及临床治疗都具有重要的意义。  相似文献   

10.
丙型肝炎病毒 (HCV)是引起输血后肝炎的主要致病因子 ,在血中含量极微 ,免疫学标志仅有抗 HCV一项 ,而且抗 HCV出现较晚或不出现 ,所以单凭血清学诊断是不够的。为此 ,采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测血清中HCV RNA ,是确诊HCV感染的有效方法之一 ,可为制订治疗方案及疗效观察提供确切依据。1 材料与方法1 1 材料1.1.1 标本 :88份血清标本来源于哈尔滨医科大学第一临床医学院临床确诊的丙型肝炎患者。1.1.2 试剂 :①丙型肝炎 (HCV)核酸扩增 (PCR)荧光检测试剂盒 ,包括 :引物序列、荧光探针序列、RNA提取液、逆转录…  相似文献   

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