MK801抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的实验研究

目的研究NMDA受体1(NMDA receptor1,NMDAR1)抑制剂MK801对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制。方法建立人结肠癌HT-29细胞株裸鼠移植瘤模型,分为实验组和对照组,实验组给予MK801 0.6mg/(kg·d)腹腔注射给药,对照组腹腔注射等量生理盐水,给药4周后处死裸鼠并称取瘤重,采用免疫组织化学法检测2组肿瘤组织中NMDAR1的表达变化。结果实验组裸鼠的肿瘤体积明显小于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,实验组肿瘤组织中NMDAR1的表达明显减少(P0.01)。结论 NMDAR1抑制剂MK801通过抑制NMDAR1的表达来抑制人结肠癌裸鼠移植瘤的生长。     

替泊沙林对裸鼠结肠癌移植瘤的抑制作用

目的通过动物体内实验研究环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂（替泊沙林）对人结肠癌的抑制作用。方法 10只裸鼠皮下接种HT-29人结肠癌细胞建立人结肠癌模型,随机分为治疗组和对照组。治疗组以替泊沙林与5%羧甲基纤维素钠溶液制成的混悬液给药,对照组不作任何治疗。治疗期间观察裸鼠皮下瘤体的生长情况,测算肿瘤体积。治疗结束后处死裸鼠并取瘤,测量肿瘤质量,检测环氧合酶-2/5-脂氧合酶在肿瘤组织中的表达,用免疫组化方法检测肿瘤微血管密度,用脱氧核糖核苷酸末端转移法酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡情况。结果 10只裸鼠全部成瘤,实验过程中无裸鼠死亡。实验结果显示：替泊沙林可抑制HT-29人结肠癌细胞的生长,可降低环氧合酶-2/5-脂氧合酶在人结肠癌细胞所致肿瘤组织中的表达水平,对诱导人结肠癌细胞诱导的裸鼠皮下移植瘤具有促进肿瘤细胞凋亡及抑制肿瘤微血管生成作用。结论环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂替泊沙林可能通过促进结肠癌细胞的凋亡、抑制肿瘤微血管生成,从而抑制结肠肿瘤的生长。     

活体成像观察Ascl2-RNAi对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影晌

目的小动物活体成像直观观察转录因子Ascl2对结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建Ascl2的shRNA干扰质粒,对人结肠癌HT-29细胞进行瞬时转染48h,G418筛选、克隆挑取、扩增培养建立稳定转染的细胞系,采用小动物活体成像仪直观观察Ascl2-RNAi对裸鼠移植瘤生长的影响。结果成功构建Ascl2的shRNA干扰质粒,并进行测序验证;质粒转染HT-29细胞,经G418筛选后挑选稳定转染的克隆,进行扩增培养,成功建立稳定转染的细胞系,命名为shRNA-Ascl2／HT-29和shRNA-control／HT-29细胞,并采用Western-blot证实干扰效果（P〈0．01）;采用小动物活体成像仪直观观察发现Ascl2-RNAi抑制HT-29细胞裸鼠移植瘤的生长。结论Ascl2-RNAi导致结肠癌HT-29细胞体外致瘤能力下降,小动物活体成像技术直观、灵敏度高、实验成本低,值得进一步推广应用。     

CAPE对人结肠癌HT-29细胞生长抑制和凋亡的作用

目的 探讨咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的作用.方法 用不同浓度CAPE处理HT-29,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测CAPE对HT一29细胞的增殖抑制效应;采用AO/EB染色和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生.结果 CAPE对HT-29细胞的生长具有明显抑制作用,呈剂量和时间依赖性.AO/EB染色发现CAPE作用后凋亡细胞数量增加.流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,2.5、5.0、7.5、10 μg,/mL处理HT-29细胞24 h后,细胞凋亡率上升,呈剂量依赖性.结论 CAPE对人结肠癌HT-29细胞具有明显的生长抑制和诱导凋亡作用.     

塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的 研究不同剂量环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的影响及机制.方法 将人结肠癌HT-29细胞注射于裸鼠背部皮下建立移植瘤模型,16 d后,将裸鼠以随机数字表法分为5组:对照组、塞来昔布1组(25 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布2组(50 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布3组(75 mg·kg-1·d-1)、塞来昔布4组(100 mg·kg-1·d-1),并给予相应剂量的塞来昔布.每周测量肿瘤体积,给药35 d后,处死裸鼠,切取移植瘤组织检测COX-2,survivin表达, VEGF mRNA表达和微血管密度(MVD).结果 塞来昔布1、2、3、4组的抑瘤率分别为34.94%、39.20%、53.50%、59.20%,与对照组比较移植瘤体积明显缩小(P<0.05).与对照组比较,塞来昔布各组COX-2、survivin的表达水平均明显降低(P<0.05),并且抑制程度呈药物剂量依赖性.低剂量(25 mg·kg-1·d-1)塞来昔布可明显抑制VEGF mRNA表达和结肠癌移植瘤微血管生成(P<0.05,vs对照组),其抑制作用并未随用药剂量的增加而增强.结论 不同剂量的塞来昔布均能明显抑制结肠癌移植瘤的生长,其抑制作用呈用药剂量依赖性,这种作用可能是通过抑制survivin的表达实现的.低剂量塞来昔布可抑制人结肠癌裸鼠移植瘤微血管生成,可能对防止肿瘤转移起到重要作用.     

三氧化二砷对结肠癌作用的实验研究

目的探讨三氧化二砷在体外、体内对结肠癌的抗癌作用。方法Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术检测三氧化二砷诱导结肠癌细胞HT-29凋亡情况;建立HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,监测给药后肿瘤体积的变化,并通过对肿瘤组织标本K i67染色和TUNEL染色检测肿瘤细胞增殖和凋亡情况。结果流式细胞术结果显示,三氧化二砷体外可抑制结肠癌细胞的增殖、诱导凋亡,与对照组相比,差异显著P0.05。在体内,三氧化二砷可抑制HT-29裸鼠皮下移植瘤的生长,抑制肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,与对照组相比,差异显著,P0.05。结论在结肠癌中,三氧化二砷通过抑制增殖,诱导凋亡而发挥抗癌作用,是结肠癌治疗的良好药物。     

酒石酸锑钾对人结肠癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:观察酒石酸锑钾(PAT)对人结肠癌裸鼠移植瘤的抑瘤及凋亡诱导作用。方法:60只裸鼠皮下注射结肠癌SW480细胞建立移植瘤模型,随机分为4组,每组15只,分别腹腔内注射生理盐水、5-Fu及不同剂量的PAT,给药15 d,末次给药24 h后处死裸鼠,计算抑瘤率并观察肿瘤细胞的凋亡。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测肿瘤细胞凋亡。结果:PAT对人结肠癌裸鼠移植瘤生长有显著性抑制作用,肿瘤细胞凋亡增加;高剂量PAT组、低剂量PAT组和5-Fu组的凋亡指数高于生理盐水组,差异有显著性(P<0.05),高剂量PAT组的凋亡指数高于5-Fu组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:酒石酸锑钾可通过诱导结肠癌SW480细胞凋亡抑制结肠癌裸鼠移植瘤生长。     

β-榄香烯对HepG2和HT-29细胞体外抗癌作用的实验研究

目的探讨β-榄香烯对肝癌和结肠癌的作用，为临床上利用β-榄香烯治疗肿瘤提供理论依据。方法体外培养HepG2肝癌细胞和HT-29结肠癌细胞，用生长曲线和MTT法观察β-榄香烯对两种细胞生长的影响。结果β-榄香烯组在培养的第6d、第7d、第8d能显著抑削HT-29细胞增殖；β-榄香烯在培养的第6d能显著抑制HepO2细胞增殖；在第2d、在第3d、在第4d，与对照组相比，β-榄香烯对HT-29和HepG2细胞增殖的抑制作用显著（P〈0．05）。结论β-榄香烯能明显抑制体外培养的HT-29和HepG2细胞生长。     

人结肠癌肝转移裸鼠肝组织中端粒酶逆转录酶的表达

目的建立人结肠癌HT-29裸鼠肝转移模型,检测肝脏组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。方法Balb/c裸鼠30只,腹腔内注射戊巴比妥麻醉,经脾脏注入人结肠癌HT-29细胞悬液,并切除脾脏,建立裸鼠肝转移模型。处死动物后观察肿瘤生长情况,并作病理学检查;采用RT-PCR方法检测裸鼠肝脏组织中hTERT mRNA的表达。结果30只裸鼠均发生人结肠癌肝转移,肝转移率100%,病理学证实肝转移发生,肝脏组织中hTERTmRNA表达阳性。结论脾种植HT-29细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型,肝脏组织中hTERTmRNA阳性表达,提示hTERT在结肠癌肝转移早期诊治中的意义。     

裸鼠脾脏移植瘤模型在NGX6抗结肠癌转移作用研究中的应用

目的:建立结肠癌肝转移模型,为抑瘤基因NGX6功能研究提供体内试验平台.方法:将低分化结肠癌细胞系HT-29组(HT-29)、空白质粒转染组[pcDNA3.1( )/HT-29]、NGX6转染组[(pcDNA3.1( )/NGX6/HT-29)]细胞分别接种于裸鼠脾脏下极包膜内,每天称量裸鼠体质量并观察裸鼠摄食、活动及精神情况,45 d后处死裸鼠,分别从大体水平以及镜下观察肝、脾、肺、肾、脑等器官肿瘤转移情况.结果:pcDNA3.1( )/NGX6/HT-29组裸鼠较其他两组裸鼠肝脏转移灶数目明显减少、脾脏上种植瘤形成明显减少.结论:抑瘤基因NGX6抑制结肠癌HT-29细胞的转移,裸鼠脾内种植转移模型可作为新基因体内功能研究的理想模型.     

ANTITUMOR ACTIVITY OF IMMUNOCONJUGATES COMPOSED OF BOANMYCIN AND MONOCLONAL ANTIBODY

ＡＮＴＩＴＵＭＯＲＡＣＴＩＶＩＴＹＯＦＩＭＭＵＮＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳＣＯＭＰＯＳＥＤＯＦＢＯＡＮＭＹＣＩＮＡＮＤＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬＡＮＴＩＢＯＤＹ￥ＺｈｅｎＹｏｎｇｓｕ；（甄永苏）；ＰｅｎｇＺｅ（彭泽）；ＤｅｎｇＹｏｎｇｃｈｕａｎ；（邓甬川）Ｘｕ...     

三氧化二砷在体外抑制结肠癌细胞的研究

目的 在体外观察三氧化二砷(As2O3)对结肠癌细胞系HT-29的抑制作用,并探讨其作用机制,为其是否能作为结肠肿瘤的化疗药物提供理论基础.方法 将不同浓度As2O3作用于HT-29细胞不同时间后,用MTT检测细胞抑制率,光镜及透射电镜观察细胞形态学和超微结构的变化,通过流式细胞仪及共聚焦显微镜分析凋亡及自噬.结果 4.0μmol/L As2O3作用72h可明显抑制HT-29细胞增殖及诱发其凋亡,且抑制率与药物作用时间及浓度成正比.在凋亡早期细胞形态学变化在光镜下可见细胞缩小变圆,在电镜上可见细胞质浓缩、核固缩及自噬溶酶体.4.0μmol/L As2O3作用72h后HT-29细胞凋亡率为25%.结论 As2O3能明显抑制结肠癌细胞系HT-29的增殖,其作用机制与引起凋亡及自噬密切相关.     

Antitumor Activities and Apoptosis-regulated Mechanisms of Fermented Wheat Germ Extract in the Transplantation Tumor Model of Human HT-29 Cells in Nude Mice

Objective A subcutaneous transplantation tumor model of human HT-29 cells in nude mice was established to evaluate anticarcinogenic activities, and the apoptosis-regulated mechanism effect of aqueous extract of fermented wheat germ with Lactobacillus plantarum dy-1 (LFWGE).
Methods The HT-29 cells were transplanted via subcutaneous injection of 1×107 cells into the right flank of each nude mouse. Then, nude mice were treated for 30 d with LFWGE (high-dose 2 g/kg/d;low-dose 1 g/kg/d) and for 7 d with 5-fluorouracil (5-FU, 25 mg/kg/d) by gavage and intraperitoneal injection, respectively. An inhibition of tumor growth was observed.
Results Tumor volume and weights decreased significantly in both groups of nude mice treated with LFWGE. In addition, the cell apoptosis rate of the LFWGE group (2 g/kg/d, 60.1%±4.4%; 1 g/kg/d, 58.6%±6.9%) was significantly higher than that of the control group (11.5%±1.6%) and 5-FU group (32.1%±3.5%) as measured by the TUNEL assay. Moreover, the real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot method further confirmed these enhancing apoptosis and growth inhibition effects. The involvement of LFWGE in inducing apoptosis was confirmed by the expression of Bax, Bcl-2, Caspase-3, and CyclinD1.
Conclusion The results showed that LFWGE could induce subcutaneous transplantation tumor apoptosis in nude mice and could be as a natural nutrient supplements or chemopreventive agent in the treatment of human colon cancer.     

四君子汤与5-FU联用对结肠癌HT-29细胞生长的抑制效应

目的探索传统中药复方四君子汤与临床常用化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)联用对体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,为临床上应用四君子汤作为5-FU的增效剂联合治疗结肠癌提供实验依据。方法将体外培养的结肠癌HT-29细胞分成不含药血清对照组、5-FU组、高剂量四君子汤血清加5-FU组、中剂量四君子汤血清加5-FU组和低剂量四君子汤血清加5-FU组5组。将制备好的四君子汤含药血清和5-FU按所需的剂量分别加入到各组培养瓶中作用于细胞24h,应用基于酶标仪的MTT方法检测各组细胞的OD值,计算不同浓度药物处理对细胞生长的抑制率。结果四君子汤血清与5-FU联用能显著抑制结肠癌HT-29细胞的生长(均P0.01),且高剂量四君子汤血清与5-FU合用组细胞生长抑制率显著高于5-FU单用组(P0.01)。四君子汤血清与5-FU联用对结肠癌HT-29细胞周期的运行产生显著的影响。结论四君子汤可以增强5-FU对结肠癌HT-29细胞的生长作用和细胞周期的干扰作用。     

裸鼠盲肠黏膜下注射HCT116细胞建立结肠癌原位种植及转移模型的研究

目的建立一种简便、可行、稳定的裸鼠盲肠黏膜原位种植癌及转移模型。方法将人结肠癌细胞株HCT116细胞注射接种于裸鼠盲肠黏膜下,HE染色及人癌胚抗原(CEA)免疫组化检测接种后不同时期的盲肠原位瘤,腹腔淋巴结、肝、肺组织转移情况。结果盲肠接种HCT116细胞后2周,90%裸鼠均长出直径2~5 mm的盲肠原位瘤;接种后4周开始有腹腔淋巴结转移,12周时淋巴结转移率100%;接种10周时见肝、肺有转移,12周时肝、肺转移率分别为60%、39%。结论利用盲肠黏膜下原位接种HCT116细胞法建立裸鼠结肠癌模型,可模拟结肠癌临床原位发生、发展演变过程,方法简便且成瘤率高,为深入研究结肠癌转移机制的基础研究提供理想、稳定的动物模型。     

丹参酮ⅡA磺酸钠在结肠癌裸鼠移植瘤模型中增殖及血管生成的实验研究

目的：探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）磺酸钠在结肠癌裸鼠移植瘤模型中的抗癌作用及其对肿瘤血管生成的影响．方法：建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,随机分成对照组和低、中、高TanⅡA磺酸钠干预组,每组6只．干预组分别用ⅡA磺酸钠1,5,10mg／kg,ip;对照组等量生理盐水干预．观察抑瘤率,TUNEL法测凋亡指数,CD34标记观察4组瘤块微血管密度（MVD）,免疫组化法检测缺氧诱导因子1α（HIF1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、环氧合酶2（COX2）的表达．结果：与对照组相比,3组干预组凋亡指数明显上升（均P〈0．05）,中剂量组增殖减慢最明显,抑瘤率为（26．0±2．4）％．与对照相比,3组干预组MVD,VEGF表达上调,尤以中高剂量组差异显著（均P〈0．05）;3组干预组COX2表达与对照组无统计学差异;HIF1α在低剂量组表达略有下调,但未达到统计学差异,中高剂量组表达则有明显上调（P〈0．05）．结论：TanⅡA体内的抗肿瘤效果在中剂量组中最显著,机制可能与诱导细胞凋亡和上调缺氧诱导因子表达有关．     

Antitumor Activities and Apoptosis-regulated Mechanisms of Fermented Barley Extract in the Transplantation Tumor Model of Human HT-29 Cells in Nude Mice

Objective A subcutaneous transplantation tumor model of human HT-29 cells was established in nude mice to study the anticarcinogenic activities and apoptosis-regulatory mechanistic effect of aqueous extract of fermented barley with Lactobacillus plantarum dy~(-1)(LFBE). Methods HT-29 cells were transplanted via subcutaneous injection of 1 × 107 cells into the right flank of each nude mouse. Then, nude mice were treated for 30 days with LFBE(high-dose 2 g·kg~(-1)·d~(-1); low-dose 1 g·kg~(-1)·d~(-1)) and for 7 days with 5-fluorouracil(5-FU, 25 g·kg~(-1)·d~(-1)) by gavage and intraperitoneal injection, respectively. Results Tumor volume and weight decreased significantly in both groups of nude mice treated with LFBE. In addition, the cell apoptosis rate of the LFBE group was significantly higher than that of the control group and 5-FU groups as measured by the TUNEL assay. Moreover, the real-time fluorescent quantitative PCR and Western blot methods further confirmed these apoptosis-enhancing and growth-inhibiting effects. The involvement of LFBE in inducing apoptosis was confirmed by the expression of Bax, Bcl-2, caspase-3, and cyclin D1. Conclusion The results showed that LFBE could induce subcutaneous transplantation tumor apoptosis in nude mice and could be used as a natural nutrient supplement or chemopreventive agent in the treatment of human colon cancer.