维拉帕米抑制培养细胞DNA、RNA和蛋白质合成的作用

为探讨钙拮抗剂对细胞大分子物质的代谢影响,本文观察了维拉帕米对人成纤维细胞(2BS)和猴内皮细胞(RF/6A)DNA,RNA和蛋白质合成的作用.维拉帕米抑制2BS细胞DNA和RNA合成的作用为浓度依赖性,ID_(50)分别为12.3和22μg/ml.抑制RF细胞DNA和蛋白质合成的ID_(50)分别为34.4和49.6μg/ml.     

支气管冲洗液及血清中乳铁蛋白测定的初步报告

报告36例肺癌患者(腺癌14、鳞癌14、小细胞未分化癌8),212例肺感染患者(肺结核12、肺炎9),4例志愿者的BLF及40例正常人和上述三组的SLF放射免疫测定值。结果:SLF:肺癌组均值4.78μg/ml,显著高于正常组1．18μg/ml(p<0.05),但与感染组均值1.69μg/ml比较无差异;BLF:肺癌组均值53.95μg/ml,显著高于正常组4.05μg/ml及肺感染组15.44μg/ml(p<0.01)。如以20μg/ml为界值,肺癌组敏感性为67%,特异性86%。对腺癌敏感性为86%．可作为周围型肺癌早期诊断的参考。     

骆驼蓬碱、氟尿嘧啶对视网膜母细胞瘤细胞系SO-Rb50生物学效应

在体外检测了骆驼蓬总碱,氟尿嘧啶(fluorouracilum,5-Fu)对人视网膜母细胞瘤细胞系SO-Rb50的生物学效应。两种药物对该细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别是1.437μg/ml与5.321μg/ml,提示Rb细胞在体外对化疗敏感。临床Rb化疗效果欠佳可能与血-视网膜屏障有关。     

反义核酸对人肺腺癌细胞多药耐药逆转的实验研究

目的　探讨反义核酸对人肺腺癌细胞多药耐药的逆转效果。方法　以mdr1cDNA -9— 6为靶位点 ,合成反义核酸 (ATCCATCCCGACCTC)并用正义链作为对照 (GAGGTCGGGATGGAT) ,通过脂质体将其导入肺腺癌细胞A5 49/R ,分别采用逆转录聚合酶链反应、流式细胞仪、罗丹明试验及药敏试验观察两组细胞的mdr1mRNA、P糖蛋白 (Pgp)表达、罗丹明的聚集和对阿霉素的敏感性。结果　反义核酸处理的细胞mdr1mRNA下降 5 1 2 % ,正义组细胞和对照组细胞无明显变化、反义组细胞Pgp含量明显降低 ,细胞内罗丹明聚集 ,反义组 ,正义组和对照组的阿霉素IC50 分别为 0 0 0 9μg/ml、0 17μg/ml和 0 18μg/ml。 结论　反义核酸具有逆转人肺腺癌多药耐药的作用 ,其作用水平在mRNA或DNA水平 ,使Pgp的表达受到明显抑制 ,对阿霉素的敏感性明显提高。     

杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响

目的通过观察杜仲总黄酮对人肺腺癌细胞H1299细胞增殖的影响,筛选杜仲抗肿瘤的药效成分。方法乙醇分段法提取杜仲皮中总黄酮,以25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml浓度分别加入H1299细胞中,用MTT法检测H1299细胞的增殖情况。结果杜仲总黄酮为25μg、50μg、100μg、200μg/ml剂量组的OD490吸光值均降低,与对照组相比,有统计学意义（P〈0.05）。结论杜仲总黄酮能直接抑制体外培养的人肺腺癌细胞H1299细胞增殖。     

平阳霉素联合透明质酸钠对人淋巴管畸形内皮细胞的作用

目的探讨平阳霉素(PYM)联合透明质酸钠(HA)对体外培养的人淋巴管畸形内皮细胞(HLMECs)的作用。方法对新鲜婴幼儿淋巴管畸形组织进行HLMECs原代培养。利用淋巴管内皮特异性标志物LYVE1和PROX1染色,将不同浓度(1、10、100、500μg/m L)的PYM和(50、100、300、500μg/m L)HA分别作用于HLMECs 12、24、48 h,观察对HLMECs增殖的影响并筛选其最适有效浓度。然后用该有效浓度的PYM和HA共同作用于HLMECs,在第24小时时,MTT法检测细胞生长情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果 1淋巴管畸形组织和HLMECs表达LYVE1和PROX1;2PYM的最适浓度为10μg/m L,HA的最适浓度为100μg/m L;3PYM联合HA在抑制细胞增殖和促进细胞凋亡方面比单纯的PYM作用强。结论 PYM联合HA有望在临床上用于治疗淋巴管畸形。     

前列腺癌单克隆抗体与平阳霉素偶联物导向化疗的体外作用

目的 探讨导向化疗对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用.方法 以葡聚糖为中介体制备抗前列腺癌单克隆抗体7E11C5.3与平阳霉素(PYM)的偶联物,用间接ELISA法测定其免疫活性,2,3,5-氯化三苯基四氮唑法测定其抑菌活性.四唑盐法测定其体外细胞毒作用.结果 偶联物中7E11C5.3和PYM的摩尔比为1:54,偶联后单抗的免疫活性降低了10%～20%,偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的25%,偶联物和游离PYM对体外培养的LNCaP细胞50%抑制浓度分别为(9.41±1.98)μg/ml和(29.92μ7.88)μg/ml.结论 7E11C5.3-PYM偶联物的体外抗前列腺癌作用强于游离PYM.     

姜黄素与顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用的体外研究

目的研究姜黄素和顺铂联合应用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法采用MTT法观察姜黄素和顺铂对人肺腺癌A549细胞的抑制作用。结果姜黄素及顺铂能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖，并呈浓度及时间依赖性，两者作用人肺腺癌A549细胞48h的半数抑制浓度（IC50）分别为18．4μmol／L、0．966μg／ml。姜黄素10μmol／L、15μmol／L、20μmol／L与顺铂1μg／ml、2μg／ml联合24h、48h、72h的抑制率显著高于单用顺铂、姜黄素组（P〈0．05），两者呈现出相加的抗瘤效果。结论姜黄素在体外对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显的抑制作用，能提高顺铂对人肺腺癌A549细胞的敏感性。     

平阳霉素对血管内皮细胞的生长抑制作用和细胞周期的影响

目的观察平阳霉素(PYM)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法检测不同浓度PYM(10-2~103 μg/ml)作用不同时间(24、48、72 h)后对ECV304细胞的生长抑制率。利用流式细胞仪检测一定浓度PYM刺激下细胞周期分布。结果10 μg/ml浓度PYM作用24、48、72 h后的细胞生长抑制率分别为44.7%、59.7%、74.4%,药物抑制效应表现为剂量依赖性和时间依赖性。药物作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为32.94、2.56、0.75 μg/ml。1 μg/ml浓度PYM作用ECV304细胞24 h,实验组S期细胞比例较对照组明显下降,G2-M期细胞比例明显增加(P<0.01),细胞被阻滞在G2-M期。结论PYM对ECV304细胞的增殖具有较强抑制作用,其机制与细胞周期阻滞作用有关。     

用G418选择系统分离人肺腺癌细胞系癌基因

本研究用人肺腺癌细胞系AGZY-83-a(简称AGZY)的基因组DNA转染小鼠NIH3T3细胞系,同时加载有抗性标记的neo基因的质粒——pSV_2-neo DNA,进行共转染。用120万细胞,加AGZY DNA300μg,pSV2-neo DNA30μg;对照组则只加转染缓冲液HBS。然后,一半以二甲基亚砜短暂处理(DMSO休克)。全部培养基均加氨基糖苷型抗菌素(Geneticin,即G418)600μg/ml。4d后大部细胞逐渐死亡。对照组细胞于第9d全部死亡。再10d后,实验组陆续出现生长良好的集落(转化灶),总数达68个(来自休克与未休克组的细胞等量)。因此,pSV2-neo DNA的转化率约为68个/30μg/120万细胞或2.2/μg DNA/10~6     

吉西他滨联合多西紫杉醇对非小细胞肺癌细胞株的效应

目的 了解吉西他滨(gemcitabine)联合多西紫杉醇(docetaxel)对非小细胞肺癌细胞株的效应。方法经细胞生长抑制实验和四唑氮氢氧化物(XTT)检测得出细胞生存率，用等效应图(Isobologram)分析得出两药各设计浓度在50％生长抑制浓度(IB50)中的联合效应。结果吉西他滨联合多西紫杉醇在肺腺癌细胞株(A549)的生长抑制实验中，11个ID50效应点中8个落在等效应图的拮抗效应区。在肺鳞癌细胞株(EBC-1)的生长抑制实验中，有效的6个ID50效应点中5个落在等效应图的“相加”区和“超相加”区。结论在体外实验中吉西他滨联合多西紫杉醇对人肺鳞癌细胞株具有“相加”和“超相加”效应，而对人肺腺癌细胞株则产生拮抗效应。     

一组抗肺癌单克隆抗体的产生及其鉴定

以肺癌细胞株和组织为免疫原制备4株抗肺癌McAbs,其中LC86a H8和LC86bD7可分别识别肺鳞癌不同亚类抗原,LC86a C5可识别肺腺癌某一亚类抗原,LC86a E4可识别某些肺鳞癌和肺腺癌的共同抗原。将这4株McAbs组成一组使用,可提高肺癌的检出率。     

siRNA稳定靶向干扰HDGF肺腺癌细胞株的建立及干扰效率检测

目的 构建针对肝癌衍生生长因子(HDGF)基因的siRNA表达载体,建立稳定干扰HDGF基因表达的肺腺癌细胞株,检测干扰效率.方法 实时荧光定量PCR比较肺腺癌细胞株SPC-A-1、10例肺腺癌组织和其配对的癌旁肺组织HDGF基因表达差异.构建shRNA-HDGF慢病毒表达载体,测序鉴定序列的正确性.随后用脂质体的方法将载体转染入肺腺癌细胞株SPC-A-1中,经杀稻瘟菌素筛选后,稳定表达siRNA-HDGF的细胞株单克隆细胞株建立.实时荧光定量PCR检测干扰效率,筛选干扰效率最高的细胞株.结果 HDGF基因在腺癌细胞株SPC-A-1和肺腺癌组织明显高表达.测序证实,构人慢病毒载体中shRNA序列正确.一共筛选了5个siRNA-HDGF细胞株.与对照载体和单纯细胞株相比,最高干扰HDGF表达的效率为75%.结论 HDGF基因在肺腺癌细胞株及肺癌组织中高表达;针对HDGF的siRNA慢病毒表达载体成功构建;在其导人肺腺癌细胞株后能稳定干扰HDGF基因的表达.

Abstract：

Objective To construct a small interfering RNA (siRNA) expression vector targeting hepatoma-derived growth factor (HDGF) and establish a lung adenocarcinoma cell line stably expressing siRNA-HDGF. Mehtod RT-PCR was used to examine HDGF expression in lung adenocarcinoma samples and the matched adjacent lung tissues, and also in lung adenocarcinoma SPC-A-1 cell line. A recombinant lentivirus shRNA-HDGF vector was constructed and transfected into SPC-A-1 cells via Lipofectamine 2000, and the cells with stable expression of HDGF-siRNA was screened by blasticidin selection. The interference effect of siRNA-HDGF was assessed by real-time PCR. Results Compared to the adjacent lung tissues, lung adenocarcinoma and SPC-A-1 cells showed increased expression of HDGF. The recombinant lentivirus shRNA-HDGF vector was successfully constructed and verified by sequence analysis. siRNA-HDGF recombinants markedly inhibited the expression of HDGF in SPC-A-1 cells. Conclusion HDGF expression increases in lung adenocarcinoma and SPC-A-1 cell lines. The recombinant siRNA-HDGF lentivirus vector can inhibit the expression of HDGF in SPC-A-1 cells.     

70KV.50mAs多层螺旋CT低辐射灌注扫描在肺癌诊治中的应用

目的探讨70KV.50m As多层螺旋CT低辐射灌注扫描在肺癌诊治中应用的可行性。方法对发现肺部孤立性肿瘤进行70KV.50m As多层螺旋CT低辐射灌注扫描。搜集有手术或穿刺病理证实45例患者,鳞癌15例,腺癌23例,小细胞性肺癌7例。利用体部肺肿瘤灌注软件对图像进行后处理,根据非去卷积模型法获得相应肿瘤灌注彩图,测定肿瘤的对比剂达峰时间(TTP)、血流量(BF)、血容量(BV)、渗透性(PMB)。结果鳞癌、腺癌、小细胞性肺癌的TTP(s)分别是:15.62、17.91、16.89;鳞癌、腺癌、小细胞性肺癌的BF(ml/100ml/min)分别是:91.72、77.27、90.60;鳞癌、腺癌、小细胞性肺癌的BV(ml/100ml)分别是:8.06、8.94、11.94;鳞癌、腺癌、小细胞性肺癌的PMB(ml/100ml/min)分别是:13.79、15.17、13.95。结论 70KV.50m As低辐射灌注扫描方法能有效降低射线对患者的辐射,该方法获得的肺部肿瘤的灌注数据可以作为临床分析肺部肿瘤的血供及肿瘤血液灌注的一种手段。     

Effect of pingyangmycin on the growth and cell cycle of human vascular endothelial cells]

OBJECTIVE: To study the effect of pingyangmycin (PYM, bleomycin A5) on the proliferation and cell cycle of the cultured ECV304 cells, a human umbilical vein endothelial cell (HUVEC) line. METHODS: The growth inhibition of PYM on ECV304 cells was measured by MTT assay and the changes in the cell cycle by flow cytometry. RESULTS: After 10 microg/ml PYM treatment of the cells for 24, 48, and 72 h, the inhibition rates were 44.7%, 59.7%, and 74.4% respectively, showing a dose- and time-dependent inhibitory effect, with the 50% inhibitory concentration (IC50) of PYM corresponding to treatment durations of 24, 48 and 72 h being 32.94, 2.56 and 0.75 microg/ml respectively. Flow cytometry showed that ECV304 cell cycle was arrested at G2-M phase after 24-hour treatment with 1 microg/ml PYM, with significant reduction in the cell ratio of S phase and increase of G2-M phase (P<0.01) CONCLUSION: PYM can effectively inhibit the proliferation of ECV304 cells, the mechanism of which might involve the blocking of cell cycle.     

悬饮宁方对SPC-A-1细胞浸润及S180腹水瘤小鼠腹膜病理形态的影响

目的:观察中药悬饮宁方抑制人肺腺癌细胞SPC-A-1浸润的作用及对S180腹水瘤小鼠腹膜病理形态学变化的影响.方法:在进行小鼠腹膜间皮细胞分离培养的基础上,将SPC-A-1人肺腺癌细胞调整加入复层培养,观察形成的克隆数.取出S180腹水瘤小鼠腹膜,用透射电镜观察悬饮宁方各剂量组小鼠腹膜病理形态学的变化.结果:体外实验显示加入含有悬饮宁生药的培养液(50 μg/ml)后,SPC-A-1在琼脂培养皿背面形成的癌细胞克隆数明显减少.用悬饮宁治疗S180腹水瘤小鼠后,取出腹膜,在电镜下可观察到,从低剂量开始即可见小鼠腹膜间皮细胞排列整齐,随着剂量的递增这种现象更明显,间皮细胞排列更加整齐,增厚;而生理盐水组小鼠腹膜间皮细胞排列疏松,坏死.结论:中药悬饮宁方有抑制SPC-A-1细胞浸润的作用,悬饮宁还可以改变S180腹水瘤小鼠排列疏松的腹膜间皮细胞,从而控制腹水瘤小鼠癌性积液生长.     

上消化道癌组织中人乳头瘤病毒16及E6 mRNA检测的临床意义

目的　探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染与上消化道癌的关系。方法　采用原位杂交(ISH)技术检测了食管癌、贲门癌、胃体癌、胃窦癌及正常胃黏膜组织中HPV16E6mRNA的表达水平。结果　食管癌、贲门癌、胃体癌、胃窦癌及正常胃黏膜组织中HPV16E6mRNA的检出率分别为 :70 %(2 8/ 4 0 ) ,6 7 6 % (5 0 / 74 ) ,4 7 5 % (19/ 4 0 ) ,35 5 % (2 2 / 6 2 )和 2 0 % (10 / 5 0 )。贲门癌与食管癌的检出率之间的差异无显著意义 (P =0 95 5 )。胃癌 (胃体癌 +胃窦癌 )的检出率明显低于贲门癌和食管癌 (均P<0 0 1)。正常人群胃黏膜中HPV16E6mRNA检出率明显低于食管癌 (P <0 0 1)、贲门癌 (P <0 0 1)、胃癌 (胃体癌 +胃窦癌 ) (P <0 0 5 )。贲门癌HPV16E6mRNA检出率与分期呈负相关 (P <0 0 5 ) ,与患者性别、年龄、肿瘤的大小、浸润深度、组织分化程度、脉管癌栓、淋巴结转移及患者的预后无显著相关性 (P >0 0 5 )。结论　HPV不仅在鳞状上皮中增生繁殖 ,在腺上皮中也能活跃地生存。HPV16感染与上消化道肿瘤 ,尤其是食管癌和贲门癌的发生可能相关。     

鱼腥草注射液诱导人肺腺上皮细胞β防御素2mRNA表达

目的：探讨鱼腥草注射液体外刺激人肺腺上皮细胞（SPC—A—1）后人β防御素2（human beta—defensin 2，HBD-2）基因表达的情况，并研究HBD-2表达对鱼腥草注射液浓度和作用时间的依赖效应。 方法：体外培养SPC—A—1细胞，设置12．5、25、50、100和200 μg／ml 5个鱼腥草注射液浓度梯度，刺激贴壁生长的SPC-A-1细胞8h，根据细胞HBD-2 mRNA表达量明确作用最佳的浓度；最佳作用浓度鱼腥草注射液作用0、1、2、4、8、16、24和48h，根据细胞HBD-2 mRNA表达量明确最佳作用时间。SPC—A-1细胞HBD-2 mRNA表达的情况应用逆转录聚合酶链式反应技术检测。 结果：不同浓度鱼腥草注射液刺激SPC—A-1细胞后，HBD-2表达与刺激剂量（rs=0．829，P=0．042）和刺激时间（rs=0．914，P=0．003）具有一定的相关性，当鱼腥草浓度为100 μg／ml、刺激8h时，HBD-2 mRNA表达水平达到最高。与空白对照组和白细胞介素1β对照组比较，100μg／ml鱼腥草注射液作用8h可以上调SPC—A-1细胞HBD-2 mRNA的表达。 结论：鱼腥草注射液可诱导HBD-2基因的表达增强，最佳浓度为100μg／ml，最佳刺激时间为8h。     

益肺抗瘤饮对实验性肺癌细胞周期及核酸和蛋白质合成的影响

目的　探讨临床验方益肺抗瘤饮对小鼠Lewis肺癌和人肺腺癌SPC A 1细胞增殖和细胞周期及核酸、蛋白质合成的影响。方法　采用体内接种瘤体称重和体外培养细胞计数相结合计算肿瘤抑制率 ,并以流式细胞仪测定肿瘤细胞周期的比例和DNA、RNA及蛋白质指数。结果　实验组肿瘤生长抑制率在 3 0 .3 8% (P <0 .0 5) ,益肺抗瘤饮各组S期细胞比例明显小于对照组 ,最显著的一组有 72 .6%的细胞滞留于G0 /G1期。其中益肺抗瘤饮 3组Lewis肺癌的DNA、RNA和蛋白质合成的抑制率分别为 7.4%、2 3 .73 %和 2 3 .3 1% ,益肺抗瘤饮Ⅱ组SPC A 1细胞DNA、RNA和蛋白质合成抑制率分别为 9.3 %、10 .1%和 14 .7% ,呈逐级放大现象。结论　益肺抗瘤饮以抑制DNA为原始作用 ,抑制Lewis肺癌细胞和SPC A 1细胞进入增殖期 ,显著抑制肺癌细胞的增殖