内皮素及其A受体在兔颅脑创伤后脑血流量变化中的作用及意义

目的:了解内皮素(ET)及其A受体在颅脑创伤后脑血流量变化中的作用及意义.方法:130只家兔致以左额顶叶为着力部位的加速性撞击伤,动态观察脑组织内皮素含量变化、内皮素A受体mRNA表达和定位变化,内皮素A受体拮抗剂BQ123的作用及上述变化对脑血流量变化的影响.结果:脑创伤后血浆、脑脊液和局部脑组织内皮素含量显著升高;内皮素A受体mRNA主要分布于脑血管内皮细胞,表达显著增强;创伤后局部脑血流量显著降低,应用BQ123治疗的动物,血流量下降被明显抑制.结论:内皮素通过其A受体的调节在颅脑创伤后脑缺血的形成中有重要作用;应用内皮素A受体拮抗剂可以防治颅脑创伤后脑缺血.     

内皮素-1对前列腺癌PC3细胞环氧化酶-2表达的影响

目的:探讨在激素非依赖性前列腺癌(HRPC)PC3细胞中,内皮素-1(ET-1)刺激对环氧化酶-2(COX-2)表达的影响,以及内皮素受体A(ETAR)与内皮素受体B(ETBR)在此调控通路中的作用.方法:用不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0 nmol/L)ET-1刺激前列腺癌PC3细胞相同时间(24 h);另外用BQ123(ETAR拮抗剂)、BQ788(ETBR拮抗剂)单独作用于PC3细胞或与100 nmoL/L ET-1联合作用于细胞24 h.均采用Western blot技术检测细胞中COX-2蛋白含量的变化:采用RT-PCR技术检测细胞中COX-2 mRNA的变化情况.结果:PC3细胞在0.1-100.0 nmol/L浓度的ET-1刺激后COX-2的蛋白及mRNA表达水平均显著上调,并显示有明显的浓度依赖性.BQ123在蛋白质和mRNA水平均显著抑制ET-1介导的COX-2的上调,与单纯应用ET-1组有显著差别(P<0.05),BQ788则对ET-1介导的COX-2的表达没有抑制作用(P>0.05).结论:在前列腺癌PC3细胞中,ET-1对COX-2的表达有上调作用;ETAR参与厂这一调控过程,ETBR可能未参与此过程.这为ETAR拮抗剂和选择性COX-2抑制剂联合应用于HRPC的治疗提供了分子生物学基础.     

雷公藤内酯醇对皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株增殖与凋亡的影响.方法:以体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学的改变,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布及凋亡率的变化.结果:随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP不但能够引起细胞形态的改变(漂浮细胞及核固缩现象增多),而且能够诱导A431细胞株凋亡,改变细胞周期的分布,与对照组相比G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05).结论:TP通过诱导A431细胞凋亡并抑制其增殖发挥抗肿瘤作用.     

三氧化二砷诱导肺癌细胞凋亡及对细胞周期的影响

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人肺癌细胞株 (Spc- A1)诱导凋亡的机制 ,为抗肿瘤药物的筛选和用药方式提供理论依据。方法 :体外培养 Spc- A1细胞株与不同浓度的 As2 O3 进行作用 ,应用 MTT比色法、流式细胞仪技术、电子显微镜技术观察细胞增殖率、细胞周期率、细胞凋亡率及亚细胞水平变化。结果 :As2 O3 能够抑制 Spc- A1细胞的增殖 ,且呈时间剂量依赖性 ,Spc- A1细胞凋亡率与药物浓度和时间呈依赖关系。电镜观察细胞线粒体肿胀、空泡 ,染色质浓缩、核碎裂。结论 :As2 O3 可诱导 Spc- A1细胞凋亡 ,细胞周期延长 ,线粒体变性。     

白藜芦醇诱导胰腺癌细胞凋亡通路的实验研究

目的:探讨白藜芦醇对人胰腺癌细胞凋亡的诱导作用及其凋亡通路.方法:运用细胞培养、Western blot分析、MTT方法和流式细胞仪,对一系列胰腺癌细胞株进行白藜芦醇敏感性筛选,同时对其毒性进行评估.结果:白藜芦醇并不能有效地诱导人胰腺癌细胞capan-1、Bxpc-3、Miapaca-2细胞凋亡,但能够有效地诱导colo357及capan-2细胞的凋亡,其机制是通过诱导caspase-3的激活而促进capan-2和colo357凋亡.白藜芦醇对colo357及capan-2细胞株的增殖有抑制效应.白藜芦醇对正常胰腺导管上皮细胞HPDE无明显毒性作用.结论:白藜芦醇通过诱导细胞周期抑制性的蛋白上调和细胞周期的阻滞而在细胞水平上有效地诱导特定胰腺癌肿瘤细胞的凋亡.     

FTY720抑制人胰腺癌Miopac2细胞株增殖的研究

目的:探讨FTY720体外抑制人胰腺癌Miopac2细胞株增殖的作用.方法:MTT比色法观察FTY720对Miopac2细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞仪检测FTY720对Miopac2细胞的细胞周期、凋亡率的影响;倒置显微镜观察细胞形态学变化.结果:随着FTY720浓度的增加,MTT实验中Miopac2细胞吸光度逐渐降低.流式细胞仪分析显示FTY720将Miopac2细胞阻滞于G1期,并使Miopac2细胞发生凋亡,且凋亡率呈浓度依赖性.倒置显微镜下观察有凋亡细胞存在.结论:FTY720对Miopac2细胞的生长有明显的抑制作用,且这种抑制作用具有浓度依赖性.其抑制效应与阻滞肿瘤细胞的细胞周期和诱导肿瘤细胞凋亡有关.表明FTY720具有一定的抗肿瘤作用.     

粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱（Tetrandrine）对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防己碱对肝癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、集落形成实验观察粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡荧光染色法及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果：MTT比色法、集落形成实验显示，粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖有抑制作用，其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明，粉防己碱可诱导7402细胞凋亡，免疫细胞化学法显示，粉防己碱上调Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达。结论：粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

粉防己碱对人乳腺癌细胞MCF-7细胞株的作用

目的:观察粉防己碱对体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7细胞株增殖的影响.方法:MTT法检测MCF-7细胞对粉防己碱的敏感性;流式细胞仪检测粉防己碱对MCF-7细胞的细胞周期、凋亡率的影响.结果:随着粉防己碱浓度的增加,作用时间延长,MTT试验中试验组细胞光吸收值降低;流式细胞试验中S期细胞数减少,凋亡细胞比例增加.结论:粉防己碱对MCF-7细胞株的生长有明显的抑制作用,并且这种抑制效应存在剂量和时间的依赖关系;粉防己碱可阻滞MCF-7细胞周期活动,诱导细胞凋亡,且其调亡率和浓度及作用时间呈正相关.     

三氧化二砷对人肺腺癌A-549细胞株增殖及c-Myc基因表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌A549细胞株的生长增殖、细胞周期、凋亡等方面的影响,并初步探讨其机制。方法选用不同浓度As2O3处理人肺腺癌A549细胞株,以MTT比色法检测细胞生长增殖的抑制情况;用流式细胞术测定细胞周期、凋亡率;以免疫组织化学法分析不同浓度As2O3对c-Myc基因表达的影响。结果 As2O3以时间和浓度依赖的方式抑制人肺腺癌A-549细胞的增殖,并能诱导细胞凋亡。不同浓度As2O3处理组可调控细胞周期分别发生G2/M期阻滞和S期阻滞,并下调c-Myc基因表达。结论三氧化二砷对人肺腺癌细胞株A-549的生长、增殖有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和抑制c-Myc基因的表达和诱导细胞凋亡有关。     

内皮素及其受体对心脏细胞肥大与增殖的作用

目的观察内皮素-1(ET-1)及其受体(ETR)对心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖的作用。方法体外乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞培养,一定浓度的ET-1作用细胞24h,以3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)、3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入法测定细胞DNA、蛋白质合成,Bradford法测定细胞总蛋白含量,RT-PCR法测定心肌细胞心钠素(ANP)mRNA的表达;用针对ETA受体(ETAR)、ETB受体(ETBR)的特异性拮抗剂BQ123、BQ788分别阻断两个受体,观察两种受体的作用。结果ET-1显著促进心肌细胞和心脏成纤维细胞3H-TdR、3H-Leu掺入,总蛋白含量增加,ET-1的作用呈剂量依赖性,并且使心肌细胞ANP mRNA表达明显增加,ET-1的作用可被ETAR拮抗剂BQ123明显抑制,ETBR拮抗剂BQ788对此无影响。结论ET-1促进心肌细胞肥大和心脏成纤维细胞增殖,ET-1的作用通过ETAR介导,ETBR对此无明显作用。     

黄芩素对人前列腺癌 PC －3细胞增殖、侵袭的抑制作用及机制研究

目的：探讨黄芩素对人前列腺癌PC－3细胞增殖、侵袭的影响及其相关机制。方法培养人前列腺癌PC－3细胞,分别予20μL的培养液（对照组）、无水乙醇（溶媒组）、黄芩素溶液（100、200μmol／L黄芩素组）处理细胞48 h后,通过四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法分析PC－3细胞的增殖情况,Transwell侵袭实验检测PC－3细胞的侵袭能力,荧光实时定量PCR检测PC－3细胞中Ezrin mRNA表达,Western blot测定PC－3细胞中Ezrin、Bcl－2、Bax蛋白表达,原位末端标记法（ TUNEL）检测PC－3细胞凋亡率。结果100、200μmol／L黄芩素作用PC－3细胞48 h后,细胞增殖抑制率、凋亡率以及Bax蛋白表达水平增加,平均穿膜细胞数以及Ezrin、Bcl－2蛋白表达水平降低,且具有剂量依赖性（ P＜0．01）,然而溶媒组上述指标与对照组比较,差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论黄芩素能够降低人前列腺癌PC－3细胞的增殖、侵袭性,其机制可能与抑制Ezrin蛋白表达及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

类黄酮衍生物DMF诱导人前列腺癌PC3细胞凋亡的实验研究

目的:检测3-(2-氯苯基)-1-(2-羟基-4,6-二甲氧基-3-((-N,N-甲基乙基胺)甲基)苯基)-丙-2-烯-1-酮(DMF)对人前列腺癌PC3细胞的抗肿瘤活性,并对相关作用机制进行研究。方法:采用MTT法测定DMF对PC3细胞增殖的体外抑制作用;流式细胞术检测PC3细胞凋亡率;JC-1染色观察线粒体ΔΨm变化;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果:DMF对PC3细胞具有显著的抗增殖作用。流式细胞术结果表明,这种抗增殖作用是通过诱导细胞凋亡实现的。DMF可诱导PC3细胞的线粒体膜电位(ΔΨm)下降,并呈明显的时间和剂量依赖效应。Western blot结果显示,DMF促进PC3细胞内procaspase-3活化及其下游底物PARP降解。同时,DMF还促进Bax蛋白表达上调和Bcl-2蛋白表达下调,使Bax/Bcl-2比值明显增加。此外,DMF可抑制PC3细胞内p38蛋白的磷酸化。结论:DMF可显著抑制PC3细胞增殖,其促凋亡作用可能是通过线粒体信号转导途径实现的。     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞Notch1表达和分布的影响

目的探讨姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖、凋亡及Notch1表达水平、分布定位的影响。方法体外培养PC3细胞给予不同浓度的姜黄素处理，以MTT法检测细胞增殖率；以RT—PCR检测细胞Notch1 mRNA表达情况；流式细胞术检测细胞凋亡率；透射电镜观察细胞超微结构的变化；激光共聚焦显微镜免疫荧光分析法评价Notch1蛋白的表达水平和亚细胞定位分布。结果姜黄素抑制PC3细胞的增殖呈时间和剂量依赖性（P〈0．01）；RT—PCR、免疫荧光细胞化学实验结果表明PC3细胞株有Notch1 mRNA和蛋白的表达，且随姜黄素浓度升高而增高（P〈0．05）；FCM显示PC3细胞凋亡率随姜黄素浓度升高而增加（P〈0．01）；电镜观察到典型凋亡形态学变化；激光共聚焦检测结果显示Notch1不仅有胞膜、胞质定位，胞核也有少量表达，随姜黄素浓度升高胞核内表达增加。结论姜黄素抑制PC3细胞增殖并诱导凋亡，呈时间和剂量依赖性。PC3细胞对姜黄素的反应性可能与Notch1的表达和核易位激活有关。     

Androgen receptor functioned as a suppressor in the prostate cancer cell line PC3 in vitro and in vivo

Background Prostate cancer is one of the most common urogenital tumors in the world with an increasing incidence in China. Androgen deprivation therapy is the major therapeutic option for advanced prostate cancer. However, the role of androgen receptor （AR） in hormone-refractory prostate cancer still remains unclear. This work aimed to investigate the role of AR in an androgen independent prostate cancer cell line by in vitro and in vivo studies.
Methods The role of AR in the proliferation and invasion/metastasis ability of PC3-AR9 （a PC3 stable clone expressing human AR driven by natural human AR promoter） were examined with M-IF assay, soft agar assay, chamber invasion assay, wound healing assay, and also with orthotopic xenograft mouse model. Results Restoring androgen receptor in PC3 cells resulted in decreased proliferation and invasion/metastasis ability in MTT, soft agar, chamber invasion and wound healing assay. In the mouse orthotopic xenograft model, PC3-AR9 resulted in smaller primary tumors and metastasis tumors, with a lower proliferation rate and higher apoptosis rate.
Conclusion The AR might function as a tumor suppressor in PC3 cells both in vitro and in vivo.     

7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：检测7-二氟亚甲基-5, 4'-二甲氧基染料木黄酮(7-difluoromethoxy-5, 4'-dimethoxygenistein,DFMG)对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响并探讨其可能机制。方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色检测HeLa细胞凋亡形态学改变;FCM检测HeLa细胞凋亡率;DNA琼脂糖电泳检测HeLa细胞凋亡的DNA条带;RT-PCR和Western 印迹检测DFMG对HeLa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：DFMG在体外呈浓度(0.25~64 μg/mL)和时间(24~72 h)依赖性抑制HeLa细胞增殖,其作用48 h的IC50值为4.62 μg/mL,HeLa细胞出现典型的凋亡形态学改变,典型的凋亡DNA条带,凋亡率呈浓度依赖性增高,伴随c-myc mRNA和蛋白表达增高,其下游蛋白bax,cyto-c,caspase-9表达增高,而bcl-2蛋白表达降低。用siRNA干扰沉默c-myc基因,能部分抵消DFMG对HeLa细胞增殖抑制和凋亡诱导效应,而用c-myc cDNA转染HeLa细胞,则能协同DFMG对细胞增殖的抑制作用及对凋亡的诱导作用。结论：DFMG在体外具有抑制HeLa细胞增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与钝化c-myc基因,启动线粒体凋亡途径有关。     

原蛋白转变酶2基因表达对肿瘤细胞增殖的影响

目的 探讨原蛋白转变酶2基因(proprotein convertase,PC2)对不同肿瘤细胞增殖的影响,为肿瘤治疗提供新的研究方向.方法 PC2重组质粒pcDNA3.1-PC2单独或与其分子伴侣7B2重组质粒pcDNA3.1-7B2混合转染小鼠乳腺癌细胞4T1、人肝癌细胞HepG2、小鼠黑色素瘤细胞B16、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞MCF-7和小鼠肥大细胞瘤细胞P815,以pcDNA3.1(+)空载体为对照,通过PC2酶活性测定法、Western blot检测野生型和转染后的4T1细胞的PC2酶活性和表达,MTT法检测肿瘤细胞增殖率的变化.通过DAPI染色检测转基因细胞和TUNEL染色检测荷瘤模型瘤组织中癌细胞的凋亡情况.结果 1:1比例的PC2:7B2共转染显示了在4T1细胞中的最高PC2活性和表达,在荷瘤小鼠瘤组织中显示明显的凋亡现象.该共转染对4T1、HepG2、B16、A549和MCF-7细胞半数抑制剂量分别为128.3、97.8、137.3、51.5、214.3μg/mL,呈剂量依赖性,P815细胞的抑制率与基因剂量之间没有关系.结论 PC2上调可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,呈现凋亡现象.     

氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响

目的 探讨氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖及凋亡的影响作用。方法 采用MTT、细胞划痕和Transwell侵袭实验评估氯化两面针碱对人前列腺癌细胞PC-3增殖与侵袭的影响;流式细胞术检测氯化两面针碱对PC-3细胞凋亡的影响;免疫印迹检测AKT/mTOR及细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤基因-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)的表达,应用PI3K通路抑制剂LY294002探讨抑制AKT通路对前列腺癌细胞PC-3的影响。结果 氯化两面针碱能抑制PC-3细胞的增殖与侵袭,且具有剂量依赖性(P<0.01)。氯化两面针碱可下调Bcl-2、而上调Bax的蛋白表达,Bax/Bcl-2比例明显上升(P<0.01),抑制AKT和mTOR通路的磷酸化,诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡。联合应用LY294002发现,抑制AKT通路可增强氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖和侵袭的抑制作用。结论 氯化两面针碱能够抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖与侵袭,诱导其凋亡,并通过抑制AKT/mTOR磷酸化发挥其抗前列腺癌作用,可作为一种潜在治疗前列腺癌的药物。     

表没食子儿茶素没食子酸脂对前列腺癌PC-3细胞体外生长的抑制作用

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG)对人前列腺癌细胞体外生长的抑制作用,以及其对细胞增殖周期的影响。方法:用不同浓度的EGCG处理体外生长的前列腺癌PC-3细胞,通过对细胞形态的对比观察和MTT法检测EGCG对PC-3细胞的抑制作用,通过流式细胞术检测其对细胞周期的影响。结果:与对照组相比,EGCG处理组可使细胞明显变圆,体积增大,细胞内颗粒及脱壁细胞增多;MTT法显示,EGCG能明显抑制前列腺癌PC-3细胞生长,并呈时间、剂量依赖性(P<0.05);流式细胞术显示,EGCG处理的PC-3细胞被阻止在G0/G1期,并有凋亡峰出现。结论:EGCG通过阻滞细胞的增殖周期对前列腺癌PC-3细胞体外生长有明显的抑制作用。     

5,7-二甲氧基白杨素对体外培养宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的:观察5,7-二甲氧基白杨素(dMChR)对体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:检测5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖活性的影响采用MTT法;观察HeLa细胞凋亡形态运用丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色法;检测HeLa细胞凋亡率采用流式细胞术。结果:5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性;5,7-二甲氧基白杨素能有效地诱导HeLa细胞凋亡,呈剂量依赖性。结论:5,7-二甲氧基白杨素具有抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

藤梨根提取液抗肺癌作用的实验研究

目的:观察藤梨根提取液对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用,为其治疗肺癌提供实验依据。方法:采用MTT检测法、集落形成试验观察药物对细胞的作用,用流式细胞术检测细胞凋亡,同时分析药物对细胞周期的影响。采用裸鼠移植瘤模型进行体内实验,并绘制移植瘤生长曲线,计算抑制率。结果:各浓度的藤梨根提取液对肺腺癌A549细胞有较强的抑制效应,呈现出明显的时相性和量－效依赖性,流式细胞仪检测结果显示,藤梨根提取液作用后,G0/G1期细胞数增加,细胞出现凋亡,并随药物浓度增大,作用增强。移植瘤体内试验显示,藤梨根提取液高剂量组（按1?000?mg/kg）和低剂量组（按500?mg/kg）的抑瘤率分别为71.40%和40.35％,治疗组移植瘤生长缓慢,体积明显小于对照组（P＜0.01）。结论:藤梨根提取液在体内外对人肺腺癌A549细胞生长均有抑制作用,体外作用与G0/G1期阻滞有关,并有诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的作用。