胶体金标记Dipstick试纸条诊断旋毛虫病的研究

目的:建立简便的旋毛虫病Dipstick快速诊断法.方法:以旋毛虫肌幼虫ES为诊断抗原,胶体金标记的羊抗人IgG为显色剂,建立Dipstick快速诊断方法;对旋毛虫病及其它寄生虫病患者和旋毛虫感染的动物血清进行检测.结果:检测旋毛虫病患者与旋毛虫感染的小鼠、大鼠、兔、猪血清的阳性率分别为100%(28/28)、96.00%(48/50)、100%(10/10)、100%(10/10)及100%(30/30);其它寄生虫病(斯氏狸殖吸虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病及囊虫病等)患者及正常人血清均为阴性.试纸条和ELISA对100条幼虫感染小鼠血清检测的阳性率分别为92.00%(46/50)和94.00%(47/50)(x2=0.15,P>0.05),两种方法对200～500条幼虫感染小鼠血清检测的阳性率均为100%(60/60).结论:旋毛虫肌幼虫ES抗原Dipstick快速诊断法具有较高的敏感性和特异性,简便快捷,勿须特殊仪器设备,是一种检测旋毛虫病血清IgG抗体和流行病学调查较好的免疫诊断方法.     

间接荧光抗体试验诊断实验性旋毛虫病的研究

本文应用间接荧光抗体试验比较了４种方法制备的旋毛虫幼虫抗原诊断实验性旋毛虫病的效果。结果表明，旋毛虫纯净幼虫冰冻切片抗原优于完整幼虫抗原、超声粉碎幼虫抗原及膈肌幼虫冰冻切片抗原。用此抗原检测感染旋毛虫的大鼠血清时，抗体阳性率为１００％（１３／１３），而１０份正常大鼠血清均为阴性反应。小鼠感染旋毛虫后２周即可检测到抗旋毛虫抗体，阳性率为１１．１１％（１／９），感染后５周抗体阳性率已升到１００％（８／８），升高的抗体滴度可一直持续至感染后第１５周。此抗原在－２０℃至少可保存２．５年而不丧失其活性和特异性。应用滤纸血也可取得满意的检测结果。     

华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

间接血凝试验诊断旋毛虫病

本文采用经Sephadex G-200层析后的旋毛虫幼虫抗原对实验感染旋毛虫大鼠和旋毛虫病人血清作间接血凝试验(IHA)。结果表明,20只大鼠感染后第16天全部出现阳性反应。9例旋毛虫病患者为阳性。本试验用于囊虫病、华枝睾吸虫病和健康人及正常大鼠均为阴性。检查本地区31只狗,阳性符合率为66.7％。     

旋毛虫感染大鼠血清中IgE水平的动态观察

【目的】观察感染旋毛虫大鼠IgE水平的动态变化 ,探讨IgE在大鼠旋毛虫感染急性期免疫机理中所起的作用。【方法】采用双抗体夹心ELISA法 ,分别检测感染旋毛虫后 7、 14、 2 1、 2 8、 35、 6 0d大鼠外周血中总IgE水平 ,同时用间接ELISA法测定特异性IgE ,并做了特异性肥大细胞脱颗粒实验。【结果】实验组较对照组总IgE水平增高 ,在 14、 2 1d达到高峰 (P <0 0 5 ) ,第 3w后呈逐渐下降 ;特异性IgE在 14和 2 1d组与对照组有显著差异 (P <0 0 1) ,阳性率达 88 9%。实验组特异性肥大细胞脱颗粒实验与对照组有显著差异 (P <0 0 5 ) ,阳性率达 6 6 7%。【结论】血清中IgE抗体参与了旋毛虫急性期的免疫 ,主要作用为快速排出肠道内的旋毛虫脱囊幼虫 ,并可致敏肥大细胞 ,使其在旋毛虫幼虫抗原的作用下发生脱颗粒 ,故说明IgE是大鼠旋毛虫感染急性期重要的抗体。     

不同培养条件对旋毛虫肌幼虫产生排泄分泌抗原的影响

目的对比在常规1640培养基中和在模拟宿主生理环境的培养液的刺激下旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原产量及成分的变化,同时观察在感染初期ES抗原的不同组分在小鼠体内诱导产生主要抗体的时间,以寻找获得更高产量的肌幼虫ES抗原的制备方法。方法在虫数、培养液体积、培养时间、温度、ES抗原体积浓缩倍数等条件相同的情况下,按培养液中小鼠血清超滤液(简称血超)、还原型谷胱甘肽(简称谷胱甘肽)和胆汁粉的不同组合分组,分别培养肌幼虫并收集ES抗原,再以相同上样体积作SDS-PAGE电泳,Odyssey双色红外激光成像系统扫描凝胶并测定条带信号强度进行定量比较。用Western blotting对比观察不同组ES抗原的活性及成分变化。以旋毛虫人工感染小鼠不同时期收集的血清(感染后15、18、20、21、22、24、27、30、40、50 d)作为一抗进行Western blotting,观察ES抗原主要成分在小鼠体内产生抗体的先后顺序。结果S DS-PAGE电泳凝胶定量分析结果显示,血超+谷胱甘肽组、胆汁组和胆汁+血超组的抗原产量明显高于1640培养基组,其中胆汁+血超组的抗原产量最高。Western blotting结果显示,各组抗原均能被感染血清(感染后40 d)识别产生多个条带,其中血超+谷胱甘肽组的条带中相对分子质量约为87 000的条带荧光信号明显强于其他组;感染初期ES抗原不同组分在小鼠体内产生抗体的先后顺序为:45 000、53 000、41 000,其抗体可被检测到的最早时间分别为感染后15、21、24 d。结论培养液中添加胆汁粉可大大提高旋毛虫肌幼虫ES抗原产量,胆汁粉与血超共用后ES抗原的增产效果更佳;感染初期肌幼虫ES抗原的不同组分诱导小鼠产生抗体的时间不同。此研究将为改进ES抗原制备方法,寻找旋毛虫病早期诊断抗原提供实验依据。     

云南省人体旋毛虫感染血清流行病学调查

目的通过调查了解旋毛虫病在云南省流行程度和分布情况,为制定防治措施和策略提供科学依据.方法根据以往人体感染和动物感染程度确定轻、中、重流行区,采用ELISA检测法进行检测.结果共调查10个县,20个点的10109人份血清,血清阳性人数852,阳性率8.43%,以陇川县血清阳性率最高25.87%,文山县血清阳性率最低1.00%;30～40岁中青年组阳性率较高10.64%,血清学阳性率年龄最大79岁,最小2岁;血清学阳性与地区、年龄、居住地、生吃或半生吃猪肉和用不洗砧板切熟食等生活、行为习惯的关系具有统计学差异(χ2=767.64、χ2=65.66、χ2=9.435、χ2=22.19,P<0.005),男女性别与血清学阳性无统计学差异(χ2=0.851,P>0.005).结论旋毛虫病为我省重要公共卫生问题,各级卫生部门加强卫生宣教,健全农村食品卫生监督制度.     

卫氏并殖吸虫成虫的特异性诊断抗原

目的：寻找诊断并殖吸虫病的特异性抗原。方法：应用SDS-PAGE和Western blot对卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析。结果：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示14条蛋白带，其中相对分子质量为53000、3l000、25000、16000、11000是主带；相对分子质量为53000和34000的条带可与华支睾吸虫病患者血清反应；108000、94000、65000的条带可与血吸虫病患者血清反应；58000、53000、43000的条带可与旋毛虫感染的大鼠血清、小鼠血清及旋毛虫病患者血清反应。37000的蛋白带只能被斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和并殖吸虫病患者血清所识别，而不与华支睾吸虫病、血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清、旋毛虫病患者血清、正常大鼠、小鼠血清及正常人血清发生交叉反应。结论：卫氏并殖吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为37000的蛋白组分为卫氏并殖吸虫成虫的特异性抗原，可用于并殖吸虫病的免疫学诊断及血清流行病学调查．     

IgG和IgE介导的免疫反应在旋毛虫病免疫机理中的作用

【目的】探讨IgG和IgE依赖中性粒细胞(Neu)和单核细胞(Mon)介导的细胞毒效应杀伤旋毛虫肌幼虫的免疫机理。【方法】以雄性Wistar大鼠为旋毛虫病实验动物模型,在动态检测不同感染时相大鼠血清中IgE、IgG的基础上,应用体外培养法观察经不同温度和时间处理的免疫血清对大鼠血液中Neu和Mon杀伤旋毛虫肌幼虫作用的影响。【结果】大鼠在感染旋毛虫后2~3周,血清中的总IgE和特异性IgE达最高值;总IgG和特异性IgG在5周达高峰。体外培养48 h后,Neus和Mons对旋毛虫肌幼虫的杀伤率分别为42.1%和23.2%。【结论】大鼠感染旋毛虫后,其血清中总IgE与特异性IgE及总IgG与特异性IgG同步增加。当免疫血清存在时,感染鼠和非感染鼠的Neu和Mon均具有杀伤旋毛虫肌幼虫的作用,但感染鼠的作用更强。Neu和Mon在发挥杀伤旋毛虫肌幼虫的作用时,主要依赖的是IgG。     

应用ELISA早期诊断旋毛虫病的实验研究

用旋毛虫肌肉内成囊期幼虫的盐水浸出液为抗原,用ELISA间接法检测实验家兔旋毛虫病的抗体反应动态。结果表明,1.检测21只病兔,灵敏度为95%,轻重感染组分别在感染后的第15,12天检出特异性抗体。2.检测43只健康家兔,特异度为95%;检测2只血吸虫病兔无交叉反应。3.抗旋毛虫幼虫的抗体可持续存在4个月。本法在旋毛虫病感染早期即可检出特异性抗体,故对本病的早期诊断是有意义的。     

尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病的初步研究

文本报告了旋毛虫感染期幼虫虫体尿素溶解性抗原的提取及其用于ELISA诊断旋毛虫病的效果。ELISA检测24例旋毛虫病人血清IgG和12例病人滤纸干血滴IgG,阳性率均为91.67％(22/24和11/12),21例病人血清IgM,阳性率为95.24％(20/21),对日本血吸虫病人血清作IgG和IgM检测时均有一定的交叉反应,而感染其它几种寄生虫的小鼠血清无交叉反应。 本实验结果表明尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病具有较高的敏感性、特异性和好的重复性,是一种具有实用价值和经济价值的诊断抗原。     

旋毛虫Ts87抗原的免疫组化定位研究

为了确定旋毛虫Ts87抗原在虫体上的分布及其是否属于旋毛虫排泄分泌(ES)抗原,借助激光扫描共聚焦显微镜,采用免疫组化和Western Bloting等方法进行研究。结果表明:旋毛虫幼虫皮质层富含Ts87蛋白,而且Ts87抗原是旋毛虫排泄分泌抗原中的组分。     

旋毛虫感染早期兔血清中IgM的检测

目的探讨斑，点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）检测旋毛虫感染早期免血清中特异性抗体IgM在免疫诊断上的价值。方法正常家免经口灌入旋毛虫肌肉期幼虫，于感染后d7和d14静脉系血分离血清，以Dot－ELISA法检测血清中的IgM。结果感染后d7和d14旋毛虫特异性抗体IgM的阳性率分别为85．7％和100％，最高滴度可达1：6400，且与日本血吸虫和弓形虫无交叉反应。结论Dot－ELIS法检测旋毛虫特异性抗体IgM对旋毛虫感染早期诊断具有特异性较强、敏感性高、重现性好的优点．     

Preliminary study of immunodiagnosis of trichinosis by ELISA using urea-soluble antigen of Trichinella spiralis

Urea-soluble antigens of Trichinella spiralis infected larva were preparedand the efficiency of the antigens in diagnosis of trichinosis by ELISA wasstudied.Specific IgG antibodies were detected by ELISA using urea-solubleantigens in 91.67% (22/24) of 24 serum samples taken from patients withtrichinosis and 91.67% (11/12) of 12 blood spots on filter paper.Specific IgMantibodies were seen in 95.24% (20/21) of 21 serum samples from patients withtrichinosis using the antigens.Sera of patients infected with Schistosoma japonicumhad some cross teactions to the antigens,but the sera of mice infected withSchistosoma japoni(?) Ancylostoma caninum larva and Plasmodium yoelti were allnegative in the test.     

抗旋毛虫单克隆抗体竞争酶联免疫吸附试验...

Monoclonal antibody competitive ELISA was devised with a highly specific McAb (2G8) against T. spiralis. Among 20 rabbits infected with T. spiralis experimentally. 35% (7/20) were positive on the 17th day post infection (PI); 100% positive on the 31st day PI. No cross reaction was found with 29 sera of rabbits infected with other kinds of helminth. The dynamic antibody titer of five infected rabbits sera were studied with this method. The change may be helpful to judge the state of infection. In short, anti-T. spiralis McAb competitive ELISA can be regarded as a sensitive and specific immunological diagnostic method for T. spiralis infection.     

免疫脂质体趋旋毛虫的靶向性研究

在旋毛虫感染小鼠模型上,体内和体外实验都证实悬挂旋毛虫幼虫单克隆抗体的免疫脂质体(~(14)C-POPC/Chol/PA),在幼虫体内的含量远高于对照脂质体。实验结果表明,免疫脂质体可以提高脂质体的靶向性,为脂质体作为药物载体应用于临床治疗旋毛虫病提供了理论依据。     

旋毛虫体外培养研究

目的 :研究旋毛虫囊蚴在宿主体外培养的情况。方法 :加 2 0 %小牛血清的 RPMI- 16 4 0作为培养基 ,在 37℃、 5 % CO2 的二氧化碳培养箱中培养。结果 :旋毛虫脱囊蚴能在体外合适培养基中存活较长时间。但虫体无明显增大。结论 :旋毛虫脱囊蚴能在体外生存 ,生长和发育还需要其它刺激因子