脑室预注射Wortmannin对沙土鼠海马缺血耐受的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇-3(羟基)激酶(PI-3K)与沙土鼠海马缺血耐受的关系。方法：沙土鼠24只，随机分为A(2min缺血组)、B(5min缺血组)、C(2min缺血 5min缺血组)、D(假手术组)、E(脑室预注射PBS组)、F(脑室预注射Wortmannin组)6组。每组4只。TUNEL法检测海马CA1区锥体细胞凋亡。结果：B组锥体细胞凋亡数较A、C、E3组显著增多，F组凋亡细胞数较C组明显增多。D组未见明显凋亡细胞。结论：脑室预注射Wortmannin可抑制海马CA1区的缺血耐受现象，PI-3K可能参与介导了沙土鼠海马缺血耐受。     

NGF预处理对全脑缺血再灌注沙土鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的探讨NGF预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后海马CA1区神经细胞凋亡的影响及最佳给药时间窗。方法采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑缺血再灌注模型。NGF侧脑室注射法。蒙古种沙土鼠30只随机分为五组，每组6只：假手术组（A）、缺血再灌注损伤组（B）、NGF预处理48h、24h、12h组（C、D、E），B、C、D、E各组分别行脑缺血20min再灌注72h后处死取标本。TUNEL法观察沙土鼠脑缺血再灌注后海马CAI区神经细胞凋亡的变化。结果与缺血再灌注损伤组相比，NGF预处理各组可显著减少沙土鼠海马CA1区神经细胞凋亡数目（P〈0．05）；其中以NGF预处理48h组神经细胞凋亡指数最低。结论NGF预处理能明显减轻沙土鼠脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡，具有明显脑保护作用；而以NGF预处理48h脑保护效果最好。     

异丙酚对新生鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:研究异丙酚对新生鼠海马神经细胞凋亡的影响.方法:新生7d SD大鼠42只随机分为三组(n=14只).雌雄各半:对照组(A组)和异丙酚单次注射组(B组)腹腔注射生理盐水7.5ml/kg,1次/d,连续6d;第7 d分别注射生理盐水7.5ml/kg 和异丙酚75 mg/kg;异丙酚多次注射组(C组)腹腔注射异丙酚75 mg/kg,1次/d,连续7 d.于第7 d给药后3 h,各组抽取2只断尾取血测定血糖;给药后5 h,各组随机抽取6只用免疫组化方法测定海马CAl区caspase-3表达水平.其余6只3周后处死.在光镜下观察海马CAl区锥体细胞的形态及缺失情况.结果:与对照组(A组)比较,异丙酚单次注射组(B组)和异丙酚多次注射组(C组)caspase-3表达均明显增高(P<0.05),海马CAl区单位面积锥体细胞不同程度减少(P<0.05),C组较B组上述改变更为显著(P相似文献   

全脑缺血再灌注后HSP70的表达及其与缺血耐受关系的实验研究

目的：研究不同时间大鼠全脑缺血预处理诱导热休克蛋白70(HSP70)的表达及其与缺血耐受间的关系。方法：用改良的四动脉阻断法制备全脑缺血模型，分别预缺血1、2、5、10min。2天后用免疫组化SP法检测海马CAl区HSP70的表达，相同的预缺血分组间隔2天再次给予20min的全脑缺血，5天后观察海马CAl区的病理学改变。结果：预缺血1min组未见HSP70表达，2min组少量表达，5min组大量表达，10min组表达减少。预缺血1min组和10min组再缺血后CAl区锥体细胞大量坏死，2min组和5min组坏死细胞较少。结论：HSP70是脑缺血敏感的应激标志，与脑缺血耐受的机制有关，在一定的缺血时间窗内存在量效关系。     

氯化锂对沙土鼠前脑缺血后神经细胞凋亡及磷酸化Akt蛋白表达的影响

目的:观察沙土鼠前脑缺血后神经细胞凋亡的变化及磷酸化Akt蛋白的表达并探讨氯化锂对其干预作用。方法:夹闭沙土鼠双侧颈总动脉5min,制备前脑缺血损伤模型。沙土鼠72只,随机分为假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)、氯化锂预处理组(LI鄄Pre组)、氯化锂治疗组(LI鄄Post组)。依术后处死动物时间的不同,各组再分别分为3个亚组,每个亚组6只动物。采用TUNEL染色法观察海马CA1区神经细胞凋亡的变化,免疫组化(SP法)检测大脑皮质区磷酸化Akt蛋白的表达。结果:①TUNEL染色:脑缺血再灌注后3天,与相应IR组相比较,LI鄄Pre组和LI鄄Post组海马CA1区TUNEL阳性细胞明显减少(P<0.01);②磷酸化Akt免疫组织化学染色:与相应IR组相比较,LI鄄Pre组或LI鄄Post组各时点亚组大脑皮层部位磷酸化鄄Akt阳性细胞表达显著增多(P<0.05或P<0.01)。结论:①氯化锂能显著减轻沙土鼠短暂前脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡;②氯化锂的脑保护作用与其激活PI3鄄K/Akt信号传导通路有关。     

尼卡地平对脑缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡的影响

目的　研究沙土鼠短暂性脑缺血再灌注后细胞凋亡及尼卡地平处理的影响。方法　实验动物随机分为正常组、假手术组、对照组、尼卡地平处理组。正常组不进行手术操作 ,不进行脑缺血 ;假手术组只进行手术操作 ,不进行脑缺血 ;对照组阻断双侧颈总动脉 15min造成完全性前脑缺血模型 ;尼卡地平处理组在脑缺血前 30min给予腹腔注射尼卡地平 2mg/kg。用TdT介导的原位末端标记 (TUNEL)法来检测死亡神经元的DNA片段。HE染色计数海马CA1区 1mm长度内正常的锥体细胞数。结果　 (1)缺血再灌注后 2～ 4d ,对照组海马CA1区正常锥体细胞数比假手术组明显减少 (P <0 .0 1)。 (2 )缺血再灌注后 2～ 4d ,尼卡地平处理组海马CA1区正常锥体细胞数明显比对照组多 (P <0 .0 1)。 (3)尼卡地平处理组明显减少缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡 (P <0 .0 1)。结论　完全性前脑缺血再灌注后存在细胞凋亡 ;尼卡地平可抑制脑缺血再灌注后海马CA1区细胞凋亡。     

培高利特对脑缺血／再灌注损伤及c-jun表达的影响

目的 研究培高利特对沙土鼠前脑缺血／再灌注损伤海马CA1区神经元凋亡及即早基因c-jun表达的影响。方法 应用HE染色法、DNA原位末端标记(TUNEL)法及免疫组织化学染色法，观察沙土鼠前脑缺血5min再灌注1、3及7天，不同时间海马CA1区神经元凋亡和c-jun的表达。结果 沙土鼠短暂脑缺血再灌注3天，海马CA1区约95％的锥体细胞凋亡；再灌注7天，海马CA1区仅残存约5％的存活锥体细胞；再灌注1天，海马CA1区c-jun表达增高，随时间的延长表达逐渐减弱。预先应用培高利特可抑制海马CA1区锥体细胞凋亡、提高存活锥体细胞数、显著抑制c-jun的表达。结论 培高利特具有确切的脑保护作用，抑制c-jun的表达可能是其脑保护作用机制之一。     

沙土鼠脑缺血预处理对缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 探讨缺血预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响。方法 采用阻断双侧颈总动脉制作沙土鼠全脑缺血模型，96只沙土鼠，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉。沙土鼠随机分为四组：SH组：假手术对照组，未行脑缺血预处理；IC组：预处理对照组，予2min脑缺血后来再次缺血；IP组：预处理缺血组，予2min脑缺血，再灌注24h后，再次脑缺血10min；IR组：脑缺血再灌注组，予脑缺血10min后行再灌注。每组据再灌时间点的不同又分为Ⅰ（1d）、Ⅱ（3d）、Ⅲ（5d）、Ⅳ（7d）4个亚组，每个亚组6只动物。呆用TUNEL法检测沙土鼠脑海马CAI区神经细胞凋亡数目。结果 IP可显著减少沙土鼠脑海马CA1区神经细胞凋亡数量（与IR组相比P〈0．01）。结论 脑缺血预处理可显著提高机体对后续缺血的耐受性，其机制可能是通过抑制缺血诱导的神经细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

NGF预处理对全脑缺血再灌注沙土鼠脑皮层神经细胞凋亡的影响

目的: 探讨神经生长因子(NGF)预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后脑皮层神经细胞凋亡的影响.方法: 采用夹闭沙土鼠双侧颈总动脉造成全脑缺血再灌注模型.沙土鼠30只随机分为5组:假手术组(A)、缺血再灌注损伤组(B)、NGF预处理48 h、 24 h、12 h组(C、D、E),B、C、D、E各组分别行脑缺血20 min再灌注72 h后处死取标本,TUNEL法观察沙土鼠脑缺血再灌注后脑皮层神经细胞凋亡的变化.结果: 与缺血再灌注损伤组相比,NGF预处理各组沙土鼠脑皮层神经细胞凋亡数目显著减少(P＜0.05),以NGF预处理48 h组脑保护效果最好.结论: NGF预处理能明显减轻沙土鼠脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡,具有明显脑保护作用,以NGF预处理48 h脑保护效果最好.     

氯胺酮和咪唑安定对全脑缺血大鼠的脑保护作用

目的 探讨氯胺酮和咪唑安定对全脑缺血大鼠的脑保护作用.方法 健康成年SD大鼠40只.随机平均分为假手术组(A组)、缺血组(B组)、氯胺酮组(C组)、咪唑安定组(D组)和氯胺酮复合咪唑安定组(E组),每组8只.以Pulsinelli-Brierley 方法为标准建立四动脉阻断法全脑缺血模型,A组分离椎动脉及颈总动脉后不行全脑缺血,B,C,D,E组行全脑缺血15 min后再灌注,其中C,D,E组于全脑缺血5 miIl时腹腔给药,分别为氯胺酮100 mg/kg,咪唑安定10 mg/lkg,氯胺酮50 mg/kg复合咪唑安定5 mg/kg.再灌注3 d后经心脏灌注固定后取脑制作石蜡切片,分别行HE染色观察海马CA1区神经元存活数目和TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡.结果 A组大鼠海马CA1区神经元大部分存活,少量神经元凋亡;B组神经元很少存活,大量凋亡,与A组差异有显著性;C,D,E组神经元存活数目明显少于A组,多于B组,凋亡数目明显多于A组,少于B组;E组神经元存活数目明显多于C组和D组,凋亡明显少于C组和D组;C组和D组间差异无显著性.结论 氯胺酮与咪唑安定均具有一定的脑保护作用,可明显抑制全脑缺血大鼠海马CA1区的神经元细胞凋亡,二者联用时效果更佳.     

Bcl-2和Bax在缺血预处理保护海马神经元缺血再灌损伤中的作用

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2和bax在缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)保护大鼠海马神经元缺血再灌损伤中的作用。方法:随机将动物分为IPC加缺血再灌组(IPC组)、单纯缺血再灌组(IR组)和对照组。观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测海马CA1区神经元凋亡;免疫组化测定海马CA1区神经元Bcl-2和Bax的表达。结果:IPC组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,Bcl-2呈强表达,Bax表达不明显。结论:IPC诱导Bcl-2表达上调和Bax蛋白表达下调,可抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。     

缺血预处理经抑制线粒体释放细胞色素C减轻大鼠海马神经元缺血再灌注损伤

目的：探讨线粒体细胞色素C的释放在缺血预处理（IPC）保护大鼠海马神经元缺血再灌注损伤中的作用。方法：动物随机分为单纯缺血再灌组（IR组）、IPC加缺血再灌组（IPC+IR组）和对照组。HE染色观察海马CA1区神经元的组织形态学变化；TUNEL染色检测该区神经元凋亡；免疫组化测定该区神经元细胞色素C的表达。结果：IPC+IR组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组，凋亡细胞数显著低于IR组，细胞色素C 的释放明显少于IR组(P均＜0.001)。结论：IPC可经阻止线粒体释放细胞色素C抑制凋亡的发生，对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。     

亚低温减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CAl区Bax表达变化的关系

目的研究亚低温（33℃,4h）减轻沙土鼠脑缺血／再灌注损伤与海马CA1区Bax表达变化的关系,探讨亚低温脑保护的可能机制。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断5min前脑缺血／再灌注损伤模型,随机分为假手术组（SH）、常温再灌注组（IR）、低温假手术组（HSH）、低温再灌注组（HIR）,每组根据再灌注的不同时间点（2h、4h、1d、3d、5d）又分为5个对应的亚组（／Z=6）。在预定时间点行开阔法迷宫检查,TUNEL法检测海马CA1区的凋亡细胞,苏木精-伊红染色检测海马存活细胞,免疫组化检测Bax在海马CA1区的动态变化。结果4h亚低温可显著减少缺血沙土鼠1d、3d、5d的探索活动及CA1区的凋亡细胞,增加存活细胞,抑制脑缺血后海马CA1区Bax的早期表达（2h、4h、1d）。结论4h亚低温对沙土鼠5min前脑缺血有确切的保护作用,抑制海马CA1区缺血／再灌注早期Bax的表达可能是其减少海马细胞凋亡、产生脑保护作用的机制之一。     

缺血预处理对缺血再灌注后神经元长期保护效应的观察

目的 动态观察缺血预处理后脑缺血大鼠脑皮层和海马CA1区神经元凋亡数和神经元数，探讨缺血预处理能否提供长时期神经元保护作用。方法 四血管阻断法复制全脑缺血模型，动物随机分为非缺血对照组、预处理对照组、缺血预处理组和缺血组。采用TUNEL和尼氏染色法观察缺血后不同时相点皮层及海马CA1区神经元凋亡细胞数和神经元数。结果 全脑缺血可诱导皮层及海马CA1区神经元凋亡；缺血预处理明显减少缺血再灌注后的神经元凋亡。缺血组神经元在缺血后7天明显减少．12周时大量减少；缺血预处理后7天神经元未见明显减少，但12周时仍然大量减少，与缺血组相比无显著差异。结论 全脑缺血可能通过诱导缺血区神经元凋亡，导致缺血区神经元的大量丢失；缺血预处理可在短时间内提供一定程度的神经元保护作用，但不能完全阻止缺血后神经元的凋亡，可能仅仅是推迟了缺血后神经元凋亡发生的进程。     

针刺预处理对高龄大鼠短暂性脑缺血/再灌注损伤后海马神经元的保护作用

目的 观察针刺预处理对老年大鼠短暂性缺血/再灌注损伤后海马CA1区神经元凋亡的影响.方法 健康老年雄性Wistar大鼠120只,随机分为四组每组30只.组Ⅰ(单纯脑缺血/再灌注组):四动脉阻断法全脑缺血4 min建立老年大鼠全脑缺血模型;组Ⅱ(针刺预处理后脑缺血/再灌注组):连续5 d对百会穴实施穴位针刺预处理(疏密波,强度1mA,频率15 Hz),每天持续30 min,然后建立伞脑缺血模型;组Ⅲ(单纯针刺预处理组):仅针刺百会穴30 min/d,持续5 d;组Ⅳ(假手术组),仪暴露4条动脉,不缺血.每组分别于缺血后12 h、1、2、3和7 d各随机处死6只大鼠,随机抽取一只动物提取海马CA1区脑组织作透射电镜观察神经元超微结构,余下的5只光镜下观察海马神经元形态和凋亡细胞,监测Caspage-3蛋白表达.结果 各组于光镜和电镜下均可见凋亡神经元,与针刺对照组(再灌注2 d时6.7个±0.8个)和假手术组(再灌注2 d时7.2个±0.7个)相比,脑缺血再灌注组和针刺预处理后脑缺血再灌注组细胞凋亡数和Caspase-3表达阳性细胞数均显著增多,再灌注2 d后达峰值,差异有统计学意义(P<0.01);与脑缺血再灌注组(再灌注2 d时44.5±2.0比78.8±4.5)相比,针刺预处理后脑缺血再灌注组细胞凋亡数(冉灌注2 d时30.6±2.7个)和Cagpage-3表达阳性细胞数(再灌注2 d时43.8±2.4个)显著减少,差异有统计学意义(P<0.01).结论 针刺预处理可通过调控caspase-3蛋白的表达对老年大鼠短暂脑缺血再灌注损伤起到的保护作用.

Abstract：

Objective To investigate the effects of acupuncture pre-conditioning on apoptosis in hippocampal neurons following ischemia-reperfusion injury in aged rats. Methods A total of 120 senile male Wistar rats aged 19-21 months (corresponding to 60-year-old human being) weighting 550-710 g were randomly divided into 4 groups (n = 30 each). Cerebral ischemie group: 4-vessel-block was conducted for 4 minutes to establish cerebral ischemie models; Acupuncture pre-eonditioning group: electroacupuneture was applied at acupoint Baihui ( GV20 ) with a frequency of 15 Hz and 2 mA for 30 minutes once daily for 5 days. Then the rats received 4-vessel-block for 4 minutes; Sham-operation group: 4 vessels were exposed; Sham-acupuncture group: only eleetroaeupuncture for 5 days without operation. The rats were sacrificed at the end of predetermined duration of reperfusion 12 h, 1, 2, 3 and 7 d respectively. The brains were immediately harvested and hippocampal CA1 region was isolated for ( 1 ) light and electron microscopic examinations of hippoeampal neurons; (2) detection of apoptotic neurons (TUNEL) ; (3) determination of easpase-3 protein expression with SABC (streptavidin-biotin-poroxidase complex) immuno-histoehemieal technique. Results There were apoptotic neurons in all groups. The numbers of apoptotic neurons and positive neurons of caspase-3 significantly increased in the acupuncture pre-conditioning and cerebral isehemic groups versus the sham-acupuncture and sham-operation groups ( P < 0. O1 ). And the numbers of apoptotic neurons and positive neurons of caspase-3 significantly decreased in the acupuncture preconditioning group versus the cerebral ischemic group (P < 0.01 ). Conclusion Acupuncture preconditioning can decrease the neuronal apoptosis after ischemia-reperfusion injury through a lowered expression of caspase-3 protein in senile rats.     

多巴胺D1,D2受体激动剂对脑缺血/再灌注损伤的影响

目的 研究多巴胺D1,D2受体激动剂对沙土鼠前脑缺血/再灌注（I/R）海马CA1区神经元凋亡及动物行为学的影响.方法 采用沙土鼠前脑I/R模型,缺血时间5 min.动物分为假手术组、I/R组、SKF-38393组、培高利特组.分别于再灌注1天、3天及7天行开阔法行为学和组织病理学观察以及原位末端标记（TUNEL）法检查CA1区神经元凋亡.结果 行为学检查结果显示,I/R组再灌注各时间点沙土鼠探索活动较假手术组明显活跃（P〈0.05）,培高利特组探索活动较I/R组明显减少（P〈0.05）;病理学及TUNEL结果显示, 培高利特组再灌注3天及7天海马CA1区存活锥体细胞较I/R组增多（P〈0.01）,凋亡细胞较I/R组减少（P〈0.05）.预先应用SKF-38393对以上结果无明显影响.结论 多巴胺D2受体激动剂培高利特能减轻脑I/R海马神经元凋亡及动物行为学异常.     

醒神解毒方预处理减轻全脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤

目的：观察比较醒神解毒方预处理与缺血预处理减轻全脑缺血再灌注大鼠海马神经元损伤的作用。方法：实验选用24只雄性SD大鼠,随机将24只大鼠分为假手术组、缺血预处理组、药物处理组、脑缺血再灌注组,采用热凝椎动脉,钳夹双侧颈总动脉建立全脑缺血模型,缺血预处理组预缺血3min,3天后给予缺血10min,再灌注24h后处死。假手术组暴露双侧颈总动脉不夹闭。缺血再灌注组,夹闭双侧大脑颈总动脉10min,再灌注24h后处死。药物预处理组,灌胃2周后,做缺血再灌注处理,运用HE染色光镜下观察存活海马神经元细胞数,电镜下观察海马神经元超微形态的改变。结果：药物预处理存活神经元与缺血预处理存活神经元比较,P〉0.05,两者与缺血再灌注比较,P〈0.01。假手术组可见海马神经元细胞形态正常,脑缺血预处理组和药物预处理组海马CA1区神经元损伤明显减轻,只有少量细胞有轻度水肿,未见坏死。而脑缺血再灌注组神经元变性严重。结论：药物预处理对随后的脑梗死有明显的保护作用,能诱导缺血耐受的产生。     

Akt信号途径参与二氮嗪预处理抑制缺氧复氧损伤大鼠海马神经元的凋亡

目的 探讨二氮嗪(DZ)预处理能否通过上调Akt信号增强Bcl-2表达、抑制Bax表达发挥抗凋亡作用.方法 离体培养9～10 d SD大鼠海马神经元分为正常对照组(A组)、缺氧组(B组)、缺氧+DZ 100 μmol/L组(c组)、缺氧+DZ 100 μmol/L+5-羟癸酸100 μmol/L组(D组)、缺氧+DZ 100 μmol/L+LY294002 50 μmol/L组(E组),自缺氧前2 d开始,神经元接受DZ预处理,每天1次,每次1 h.每次实验,每组16孔或2皿细胞,实验重复3次.比较缺氧4 h复氧48 h各组海马神经元的活力、凋亡率、Akt、Bcl-2和Bax蛋白的表达程度.结果 缺氧复氧后C组吸光度值较B、D、E组显著增高(P＜0.05);其他缺氧各组间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).C组凋亡率较B、D、E组显著减低(P＜0.05).C组Akt、Bcl-2表达较B、D、E组强烈(P＜0.05),Bax表达则减弱(P＜0.05).B、D、E组问比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 DZ可经Akt信号通路上调Bcl-2/Bax蛋白比值而抑制缺氧复氧损伤大鼠海马神经元的凋亡.