兔血管内皮细胞与平滑肌细胞体外增殖的相互影响

目的　研究在体外培养条件下血管内皮细胞条件培养基（ECCM）、内皮素-1（ET-1）、内皮素转化酶抑制剂phosphoramidon对血管平滑肌细胞（SMC）增殖的影响,同时研究了血管平滑肌细胞条件培养基（SMCCM）对血管内皮细胞（EC）增殖方面的影响. 方法　EC和SMC均来源于兔主动脉,在获得了EC和SMC的条件培养基（CM）后,分别用两者以及ET-1进行实验,细胞的增殖率通过3H掺入法进行测定. 结果　ECCM和ET-1可明显促进SMC的增殖,并呈现剂量依赖性. 其最大效应分别为(190±11)% (100% ECCM)和(166±9)% (100 ng*L-1 ET-1). 而phosphoramidon存在条件下的ECCM使其分裂作用降低了(33±2)%. SMCCM抑制EC的增殖,这种抑制作用并非剂量依赖性,其最大的抑制效应为基本水平的(78±3)%. 结论　ECCM和ET-1可促进SMC的增殖作用. phosphoramidon可明显地抑制ECCM对SMC的增殖作用.同时SMCCM对EC的增殖起抑制作用.     

血管内放射对猪受损髂动脉平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 :观察血管内放射照射对猪髂动脉球囊损伤后血管新生内膜平滑肌细胞(SMC)增殖与凋亡的影响。方法 :2 7头小型猪分为 3组 ,所有猪行髂动脉球囊过大扩张 ,通过后装装置将 1 0Gy和 2 0Gy的192 Ir放射源分别置于 9只猪受损髂动脉部位 ,其他 9只猪的受损髂动脉作为对照。每组的 9头猪分别术后 3天、1 0天和 2 8天分 3次处死。用增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法 (TUNEL)法检测内膜SMC增殖和凋亡情况。结果 :代表血管内膜增殖的PCNA指数在 1 0天和 2 8天宰杀的猪中 ,放射治疗组明显低于对照组。术后 1 0天内膜SMC凋亡在对照组和 1 0Gy、2 0Gy组的值分别为 :(1 85± 0 49) %比 (2 2 7± 0 49) %(P >0 0 5)和 (1 85± 0 49) %比 (2 53± 0 45) %(P <0 0 5) ;术后 2 8天上述值分别为(1 61± 0 3 5) %比 (3 1 1± 0 51 ) %(P <0 0 5)和 (1 61± 0 3 5) %比 (7 0 5± 1 82 ) %(P <0 0 5) ;2 8天时 2 0Gy组的内膜SMC凋亡明显高于 1 0Gy组 (7 0 5± 1 82 ) %比 (3 1 1± 0 51 ) %(P <0 0 5)。相同的放射剂量时 ,2 8天宰杀猪的髂动脉SMC凋亡高于 1 0天宰杀猪的量。结论 :血管内γ射线照射能抑制小型猪球囊损伤髂动脉内膜SMC增殖和刺激SMC凋     

持续加压应力对兔骨折局部IGF-Ⅰ和骨钙素含量的影响

目的:探讨天鹅记忆接骨器(SMC)固定下持续加压应力对骨折局部胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)和骨钙素含量的影响.方法:30只新西兰大白兔两侧肱骨行中段断骨处理,建立肱骨骨折模型,随机选择一侧肱骨用SMC固定,对侧用4孔加压钢板(DCP)固定,分别于术后第2、3、4、6、8和12周各处死5只兔取材,标本按内固定物分为SMC组和DCP组(n＝5).用放射免疫技术测定骨折局部IGF-Ⅰ和骨钙素的含量.结果:SMC组和DCP组IGF-Ⅰ和骨钙素的含量随时间延长均呈增高趋势.术后3、4和6周,SMC组IGF-Ⅰ含量分别为(2.98±0.32)、(3.36±0.18)和(3.47±0.17) ng/mg,DCP组IGF-Ⅰ含量分别为(2.54±0.21)、(2.78±0.43)和(3.06±0.62) ng/mg,SMC组明显高于DCP组(P<0.05);术后4、6和8周,SMC组骨钙素含量分别为(387±23)、(395±31)和(416±37) ng/mg,DCP组骨钙素含量分别为(323±16)、(356±51)和(378±26) ng/mg,SMC组明显高于DCP组(P<0.05).结论:SMC固定后所产生的持续稳定的记忆加压应力有利于促进兔骨折端IGF-Ⅰ和骨钙素的分泌.     

持续加压应力对兔骨折局部IGF-和骨钙素含量的影响

目的 :探讨天鹅记忆接骨器 (SMC)固定下持续加压应力对骨折局部胰岛素样生长因子 (IGF- )和骨钙素含量的影响。 方法 :30只新西兰大白兔两侧肱骨行中段断骨处理 ,建立肱骨骨折模型 ,随机选择一侧肱骨用 SMC固定 ,对侧用 4孔加压钢板 (DCP)固定 ,分别于术后第 2、3、4、6、8和 12周各处死 5只兔取材 ,标本按内固定物分为 SMC组和 DCP组 (n=5 )。用放射免疫技术测定骨折局部 IGF- 和骨钙素的含量。 结果 :SMC组和 DCP组 IGF- 和骨钙素的含量随时间延长均呈增高趋势。术后 3、4和 6周 ,SMC组 IGF- 含量分别为 (2 .98± 0 .32 )、(3.36± 0 .18)和 (3.4 7± 0 .17) ng/ mg,DCP组 IGF- 含量分别为 (2 .5 4± 0 .2 1)、(2 .78± 0 .4 3)和 (3.0 6± 0 .6 2 ) ng/ mg,SMC组明显高于 DCP组 (P<0 .0 5 ) ;术后 4、6和 8周 ,SMC组骨钙素含量分别为 (387± 2 3)、(395± 31)和 (4 16± 37) ng/ mg,DCP组骨钙素含量分别为 (32 3± 16 )、(35 6± 5 1)和 (378±2 6 ) ng/ mg,SMC组明显高于 DCP组 (P<0 .0 5 )。结论 :SMC固定后所产生的持续稳定的记忆加压应力有利于促进兔骨折端IGF- 和骨钙素的分泌。     

IMDM营养液保存角膜的实验研究

本文应用IMDM营养液对保存2周的兔角膜14只和正常兔角膜10只进行了24例穿透性角膜移植.移植术后角膜植片透明,术后3、7、14、21天的角膜厚度保存组分别是417±28μm、357±15μm、34917±μ(?)、343±11μm;正常对照组分别是409±34μm、356±10μm、343±17μm、341±20μm,两组比较差异无显著性(P>0.05)。移值术后1个月内皮细胞损失率,保存组为32.9%,正常对照组为29.1%,两组比较差异无显著性(P>0.05).扫描电镜观察显示植片内皮细胞镶嵌结构完整。提示IMDM营养液可保存兔角膜2周.     

放射性32P对兔平滑肌细胞和内皮细胞增殖的影响

目的 评价放射性次磷酸钙[32P-Ca（H2PO2）2]溶液和以化学镀法制备的32P钢丝对体外培养的兔平滑肌细胞（SMC）和内皮细胞（EC）增殖的影响。方法 分别将5、10、20、40、80μCi的32P-Ca（H2PO2）2液加人体外培养的兔SMC和EC培养液中,72h后检测细胞生存力;以化学镀法制备不同活度的32P放射性钢丝,观察其对细胞生长的抑制范围。结果 当32P-Ca（H2PO2）2放射活度为5μCi时,对EC的生存力并无明显影响,却可导致SMC生存力显著降低（P<0.05）;当放射活度增加至10μCi时,虽然SMC和EC的生存力均显著降低,但对SMC生存力的影响显著大于对EC的影响（P<0.05）;高于20μCi则两种细胞的敏感性趋于一致。32P放射性钢丝对细胞生长有明显的抑制作用,而且这种作用有量一效关系。同一活度组的钢丝对SMC的抑制作用显著强于对EC的抑制（P<0.05）。结论32P-Ca（H2PO2）溶液和以化学镀法制备的32P钢丝可显著抑制SMC和EC的增殖;对较低的放射活度,EC耐受力大于SMC;在冠状动脉内进行低活度的放射,对再狭窄的预防有重要意义。     

洛沙坦抑制平滑肌细胞增殖和神经肽Y作用的关系

【目的】探讨洛沙坦(Losartan)对高血压病人血管重塑的作用机制以及肾素-血管紧张素系统和神经肽Y(NPY)在高血压、动脉粥样硬化等心血管疾病发生的作用。【方法】实验分为对照组、Losartan组、NPY组及Losartan+NPY4组,应用生物化学方法(MTT)和荧光免疫组化定量技术(ACAS570共聚焦激光扫描显微细胞仪),每组扫描细胞总数在200个以上,观察Losartan对体外培养血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响和与NPY作用的关系。【结果】对照组、Losartan组、NPY组及Losartan+NPY4组VSMC增殖活度(吸光度表示)分别为0.2239±0.0010、0.2045±0.0013、0.2626±0.0025、0.2440±0.0013,增殖细胞核抗原(PCNA)荧光值分别为1543±200、1339±233、1649±233、1545±256。Losartan可抑制体外培养和NPY作用下VSMC的增殖,与对照组相比,VSMC增殖活度和PCNA的表达均明显降低(P<0.01)。【结论】Losartan对高血压的治疗既有Losartan对VSMC增殖的抑制作用,也有对NPY等缩血管因素的拮抗作用。     

催乳素对人B淋巴细胞增殖功能的影响

目的探讨催乳素(PRL)对B淋巴细胞生长的调节作用。方法将生理浓度(10 ng.ml-1)的PRL加到IM-9细胞中培养72 h,以MTT比色分析法检测细胞增殖情况。结果空白对照组、脂多糖(LPS)组、PRL组、LPS+PRL组、LPS+溴隐停(Br)组、LPS+PRL+Br组A值分别为1.00±0.09、1.11±0.14、1.21±0.23、1.38±0.44、0.95±0.14、0.89±0.11。与空白对照组比较,PRL(t=2.689,P<0.01)、LPS(t=2.292,P<0.05)均能促进IM-9细胞的增殖;与LPS组相比,加入Br后对IM-9细胞的增殖有抑制作用(t=2.556,P<0.05);与LPS-PRL组相比,加入Br后对IM-9细胞的增殖亦有抑制作用(t=3.417,P<0.01)。结论人PRL能明显地促进IM-9细胞的增殖,Br对IM-9细胞的增殖有抑制作用。     

HIV-1 Nef重组重叠肽诱导小鼠免疫保护作用研究

目的探讨HIV-1 Nef重组重叠肽诱导小鼠细胞免疫应答的效果。方法以HIV-1 LAI Nef重组重叠肽和相应蛋白免疫接种BALB/c和C57BL/10小鼠,每组5例,分离小鼠脾单个核细胞(spleen mononuclear cell,SMC),以ELISPOT和流式细胞术检测特异性细胞应答,以大剂量Nef重组痘苗病毒攻击试验检测重组重叠肽对免疫小鼠的保护作用。结果在C57BL/10小鼠中,佐剂组ELISPOT为阴性,重叠肽组和相应蛋白组LAI Nef特异性细胞免疫应答分别为(145.7±36.2)SFU/106SMC和(24.2±10.2)SFU/106SMC(P=0.001),在BALB/c小鼠中分别为(148.8±50.4)SFU/106SMC和(19.8±9.0)SFU/106SMC(P=0.004),而NL4-3 Nef特异性细胞免疫应答分别为(104.0±33.8)SFU/106SMC和(20.7±9.5)SFU/106SMC。重组重叠肽疫苗诱导的Nef特异性CD4+和CD8+细胞的百分比分别为1.53和0.80。在攻毒试验中,重叠肽组、蛋白组、佐剂组和空白对照组的生存率分别为80%、40%、20%和0%。结论重组重叠肽免疫小鼠可产生具有保护作用的较强的广谱特异性细胞免疫应答,对于不同株系的Nef具有交叉反应,重组重叠肽的免疫接种效果强于相应蛋白。     

放射性32P对兔平滑肌细胞和内皮细胞增殖的影响

目的评价放射性次磷酸钙[32P-Ca(H2PO2)2]溶液和以化学镀法制备的32P钢丝对体外培养的兔平滑肌细胞(SMC)和内皮细胞(EC)增殖的影响. 方法分别将5、10、20、40、80μCi的32P-Ca(H2PO2)2液加入体外培养的兔SMC和EC培养液中,72h后检测细胞生存力;以化学镀法制备不同活度的32P放射性钢丝,观察其对细胞生长的抑制范围. 结果当32P-Ca(H2PO2)2放射活度为5μCi时,对EC的生存力并无明显影响,却可导致SMC生存力显著降低(P＜0.05);当放射活度增加至10μCi时,虽然SMC和EC的生存力均显著降低,但对SMC生存力的影响显著大于对EC的影响(P＜0.05);高于20μCi则两种细胞的敏感性趋于一致.32P放射性钢丝对细胞生长有明显的抑制作用,而且这种作用有量-效关系.同一活度组的钢丝对SMC的抑制作用显著强于对EC的抑制(P＜0.05). 结论32P-Ca(H2PO2)溶液和以化学镀法制备的32P钢丝可显著抑制SMC和EC的增殖;对较低的放射活度,EC耐受力大于SMC;在冠状动脉内进行低活度的放射,对再狭窄的预防有重要意义.     

早产、足月胎兔动脉导管平滑肌细胞中胱硫醚-γ-裂解酶mRNA表达及意义

目的:研究早产和足月胎兔动脉导管平滑肌细胞胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)mRNA的表达情况。方法:选取日本大耳白胎兔早产组(孕25 d)、足月组(孕30 d)各10只,分离动脉导管平滑肌组织,采用组织块改良贴壁法进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养,半定量逆转录集合酶链(RT-PCR)检测胱硫醚-γ-裂解酶mRNA的表达。结果:经10～15 d培养后,倒置显微镜下观察,动脉导管平滑肌细胞呈梭形或放射状生长,高低起伏形成典型的"峰-谷"样,早产组和足月组CSE mRNA的表达值分别为(29.67±6.7)和(10.35±4.5),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:早产及足月胎兔动脉导管平滑肌细胞均表达CSE mRNA,表达量可能与胎龄有关,提示动脉导管组织可能内源性生成H2S气体,且在宫内低氧环境中H2S可能是维持动脉导管开放状态的一个重要因素。     

柔脉胶囊抗动脉粥样硬化的实验研究

目的：探讨柔脉胶囊对动脉粥样硬化（ＡＳ）的防治作用。方法：以大白兔建立实验性ＡＳ模型，进行柔脉胶囊抗ＡＳ作用的模拟实验，分别进行免动脉大体形态和超微结构的病理观察。结果：大小剂量观察组主动脉内膜光滑，仅有许散在的点状脂纹，内皮细胞完整，仅有少量的泡沫细胞，内皮有少量增生的胶原纤维，弹力纤维及平滑肌细胞，细胞超微结构正常，尤以大剂量组作用更显著，有别于阳性对照组模型的ＡＳ病变。结论：柔脉胶囊有明显抗     

血管紧张素Ⅱ对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响,以探讨血管钙化发生的机制。方法:体外培养人动脉平滑肌细胞,用β甘油磷酸(βGP)诱导细胞钙化。培养细胞分4组:正常对照组;βGP组:βGP终浓度为10mmol·L-1;AngⅡ组:AngⅡ终浓度为10-7mol·L-1;βGP+AngⅡ组:同时加入相同浓度的βGP和AngⅡ,连续培养10d。采用Vonkossa染色、细胞层钙沉积定量和细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断钙化程度,用流式细胞仪测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:βGP组细胞Vonkossa染色见大量黑色颗粒状沉积物弥漫分布于细胞层,βGP+AngⅡ组细胞之间散在分布黑色沉着点;βGP+AngⅡ组细胞钙沉积显著低于βGP组[分别为(1.336±0.096)和(2.056±0.441)μmol·L-1,P<0.01];βGP+AngⅡ组细胞内ALP活性显著低于βGP组[分别为(277.57±87.81)和(691.27±128.06)IU·L-1,P<0.01]。正常对照组与AngⅡ组细胞比较,Vonkossa染色、细胞钙沉积量和ALP活性均无显著性差异。流式细胞仪结果显示,βGP+AngⅡ组细胞凋亡率显著低于βGP组,G0/G1期细胞比例降低,S期的比例升高(P<0.05)。结论:10-7mol·L-1的AngⅡ可抑制钙化血管平滑肌细胞的体外钙化进程。其作用可能与抑制ALP活性和促进细胞增殖、抑制凋亡有关。     

壳多糖对兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞增殖的影响

目的：研究壳多糖对体外培养的兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞生长的影响。方法：将不同质量浓度（０．２,２,２０,２００,２０００μｇ／ｍｌ）的壳多糖溶液分别加入兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞培养液中,培养１２,２４,４８ｈ后用ＭＴＴ经色法测定细胞数。结果：平滑肌细胞数随着壳多糖质量浓度和作用时间的增加而减少;内皮细胞数随着其质量浓度和作用时间的增加,在一定范围内相应增加。结论：壳多糖能抑制兔主动脉平滑肌     

丹参酮ⅡA抑制体外培养兔血管平滑肌细胞迁移及机制

目的观察丹参酮ⅡA对体外培养兔血管平滑肌细胞的影响；初步探讨丹参酮ⅡA影响体外兔血管平滑肌细胞迁移的可能机制。方法利用组织贴块法培养兔胸主动脉的中膜平滑肌细胞，经传代后分组培养。用划痕法在相差显微镜下观测丹参酮ⅡA对细胞迁移的影响；并采用TRITC-鬼笔环肽标记平滑肌细胞F—actin，观察该药物对细胞骨架微丝结构的影响。结果丹参酮ⅡA以时间和浓度依赖方式抑制体外培养兔血管平滑肌细胞迁移；同时，丹参酮ⅡA对兔血管平滑肌细胞的细胞骨架微丝结构具有显著影响。结论丹参酮ⅡA对体外培养兔血管平滑肌细胞的迁移有抑制作用，上述作用可能与影响细胞骨架微丝结构有关。     

Experimental study on the effect of ligustrazine in the prevention of intimal proliferation of deendothelial artery

Ligustrazine possesses multiple pharmacologicaleffects including anti- platelet,anticoagulation,calci-um antagonism and so on[1,2 ] and is able to interfer-ing with multiple cascades of restenosisafter percuta-neou transluminal coronary angioplasty ( PTCA) .Toevaluate the possibility of using ligustrazine in theprevention of restenosis,we investigated the effectsof ligustrazine on the intimal thickening ofair- injuredcarotid artery of rats,and examined the effects ofligustrazine on the prolif…     

A novel bioreactor to simulate urinary bladder mechanical properties and compliance for bladder functional tissue engineering

Background  Bioreactors are pivotal tools for generating mechanical stimulation in functional tissue engineering study. This study aimed to create a bioreactor that can simulate urinary bladder mechanical properties, and to investigate the effects of a mechanically stimulated culture on urothelial cells and bladder smooth muscle cells.

Methods  We designed a bioreactor to simulate the mechanical properties of bladder. A pressure-record system was used to evaluate the mechanical properties of the bioreactor by measuring the pressure in culture chambers. To test the biocompatibility of the bioreactor, viabilities of urothelial cells and smooth muscle cells cultured in the bioreactor under static and mechanically changed conditions were measured after 7-day culture. To evaluate the effect of mechanical stimulations on the vital cells, urethral cells and smooth muscle cells were cultured in the simulated mechanical conditions. After that, the viability and the distribution pattern of the cells were observed and compared with cells cultured in non-mechanical stimulated condition.

Results  The bioreactor system successfully generated waveforms similar to the intended programmed model while maintaining a cell-seeded elastic membrane between the chambers. There were no differences between viabilities of urothelial cells ((91.90±1.22)% vs. (93.14±1.78)%, P >0.05) and bladder smooth muscle cells ((93.41±1.49)% vs. (92.61±1.34)%, P >0.05). The viability of cells and tissue structure observation after cultured in simulated condition showed that mechanical stimulation was the only factor affected cells in the bioreactor and improved the arrangement of cells on silastic membrane.

Conclusions  This bioreactor can effectively simulate the physiological and mechanical properties of the bladder. Mechanical stimulation is the only factor that affected the viability of cells cultured in the bioreactor. The bioreactor can change the growth behavior of urothelial cells and bladder smooth muscle cells, resulting in the cells undergoing adaptive changes in mechanically-stimulated environment.

     

舒芬太尼对大鼠腹主动脉平滑肌细胞钙激活钾电流的影响

目的:观察舒芬太尼对大鼠腹主动脉平滑肌细胞(AASMCs)钙激活钾电流(IKCa)的影响,探讨其扩张血管的作用机制。方法:用酶消化法急性分离AASMCs,采用全细胞膜片钳技术记录IKCa,观察不同浓度(1×10-8、3×10-8、1×10-7mol/L)舒芬太尼对该电流的影响。结果:与不加药对照组相比舒芬太尼能显著增大IKCa幅度(P<0.05或P<0.01),这一作用具有可逆性,并具有浓度依赖性。结论:舒芬太尼能增强AASMCs钙激活钾通道的活动,这一作用可能与临床上观察到的舒芬太尼舒血管效应有关。     

改良成人大隐静脉平滑肌细胞培养方法

目的:研究提高成人大隐静脉平滑肌细胞(hVSMC)体外培养效率的方法。方法:无菌条件下取3 cm左右大隐静脉,去除内外膜后,切成1 mm×1 mm大小组织块,贴块法培养,高糖DMEM中加入血小板衍生生长因子(PDGF)10μg/L,免疫组织化学法鉴定平滑肌细胞。结果:大隐静脉平滑肌细胞沿组织块长出时间为8-12 d,原代培养(22±2)d传第1代,免疫组织化学染色细胞平均阳性率≥98%。结论:PDGF和高糖克服了hsVSMC体外培养休眠期过长的缺点。运用该方法,稳定获得hsVSMC原代细胞,且重复性好,细胞产量较大,简便而有效。     

酶联合消化法培养小鼠主动脉平滑肌原代细胞

目的建立一种适用于体外有效分离培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞的技术方法。方法分离主动脉,用优化的酶联合消化法获取主动脉平滑肌细胞,用形态学法、免疫细胞化学法鉴定。结果该方法所分离的主动脉平滑肌细胞生长旺盛,细胞活性好,7～9d后细胞总量可达到5×105个/瓶,细胞纯度可达85%以上,细胞呈长梭形、放射状、束状生长,平行排列呈峰谷状,免疫荧光显示胞浆内α-SMA蛋白表达阳性。结论该酶联合消化法可在体外短时间内获取数量可观、高纯度的主动脉平滑肌细胞。