白血病红系、粒系造血祖细胞集落测定及血清调控作用研究

本文报告了应用我们已建立的红系造血细胞体外培养方法,并配合粒系造血祖细胞体外培养方法,观察了慢性粒细胞白血病(简称慢粒)红系和粒系造血祖细胞集落细胞的体外增殖特性、集落产率、集落细胞染色体核型变化,以及慢粒集落细胞对刺激因子反应特性。此     

小鼠骨髓红系祖细胞体外培养细胞分化的形态学观察

用改良Iscove甲基纤维素法体外培养小鼠骨髓红系祖细胞,对形成的红系集落细胞分化进行形态学观察。结果发现:(1)在低浓度红细胞生成素培养条件下,处于较晚发育期的红系祖细胞(CFU-E)可形成数十个细胞组成的集落,但各集落间的细胞数量及发育阶段的同步性有较大差异;(2)在高浓度红细胞生成素培养条件下,处于较早发育期的红系祖细胞(BFU-E)可形成数千个甚至上万个细胞组成的大集落,且集落内细胞的发育阶段具较高的同步性;(3)在CFu-E和BFu-E培养集落中均可观察到自然出现的核固缩及排核现象。以上发现为哺乳类红细胞自然排核学说及红系终末细胞中存在不利于细胞核增殖生长的“胞质因子”工作假说提供了有利的佐证。     

肿瘤坏死因子α对红系造血的抑制作用

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）在红系祖细胞造血过程中的作用。方法：利用免疫磁珠法分离并纯化人类外周血CD34^ 细胞，在体外与TNF-α一起培养，测定红系、非红系细胞扩增倍数及集落形成能力；用流式细胞仪检测细胞表面标记。结果：TNF-α抑制暴式红系集落形成单位（BFU-E）的形成及血型糖蛋白A(GpA)的表达，增加红系集落形成单位（CFU-E）和非红系集落的数量；GpA^ 细胞缺乏TNFR Ⅰ表达，TNFα增加GpA^-细胞表达TNFRⅡ；这些TNFRⅡ^ 的GpA^-细胞具有树突状细胞（DC）相关的表达标记。结论：TNF-α抑制红系祖细胞的生长，选择性地发生在分化的早期阶段，与TNF-α诱导增加的DC有关。     

人多能造血祖细胞与前红系祖细胞体外培养的研究

本文以Messner培养体系为基础,并加以改良,在一个培养体系内培养出了人多能造血祖细胞(CFU-Mix)和前红系祖细胞(BFU-E),集落产率高于文献报道。同时,我们改进了细胞离心方法,使单个细胞集落形态完整,记数准确,为研究造血干细胞的分化提供了条件。     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

研究正常人骨髓基质祖细胞在体外传代培养过程中的功能变化,方法：采用体外液体单层和半固体培养法。结果：Ｆ１传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位和粒系祖细胞集落形成单位支持能力最显著,Ｆ２代对有核细胞粘附能力最显著。     

脐血红系祖细胞及其生长刺激因子的比较观察

本文采用细胞集落培养技术,对照研究40例脐血的红系祖细胞（BFU－E）和红细胞生成素（EPO）爆式集落促进活性（BPA）。结果显示,在不加用EPO、BPA而仅加脐血集落刺激因子（CB－CSF）的培养体系中,同样可生成BFU-U－E,而且富含EPO、BPA等红系集落刺激因子。     

不同部位的巨噬细胞培养上清液对小鼠红系血细胞发生的影响

目的:探讨腹腔、肺泡和肝脏的巨噬细胞培养上清液对小鼠早期红系造血祖细胞[用红系爆式集落形成单位(BFU-E)表示]和晚期红系造血祖细胞[用晚期红系集落形成单位(CFU-E)表示]发生的影响.方法:采用造血祖细胞体外培养技术观察3种不同部位的巨噬细胞培养上清液对BFU-E和CFU-E集落数的影响.结果与结论:3种培养上清液均能促进BFU-E和CFU-E的分化与增殖,而肺泡巨噬细胞培养上清液的上述作用更明显.     

人脐血间充质样细胞体外培养的形态学变化

目的:分离培养人脐血间充质样细胞,观察其形态学的变化.方法:取新鲜采集脐带血,用1.077 g/cm3的淋巴细胞分层液密度梯度离心法分离脐血单个核细胞.将脐血单个核细胞接种于37℃、体积分数5%CO2培养箱内培养.于不同时间观察细胞形态的变化.结果:从脐血中可以分离出单个核细胞;培养3 d出现大量的造血细胞集落,瑞氏染色显示粒-巨噬系集落形成单位与红系集落形成单位集落形成最多;培养5 d出现贴壁的扁平状上皮样细胞和长梭形的成纤维样细胞,同时有大量的破骨样细胞混杂;培养1周出现上皮样细胞和成纤维样细胞的集落,此时经胰蛋白酶消化机械吹打可以传代;培养2周以上,出现上皮样细胞的克隆,镜下呈现球形样结构,折光性强.结论:脐血成分复杂,在体外分离培养可以获得形态各异的脐血间充质样细胞.     

多能造血干细胞(CFU-S)的不均一性——Ⅰ.9天CFU-S和13天CFU-S的某些性质比较

与9天CFU-S 比较,13天CFU-S 产生较多的脾集落数,自我更新能力较强,对放射的敏感性较低。9天CFU-S生成的脾集落细胞类型以单系主要是红系细胞为主;13天CFU-S生成的脾集落是以混合系主要是红、粒和巨核三系细胞混合为主,表明13天CFU-S是一类更为原始的多能造血干细胞。     

脐血造血细胞培养的特性

目的　培养脐血中具有造血潜能的造血细胞 ,分析脐血中造血细胞的特性。方法　用密封的采血袋采集脐血 ,采用羟乙基淀粉一次沉淀法分离有核细胞 ,用半固体培养体系培养 ,7天计数红系集落形成单位 (CFU E) ,14天后计数红系爆式集落形成单位 (BFU E)、粒单系集落形成单位 (CFU GM) ,同时染色分析集落的组成成分。结果　采集 34份脐血 ,平均体积为 (99± 2 2 )ml;有核细胞数为 (0 6 4～ 2 5 9)×10 9,有核细胞回收率为 79 2 %± 13 7% ,回收的有核细胞绝对值为 (1 2 2± 0 43)× 10 9;平均每份脐血中含有BFU E(1 39± 0 75 )× 10 6,CFU GM (2 15± 1 2 2 )× 10 6。结论　脐血富含各期具有造血潜能细胞 ,每份脐血在有核细胞数和各种集落总数都可以满足成人移植的需求。