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长白白眉蝮蛇类凝血酶的研究Ⅰ:纯化方法的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
采用四种纯化方法,对长白白眉蝮蛇类凝血酶的纯化途径进行研究。结果,阴阳离子交换柱、分子筛柱层析法周期较长,收率较低。羟基磷灰石柱法。对类凝血酶有较好的分离效果,但要求样品量小且纯度较高。亲和层析法分离类凝血酶,具有操作简便、纯化周期短、回收率高、处理样品量大等特点。 相似文献
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一种检测凝血酶、类凝血酶的新方法—纤维蛋白原平板法 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:创建一种定量检测凝血酶(Thrombin)、类凝血酶(Thrombin-likeenzymes)活性的新方法—纤维蛋白原平板法。方法:采用纤维蛋白原作为底物,用琼脂糖与纤维蛋白原制作成纤维蛋白原平板,以凝血酶、类凝血酶标准品分别在该平板上的扩散反应,制作相应的标准曲线及回归曲线,并对凝血酶、类凝血酶活性作定量测定。结果:本法制作的凝血酶、类凝血酶检测标准曲线具有良好的线性关系(r=0.9994、r=0.9997)。结论:纤维蛋白原平板法可用于凝血酶、类凝血酶定量测定。具有操作简便、直观、稳定、敏感度高,不受检品浊度或颜色干扰且成本低廉等特点。 相似文献
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长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因特异片段的制备与分挝 总被引:1,自引:0,他引:1
目的分离和纯化长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,为克隆全长类凝血酶cDNA奠定基础.方法应用RT-PCR方法获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,克隆于pGEM-T载体上,进行测序和NCBI数据库同源性分析.结果获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段长度为289bp,该片段与其他种蝮蛇类凝血酶DNA片段有同源性.结论本实验克隆了长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因片段.根据不同种属蛋白质家族成员的保守性和同源性设计引物可以有效地克隆家族成员的DNA片段. 相似文献
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欧阳等对台湾尖吻蝮蛇毒进行分离纯化,并对类凝血酶组分进行系统研究后指出,类凝血酶具有去纤维蛋白原作用,能使血液产生低凝状态. 张洪基以及李麟仙等对大陆尖吻蝮蛇毒进行分离纯化,研究了“去纤酶”的体内抗凝血作用,对大鼠动静脉实验性血栓的形成有预防效应. 本文报导家兔静注尖吻蝮(Agkistrodn acutus)类凝血酶对体外血栓形成的影响进行研究,认为药效满意. 相似文献
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目的:分离和纯化长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,为克隆全长类凝血酶cDNA奠定基础。方法:应用RT-PCR方法获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段,克隆于pGEM-T载体上,进行测序和NCBI数据库同源性分析。结果:获得长白山白眉蝮蛇类凝血酶cDNA片段长度为289bp,该片段与其他种蝮蛇类凝血酶DNA片段有同源性。结论:本实验克隆了长白山白眉蝮蛇类凝血酶基因片段,根据不同种属蛋白质家族成员的保守性和同源性设计引物可以有效地克隆家族成同的DNA片段。 相似文献
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一种新的五步蛇蛇毒类凝血酶Cdna的克隆和序列分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:克隆出五步蛇的类凝血酶cDNA,为研究其结构和功能的关系。并为下一步基因表达开发抗血栓药物提供依据和基础。方法:从五步蛇蛇腺中提取了总RNA,通过反转录合成第一链cDNA,经PCR扩增出五步蛇毒腺中类凝血酶TLE1的cDNA片段,并将其连接到质粒载体扩增,然后进行DNA测序。结果:成功克隆出一种新的五步蛇类凝血酶的cDNA片段。此片段全长794bp,包括编码部分的全长为777bp。推导其编码的蛋白质序列为258个氨基酸,其中包括18个氨基酸的信号肽,6个氨基权的前肽和234个氨基酸的成熟氨基酸顺序。TLE1成熟肽与其它蛇毒类凝血酶相比,蛋白质一级结构具有较高的同源性。结论:从五步蛇中成功克隆出一 种新的类凝血酶cDNA,并确定了它的DNA顺序。 相似文献
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注射用蛇毒类凝血酶为生物制品,经国家食品药品监督管理局批准同意对该药物进行临床研究(批件号2003L02190),临床研究方案经伦理委员会审查批准同意后实施.本研究以同类产品reptilase为对照药品,评价注射用蛇毒类凝血酶对正常人体血液学指标的影响,以探索止血的有效剂量和安全性,为Ⅱ期临床试验用于止血的给药方案提供依据. 相似文献
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正蛇毒类凝血酶作为一种动物来源的蛋白酶类止血药,由于其毒性低、起效快、药效持久且不引起血管内栓塞等优点,近年来已经引起了人们的极大关注[1]。尖吻蝮蛇血凝酶(Haemo-coagulase Agkistrodon,HCA,商品名苏灵)是一种从尖吻蝮蛇毒液中提取分离出的蛇毒类凝血酶,该类凝血酶具有良好的止血作用[2],用于各种出血、血友病血肿、血小板减少性疾病伴出血症 相似文献
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正蕲蛇为蝰科动物五步蛇Agkistrodon acutus(Güenther)的干燥体,具有祛风,通络,止痉等功效,用于风湿顽痹,麻木拘挛,中风,半身不遂,抽搐痉挛,破伤风,麻风疥癣~([1])。蕲蛇主要含有氨基酸、骨胶原、脂肪、多糖等成分~([2]),药理研究显示,其具有抗炎、镇痛、抑制肿瘤活性和杀死癌细胞的作用~([3])。 相似文献
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目的 评估注射用尖吻蝮蛇凝血酶的疗效和安全性,探索并确定注射用尖吻蝮蛇凝血酶的有效剂量.方法 腹部中等手术病例45例随机分为1 U剂量组、2 U剂量组和空白对照组,两试验组分别于手术前30 min缓慢静脉给予1 U和2 U尖吻蝮蛇凝血酶,空白对照组不作任何处理,评价注射用尖吻蝮蛇凝血酶疗效并观察其不良反应.结果 1 U和2U两试验组切口出血量、切口单位面积出血量均较空白对照组小,差异有统计学意义(P<0.05);切口出血时间两试验组较空白对照组小,但差异无统计学意义(P>0.05);2 U剂量组切口单位面积出血量较1 U剂量组小,差异有统计学意义(P<0.05);不良反应3组无统计学意义.结论 1 U和2 U剂量的尖吻蝮蛇凝血酶对腹部手术切口均有一定止血作用,且2U剂量较1 U剂量明显.两试验剂量用药均安全. 相似文献
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目的:从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化出高纯度的纤溶酶并对其进行初步性质研究和氨基酸序列分析。方法:采用DEAE-Sepharose FF离子交换和两次Superdex75PG凝胶过滤,从尖吻蝮蛇蛇毒中纯化出可直接溶解纤维蛋白原的蛋白酶。结果:分离到的纤溶酶相对分子质量为25kD,HPLC分析纯度在97%以上,氨基酸序列分析其N末端为MSTEF QRYME IVVNHS MVKKY NGDSD KIKAW。结论:采用此工艺可从尖吻蛇毒中分离出高比活的纤溶酶,为进一步研究其药理作用奠定了基础。 相似文献
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目的:扩增桂北五步蛇金属蛋白酶原基因,并对其进行序列分析,方法:从广西桂北山区五步蛇毒腺中抽提蛇毒总RNA,采用一步法(RT-PCR和PCR在同一试管内进行)扩增金属蛋白酶原基因,对其进行电泳检测,得到3条特异的DNA条带,大小分别为1.5kb,1.3kb,和800bp,利用平端连接方法将800bp克隆至pGEM-T载体,挑选白色菌落,用酶切和PCR法对其进行鉴定,提取阳性菌落进行测序并推导编码的氨基酸序列。结果:信号肽和前肽和已报道的皖南五步蛇金属蛋白酶很相似。同源性为97.9%,但仅含有部分金属蛋白酶成熟肽的氨基酸序列。结论:推测此800bp片段为广西五步蛇金属蛋白酶原基因的一部分。 相似文献
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目的:克隆桂北五步蛇金属蛋白酶原基因,并对其进行序列分析。方法:采用一步法抽提广西桂北山区五步蛇蛇毒总RNA,经RT-PCR扩增纤溶酶金属蛋白酶原基因,将扩增产物克隆至pGEM-T Easy载体,挑选白色菌落。用酶切和PCR法对其进行鉴定。直接利用纯化PCR产物或提取阳性菌落进行测序并推导其编码的氨基酸序列。结果:RTPCR和PCR扩增得到一约1137bp产物,并将其克隆及测序。结论:和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较,二者之间有91%的同源性。 相似文献
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本文进行蝮蛇类毒素及五步蛇类毒素免疫豚鼠的交叉免疫力比较试验,结果表明蝮属及烙铁头蛇属的蛇毒间存在共同抗原,可激发免疫动物产生交叉免疫力。实验资料提示蝮蛇类毒素的抗原谱比五步蛇类毒素为宽,因此在我国应用蝮蛇类毒素预防蛇伤比应用五步蛇类毒素更为优越。 相似文献
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桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因的克隆和序列分析 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:克隆桂北五步蛇纤溶酶金属蛋白酶基因,并对其进行序列分析。方法:从桂北五步蛇毒腺中抽提总RNA,采用一步法(RT-PCR和PCR在同一管内进行)扩增出纤溶酶金属蛋白基因,利用平端连接的方法将PCR扩增产物克隆至pGEM-T Easy载体,挑选白色菌落,用酶切和PCR法对其进行鉴定,直接利用纯化PCR产物进行测序或提取阳性菌落进行测序。结果:RT-PCR和PCR扩增得到一600bp产物,并被克隆 相似文献
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本文提示五步蛇毒类毒素免疫豚鼠可抵御18mg竹叶青蛇毒(6 MLD)或17.5mg烙铁头蛇毒(7MLD);免疫豚鼠血清每毫升可中和五步蛇毒(640μg相当小鼠8LD_(50))、竹叶青蛇毒160μg(4.6LD_(50))或烙铁头蛇毒140~180μg(3.2~4.1LD_(50))。本文提示五步蛇毒与竹叶青毒及烙铁头毒有共同抗原,可引起交叉免疫。 相似文献
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尖吻蝮蛇毒无出血活性纤维蛋白溶解酶的纯化及其理化性质研究 总被引:9,自引:2,他引:7
目的:从蝮亚科尖吻蝮蛇毒(Agkistrodon acutus venom)中分离纯化出无出血活性纤维蛋白溶解酶(Non—hemonrrhagic fibrinolytic enzyme,NHFLE)并对其理化性质进行研究。方法:应用凝胶过滤和离子交换柱层析法分离纯化尖吻蝮蛇毒NHFLE,用纤维蛋白平板法测定其纤溶活力,用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定其相对分子质量,用皮内出血实验测定其出血活性。结果:从短亚科尖吻蝮蛇毒中分离出一种单一组分的纤维蛋白溶解酶,它的相对分子质量为25000,没有出血活性,在普通纤维蛋白平板和加热平板上都能溶解纤维蛋白,相对活性为粗毒的3.2倍。结论:从尖吻蝮蛇毒中分离出相对分子质量为25000的纯化蛋白是具有直接溶解纤维蛋白活性,而无出血活性的单一的纤维蛋白溶解酶。 相似文献