原花青素对肿瘤坏死因子-α诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响

目的研究原花青素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HeLa细胞凋亡和caspase-8活化的影响。方法采用流式细胞术检测细胞凋亡,荧光检测试剂盒测定caspase-8活性,Westernblot检测caspase-8酶原表达水平。结果原花青素(5、10、20mg/L)对重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α,100μg/L)诱导的HeLa细胞凋亡均有显著的抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对rhTNF-α(100μg/L)诱导的HeLa细胞caspase-8活化均有显著抑制作用(P<0.01),呈剂量依赖关系;原花青素(5、10、20mg/L)对HeLa细胞caspase-8酶原表达无明显影响。结论原花青素抑制TNF-α诱导HeLa细胞凋亡可能与其抑制caspase-8活化有关。     

Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用,探讨其信号传导机制.方法以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞,通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用;利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法,液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化.结果bFGF使该细胞株增殖比明显增加,细胞内TPK、PKC活性升高;genistein使细胞增殖比明显下降,抑制细胞内TPK、PKC活性,且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著.结论bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖,genistein可有效阻滞此传导途径,从而抑制细胞增殖.     

蛋白激酶C在高葡萄糖诱导肾小球系膜细胞核转位信号中的作用

目的探讨肾小球系膜细胞中高葡萄糖对c-fos、c-Jun核转位及丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)活性的影响是否为蛋白激酶C(PKC)活化所介导.方法原代培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(5.5mmol/L D-葡萄糖),高葡萄糖组(25mmol/L D-葡萄糖)和d-α-生育酚预处理的高葡萄糖组.观察干预后24、48、72h原位PKC活性、c-fos、c-Jun核蛋白水平及细胞核MAPK活性.结果高葡萄糖负荷肾小球系膜细胞24h,原位PKC活性、细胞核c-fos、c-Jun蛋白水平及MAPK活性均与正常对照组无显著性差异(P>0.05),而48h后,原位PKC活性、细胞核MAPK活性及c-Jun核蛋白水平均较正常对照组显著升高,但c-fos核蛋白含量在72h后降至正常水平.d-α-生育酚预处理可阻止高葡萄糖诱导的PKC激活,细胞核c-fos、c-Jun核蛋白高表达及胞核MAPK活化.结论高葡萄糖可诱导肾小球细膜c-fos、c-Jun核转位和细胞核MAPK活化,此可能为PKC活化所介导,d-α-生育酚可通过抑制PKC激活而阻止高葡萄糖对PKC下游核转位信号的影响.     

蛋白激酶C的活化机制及在细胞调节中的作用

蛋白激酶C通常以无活性型存在于细胞的可溶性部分。如用H_1组蛋白为底物,此酶活化需要Ca及磷脂,当用鱼精蛋白为底物时,活化就不需要Ca~( 2)及磷脂,且活性远高于以H_1组蛋白为底物。但蛋白激酶C的抑制剂氯丙嗪,此时也有抑制作用。     

Genistein对CAOV3细胞增殖的抑制作用

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)抑制剂genistein对碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的人卵巢上皮性浆液性癌细胞株CAOV3细胞增殖的抑制作用，探讨其信号传导机制。方法 以不同浓度的bFGF和genistein诱导CAOV3细胞，通过MTT比色法观察genistein对细胞增殖的抑制作用；利用[γ-^32P]ATP掺入外源性底物的方法，液体闪烁测定TPK和蛋白激酶C(PKC)活性的变化。结果 bFGF使该细胞株增殖比明显增加，细胞内TPK、PKC活性升高；genistein使细胞增殖比明显下降，抑制细胞内TPK、PKC活性，且genistein对bFGF诱导的TPK和PKC活性抑制更显著。结论 bFGF可能通过TPK途径激活PKC来调控CAOV3细胞增殖，genistein可有效阻滞此传导途径，从而抑制细胞增殖。     

rhC5a对外周血单个核细胞PKC活性的影响

目的 :观察外周血单个核细胞 (PBMC)在rhC5a诱导后蛋白激酶C(PKC)活性变化及其特点。方法 :将PBMC与rhC5a置体积分数为 0 .0 5的CO2 中 37℃孵育 ,按一定时间间隔收集细胞 ,然后测定PKC活性。结果 :PBMC经rhC5a诱导后PKC活性呈双峰型增高。结论 :C5a细胞内信号转导过程与PKC活化有关     

野黄芩甙元及其类似物对蛋白激酶C的抑制作用

本实验测定了19种黄酮类化合物对蛋白激酶C(PKC)活性的影响,并初步探讨了化学结构与活性之间的关系。其中从中药灯盏花中分离得到的野黄岑甙元和从黄芩中分离得到的黄芩素抑制PKC的IC_(50)分别为48μmol/L和76μmol/L,并观察到野黄芩甙元在Ca~(2+)浓度10~(-2)至10~(-7)mol/L时都显示对PKC的抑制作用,这种作用也不因二油酰甘油酯或底物组蛋白的浓度增加而逆转,说明野黄芩甙元对PKC的作用属于非竞争性抑制。     

第三代维甲类化合物丁羟胺酸在体外对蛋白激酶C的抑制作用

丁羟胺酸(R8605)是本所新合成的第三代维甲类化合物。在体外对二乙酰甘油和TPA活化PKC过程有抑制作用;对Ca~(2+)、磷脂和二乙酰甘油非依赖性PKC磷酸化鱼精蛋白有抑制作用。其IC50分别为65、70和100μmol/L。丁羟胺酸对PKC活性的抑制有助于解释其抗促癌作用机理。     

灯盏花注射液对急性脑梗死患者PLT及血小板PKC的影响

目的:研究灯盏花注射液在急性脑梗死患者治疗前后血小板(PLT)及血小板蛋白激酶C(PKC)的变化并探讨其作用。方法:对38例急性脑梗死患者的PLT计数,血小板PKC及其膜和浆蛋白激酶C(M-PKC和P-PKC)在治疗前后的变化,对检验结果做统计学分析。结果:发病后24小时内PLT计数及PLT膜PKC活性明显高于正常组(P<0.01),经应用灯盏花治疗后,PLT计数及PLT膜PKC活性下降,其结果与正常组和对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:灯盏花注射液通过降低PKC活性,减少PLT聚集粘附,有助于改善脑梗死的缺血性损害。     

蛋白激酶C在糖尿病周围神经病变中的表达及中药干预的实验研究

目的　蛋白激酶C(PKC)与糖尿病(DM)及其并发症的关系已成为研究的焦点,本实验检测了DM大鼠坐骨神经及腓肠肌PKC -beta表达及活性变化,探讨PKC在糖尿病周围神经病变(DPN)发病中的作用,并观察中药对其影响。方法　利用(γ -32P)ATP底物磷酸化方法检测实验对照组、中药组DM大鼠及正常组大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC-beta活性,并行免疫印迹分析PKC- beta在神经肌肉组织中的表达。结果　实验 2个月,两组DM大鼠坐骨神经及腓肠肌的胞浆、胞膜PKC beta活性与正常组大鼠比较均增高,实验对照组增高明显,中药组稍高于正常组。PKC- beta表达与活性测定结果相一致。结果提示实验对照组坐骨神经及腓肠肌部位PKC- beta表达明显增加,活性明显增高,而中药组接近正常组。结论　实验性 2个月DM大鼠周围神经病变中的PKC- beta表达及活性明显增加,本中药复方对其有一定抑制作用。