通心络对糖尿病肾病大鼠肾脏CTGF、BMP-7的影响

目的  研究通心络对糖尿病肾病大鼠肾脏组织结缔组织生长因子(CTGF)及骨形态蛋白7 (BMP-7)表达的影响,并探讨其对糖尿病大鼠肾脏保护作用及机制。方法  采用链脲佐菌素(STZ) 诱导建立糖尿病大鼠模型,造模成功后随机分为糖尿病组(DM组),通心络治疗组（TXL组）,正常大鼠为对照组（C组）,于24周末检测各组大鼠、24h尿微量蛋白、空腹血糖（FPG）、血清糖基化血红蛋白I(HbA1c)、晚期糖基化终末产物（AGEs）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、肾质量/体质量(KW/BW),光镜PAS染色,采用RT-PCR及Western blot测定CTGF、BMP-7mRNA及蛋白的表达水平。结果  与C组比较, DM组大鼠24周后KW/BW、尿微量蛋白、血清AGEs、BUN、Cr、HbA1c均显著性升高(P<0.05);TXL组较DM组KW/BW、尿微量蛋白显著降低(P<0.05);肾脏组织学观察显示,DM组肾小球基底膜增厚,系膜区细胞外基质(ECM)沉积增多,肾小管上皮细胞水肿现象明显,经通心络治疗后,肾脏病理改变显著减轻。另外,DM组大鼠肾组织BMP 7基因和蛋白表达下降,而CTGF基因和蛋白表达升高;与DM组比较TXL组能够抑制CTGF表达,使BMP 7表达升高。结论  通心络可以减轻糖尿病大鼠尿微量蛋白、改善肾脏组织病理,对DN大鼠肾脏具有保护作用,其机制可能与抑制CTGF,上调BMP-7表达有关。     

葡萄子原花青素对糖尿病大鼠肾保护作用机制的研究

目的 研究葡萄子原花青素（GSPE）对糖尿病大鼠肾保护作用的分子生物学机制。方法 雄性Wistar大鼠尾静脉注射0.1%链脲佐菌素（STZ）建立糖尿病大鼠模型，成模后随机分为糖尿病组（DM组）和糖尿病GSPE治疗组［GSPE组，GSPE 250mg/(kg·d)］，另设正常对照组（C组）。24周后采血测定空腹血糖（FPG）、尿素氮（BUN）、肌酐（SCr）、糖基化血红蛋白（HbA1c），晚期糖基化终末产物（AGEs），并观察糖尿病大鼠肾脏病理改变。应用双向凝胶电泳（2-DE）和质谱鉴定方法比较糖尿病大鼠肾组织蛋白质的差异表达。结果 GSPE组AGEs、BUN、SCr水平较DM组降低（P＜0.05），GSPE组肾组织病理改变较DM组改善。DM组与C组比较差异表达的蛋白点25个，其中蛋白SSP No.1252经鉴定为谷胱甘肽转硫酶Mu亚型（GSTM）；GSTM在DM组表达较C组上调，在GSPE组治疗后回调（P＜0.05）。结论GSPE可能通过下调GSTM表达而起肾保护作用。     

厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化干预作用

目的：观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织结缔组织生长因子（CTGF）、骨形成蛋白-7（BMP-7）表达的影响,探讨厄贝沙坦保护肾脏的机制。方法：36只雄性Wistar大鼠随机分为厄贝沙坦治疗组、模型组、假手术组,每组12只。厄贝沙坦治疗组、模型组结扎大鼠左侧输尿管建立UUO模型,假手术组仅分离不结扎左侧输尿管,治疗组给予厄贝沙坦20mg/kg·d,假手术组、模型组每天给予相同剂量的生理盐水。每组分别于14d和28d各处死6只大鼠,并留取左侧肾脏组织做HE、MASSON染色,免疫组化法测定CTGF、BMP-7的表达。结果：与假手术组比较,厄贝沙坦治疗组、模型组的CTGF表达升高（P〈0.01）,而治疗组CTGF的表达低于模型组（P〈0.01）,治疗组肾间质纤维化程度也低于模型组（P〈0.01）。与假手术比较,治疗组、模型组BMP-7表达降低（P〈0.01）,且治疗组BMP-7表达高于模型组（P〈0.01）。结论：肾间质纤维化进展过程中厄贝沙坦治疗组CTGF表达逐渐减少,BMP-7表达逐渐增加。厄贝沙坦对肾脏的保护作用可能是通过减少CTGF的表达和增加BMP-7的表达。     

AGEs对人腹膜间皮细胞FN和CTGF的合成和表达作用研究

目的 观察糖基化终末产物（AGEs）对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（FN）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响.方法 分别以不同浓度的AGEs（0、200、600、1 000mg/L）刺激HPMC 48h后,用RT-PCR法检测FN的表达情况.同时将体外培养的HPMC分为正常组（未加任何刺激因素）和AGEs组（终浓度为600mg/L）,两组均予刺激HPMC48h后,用RT-PCR及ELISA法检测细胞内FN和CTGF mRNA及蛋白的表达水平.结果 AGEs呈剂量依赖性上调HPMC FN mRNA的水平;AGEs组FN、CTGF mRNA和蛋白表达水平均较正常组明显增加（P＜0.05或0.01）.结论 AGEs可诱导体外培养HPMC的FN、CTGF基因和蛋白高表达.     

自发性高血压大鼠Klotho与MMP-9, TIMP-1和 PAI-1基因的表达及福辛普利和缬沙坦对其的干预作用

目的：观察自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）肾脏组织中Klotho、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor,PAI-1）基因的表达状况,探讨其在高血压肾间质纤维化中的作用及福辛普利和缬沙坦的肾保护作用机制。 方法：22周龄雄性SHR 20只随机分为4组（每组5只）：高血压组（SHR组）、fosinopril组［Fos组,10 mg/( kg·d)灌胃］,Valsartan组［Val组,50 mg/( kg·d)灌胃］和fosinopril+valsartan组［Fos＋Val组,fosinopril 10 mg/( kg·d)+valsartan 50 mg/( kg·d)灌胃］。22周龄雄性Wistar Kyoto大鼠（WKY组）5只作为对照组。用药物干预连续喂养8周,分别用RT-PCR和Western 印迹检测肾脏组织中Klotho,MMP-9,TIMP-1和PAI-1 mRNA和蛋白的表达水平。 结果：SHR组肾脏组织Klotho mRNA和蛋白表达较WKY组明显下调(P＜0.01),而MMP-9,TIMP-1和PAI-1mRNA和蛋白的表达较WKY组均明显上调(P＜0.01);用fosinopril和/或valsartan干预后,可上调Klotho mRNA在Fos,Fos＋Val组(P＜0.01）和Val组(P＜0.05）的表达,上调Klotho 蛋白在Val,Fos＋Val组(P＜0.01）和Fos组(P＜0.05）的表达。同时下调MMP-9,TIMP-1,PAI-1 mRNA和蛋白在Fos,Val,Fos＋Val组的表达(P＜0.01）。相关分析表明：Klotho mRNA和蛋白的表达与MMP-9,TIMP-1,PAI-1 mRNA (r值分别为-0.864,-0.725和-0.785,P＜0.01)和蛋白（r值分别为-0. 614,-0.579和-0.552,P＜0.05）的表达均呈负相关。 结论：高血压肾损害与抗衰老基因Klotho和基质降解相关基因MMP-9,TIMP-1,PAI-1关系密切;Klotho基因与MMP-9,TIMP-1和PAI-1基因的表达呈负相关。上调抗衰老基因Klotho表达的药物fosinopril 和/或valsartan可改善Klotho-MMPs/TIMPs-PAI-1的表达,这可能是其抗肾纤维化的重要机制。     

硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨硒对肾间质纤维化大鼠肾组织结缔组织生长因子（CTGF）表达及肾小管上皮细胞表型转化的影响。方法以单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将54只SD大鼠随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（UUO）组（B组）、U-UO+硒组（C组）,每组18只。C组给予亚硒酸钠0.2mg/（kg·d）灌胃。A、B组给予同等剂量0.9%氯化钠溶液灌胃。术后第7、14、21天各组随机处死6只大鼠,肾组织行HE、Masson染色评定肾间质纤维化程度,免疫组织化学半定量法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白（α- SMA）的表达。Western印迹法检测肾组织CTGF蛋白表达。化学比色法检测肾组织氧化指标谷胱甘肽过氧化物酶（GSH- Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的表达水平。结果术后各时点C组肾间质纤维化程度较B组明显减轻（P＜0.05）,肾组织CTGF和α- SMA的表达强度明显低于B组（P＜0.05或0.01）、GSH- Px和SOD水平明显高于B组（P＜0.05）,MDA含量明显低于B组（P＜0.05）。B组肾组织中CTGF、a- SMA表达量之间呈正相关（P＜0.05）,CTGF和a- SMA表达量与肾间质纤维化病变程度呈正相关（P＜0.05）。结论硒可以减轻UUO模型大鼠肾间质纤维化程度,其机制可能与硒的抗氧化作用、下调肾组织CTGF的表达、抑制肾小管上皮细胞－肌成纤维细胞转分化有关。     

十味芪黄益肾方对腺嘌呤所致肾纤维化大鼠模型TGF-1/Smads/BMP-7信号通路的影响

目的 探讨十味芪黄益肾方对腺嘌呤所致肾纤维化大鼠模型TGF -1/Smads/BMP-7信号通路的影响。方法 选取40只6周龄SPF级大鼠,体重（200±30)g,采用腺嘌呤灌胃的方法制备肾纤维化大鼠模型,并分为芪黄益肾方组,模型组、正常对照组和TGF B抑制剂组。通过灌胃的方法给大鼠服用十味芪黄益肾方4周,每隔一周检测大鼠体重、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）和血红蛋白（Hb）的含量。使用Westen Bolt和RTPCR定性、定量检测大鼠TGF-1、Smad 2、Smad 6及BMP-7、BMP-7 RII、PDGFR 、PDGFR 、PDGF-A和PDGF-B蛋白表达情况,将大鼠肾脏组织染色后,观察大鼠肾脏组织的病理改变及肾间质纤维化情况。结果 与模型组大鼠比较,十味芪黄益肾方组和TGF-B抑制剂组大鼠体重显著增加,Scr、BUN显著降低,Hb显著升高;TGF -1、Smad 2蛋白表达量显著降低,Smad 6、BMP-7和BMP-7 RII蛋白表达量显著升高（均P＜0.05）。 结论 十味芪黄益肾方通过下调TGF β1、Smad 2蛋白表达量,上调BMP-7和BMP-7 RII蛋白表达量,从而抑制了TGF -1信号向细胞核内转导的通路,缓解了腺嘌呤所致肾纤维化的进程。     

糖基化终产物诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达的规律

目的:探讨糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达的影响。 方法：在体外培养的大鼠肾系膜细胞培养基中，分别加入不同浓度的糖化牛血清白蛋白（AGE-BSA）及牛血清白蛋白（BSA），RT-PCR法检测细胞转化生长因子β₁ (TGF-β₁)和结缔组织生长因子(CTGF) mRNA表达。 结果：与加入BSA组比较，AGE-BSA组TGF-β₁和CTGF mRNA表达明显增强（P<0.01），TGF-β₁ mRNA表达增强发生时间早于CTGF。 结论：AGEs能明显诱导肾系膜细胞CTGF mRNA表达上调，并且具有时间和剂量依赖性。     

缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制

目的 探讨血管紧张素受体拮抗剂缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其机制.方法 36只雄性SD大鼠随机分成正常组、糖尿病组和缬沙坦治疗组.实验2、4、8、12周后分别处死大鼠.光学显微镜下观察肾组织病理改变,逆转录-聚合酶链反应测定肾脏结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,免疫组织化学测定肾脏CTGF蛋白的表达.结果 与正常组比较,糖尿病组和缬沙坦治疗组大鼠的血糖、血尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率均显著增高(P值分别＜0.01、0.05),肾脏CTGF mRNA和CTGF蛋白表达显著增加(P值分别＜0.01、0.05).缬沙坦治疗组大鼠血尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率较糖尿病组大鼠均有不同程度的显著降低(P值分别＜0.01、0.05),肾脏CTGF mRNA和CTGF蛋白表达显著降低(P值均＜0.05).结论 缬沙坦对糖尿病大鼠肾脏保护的作用可能与减少肾脏CTGF mRNA和CTGF蛋白的表达有关.     

马兜铃酸致大鼠肾小管损伤及对肾组织骨形态发生蛋白7 mRNA表达的影响

目的：观察关木通成分马兜铃酸（aristolochic acid,AA）引起的大鼠肾小管损伤,及肾组织骨形成蛋白7（bone morphogenetic protein-7,BMP-7）mRNA表达水平的变化,探讨马兜铃酸肾病的发病机制。方法：46只Wistar大鼠随机分为正常对照组20只和AA组26只。AA组按AA20mg/（kg.d）灌胃关木通浸膏,正常对照组等容量饮用水灌胃。于第4、8和12周末用代谢笼分别留取24h尿液,检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG）活性;腹主动脉取血检测血清肌酐（serum creatinine,SCr）含量;观察肾组织病理的改变及肾小管损伤程度;免疫组化检测肾小管增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达;半定量逆转录聚合酶链式反应法检测肾组织BMP-7mRNA的表达。结果：与正常对照组比较,用药4、8和12周后AA组大鼠尿NAG活性增加,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）,SCr/体质量比值升高（P〈0.01）。肾脏病理表现为肾小管浊肿、变性和脱落等急性小管间质损伤,随着用药时间延长,肾小管损伤程度进行性加重;AA组大鼠肾小管PCNA增殖指数在用药4周和8周后显著升高（P〈0.01）,12周后有所下降（P〈0.05）;用药4周后,AA组大鼠肾组织BMP-7mRNA表达低于对照组（P〈0.05）,并随着用药时间延长减少更明显（P〈0.01）。结论：AA可引起大鼠肾小管损伤,使肾小管再生修复能力下降,抑制BMP-7mRNA表达。这可能是马兜铃酸肾病发生发展的机制之一。     

葡萄子原花青素对糖尿病大鼠心肌超微结构的影响

目的：观察葡萄子原花青素（grape seed proanthocyanidin extracts,GSPE）对链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）糖尿病大鼠血浆糖基化终末产物（advanced glycation end products，AGEs）、心肌超微结构的影响；探讨GSPE对STZ糖尿病大鼠心肌的保护作用。方法：雄性Wistar大鼠尾静脉注射0.1%STZ以建立糖尿病模型，成模后随机分为2组，糖尿病对照组（DM1组，n=8）和糖尿病GSPE治疗组（GSPE250?mg/(kg·d)，DM2组,n=12）,另设2组，正常对照组（C1组,n=10）和正常GSPE治疗组（C2组,n=10）。24周后采血测血糖、糖化血红蛋白（glycosylated hemoglobin, HbA1c）、AGEs，电镜观察心肌超微结构变化。结果：DM2组AGEs较DM1组明显降低(t=2.792, P=0.02)；DM1组肌原纤维和线粒体排列紊乱，经GSPE治疗后DM2组明显减轻。结论：GSPE能够抑制STZ糖尿病大鼠非酶糖基化反应，对其心脏超微结构有一定保护作用。     

肾病综合征患儿血清TGF-β1、CTGF、BMP-7检测的临床意义

目的 检测原发性肾病综合征(primary nephrotic syndrome,PNS)患儿血清转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、骨形态发生蛋白-7(bone mo...     

HIF-1α在5/6肾切除大鼠慢性肾纤维化模型中的表达

目的：探讨低氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α）在慢性肾脏纤维化中的表达及作用,观察培跺普利对其表达的影响。方法：大鼠慢性肾纤维化模型用5/6肾切除法制作,假手术组为对照组,模型组随机分为手术组和培跺普利治疗组。治疗5周后,用天狼猩红苦味酸染色法检测胶原在肾脏的沉积;Western印迹检测HIF-1α蛋白在肾组织中的表达;实时荧光定量PCR法检测HIF-1α与CTGF (connective tissue growth factor) mRNA在肾组织中的表达。结果：与对照组比较,手术组的胶原、HIF-1α蛋白、HIF- 1α与CTGF mRNA表达明显增加（P＜0.01）。与手术组比较,治疗组的胶原、HIF-1α蛋白、HIF- 1α与CTGF mRNA表达明显减少（P＜0.01）。CTGF的表达与HIF-1α呈正相关（r=0.68,P＜0.01）。结论：HIF-1α通过调节CTGF的表达参与肾脏纤维化,培跺普利可通过减少HIF-1α的表达来减轻肾脏纤维化。     

2型糖尿病大鼠肾脏相关细胞因子表达与足细胞损伤关系

目的 探讨转化生长因子β1（TGF-β1）、骨形态发生蛋白7（BMP-7）、结缔组织生长因子（CTGF）、nephrin在2型糖尿病肾病（DKD）大鼠肾脏组织表达变化,及其与肾脏足细胞损伤的关系。方法 雄性SD大鼠50只,随机分为正常对照组（NC组,20只）和模型组（DKD组,30只）,DKD组给予高糖高脂饲料喂养8周建立2型糖尿病模型,建模成功后空腹状态下给予小剂量链脲佐菌素（STZ,30 mg/kg）一次性腹腔注射;NC组给予常规饲料喂养,腹腔注射等量枸橼酸缓冲液,继续喂养8周。于8周末检测两组24 h尿清蛋白（UAL）、空腹血糖（FBG）、血肌酐（Scr）、尿肌酐（Ucr）,电镜观察肾小球足细胞超微结构的变化,光镜检测肾小球硬化指数（GSI）,免疫组化、实时定量PCR检测肾组织nephrin、BMP-7、CTGF、TGF-β1的表达。结果 与NC组比较,DKD组大鼠UAL、GSI明显升高,肾小球足细胞nephrin、BMP-7表达下调,而CTGF及TGF-β1表达上调,差异均有显著性（t=3.20-41.17,P〈0.01）。光镜下观察,DKD组大鼠肾小球肥大,系膜细胞增生,细胞外基质增多。电镜下观察,DKD组大鼠肾脏足细胞肿胀,足突融合消失,足细胞损伤。结论 DKD 大鼠肾小球存在足细胞损害,其机制可能与 BMP-7 表达下调及 CTGF、TGF-β1 过度表达有关。     

糖尿病心肌梗死大鼠TGF -β1和CTGF表达变化及HGF的干预作用

摘要目的：探讨糖尿病心肌梗死大鼠心肌TGF-β1和CTGF表达的变化以及肝细胞生长因子（HGF）对其影响。方法：6周龄Wistar大鼠90只随机分为5组：对照组、糖尿病假手术组、心肌梗死组、糖尿病心梗组和HGF治疗组．每组备18只。以高糖高脂饲料＋腹腔注射链尿佐菌素（STZ）诱导建立2型糖尿病大鼠模型后再建立急性心肌梗死（AMI）模型。糖尿病模型大鼠成模后次日,HGF治疗组每天皮下注射HGF,分别观察4周及8周,检测各组心肌组织TGF-β1、CTGF的mRNA及蛋白表达情况：：结果：对照组大鼠的TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平表达微弱;糖尿病心梗组4周后TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平表达明显升高（P〈0．05）,8周后表达进一步升高（P〈0．01）;给予HGF治疗4周后,可以部分降低TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白水平的表达（P〈0．05）;给予HGF治疗8周后,可以明显降低TGF-β1、CT-GFmRNA及蛋白水平的表达（P〈0．01）。结论：糖尿痛心肌梗死大鼠心肌TGF-β1、CTGF的表达明显增高．HGF治疗后能够降低TGF-β1、CTGF的表达,对糖尿病心肌梗死后心肌纤维化的发生有抑制作用。     

醛固酮对3T3-L1脂肪细胞PTEN及p-Akt蛋白表达的影响

目的 观察胰岛素抵抗（IR）的脂肪细胞中Aktser473磷酸化（p-Akt）水平和与张力蛋白同源10号染色体缺失的磷酸酶基因（PTEN）蛋白的表达,以及醛固酮和螺内酯处理后上述蛋白表达的变化,从而探讨醛固酮在IR发病机制中的作用。方法 通过地塞米松与胰岛素共同诱导3T3 L1前脂肪细胞建立IR模型,western blots方法检测正常分化及IR的脂肪细胞PTEN蛋白和p-Akt水平,观察醛固酮和螺内酯对细胞PTEN蛋白表达及p Akt水平的影响。结果 IR脂肪细胞PTEN的蛋白水平较正常分化脂肪细胞显著升高［（0.83±0.11）vs（0.63±0.06）,P＜0.05］,高浓度醛固酮可增加PTEN蛋白表达,经螺内酯处理后PTEN蛋白表达明显下调（P均＜0.05）;IR脂肪细胞模型p-Akt水平明显低于正常分化脂肪细胞［（0.52±0.12）vs（0.78±0.12）,P＜0.05］,高浓度醛固酮可下调p-Akt水平,螺内酯可部分逆转醛固酮的抑制作用（P均＜0.05）。结论 醛固酮可能通过PI3K-AKT通路导致IR的发生。     

缬沙坦对慢性病毒性心肌炎小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)缬沙坦对慢性病毒性心肌炎(VMC)小鼠Th17与CD4+CD25+Treg细胞的平衡状态及心肌病变的影响,探讨ARB对慢性VMC的作用及其机制。方法以柯萨奇病毒(CVB3)重复增量感染(第1、14、28天剂量分别为0.20、0.25、0.30 mL)BABL/c组小鼠建立慢性VMC模型(n=36),对照组(n=6)同期腹腔注射等体积生理盐水。42 d将慢性VMC模型组存活小鼠随机分为慢性VMC组和缬沙坦组,干预28 d后,处死各组小鼠。处死前测量各组小鼠血压、心脏质量和体质量;脾脏中提取淋巴细胞,采用流式细胞术检测Th17和CD4+CD25+Treg细胞比例;采用Real Time-PCR法检测Foxp3和IL-17的mRNA在心肌中的表达;心肌行HE和Masson染色;心脏超声检查小鼠心脏功能。结果各组小鼠血压水平无显著性差异(P>0.05)。慢性VMC组小鼠心脏质量/体质量比(HW/BW)大于缬沙坦干预组和对照组(P<0.01),慢性VMC组小鼠脾脏中Th17细胞的比例、IL-17、病理积分明显高于缬沙坦组和对照组(P<0.01),而CD4+CD25+Treg细胞的比例、Foxp3低于缬沙坦组和对照组(P<0.05)。缬沙坦组小鼠心功能较慢性VMC组明显改善。结论病毒性心肌炎小鼠外周血中存在Th17/Treg失衡,且与心肌病变有相关性,缬沙坦可通过调节Th17/Treg平衡,减轻慢性VMC自身免疫损伤,避免向扩张型心肌病进展。