茯苓酸在人源肠Caco-2细胞单层模型的吸收和转运

目的：研究中药茯苓中茯苓酸（pachymic acid，PA）在人肠的吸收和转运。 方法：人源肠Caco－2细胞单层作为药物的肠吸收转运模型，测定PA从绒毛面（AP）到基底面（BL）的渗透性；反相高效液相色谱法测定PA在AP和BL的浓度，紫外检测波长为210nm；计算转运参数和表观渗透系数（Papp），并与在Caco-2细胞单层模型呈良好吸收转运的阳性对照药普萘洛尔和不良吸收转运的阳性对照药阿替洛尔进行比较。 结果：PA由AP到BL方向的Papp值为（9．50±2．20）×10^-7cm／s，由BL到AP方向的Papp值为（11．30±5．90）×10^-7cm／s。在本项研究条件下，普萘洛尔和阿替洛尔的Papp值分别为1．45×10^-5cm／s和4．22×10^-7cm／s。 结论：PA在Caco-2细胞单层馍型的吸收转运呈浓度依赖性，与转运时间呈线性关系；由AP到BL和BL到AP两个方向的转运不良，其Papp值与阿替洛尔的接近；除被动扩散机制外，ATP部分地参与了PA的转运。     

药物体外转运模型及普萘洛尔异构体转运动力学研究

目的:用近年来最具代表性的研究口服药物吸收机制的Caco-2细胞单层模型,研究盐酸普萘洛尔异构体的吸收及其吸收机制.方法:建立Caco-2细胞单层模型,研究不同浓度不同时间点该药物异构体的转运情况,通过柱前衍生化的RP-HPLC法检测盐酸普萘洛尔的异构体.结果:盐酸普萘洛尔吸收完全,主要为被动吸收,其异构体在Caco-2细胞模型上吸收无手性选择性.结论:本文建立了Caco-2细胞模型,并进行了完整性评价,表明Caco-2细胞模型完整性良好,将其用于手性药物盐酸普萘洛尔的吸收转运实验.同时还建立了柱前衍生化的RP-HPLC法,可以在20min内分离测定盐酸普萘洛尔异构体,方法操作简便、精密度好、结果准确可靠.     

不同温度及pH值对人结肠腺癌细胞模型的影响

目的:建立人结肠腺癌细胞系(Caco-2)细胞模型并对其药物研究的方法进行初步探讨。方法:通过测定跨细胞膜电阻(TEER)、荧光素通透量及碱性磷酸酶(AKP)评价Caco-2细胞模型,用MTT法考察HBSS缓冲液在不同pH值、不同温度及不同时间条件下对Caco-2细胞的毒性。结果:各项指标的测定值符合要求,表明本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、紧密性和通透性良好;进行药物Caco-2细胞吸收潜性研究时,药物作用4 h之内对Caco-2细胞模型没有影响。结论:建立的Caco-2细胞模型可用于药物吸收机制研究。     

人结肠腺癌细胞系Caco-2单细胞层短期培养法及其评价

 目的 利用丁酸建立一种短期培养人结肠腺癌细胞系Caco-2(human colon adenocarcinoma cell line)单细胞层的方法。方法 使用不同成分的含丁酸培养基培养Caco-2单细胞层,通过显微镜观察细胞形态学特点、测定跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)和荧光黄通透量等指标,评价其完整性;通过检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性,评价其细胞极化程度;通过RT-PCR评价其对主要药物转运蛋白表达的影响。结果 使用短期培养法获得的Caco-2单细胞层形态完整,TEER>500 Ω·cm2,漏出标志物荧光黄表观分配系数(apparent permeability,Papp)<5×10-5 cm/s,表明单细胞层的完整性良好。同时肠腔侧(apical,AP)AKP活性显著升高,表明单细胞层出现明显的极性分化。短期培养与21天培养所得的Caco-2单细胞层中,药物转运蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的RNA表达水平基本一致。结论 含丁酸的无血清培养基可促进Caco-2单细胞层的快速形成,利用该法建立的Caco-2细胞模型符合各项指标的要求,可用于研究口服药物转运的吸收机制。     

Caco-2细胞模型及其对黄酮类成分作用机制研究进展

Caco-2细胞模型作为ADME/Tox研究平台中肠吸收模型之一,已广泛用于药物动力学研究,可通过体外试验预测药物在体内的吸收和代谢,阐明药物在体内的吸收机制、毒性、药物吸收过程中的相互作用、药物的化学结构和体内转运关系以及药物代谢稳定性等。以黄酮类成分为代表,介绍Caco-2细胞模型在中药有效成分吸收代谢机制研究方面的应用进展。     

手性金属配合物d,l-[Ni(phen)3]2+经Caco-2细胞单层模型的吸收转运

目的:研究手性金属配合物经Caco-2细胞单层转运吸收的手性选择性.方法:采用动力学研究方法,测定手性金属配合物跨Caco-2细胞单层的转运速率.结果:金属配合物的手性不同,导致金属配合物经Caco-2细胞单层的转运速率不同.结论:手性金属配合物经Caco-2细胞单层的转运吸收存在手性选择性的差异.     

白术/防风药对对Caco-2细胞屏障功能的协同保护作用及机制研究

目的通过研究白术、防风、白术/防风药对对Caco-2细胞屏障损伤模型的作用,获得白术/防风药对协同保护肠黏膜机械屏障的证据,并从PAR-2信号介导的Caco-2细胞屏障损伤探讨白术/防风药对保护肠机械屏障的分子机制。方法建立Caco-2细胞肠机械屏障损伤模型,测定肠Caco-2细胞的跨上皮细胞电阻值(TEER)和荧光黄透过率(PFP),评价白术/防风药对对肠Caco-2细胞机械屏障的影响,并分别应用Q-PCR和Western blot技术检测Caco-2细胞PAR-2基因和细胞紧密连接ZO-1蛋白的表达。结果白术、防风、白术/防风药对能提高细胞TEER和降低PFP,抑制PAR-2基因的表达,上调ZO-1紧密连接蛋白的表达,且白术/防风药对效果优于单味药。结论白术/防风药对对Caco-2细胞屏障损伤模型具有保护作用,起协同增效作用,其机制可能与调控肠屏障损伤关键信号PAR-2有关。     

壳聚糖及其衍生物包覆的脂质体对胰岛素细胞旁路转运的促进作用

目的:考察壳聚糖及其衍生物包覆的脂质体对胰岛素细胞旁路转运的促进作用.方法:采用逆相蒸发法制备胰岛素脂质体;利用离体肠黏膜法和Caco-2细胞模型法研究壳聚糖及其衍生物包覆的胰岛素脂质体的肠吸收;分别运用放射免疫法和HPLC法测定离体肠黏膜法和Caco-2细胞模型法接收池中胰岛素含量.结果:胰岛素跨肠黏膜转运能力大小次序为:CH-CEC组＞CH组＞TMC组＞CEC组＞Uncoated组＞Ins组;胰岛素跨Caco-2细胞单层膜的转运能力大小次序为:CH组＞CH-CEC组＞CEC组＞TMC组＞Uncoated组＞Ins组.结论:脂质体能增加胰岛素的跨膜转运,而脂质体经壳聚糖及其衍生物包覆后通过打开上皮细胞紧密结,进一步提高胰岛素经细胞旁路的转运能力.     

Caco-2 细胞单层模型中熊果酸摄取转运机制的研究

目的 研究熊果酸在 Caco-2 细胞单层模型中的吸收转运机制。方法 利用人源结肠腺癌细胞系 Caco-2 细胞单层模型研究熊果酸在有或无 P-糖蛋白专属性抑制维拉帕米存在时,评价其双向转运特征,并考察时间、药物浓度、体系温度以及培养介质 pH 值对 Caco-2 细胞摄取熊果酸的影响。采用高效液相色谱-紫外检测法对熊果酸进行定量分析,计算其表现渗透系数 (Papp)。结果 浓度在 10～40 μmol/L 内,Caco-2 细胞对熊果酸摄取量呈线性增加。双向转运研究发现加入 P糖蛋白专属性抑制剂维拉帕米后,其 Papp 发生显著改变,表观渗透率由 3.445 下降至 1.386。结论 熊果酸在 Caco2 细胞模型的吸收转运机制以被动转运为主,P-糖蛋白参与主动转运的过程。     

关于Caco-2细胞构建肠粘膜屏障模型的相关研究

目的 通过用Caco-2细胞的体外培养,建立肠粘膜屏障的模型。方法 通过对Caco-2细胞在体外transwell小室中连续培养21 d,并对培养的细胞进行形态学观察、跨膜电阻测定、inulin-FITC通透率测定,评估肠屏障模型是否构建成功。结果 通过体外连续培养Caco-2细胞形成了致密单层,可见细胞层单层排列,相互融合,边界清晰,细胞间紧密连接清晰可以见,21 d TER值为496.32±6.02(Ω·cm2),inulin-FITC的通透率<0.5%。结论通过细胞形态学观察,跨膜电阻测定及inulin-FITC的通透率显示Caco-2细胞体外构建肠屏障模型成功,此模型对于相关疾病的研究具有一定意义。     

人参皂苷Rb_2透过Caco-2单细胞层的吸收特征研究

目的测定人参皂苷Rb2透过Caco-2单细胞层的浓度,研究其吸收特征。方法采用液相色谱-质谱联用（LC-MS-MS）法,测定人参皂苷Rb2浓度并计算其表观渗透系数（Papp）。结果人参皂苷Rb2从基顶侧至基底侧的表观渗透系数Papp（AP-BL）为3.27&#215;10^-7cm&#183;s^-1,从底侧至顶侧Papp（BL-AP）为3.16&#215;10^-6cm&#183;s^-1,Papp（BL-AP）/Papp（AP-BL）比值为9.63。结论本研究阐明了人参皂苷Rb2在Caco-2单细胞层模型上的吸收特征,这在国内尚属首次报道。     

野黄芩苷和野黄芩素在Caco-2细胞模型中的吸收转运特性

目的:研究黄酮类化合物野黄芩苷(scutellarin)和野黄芩素(scutellarein)在Caco-2单层细胞模型中的吸收和转运特性。考察缓冲液、作用时间、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂、多药耐药蛋白2(multidrug resistance protein 2,MRP2)抑制剂、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer drug resistance protein,BCRP)抑制剂对野黄芩苷和野黄芩素吸收转运的影响。方法:利用Caco-2单层模型研究从绒毛面(apical,AP)侧到基底面(basolateral,BL)侧以及从BL侧到AP侧两个方向的转运过程。应用高效液相色谱法定量分析,计算转运参数和表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp)。结果:两化合物在磷酸盐缓冲液和Hanks缓冲液中的Papp有差异。在磷酸盐缓冲液中野黄芩苷AP→BL侧无转运,BL→AP侧的Papp为(0.74～1.58)×10-6cm/s;野黄芩素在AP→BL侧与BL→AP侧的Papp分别为(4.33～6.79)×10-6cm/s和(1.3...     

独活中6种香豆素类成分在Caco-2细胞单层模型中的吸收转运研究

目的研究独活中6种香豆素类成分(伞形花内酯、甲氧基欧芹素、二氢欧山芹素、二氢欧山芹醇乙酯、当归醇-A和当归醇-B)在人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型的吸收和转运.方法采用Caco-2细胞单层模型研究6种香豆素类化合物由绒毛面(AP侧)到基底面(BL侧)和从BL侧到AP侧两个方向的转运过程,采用高效液相色谱法测定其在AP和BL侧的含量,计算表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp),并与阳性对照药普萘洛尔和阿替洛尔进行比较.采用ATP耗竭剂碘乙酰胺和MRP2抑制剂MK571添加法探讨当归醇-B的转运机制.结果6种香豆素类成分皆以被动扩散为主要方式被Caco-2细胞吸收、转运.伞形花内酯、甲氧基欧芹素、二氢欧山芹素、二氢欧山芹醇乙酯、当归醇-A和当归醇-B由AP侧到BL侧的Papp分别为(2.679±0.263)×10-5、(1.306±0.324)×10-5、(0.595±0.086)×10-6、(0.293±0.041)×10-6、(1.532±0.444)×10-5和(1.413±0.243)×10-5cm/s;由BL侧到AP侧的Papp分别为(3.381±0.410)×10-5、(0.898±0.134)×10-5、(0.510±0.183)×10-6、(0.222±0.025)×10-6、(1.203±0.280)×10-5和(0.754±0.092)×10-5cm/s.在本实验条件下,易吸收的阳性对照药普萘洛尔由AP侧到BL侧的Papp值为2.18×10-5cm/s,不易吸收的阳性对照药阿替洛尔由AP侧到BL侧的Papp值为2.77×10-7cm/s.上述6个香豆素类化合物中,伞形花内酯、甲氧基欧芹素、当归醇-A和当归醇-B的Papp值与普萘洛尔的Papp值在一个数量级;二氢欧山芹素和二氢欧山芹醇乙酯的Papp值在易吸收和不易吸收的阳性对照药之间.以EBSS代替HBSS作为转运介质,在碘乙酰胺和MK571存在下,当归醇-B从AP侧到BL侧和从BL侧到AP侧转运的Papp值与HBSS为转运介质的对照组相比皆没有统计学意义上的变化.回收率实验中,伞形花内酯的平均总回收率为(83.31±3.52)%、当归醇-A的平均总回收率为(77.39±7.38)%;甲氧基欧芹素、二氢欧山芹素和当归醇-B的平均总回收率在50%～65%之间,二氢欧山芹醇乙酯的平均总回收率低于10%.甲氧基欧芹素和二氢欧山芹素在Caco-2细胞中的蓄积率分别为(36.15±5.87)%和(53.90±4.39)%.结论6种香豆素皆以被动扩散为主要方式被Caco-2细胞单层吸收和转运;伞形花内酯、甲氧基欧芹素、当归醇-A和当归醇-B是良好吸收的化合物,二氢欧山芹素和二氢欧山芹醇乙酯的吸收性属中等.在Caco-2细胞中,甲氧基欧芹素和二氢欧山芹素有蓄积,二氢欧山芹醇乙酯具有代谢不稳定性.当归醇-B的转运不受转运介质EBSS(pH 6.5)的影响,碘乙酰胺或MK571的存在亦不影响当归醇-B在两个方向的转运.     

Studies on Absorption and Tansport of Limoninoids from Fructus Evodiae in Caco-2 Cell Monolayer Model

Objective To study the intestinal absorption and transepithelial transport of three limoninoids: evodol (EVO), limonin (LIM), and shihulimonin A (SHIA), isolated from Fructus Evodiae [the unripe fruit of Evodia rutaecarpa and Evodia rutaecarpa var. bodinieri] in the human intestine. Methods The in vitro cultured human colon carcinoma cell line, Caco-2 cell monolayer model, was applied to studying the absorption and transepithelial transport of the three limoninoids from apical (AP) to basolateral (BL) side and from BL to AP side. The three limoninoids were measured by reversed-phase high performance liquid chromatography coupled with ultraviolet absorption detector. Transport parameters and apparent permeability coefficients (Papp) were then calculated and compared with those of Propranolol as a control substance of high permeability and Atenolol as a control substance of poor permeability. Results The Papp value of EVO and LIM from AP to BL side for absorption and transport were 1.78 × 10-5 cm/s and 1.16 × 10-5 cm/s, respectively, which was comparable to that of Propranolol with Papp 2.18 × 10-5 cm/s. Conclusion The absorption and transport of both EVO and LIM are main passive diffusion as the dominating process in Caco-2 cell monolayer model, and they were estimated to be high absorbed compounds. SHIA in Caco-2 cell monolayer model may be involved in metabolism in the transport processes.     

改善葛根素肠道吸收的体外研究

目的 研究葛根素肠道吸收的机制,探讨提高其肠道吸收的方法。方法 改变实验时间、温度及药物质量浓度,考察葛根素在Caco-2细胞中的转运特性,并考察不同的吸收促进剂对其跨膜转运的影响。结果 葛根素的膜渗透性低,被动扩散是其跨膜转运的主要机制;十二烷基磺酸钠（SDS）破坏Caco-2单细胞层的完整性,提高葛根素转运;聚氧乙烯月桂基醚（Brij 35）、牛血清白蛋白（BSA）和分离乳清蛋白对葛根素转运有促进作用,但不影响Caco-2细胞的跨膜电阻（TEER）;相对分子质量较高的壳聚糖通过可逆性地降低TEER,促进细胞间转运,提高葛根素的膜渗透性。结论 葛根素的膜渗透性低是口服生物利用度低的主要原因,不同吸收促进剂可通过不同机制改善其膜渗透性。     

Caco-2细胞模型在中药成分吸收机制研究中的应用

caco-2细胞单层的形态和功能特性都类似于人小肠上皮细胞,是研究药物吸收、转运的一个重要模型。近年来在许多单体及配伍的生物活性成分的研究中得到了广泛应用。本文对caco-2细胞在中药成分吸收机制的研究报导进行归纳,评价Caco-2细胞模型在中药成分吸收机制的应用前景。     

脱水穿心莲内酯在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制

目的 研究脱水穿心莲内酯（DAL）在Caco-2细胞单层模型中的吸收机制。方法 观察DAL在Caco-2细胞单层模型中的双向转运,考察时间、DAL浓度、温度和P-糖蛋白（P-gp）抑制剂维拉帕米对DAL吸收的影响。采用LC/MS/MS方法检测DAL浓度,计算其表观渗透系数（P_app）。结果 DAL在Caco-2细胞模型中的双向转运,随时间和浓度的增加,DAL的吸收具有时间、浓度依赖性,未出现饱和趋势;不受温度和P-gp抑制剂维拉帕米的影响。结论 DAL在Caco-2细胞模型中的吸收主要是靠浓度扩散的被动转运。     

补阳还五汤黄酮类有效成分在Caco-2细胞单层模型的转运特征及对CYP450酶活性的影响

目的研究补阳还五汤3个黄酮类有效成分(羟基红花黄色素A、毛蕊异黄酮、芒柄花素)在Caco-2细胞单层模型中的转运特征及其在大鼠肝微粒体中对CYP450酶亚型活性的影响。方法 MTT法研究药物在Caco-2细胞单层模型的安全浓度范围,以Caco-2细胞单层模型研究黄酮类有效成分的双向转运机制,以表观渗透系数(Papp)为检测指标,考察时间、浓度以及P-gp抑制剂维拉帕米对转运的影响,利用Cocktail探针法研究药物对CYP450亚型的体外抑制作用。结果从顶侧(apical,AP)到底外侧(basolateral,BL)(AP→BL),芒柄花素、毛蕊异黄酮的Papp>10-6 cm/s,表明其吸收性良好,羟基红花黄色素A的Papp为10-6cm/s,表明其吸收性一般;且三者的转运量随浓度升高和时间延长而显著升高,BL→AP的转运量与AP→BL的转运量的比值小于1.5,其中芒柄花素、毛蕊异黄酮的转运都受到P-gp外排蛋白的外排作用;补阳还五汤黄酮类有效成分明显降低了CYP2E1、CYP1A2酶探针底物的代谢量(P<0.05)。结论 3种黄酮类有效成分在Caco-2细胞模型的转运方式均为被动转运,毛蕊异黄酮与芒柄花素明显受到P-gp的外排作用,补阳还五汤黄酮类有效成分可以增加主要通过CYP2E1、CYP1A2酶代谢的药物浓度。