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相似文献
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1.
小鼠体外受精及其胚胎体外培养的比较研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 通过比较不同品系小鼠体外受精情况以及不同培养液对C57BL/6J小鼠胚胎体外培养效果的实验,进一步完善小鼠体外受精和早期胚胎体外培养体系.方法 对C57BL/6J、DBA/2、FVB/NJ、BALB/c、KM、ICR及BARR Ⅱ小鼠进行超排和体外受精,并对C57BL/6J小鼠体外受精后的2-细胞胚胎用HTF、CZB、KSOM、M16、HECM五种培养液在相同条件下进行体外培养到囊胚,计算4-细胞~囊胚的发育率.结果 各品系小鼠平均排卵数为13.0~38.7个(P<0.01),体外受精率为70.2%~92.8%(P<0.05).不同培养液至4-细胞的发育率为60.3%~95.8%,其中KSOM的4-细胞发育率为95.8%,最适合2-细胞向4-细胞的发育.8-细胞发育率为52.8%~91.1%,桑椹胚发育率为40.6%~87.5%,囊胚发育率为5.1%~75.4%,各阶段胚胎发育率均差异显著.其中适合于金黄仓鼠桑椹胚、囊胚发育的HECM-2并不支持C57BL/6J囊胚的发育,其囊胚发育率只有5.1%,CZB最适合其囊胚的发育.结论 遗传背景是影响小鼠超排及体外受精效果的主要因素之一.葡萄糖的存在不利于克服2-细胞发育阻断,胚胎在8-细胞期以前,主要能源物质不是葡萄糖,直到桑椹胚后期,葡萄糖才是主要的能量物质.磷酸盐可引起胚胎发育阻断.氨基酸和EDTA有利于克服胚胎发育阻滞.  相似文献   

2.
目的 为扩大胚胎来源并获取特定胚龄胚胎 ,建立小鼠冷冻胚胎库。方法 运用超数排卵、体外受精与胚胎培养及胚胎冷冻技术系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律。卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻。结果  (1)注射hCG后 12~ 2 0h受精卵发育至原核期 ,4 2~ 4 8h为 2 细胞期 ,4 8~ 6 0h为 4 细胞期 ,6 0~ 6 8h为 8 细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75~ 78h为桑椹胚 ,78~ 80h为致密桑椹胚 ,90~ 92h为早期囊胚 ,92~ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中。 (2 )培养液中添加促性腺激素 (FSH与hCG) ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育。 (3)在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 细胞阻断 ,其 2 细胞胚的发育率达 10 0 % ,8 细胞胚发育率达 5 5 %以上 ;牛、羊上皮细胞培养液上清也能有效克服 2 细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞期胚的发育率显著提高。 (4)以D PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9 3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 4 %。结论 研究为将生物技术应用于小鼠 ,扩大卵子和胚胎来源  相似文献   

3.
陈悦洲  原玮  任永生 《郧阳医学院学报》2006,25(6):340-342,F0003
目的:采用子宫内膜上皮细胞与小鼠胚胎共培养,观察其对早期胚胎体外发育的影响。方法:对小鼠子宫内膜上皮细胞进行分离、培养鉴定,然后与体外受精的小鼠胚胎进行共培养,观察共培养对小鼠胚胎卵裂率、孵化率以及囊胚期胚胎总细胞数的影响。结果:与无上皮细胞相比,共培养明显促进了小鼠桑椹胚率(71.3%和61.2%,P<0.05),囊胚率(50.0%和39.7%,P<0.05),囊胚孵化率(34.8%和24.3%,P<0.05)和胚胎总细胞数(44.1和35.6,P<0.05)。结论:子宫内膜上皮细胞能够促进小鼠胚胎的体外发育,对早期胚胎的体外发育环境具有优化作用。  相似文献   

4.
目的探讨小鼠胚胎体外发育中的最佳培养方案。方法将从超排的ICR雌鼠输卵管内收集的1-细胞放入无糖CZB中培养,分别于2-细胞、4-细胞、桑椹胚阶段更换入含3.0 mmol/L葡萄糖(最适浓度)的CZB中,以及胚胎培养全程均在含糖CZB中更换1次培养液、胚胎培养全程均在含糖CZB中不更换培养液,对照组胚胎培养全程均在无糖CZB中,观察记录胚胎的发育情况。结果2-细胞、4-细胞阶段换入含糖CZB中的序贯培养及培养全程在含糖CZB中单一培养,囊胚率均高于对照组(P0.05);桑椹胚阶段换入含糖CZB中的序贯培养,囊胚率与对照组差异无统计学意义(P0.05);2-细胞、4-细胞阶段换入含糖CZB中的序贯培养与全程在含糖CZB中的两步法单一培养及一步法单一培养,囊胚率分别为46.5%、38.4%、41.7%、56.6%,其差异无统计学意义(P0.05)。结论在小鼠早期胚胎体外发育中,2-细胞至桑椹胚前对葡萄糖存在依赖性;尽管序贯培养是有效的,但并不一定优于一步单一培养。  相似文献   

5.
目的 为基因型完全相同的同卵双胞脂人类动物模型的建立积累基础资料。方法C57BI/6J雌性小鼠与KM雄性小鼠交配,见栓3.5d采集小鼠晚期桑椹胚和早期囊胚,应用显微手术刀直接分割法进行胚胎二等份分割,所得半胚体外培养,观察其发育情况。结果 晚期桑椹胚分割成功率是91.3%,半胚发育率为57.1%,早期囊胚分割成功率约为89.2%,半旺发育率为71.2%。结论 C57BI/6J小鼠与KM小鼠的F1代胚胎经切割后能在体外良好发育,该资料可用于同卵双胞胎分化发育的研究及人类双胞胎动物模型的制作。  相似文献   

6.
目的研究胰岛素对不同时期小鼠胚胎体外发育的影响.方法收集1-细胞、2-细胞、4-细胞及桑椹胚期鼠胚,分别在含0(对照组)、0.005、0.05、0.5、5、10μg/mL胰岛素的KSOM中培养.结果在1-细胞及2-细胞阶段添加系列浓度时,0.005μg/mL及0.05μg/mL胰岛素组不仅提高囊胚率、孵化率,而且提高囊胚细胞数.4-细胞阶段添加系列浓度时0.05μg/ml胰岛素组能够提高囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数;而至桑椹胚阶段再添加系列浓度胰岛素时,囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数均无统计学意义(P〉0.05).结论在ICR小鼠胚胎体外培养时适宜的胰岛素浓度为0.05μg/mL;桑椹胚之前添加胰岛素对小鼠胚胎发育是必要的.在一定发育阶段内,随着胚胎的生长对胰岛素的需求也相应增加.  相似文献   

7.
《陕西医学杂志》2015,(8):941-943
目的:探讨将胚胎切割方法尽早应用于临床。方法:应用显微切割刀和酶消化透明带显微玻璃针分割两种方法:对2、4、8细胞期和桑椹期的胚胎分割为二分胚;将2、4、8细胞期的胚胎切割成卵裂球;同时将2细胞期的胚胎连续2次分割培养;切割的二分胚和卵裂球在M16溶液中行胚胎体外培养,观察其发育情况,达囊胚期植入子宫。结果:小鼠2、4、8细胞期的切割成功率分别为98.0%、86.6%、77.2%、66.1%,发育率为61.5%、80%、84.8%、89.3%;小鼠2、4、8细胞期切成的卵裂球发育至桑椹胚的成功率随着细胞数的增多而减少。小鼠2细胞期卵裂球的全能性优于4、8细胞期卵裂球。各细胞期半胚的发育率明显好于卵裂球的发育率。连续有两次切割2细胞期的胚胎发育到桑椹胚为15%。发育到囊胚的8细胞期和桑椹胚期的半胚移入假孕母鼠体内妊娠率分别为33.3%和60%。结论:显微玻璃针在切割成功率及后期的细胞成活率上优于纤维切割刀的切割方法。  相似文献   

8.
目的研究ICR小鼠胚胎体外培养时,添加胰岛素的作用、浓度及所需阶段.方法用添加不同浓度胰岛素的mKSOM培养基对小鼠胚胎进行体外培养及选择最适浓度对不同阶段鼠胚进行体外培养,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化.结果所有添加胰岛素的浓度组,囊胚发育率均高于对照组,其中0.005μg/mL和0.05μg/mL浓度组囊胚细胞数显著高于对照组和其他各浓度组.2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素囊胚率显著高于对照组和其他实验组.结论在ICR小鼠胚胎体外培养时添加胰岛素能够促进胚胎发育;胰岛素浓度增至μg/mL对在ICR小鼠胚胎无毒性作用;在ICR小鼠胚胎体外培养的适宜胰岛素浓度为0.005μG/mL和0.05μG/mL;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素更加重要.  相似文献   

9.
以小鼠2~4细胞胚为材料,进行分离、培养和移植试验,探索通过早期胚的分离技术获得一卵双胎或多胎动物的可能性。方法是先将胚胎在含链霉蛋白酶的溶液中去透明带,然后移到不含Ca~(2 )、Mg~(2 )的EDTA溶液中并用吸管轻微吹打,使每个胚胎分为1/2半胚或1/4半胚,然后移至培养液微小滴中,在37℃、5%CO_2培养箱内培养72小时,并根据发育为正常囊胚为指标观察了不同的培养基、不同胚龄以及动物品种间对分离胚发育的影响。在部分实验中还将发育为桑椹胚、囊胚的分离胚移植给假孕小鼠观察了产仔情况。结果是,分离胚的发  相似文献   

10.
[目的]观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育.[方法]昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞.成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况.[结果]卵子去核存活率为75.9%(362/477),注核存活率为39.8%(143/359),D1存活率为38.4%(138/359).39.9%(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核,其卵裂率为80.7%(46/57).大部分重构胚发育到2~3细胞停滞,其中2个分裂至4细胞,无囊胚形成.[结论]将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中,可以诱导极体排出,形成2原核 1极体的重构胚胎.重构胚胎大部分发育到2~3细胞即发生停滞,最多到达4细胞期,发育潜能差.  相似文献   

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