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1.
目的探讨小口径内皮化人工血管的临床应用效果。方法将成人大隐静脉内皮细胞在体外培养(12.54±1.28) d;扩增培养的自体细胞衬里 于纤维蛋白胶和纤维连接蛋白联合预衬的国产 ePTFE人工血管,继续培养 9 d。将此人工血管行股- 动脉旁路搭桥术。结果细胞数增加(178.26±44.93)倍。细胞种植后 2 h和 9 d,人工血管腔面见一层均匀的基质,基质表面有一层连续的内皮细胞单层。内皮细胞排列紧密,呈梭形状,形态饱满。除1例术后2月出现人工血管血栓形成外,其余10例患者经6~36月的随访检查,人工血管通畅良好。结论双期法离休衬里技术可有效地提高小口径人工血管的通畅率。  相似文献   

2.
15只恒河猴随机分为2组:实验组10例,其人工血管均经自体静脉内皮细胞种植;对照组5例,其人工血管均未经任何处理。实验组、对照组手术方法相同,将长6cm、直径3mmePTFE(膨体聚四氟乙烯)人工血管近端与腹主动脉行端-侧吻合、远端与髂总动脉行端-端吻合,术后当日、1周及4周,所有恒河猴均行静脉法数字减影造影术,术后4周行彩色B型超声波检查,然后取出所有对照组及9例实验组恒河猴腹腔内之人工血管,标本送光镜、扫描电镜及透射电镜检查。结果表明,术后4周,对照组人工血管均不通畅,而实验组有8条人工血管通畅良好。B超见全部对照组及1例实验组人工血管腔内形成血栓,实验组8例通畅之人工血管均保持较高的血流量。扫描电镜见实验组全部人工血管腔内均有一层完整融合的内皮细胞单层,而对照组人工血管腔内未见有内皮细胞。  相似文献   

3.
恒河猴静脉内皮细胞衬里ePTFE人工血管的实验研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
按原位获取法恒河猴表浅静脉内皮细胞,在体外培养扩增,制备成内皮细胞悬液。用纤维蛋白胶和纤维连接蛋白联合预衬各ePTFE人工血管腔,将内皮细胞灌入此人工血管,结果内皮细胞的贴壁率明显提高;内皮细胞高密度种植人工血管后2h,扫描电下见人工血管腔表面已形成完整的内皮细胞单层;孵育9d后,透射电镜见内皮细胞骨架已分化成熟,表明此时人工血管腔内皮细胞具有良好的抗切应能力。  相似文献   

4.
:15只恒河猴随机分为 2组 :实验组 10例 ,其人工血管均经自体静脉内皮细胞种植 ;对照组 5例 ,其人工血管均未经任何处理。实验组、对照组手术方法相同。将长 6cm、直径 3mmePTFE(膨体聚四氟乙烯 )人工血管近端与腹主动脉行端 -侧吻合、远端与髂总动脉行端 -端吻合。术后当日、1周及 4周 ,所有恒河猴均行静脉法数字减影造影术 ,术后 4周行彩色B型超声波检查 ,然后取出所有对照组及 9例实验组恒河猴腹腔内之人工血管 ,标本送光镜、扫描电镜及透射电镜检查。结果表明 ,术后 4周 ,对照组人工血管均不通畅 ,而实验组有 8条人工血管通畅良好。B超见全部对照组及 1例实验组人工血管腔内形成血栓 ,实验组 8条通畅之人工血管均保持较高的血流量。扫描电镜见实验组全部人工血管腔内均有一层完整融合的内皮细胞单层 ,而对照组人工血管腔内未见有内皮细胞。  相似文献   

5.
按原位获取法获取恒河猴表浅静脉内皮细胞,在体外培养扩增。制备成内皮细胞悬液(2×109/L)。用纤维蛋白胶和纤维连接蛋白联合预衬各ePTFE人工血管腔(长10cm,直径3mm),将内皮细胞灌入此人工血管。结果内皮细胞的贴壁率明显提高[(94.62±2.84)%];内皮细胞高密度种植入工血管后2h,扫描电镜下见人工血管腔表面已形成完整的内皮细胞单层;孵育9d后,透射电镜见内皮细胞骨架已分化成熟,表明此时人工血管腔内皮细胞具有良好的抗切应能力。  相似文献   

6.
目的:对比分析恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的特点和差异。方法:利用非接触式自动角膜内皮细胞仪SP3000P分别对6只恒河猴(12眼)和20只树鼩(40眼)进行角膜内皮细胞测量,并获得角膜的8个相关参数:中央角膜厚度(CCT)、最小细胞面积(Smin)、最大细胞面积(Smax)、平均细胞面积(Savg)、细胞面积标准差(SSD)、细胞面积变异系数(CV)、细胞密度(CD)和六边形细胞百分比(HG),并结合文献与人眼的相关参数进行对比分析。结果:SP3000P角膜内皮细胞仪能在较短时间内完成恒河猴和树鼩角膜内皮的图像采集和参数的检查,耗时无显著性差异。恒河猴和树鼩CCT分别为(449.2±12.8)μm和(262.4±24.6)μm; Smin分别为(120.4±26.3) S/μm2和(153.2±42.9) S/μm2; Smax分别为(705.0±130.8) S/μm2和(468.7±109.3) S/μm2; Savg分别为(351.1±26.1)和(295.4±18.9)S/μm2; SSD分别为(113.1±27.4)和(75.9±27.3)S/μm2; CV分别为(31.9±6.0)和(25.3±8.3); CD分别为(2874.2±203.8)p/cell﹒mm-2和(3399.3±224.7)p/cell﹒mm-2; HG%分别为(58.6±9.1)和(94.0±9.7)。二者的上述参数差异均有显著性差异(P<0.05)。树鼩角膜厚度比恒河猴小,内皮细胞面积、变异系数也较恒河猴小,但是角膜内皮细胞密度和六边形细胞比例显著高于恒河猴。恒河猴角膜厚度、角膜内皮细胞变异系数和六边形细胞比例与人眼高度相似,但内皮细胞密度低于人眼;树鼩角膜厚度为恒河猴的60%、人眼的50%,但角膜内皮细胞密度和平均细胞面积更接近于10~20岁人眼。结论:恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的形态和各项参数均有显著差异,各自与人眼角膜内皮细胞既有相似之处,也有不同点,恒河猴和树鼩均是研究人类角膜内皮疾病可以选择的合适实验动物。  相似文献   

7.
甲型肝炎灭活疫苗不同免疫方案对恒河猴免疫效果观察   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 确定甲型肝炎灭活疫苗免疫恒河猴最佳免疫方案。方法 根据3个免疫方案(方案1:0周免疫;方案2:0周初次免疫、4周加强免疫;方案3:0周初次免疫、24周加强免疫),将17只抗-HAV阴性的恒河猴随机分成4组;第1组;免疫方案1;第2组:免疫方案2;第3组:免疫方案3。1~3组各5只,空白对照组2只。用同等剂量(1280EL.U/ml)的甲型肝炎灭活疫苗于上臂三角肌内分别免疫两组恒河猴,检测恒河  相似文献   

8.
9例出现表皮癣菌的恒河猴,经病原菌培养,鉴定为石膏样毛癣菌,随机分为2组治疗,组I(n=4)局部分擦达克宁霜剂;组Ⅱ(n=5)局部外擦达克宁霜剂,同时用10%甲醛溶液喷洒猴舍。在各组治疗结束后第14天进行疗效评估:组I有效率为75%;组Ⅱ有效率为100%。结果显示:(1)达克宁霜剂与10%甲醛溶液同时用药治疗恒河猴患石膏样毛癣菌病效果显著;(2)用10%甲醛溶液定期消毒猴舍对预防恒河猴感染石膏样毛  相似文献   

9.
反义寡脱氧核苷酸对人肝癌裸鼠模型生长及转移的影响   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的 观察反义H-ras寡脱氧核苷酸(ODN)对高表达蛋白p21H- ras的人肝癌高转移裸鼠模型LCI-D20细胞生长、凋亡及转移潜能的影响。方法原代培养LCI-D20细胞,经10μmol/L浓度反义ODN处理后,以1.5×10细胞数分别接种于14只裸鼠皮下缝制皮囊内:6只接种反义H-rasODN处理细胞,4只接种H-ras非特异性反义ODN处理细胞,余4只接种未作处理的对照细胞。结果反义H-ras对LCI-D20细胞增殖具有显著抑制作用(t=31.529,P<0.01),反义ODN处理细胞,S期比率(36.0±1.4)显著低于对照组(58.5±0.9,t=13.519,P<0.01),而G1/G0期比率(56.7%±1.1%)高于对照组(37.4±0.7,t=14.802,P<0.01);反义H-rasODN处理细胞的凋亡发生率(34.0%±4.5%)显著高于对照组(2.5%±1.2%,t=13.434,P<0.01);反义H-ras处理对LCI-D20细胞在接种动物体内的生长具有显著延迟抑制作用(t=3.509,t=3.452,P<0.01);接种动物的肺转移率,反义H-rasODN处理组显著低于对照组。  相似文献   

10.
目的:建立一种简单、经济、高效地培养恒河猴外周血单核巨噬细胞(monocyte-derived macrophage,MDM)的方法。方法:用肝素钠抗凝管采集健康成年中国恒河猴(Macaca mulatta)全血,密度梯度离心法分离外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)。同时用无抗凝剂采血管采集同一只猴外周血,自凝后分离血清。将猴PBMCs置于CELLBIND Surface的96孔(0.8×106个细胞/孔)或48孔培养板(3×106个细胞/孔)中,用含不同百分比的猴自体血清或胎牛血清(fetal calf serum,FCS)的RPMI 1640培养液培养24h后洗弃未贴壁细胞,加入含有猴自体血清或FCS的新鲜培养基继续培养7天后观察细胞形态学。分化良好的猴单核巨噬细胞贴壁能力强,占据板底大部分区域。胞体形态多样,多数呈长梭形。用巨噬细胞标记受体(CD14)抗体染色判断细胞纯度。并用细菌内毒素(LPS)刺激分化的巨噬细胞,检测巨噬细胞炎性因子的表达。此外,用猴艾滋病毒(SIVmac17E-Br、SIVmac251)和人-猴嵌合体艾滋病毒(SHIV KU-1)感染分化良好的猴巨噬细胞,检测病毒在猴巨噬细胞中的复制。结果:在含2%猴自体血清的RPMI 1640培养条件下,大多数(>85%)猴单核细胞能在24h内贴壁,体外分化5-7天后,猴巨噬细胞纯度大于96%。相比而言,含较高浓度(4%,8%或10%)猴自体血清或FCS的RPMI 1640 培养基对猴单核细胞的贴壁和分化作用较差。分化良好的猴巨噬细胞对LPS刺激敏感,可产生多种巨噬细胞炎性因子。此外,这些细胞对SIV或SHIV均易感,产生感染性病毒。结论:含2%猴自体血清的RPMI 1640培养基适于原代猴单核细胞的贴壁和分化。该方法简单、花费少,无需生长因子,且分化效果好,是培养猴艾滋病毒及开展相关免疫学实验的重要手段。  相似文献   

11.
梅芳  曹凯 《江西医学院学报》2005,45(2):7-10,F002
目的利用组织工程技术体外重建角膜上皮组织,为重建角膜表面提供良好的移植材料和方法。方法以等量凝血酶和纤维蛋白原作用生成的纤维蛋白胶为载体(实验组),种植兔角膜缘组织块,体外培养重建角膜上皮层,每天记录细胞生长覆盖面积,从生长特性、光镜特征、超微结构特点以及免疫细胞化学方面进行观察检测。结果角膜缘上皮细胞在纤维蛋白胶上黏附生长增殖,体外培养7d左右即形成单层上皮细胞,2周左右形成的复层上皮细胞与纤维蛋白胶构成角膜上皮组织经检测与生理状态下的角膜上皮组织相近。实验组与对照组(置盖玻片为载体)比较细胞生长覆盖面积第4天至第7天差异有显著性(P<0.05)。结论以纤维蛋白胶为载体,体外培养的角膜上皮组织片可作为眼表重建角膜上皮移植良好的来源。  相似文献   

12.
Background Placement of an external support has been reported to prevent intimal hyperplasia of vein grafts. However, it is limited by potential complications. In the present study, we investigated the effect of fibrin glue on preventing vein graft failure as perivenous application. Methods Twenty-four rabbits were divided into non-supported group (n=12) and fibrin glue group (n=12). All animals underwent unilateral jugular vein into common carotid artery interposition grafting and then fibrin glue was applied as perivenous support. Samples of tissues were harvested after 4 weeks. Results The vein grafts with fibrin glue demonstrated a statistically significant decrease in proliferating cell nuclear antigen in the medial/intimal region [13.38% (11.26%-15.11%)] compared with non-supported vein grafts [31.22% (27.15%-35.98%)] (P〈0.001). Light microscopy showed remarkable attenuation of endothelial cell loss and numerous microvessels in neoadventitia in the fibrin glue group compared with the non-supported group. The smooth muscle cells migrated into adventitia significantly in fibrin glue group, whereas the smooth muscle ceils migrated into intima in non-supported group. Conclusion Perivenous support of vein graft with fibrin glue in vivo can attenuate the severe injury encountered in the non-supported vein grafts exposed to artery.  相似文献   

13.
目的观察采用生物蛋白胶(fibrin glue,FG)双相接种技术促进组织工程骨体外构建的可行性。方法以生物蛋白胶为介质,用双相接种技术将羊骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)与同种异体冻干脱钙骨基质(freeze-dried demineralized bone matrix,FDBM)复合,在体外构建组织工程骨,以静置接种法作为对照。通过细胞计数、光学和电子显微镜及四甲基偶氮唑盐比色法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测观察细胞在支架材料上的粘附、生长情况。结果双相接种法在不同接种密度时都可保持细胞上架率维持在80%左右,上架细胞的数量随接种细胞密度增加成比例增加;FG对细胞的增殖没有明显影响,提高接种密度使细胞生长曲线提前达到平台期,各组的细胞数量峰值接近。结论双相接种技术可显著提高种子细胞的上架效率,可以作为一种体外构建组织工程骨的好方法。  相似文献   

14.
We presented the experimental results of endothelial cells (EC) seeding in small caliber interpositional dacron grafts of canine carotid arteries. Six weeks after surgery, 9 (56.25%) seeded, and 6 (37.5%) control grafts remained patent. The mean thrombus-free surface area was 83.4% in the seeded and 62% in the controls. The mean volume of thrombus was 74 mg and 218 mg respectively (P less than 0.05). Morphologically, the endothelial layer extension on the graft from the host artery was less than 1 cm. Scanning electron microscopy revealed that a thin luminal layer was composed of flat polygonal cells at the seeded midgrafts, and that fibrous tissues were covered with numerous platelets, fibrin, and blood cells at the unseeded midgrafts. Transmission electron microscopy demonstrated that cells on the seeded midgrafts were characterized by endothelial cells. We conclude that endothelial cells seeding could improve the performance of small-caliber dacron prostheses.  相似文献   

15.
目的以生物蛋白胶作为外周支持,研究其对兔移植静脉的影响,从而寻找更适合临床的外支架材料。方法24只雄性新西兰大耳白兔随机分为非支架组(NS组n=12)和生物蛋白胶支架组(FS组n=12)。建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型。FS组给予生物蛋白胶作为外支架。术后28天取出移植静脉,进行超微结构、组织病理分析和免疫组织化学分析。结果超微结构显示与NS组相比,FS组移植静脉损伤程度明显减轻。免疫组化结果显示与NS组相比,FS组移植静脉细胞增殖核抗原表达明显受到抑制 NS组内皮层损伤严重,有淋巴细胞侵润,而FS组内皮层则几乎完好无损(P〈0.01) 在NS组平滑肌细胞增殖活跃且向内膜迁移,FS组平滑肌细胞增殖受到抑制,且向外膜迁移 在FS组移植静脉外膜有丰富的成熟微小血管网形成,但是在NS组,微小血管数量则非常少。结论生物蛋白胶外支架能给兔移植静脉提供足够的外周支持,明显缓解移植静脉植入动脉循环后的早期损伤。该作用与保护血管内皮完整、抑制增殖细胞核抗原表达、促使平滑肌细胞向外膜迁移和形成外膜新生血管网有关。  相似文献   

16.
Cultured keratinocyte grafting on various biologic matrices   总被引:5,自引:0,他引:5  
Objective: To make attempts to use cell constructs from subconfluent keratinocyte cultures, which contain a much glue (TissucollR) and directly applied onto full thickness wounds in athymic mice or combined with allogenic split thickness overgrafts and compared with cultured sheet grafts. This keratinocyte fibrin glue suspension (KFGS) has also been used in burns up to 88% burned TBSA as well as in chronic wounds. Keratinocytes were also seeded onto various biomaterials (BiobraneR, HYAFF LaserskinR, IntegraTM, TissuFascieR) as carriers. Results: Human suspended keratinocytes were effective to reorganize to skin in vivo both in nude mice and in patients and superior if compared to sheet grafts. 3~ 5 d after seeding onto various biomaterials, cell reached subconfluence and were ready for grafting. These cell-membrane constructs were always tured on microspheres in spinner cultures could increase the cell yield, and the subconfluently covered microspheres were directly grafted onto" the wound. Conclusion: These experiments demonstrated that keratinocytes can grow on a variety of carrier materials in vitro and these cell constructs were able to spontaneously reform a multilayer neoepithelium in vivo. The current screening looks for the ideal carrier for keratinocytes that also would serve as a temporary wound cover and induce dermis formation by tissue conduction which further may be enhanced by gene therapy.  相似文献   

17.
构建内皮细胞三维芽生模型,为调控肿瘤血管生成药物的药效研究提供一种更为准确的检测手段。通过倒挂悬滴式的培养方法使脐静脉内皮细胞形成致密的细胞团,再将细胞团分别放入Matrigel,鼠尾胶及纤维胶3种基质中进行三维培养。结果显示内皮细胞团在纤维胶中形成了明显的相互连接的毛状管腔样结构,即芽生。经验证,内皮细胞团在纤维胶中能形成明显的管腔样结构,且该方法能够成为一种体外观察研究管腔形成的有效方法。  相似文献   

18.
目的将兔骨髓诱导的内皮细胞接种于纤维蛋白凝胶内并观察其生长增值情况。方法梯度离心分离兔骨髓单个核细胞(MNCs),直接向内皮细胞诱导培养,传代培养至第2代细胞,倒置显微镜观察细胞形态及生长特点,免疫组化鉴定;以10^5密度接种于纤维蛋白凝胶中培养并定期观察细胞生长情况,单纯细胞及胶原内的细胞分别用MTT法检测其生长并绘制生长曲线,胶原切片并作苏木精.伊红染色观察细胞在胶原内的生长。结果诱导的内皮细胞为铺路石样。呈单层生长,第2代细胞CD31、八因子相关抗原免疫组化均为阳性,摄取低密度脂蛋白和结合凝集素实验均阳性;细胞在纤维蛋白凝胶内成立体生长,细胞在纤维蛋白凝胶内3d后成梭形铺开,6d后自发形成管腔样结构;细胞在纤维蛋白凝胶内生长曲线成“s”形。结论骨髓诱导的内皮细胞在纤维蛋白凝胶内生长增值良好,纤维蛋白凝胶可以作为接种骨髓诱导的内皮细胞的基质材料。  相似文献   

19.
目的:用体外培养的角膜缘上皮细胞联合人羊膜的方法,行自体移植治疗角膜缘干细胞完全缺乏的兔眼。方法:制作10只兔右眼于细胞缺乏的模型,取其中7只兔的左眼上方角膜缘取一小块组织进行体外培养,并传代在无上皮细胞的人羊膜上。1个月后,手术切除10只兔受伤眼角膜表面被覆的新生血管膜和结膜上皮,7眼接受了含自体培养上皮细胞的羊膜移植,另3眼仅移植无上皮细胞的羊膜。结果:1周后原代培养的角膜缘上皮细胞融合,传代至无上皮细胞的人羊膜上继续生长2~3周,角膜上皮细胞可牢固的附着于羊膜上。移植了含有角膜上皮细胞的羊膜的兔子,术后早期都形成了角膜上皮化,并明显抑制了新生血管的再生,而接受羊膜移植的兔子,术后又出现明显的新生血管。结论:利用无上皮细胞的羊膜作为载体,培养角膜缘上皮细胞并自体移植可以恢复角膜上皮化、抑制新生血管生长。  相似文献   

20.
兔角膜内皮细胞移植治疗角膜内皮损伤   总被引:8,自引:0,他引:8  
Liu XW  Zhao JL 《中国医学科学院学报》2007,29(3):407-412,I0010
目的 研究兔角膜内皮细胞(CECs)移植的可行性和移植后细胞的形态和功能。方法 体外培养兔CECs并用Brdu标记后接种在Gelatin膜载体上;采用α-氰基丙烯酸脘基酯作为组织黏合剂,将接种有兔CECs的载体与机械去除了内皮细胞的自体兔角膜植片相黏合,原位缝合对21只新西兰白兔的右眼进行CECs移植;另外17只兔的右眼作为对照仅移植没有接种任何细胞的载体膜。术后1、2、4、8、12周观察兔眼角膜移植片的透明情况、眼压和植片厚度,并利用共焦显微镜进行移植细胞的形态观察和计数。观察12周后处死动物,角膜标本分别进行组织切片、免疫组织化学染色和电镜观察。结果 CECs在Gelatin膜载体上生长良好,体外培养3—5d后细胞汇合,细胞密度可以达到约2700个/mm^2。术后2周,所有植片均发生了水肿,并逐渐浑浊。CECs组植片在术后4周左右逐渐水肿减退,开始恢复透明;而对照组角膜植片则持续水肿,逐渐浑浊。术后移植细胞的密度随时间推移逐渐降低,术后12周时,移植细胞的平均密度为(2023±330)个/mm^2。Brdu单克隆抗体免疫组织化学染色显示,植片上的细胞为移植细胞。结论 Gelatin膜作为内皮细胞培养载体并进行内皮细胞移植是一种可行的方法。  相似文献   

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