人Ⅱ型胶原反应性T细胞克隆、T细胞受体β链的作用

目的 探讨人Ⅱ型胶原(CⅡ)反应性T细胞克隆(TC9)、T细胞受体β链的作用。方法 通过切割和纯化人CⅡ片段以定位T细胞表位，分子克隆并测序TC9的TcRβ链基因。结果 与CⅡ反应的HLA—DR7限制性TC9其T细胞受体β链由Vβ6．7、Jβ2．3、Cβ2以及序列尚不清楚的D片段构成。结论 对CⅡ反应的TC9的TcRβ链是一种有意义的自身抗原，对进一步研究与CⅡ相关的类风湿性关节炎发病机制及特异性治疗有重要作用。     

淋巴瘤相关抗原肽刺激所获细胞毒性T细胞克隆的特征

目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的B淋巴瘤相关抗原九肽(IgHV1QLVQSGAEV和IgHV3SLYLQMNSL)负荷的抗原递呈细胞(APC),刺激正常HLAA0201供者的外周血单个核细胞(PBMC),每周1次共4次,用流式细胞仪检测体外培养细胞的免疫表型的变化,并用肽/主要组织相容性基因复合体(MHC)四聚体方法检测肽特异性的CTL增殖情况。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CTL与不同的靶细胞共同孵育时释放干扰素γ(IFNγ)的能力。应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和T细胞受体(TCR)基因指纹谱型图方法检测培养前后的淋巴细胞的克隆变化,并用直接测序的方法得到CTL克隆的TCR基因序列。结果B淋巴瘤相关抗原肽4次刺激体外培养的PBMC后CD8+CTL大量增殖,CD4/CD8明显下降(0.10vs1.43,P<0.05)。IgHV1QLVQSGAEV/HLAA0201四聚体和CD8双阳性的肽特异性CTL数量(49.38%)比刺激前(0.04%)明显上升。ELISA检测IFNγ的分泌表明其识别靶细胞是肽特异性和HLA限制性的。TCR基因指纹谱型图显示抗原肽反复刺激获得的CTL的TCR表达集中于个别基因家族,呈克隆性增殖。结论应用IgHV基因框架区来源的B淋巴瘤相关抗原九肽可以使特异性CTL克隆增殖,这些克隆以肽特异性和HLA限制性的方式识别靶细胞。了解这些CTL的作用和TCR识别相关抗原肽的分子结构,将有助于确定体内T细胞和B细胞相互调节的机制。     

类风湿关节炎患者外周血T细胞抑制性多肽的研究

目的探讨HLADRB1结合性流感病毒血凝素(HA)308317变构肽对类风湿关节炎(RA)患者外周血T细胞激活的影响。方法选取27例HLADRB1阳性的RA患者,密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。采用固相法合成HA308317变构肽,并检测RA患者外周血T细胞对这些多肽的反应性;及多肽对白细胞介素(IL)2、γ干扰素分泌及CD69表达的影响。同时进一步观察HA308317变构肽对CII263272或HA308317多肽介导的T细胞激活的抑制作用。结果变构肽刺激T细胞增殖的阳性率分别为7.4%(APL1)、3.7%(APL2)和3.7%(APL3),明显低于CII263272和HA308317原型肰(62.2%和52.9%),3条变构肽的刺激指数也明显低于原型肽(均P<0.01)。并且,其诱导IL2、γ干扰素分泌的水平及CD69的表达亦下降(P<0.05)。与单独加入CII263272或HA308317原型肽的对照组相比,加入HA308317变构肽的T细胞增殖的刺激指数明显下降(P<0.05)。结论替换HA308317多肽中T细胞受体的接触残基产生了弱或非T细胞刺激肽,它们可能有效地抑制RA的T细胞免疫反应。     

T辅助细胞在疫苗研制中的作用

发展感染性疾病疫苗之关键挑战在于利用确定的抗原以刺激产生能引起保护作用的合适的免疫反应。肽类疫苗的运用得到了极大的关注，其意义在于，已知不同的多表位构成单一结构以诱导出所希望的免疫反应所表现出的灵活性。这一般比利用减毒的活疫苗要安全并且相对而言比制造亚单位疫苗要容易。然而，多肽疫苗的发展面临巨大挑战。这一方法在诱导遗传背景复杂的人群免疫反应方面受到限制，这与主要组织相溶性复合物(MHC)多态性有关。因同样的理由，肽类免疫应答常因缺乏适当的辅助T淋巴细胞(HIL)而引导出不充分的细胞毒素T淋巴细胞(CTL)和抗体反应。另一个运用线性肽链结构的可能缺点是：为了引导出合适抗体反应，表面免疫球蛋白受体簇对于激活静息的B细胞就成为必须因素。由WHC多肽性引起的问题可由运用不加区别的T细胞表位来解决。从麻疹病毒F蛋白(氨基酸288到302)中得到的不加区别的T细胞表位和鼠的确定结合在多种MHC分子上的辅助T细胞表位(v1EB，aa191-209)已被定性并且被用于能极大激发免疫应答的结构中，以克服单一限制型免疫应答的缺陷。合成的，非自然Pan DR表位(PADRE)具有退化的结合几种通常HLA—DR的能力，能以绝对效价和抗体反应质量两种形式来增强激发短肽链的免疫应答。另外，一些所谓的从流感病毒血凝素(HA)来的“不加区别的”T细胞表位，恶性疟疟原虫红细胞前期抗原和分枝杆菌蛋白被报道能激发广泛的免疫应答。为了不加区别地结合于几种同型和同种异型的MHCⅡ类分子，这些肽类应显示出部重叠MHC结合形式或应利用保存于配体中的固定位点和应缺失等位基因特异性固定残基，以防止结合于其它Ⅱ类分子。了解MHCⅡ类分子对肽链的不加区别及特异性识别的生物物理学基础将为在疫苗设计中突破遗传限制的策略提供分子水平的依据。     

调节性T细胞的功能特征及其临床联系

人体的自身免疫耐受状态可以通过以下几种途径实现：①通过胸腺的阴性选择。这是主要机制，但是并不完全有效。尤其是表达识别胸腺外自身抗原T细胞抗原受体(TCR)的自身反应性T细胞逃避了阴性选择。②逃避了阴性选择的自身反应性T细胞不易被激活。因为它们可能忽视自身抗原，TCR活性也不强，并且缺乏配体结合抗原呈递细胞提供的协同刺激分子。③可通过Tr细胞(本文将着重介绍)。     

WT1多肽特异性T细胞受体基因转导正常T细胞的抗肺癌效应

目的 通过基因转导技术获得WT1多肽特异性TCR基因转导的正常外周CD8+T细胞,检测其对肺癌细胞的杀伤活性,探讨TCR基因转导用于过继性细胞治疗肺癌的可行性及安全性.方法 通过克隆HLA-A*2402限制性WT1特异性细胞毒性T细胞(CTL)之TCR基因,经构建逆转录病毒载体后转导WT1-TCR基因至正常外周CD8+T细胞;所获得的CD8+T细胞对靶细胞的杀伤效应经标准51Cr释放试验测定.结果 WT1-TCR基因转导后的正常外周CD8+T细胞显示出对WT1多肽负载的HLA-A*2402+LCL细胞的特异性杀伤作用,同时TCR基因改造后的CD8+T细胞可特异性杀伤HLA-A*2402及WT1表达阳性的肺癌细胞株而不对HLA-A*2402表达阳性的正常细胞产生杀伤作用.结论 这些数据论证了WT1-TCR基因转导正常外周T细胞具有与亲代CTL一致的特异性杀伤特性,提示该方法用于过继性细胞免疫疗法治疗肺癌具有可行性.     

复制型重组痘苗病毒TTK-EG特异性T细胞表位研究

目的筛选和确定TTK-EG包含的H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。方法 6~8周龄雌性BALB/c小鼠0周时分别经肌肉注射、皮内注射和滴鼻途径免疫5×10~6PFU TTK-EG,间隔4个月进行加强免疫。末次免疫后2周取小鼠脾细胞,采用IFN-γELISPOT方法筛选HIV-1 Env和Gag肽库,反应阳性的肽库进行第二轮单肽筛选。用流式细胞术(胞内因子染色,intracellular cytokine staining,ICS)对筛选出的单肽进行验证(小鼠免疫途径为肌肉注射),确定H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。结果经过ELISPOT筛选和ICS验证,确定2条Env多肽(gp140-9,氨基酸位点60~77;gp140-74,氨基酸位点548~565)和3条Gag多肽(Gag-49,氨基酸位点196~210;Gag-64,氨基酸位点256~270;Gag-65,氨基酸位点260~274)包含H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位,其中gp140-74(IVQQQSNLLRAIEAQQHL)是首次发现的H-2~d限制的HIV-1特异性T细胞表位。Env、Gag优势表位肽与Env、Gag全肽池刺激小鼠T细胞分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α三种细胞因子的能力基本相同。结论 Env多肽gp140-9、gp140-74和Gag多肽Gag-49、Gag-64、Gag-65包含H-2~d限制的T细胞表位,可用于重组痘苗病毒TTK-EG的T细胞免疫研究。     

1型糖尿病人来源胰岛素原特异性T细胞克隆的建立及表型鉴定

[目的]研究1型糖尿病相关的胰岛素原(Proinsulin,PI)T细胞表位。[方法]采用有限稀释法建立糖尿病病人胰岛素原抗原特异性的T细胞克隆,~(51)Cr释放细胞毒性试验测定T细胞激活的HLA限制性和PI肽段中最小的抗原表位,用流式细胞仪分析其表型及表面肿瘤坏死因子凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apopto-sis-inducing ligand,TRAIL)的表达。[结果]建立了PI抗原特异性的CD4~+ T细胞克隆TWHPI-1,CD8~+ T细胞克隆TWH PI-2。前者为HLA DRB4 0101限制,PI最小抗原表位在PI(79～87),74.2％细胞表达 TRAIL。后者为HLA A1限制。PI最小抗原表位在PI(78～86),94.9％细胞表达TRAIL。[结论]HLA DRB4 0101-Al可能参与IDDM的致病过程,TRAIL可能是两株T细胞克隆引起胰岛细胞死亡的因子之一。     

Ⅱ型胶原多肽263～272序列中多个氨基酸替换的意义及其在胶原性关节炎治疗中的作用

目的:研究Ⅱ型胶原变构肽(APL)中氨基酸替换对胶原性关节炎(CIA)的抑制作用,为类风湿关节炎(RA)的多肽免疫治疗提供试验依据.方法:以丙氨酸替换Ⅱ型胶原(CⅡ)263～272多肽中与T细胞受体(TCR)结合的氨基酸,3H掺入法检测变构肽对RA患者外周血T细胞活化的竞争抑制作用,筛选用于CIA治疗的变构肽.以牛CⅡ诱导大鼠CIA模型,应用不同剂量(1, 10, 100 μg)的CⅡ变构肽每周2次皮下注射,观察大鼠关节肿胀的变化情况.治疗3周后(初次免疫后第35天)处死大鼠,进行X线及病理评分.ELISA法检测血清IFN-γ水平.结果:3条CⅡ263～272变构肽均不同程度抑制CⅡ原型肽对RA患者T 细胞的活化.其中,同时替换267位谷氨酰胺(Q)、270位赖氨酸(K)和271位甘氨酸(G)为丙氨酸(A)的APL3效果最好.应用APL3对CIA进行治疗的结果发现,100 μg治疗组CIA大鼠的关节炎指数、X线及病理评分均显著低于PBS对照组.血清IFN-γ水平也较PBS对照组明显下降.而无关肽组与PBS对照组相比,关节炎指数、X线和病理评分以及血清IFN-γ水平均无明显差别.结论:TCR结合氨基酸位点替换后的CⅡ263～272多肽具有T细胞低反应性和对原型肽的竞争抑制作用,并可抑制大鼠胶原性关节炎的发展,提示其抑制RA免疫异常的可能性.     

识别肿瘤血管内皮细胞的嵌合性T细胞受体的构建与鉴定

近年来发展了一种新的肿瘤免疫治疗策略 ,即将能够特异性识别并结合肿瘤细胞表面抗原、或受体的抗体或配体 ,与T细胞受体胞内成分融合成嵌合性 T细胞受体 (chimeric Tcell recepter,c TCR) ,赋予 T细胞持久的、预先决定的新配体识别特异性 ,转染 c TCR的细胞毒 T淋巴细胞 (cytotoxic Tlym phocyte,CTL )选择性地靶向和杀伤肿瘤细胞 [1 ] 。鉴于血管内皮生长因子受体在恶性肿瘤组织和正常组织中表达完全不同 [2 ,3] ,本研究采用重叠延伸技术构建一种能识别肿瘤血管内皮细胞的 c TCR,为进一步研究其功能提供实验基础。1　材料和方法1.…     

类风湿关节炎患者人类白细胞抗原-DR4/1表型与Ⅱ型胶原特异性T细胞增殖及血清Ⅱ型胶原抗体的关系

目的:探讨类风湿关节炎 (RA) 患者HLA-DR4/1表型与Ⅱ型胶原 (CⅡ) 263-272 多肽特异性T细胞增殖和血清CⅡ263-272抗体之间的关系. 方法:将CⅡ263-272多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5天,用3H参入法测定T细胞增殖,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测患者血清CⅡ263-272抗体水平.以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)技术对上述患者进行HLA-DR分型.结果:在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性,43例HLA-DR4/1表型阴性.在HLA-DR4/1表型阳性的RA患者中,CⅡ263-272多肽可刺激T细胞增殖的有15例(55.6%),12例(44.4%)呈无反应性;18例(66.7%) 患者抗CⅡ263-272抗体阳性.而在HLA-DR4/1表型阴性的RA患者中,T细胞对CⅡ263-272多肽有反应性者13例(30.3%),无反应性者30例(69.7%);15例(34.8%) RA患者抗CⅡ263-272抗体阳性.HLA-DR4/1表型阳性组CⅡ263-272特异性细胞增殖和CⅡ263-272抗体生成均高于HLA-DR4/1表型阴性组.结论:RA 患者CⅡ263-272 特异性T细胞增殖和CⅡ263-272抗体生成与HLA-DR4/1表型有关.     

类风湿关节炎患者Ⅱ型胶原特异性T细胞增殖及抗体生成与HLA-DR4的关系

目的　探讨类风湿关节炎(RA)患者Ⅱ型胶原 (CⅡ)特异性T细胞增殖和CⅡ抗体生成,及与人类白细胞抗原(HLA)- DR_4亚型之间的关系。方法　将CⅡ263 -272十肽与 62例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育 5d,应用四甲基偶氮唑盐法测定T细胞增殖。酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定患者血清CⅡ抗体水平。提取 40例患者外周血基因组DNA,以 33种HLA- DR_4等位基因亚型的特异引物PCR扩增后测定患者HLA DR分型情况。结果　在 62例RA患者中, 38例(61 .3% )患者的T细胞在加入CⅡ263- 272后出现明显增殖,CⅡ263 -272抗体阳性率为 53. 2%。细胞增殖反应阳性的患者CⅡ263- 272抗体的阳性率为 66. 7%,增殖反应阴性的患者为 34 6%,两者比较P<0 .05。CⅡ263 -272抗体阳性的患者T细胞增殖反应率为 69 7%,阴性患者为 42 .1%, 两者比较P<0 .05。所有患者T细胞增殖刺激指数 (SI)与CⅡ263- 272抗体浓度呈显著正相关 (r=0 68,P<0. 01)。40例患者HLA分型中,有 16例携带HLA -DR_4等位基因,未发现HLA DR_4与CⅡ特异性T细胞增殖反应、CⅡ抗体阳性有显著相关性。结论　CⅡ抗体的生成可能与CⅡ特异性T细胞介导的B细胞活化有关。     

类风湿关节炎患者HLA-DR4/1表型与流感病毒血凝素特异性T细胞增殖及其抗体的关系

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者人类白细胞抗原(HLA)-DR4/1表型与流感病毒血凝素(HA)308-317多肽特异性T细胞增殖和血清抗HA308-317抗体之间的关系.方法 将HA308-317多肽与70例RA患者外周血单个核细胞(PBMC)共孵育5 d,3H掺入法测定T细胞增殖.用ELISA法检测RA患者血清HA308-317抗体水平.以序列特异性引物聚合酶链反应(PCR.SSP)技术对RA患者进行HLA-DR分型.结果 在70例RA患者中,27例HLA-DR4/1表型阳性.其中,HA308-317多肽可刺激T细胞增殖的RA患者有17例(62.9%),10例无反应性;15例(55.6%)HLA-DR4/阳性RA患者抗HA308-317抗体阳性.在HLA.DR4/I表型阴性的RA患者中,T细胞对HA308.317多肽有反应性者10例(23.3%),无反应性者33例;25例(58.1%)患者抗HA308-317抗体阳性.HLA-DR4/1表型阳性组HA308-317特异性细胞增殖高于HLA-DR4/1表型阴性组(P＜0.01),但两组血清中HA308-317抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者HA308-317特异性T细胞增殖与HLA-DR4/1表型有关,HA308-317抗体生成与HLA-DR4/l亚型无明显关系;HA308-317多肽可能通过诱导HLA-DR4/1特异性T细胞活化参与RA的发病.     

瓜氨酸化修饰对纤维蛋白原多肽抗原性的影响

目的 研究瓜氨酸化修饰对人纤维蛋白原(Fg)多肽抗原性的影响,探讨针对瓜氨酸化Fg的自身免疫应答在类风湿关节炎(RA)发病中的分子机制.方法 体外对人Fg进行瓜氨酸化修饰,用修饰后Fg刺激RA患者及对照组外周血单个核细胞,通过~3H掺人法观察细胞增殖情况;通过计算机软件对人Fg α链进行瓜氨酸化修饰前后的抗原性分析,从中筛选出1条多肽,并体外合成原型肽和瓜氨酸替换肽,通过在表达HLA-DRB1细胞系中的直接肽结合试验和抗体竞争肽结合试验,评价瓜氨酸化修饰对Fg多肽与HLA-DRB1亲合力的影响;另外,在体外采用抗原提呈及活化系统,通过检测细胞增殖情况观察瓜氨酸化修饰对Fg多肽激活T细胞作用的影响.结果 瓜氨酸化修饰的Fg和野生型Fg对RA患者外周血单个核细胞的激活作用略高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).多肽结合试验和细胞活化试验证实,瓜氨酸替换肽与HLA-DRB1的结合力明显高于原型肽,而且瓜氨酸替换肽对T细胞的活化作用强于原型肽,二者差异有统计学意义(SI为2.26±0.14比1.65±0.53,P<0.01).结论 瓜氨酸化修饰能够增加Fg多肽与HLA-DRB1的结合力,诱导T细胞活化,从而增强Fg多肽的抗原性.     

Ⅱ型胶原变构肽对胶原性关节炎软骨破坏的影响

目的研究连续替换Ⅱ型胶原(CⅡ)268-270位T细胞受体(TCR)结合氨基酸的CⅡ变构肽sub268-270对胶原性关节炎(CIA)关节软骨损伤的抑制作用。方法使用牛CⅡ在Lewis大鼠诱发CIA。将CIA大鼠分为30μg组、5μg组、1μg组和空白对照组,每组8只,每次分别接受CⅡ变构肽sub268-27030μg、5μg、1μg及磷酸盐缓冲液静脉注射,每周2次。从关节炎症积分、病理学滑膜炎症积分、血管翳评分、关节软骨损伤评分和骨破坏积分评价变构肽疗效,用血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平和关节组织切片中软骨番红花红含量来评价变构肽对关节软骨损伤的抑制作用。结果30μgCⅡ变构肽组关节炎症积分为5·6±2·63,显著低于5μg组为(9·67±5·61)、1μg组为(10·02±5·06)及空白对照组为(11·8±5·34)(P<0·01)。与5μg变构肽、1μg变构肽和PBS相比,30μg变构肽可以显著降低CIA大鼠滑膜炎积分(P<0·01)、血管翳积分(P<0·01)、软骨损伤积分(P<0·01)和骨破坏积分(P<0·01)。30μg变构肽组血清COMP水平(μg/ml)为2·21±0·76,5μg变构肽组为5·63±1·73,1μg变构肽组为6·04±1·76,空白对照组为7·00±1·46,30μg治疗组与空白对照组比P<0·01。关节组织切片中软骨蛋白聚糖含量(A值)30μg组为2·35±0·76,5μg组为1·57±0·63,1μg组为1·37±0·53,空白对照组为1·00±0·41,30μg组与空白对照组比P<0·01。结论30μgCⅡ变构肽sub268-270可以有效缓解CIA,显著抑制CIA中的关节软骨破坏。     

A hepatitis C virus (HCV) core protein derived peptide inhibits HCV specific lymphocyte proliferation

T helper lymphocytes are important regulatory cells for the immune response in chronic hepatitis C. They recognize peptides, which are generated from the viral proteins by antigen processing and are bound to MHC (major histocompatibility complex) class II molecules. However, antigen processing might also result in non-immunogenic peptide fragments that can modify T cell activation. - To identify such peptide fragments in hepatitis C, we studied binding of 15 synthetic HCV core derived peptides to MHC class II molecules of 9 human homozygous typing B cell lines (HT-BCLs) as well as T cell proliferation in 41 HLA-typed patients with chronic hepatitis C. - We identified a peptide (HCV core aa 59-83) which bound to 7 HT-BCLs, whereas PBMC of only 2 out of 36 patients with the corresponding HLA-DR alleles proliferated in response to this peptide. Competition experiments indicated that small amounts of peptide aa 59-83 specifically inhibited the proliferative response to the recombinant core protein but not to core derived immunogenic peptides. Our data show that a peptide fragment from the HCV core region aa 59-83 can interfere in vitro with immune recognition of the HCV core protein.     

Intrathyroidal T cell activation and HLA-DR antigen expression on thyroid follicular cells in autoimmune thyroid diseases]

Thyroid specimens from 19 patients with Hashimoto's thyroiditis (HT), 11 with Graves' disease (GD), 4 with nontoxic goiter (NTG), 1 with subacute thyroiditis (SAT), 1 with thyroid adenoma and 4 from normal thyroids were investigated by alkaline phosphatase anti-alkaline phosphatase (APAAP) immunocytochemical technique. A group of monoclonal antibodies against the corresponding T cell activation antigens were used. The positive rates of all the four activation antigens in thyroid gland mononuclear cells (TG-MNC) were significantly higher in HT than in NTG (P less than 0.05-0.01). However, the differences between HT and GD were insignificant (P greater than 0.05) except for HLA-DR antigen. The activation antigen-positive (especially TLiSA 1+) TG-MNC were often seen intruding into thyroid lumens of HT. All the abnormal specimens expressed HLA-DR antigens on thyroid follicular cells (TFC) in different degrees (+/- to +3), and the degree in HT was significantly higher than that in GD (P less than 0.01) or NTG (P less than 0.05). The level of DR expression on TFC correlated significantly with the infiltrating degrees of T-activation-antigen-positive cells (P less than 0.01). This indicates that aberrant DR expression in vivo is closely related to the activation of intrathyroidal T cells.     

VIR576通过与TCR跨膜区结合抑制抗原特异性T细胞活化

目的 探讨抗HIV多肽VIR576抑制抗原特异性T细胞活化的作用机制.方法 OVA体外刺激分离的DO11.10小鼠抗原特异性T细胞,CCK-8法检测VIR576对其活化的影响.采用溶血试验,溶血抑制实验、荧光结合法等方法检测VIR576与TCR跨膜区序列(TCR-TMD)之间的相互作用.结果 体外实验显示,VIR576能逆转HIV gp41融合多肽(FP)介导的抗原特异性T细胞活化,并且其自身也能抑制抗原特异性的T细胞活化(P<0.05).溶血试验、溶血抑制实验、荧光结合法等方法证实,VIR576能与TCR-TMD特异性结合.结论 VIR576对T细胞活化的作用是TCR依赖性的,通过与TCR-TMD结合抑制抗原特异性T细胞活化.VIR576兼具抑制HIV进入和抗原特异性T细胞活化的特性,可望作为预防HIV性传播的杀微生物剂进行研究.

Abstract：

Objective To study the mechanism underlying the inhibitory effect of the anti-HIV peptide VIR576 on antigen-specific T cell activation. Methods CCK-8 assay was used to investigate the effect of VIR576 on the proliferation of splenocytes of OVA-specific DO11.10 Tg mice in response to chicken OVA. Hemolysis test, hemolysis inhibition assay and fluorescence binding assay were used to investigate the interaction of VIR576 with the transmembrane domain (TMD) of the T cell receptor (TCR). Results VIR576 inhibited HIV glycoprotein gp41 fusion peptide-mediated antigen specific T cell activation, and VIR576 itself also inhibited splenocyte proliferation in responses to OVA (P<0.05). Hemolysis test, hemolysis inhibition assay and fluorescence binding assay demonstrated that VIR576 suppressed TCR-TMD-mediated hemolysis and competitively inhibited Rho-VIR576 binding to TCR-TMD peptide. Conclusion VIR576 is effective in suppressing the antigen-specific T cell activation via TCR and can interact with TCR-TMD. VIR576 may serve as a potent microbicide candidate to block sexual transmission of HIV due to of its inhibitory effect on both HIV entry and antigen-specific T cell activation.