GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光（GFP）小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法 将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义（P=0.364）。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论 三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。     

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。     

annexin A2体外胚胎着床的功能阻滞研究

目的 将通过已有的小鼠体外胚胎着床模型对annexin A2在胚胎着床中的功能进行相应的研究。方法 将孕第4天ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。比较子宫内膜经annexin A2抗体预处理以及未经处理之间,各组胚胎黏着率的差异,并在共培养后进行组织学研究。结果 小鼠子宫内膜经浓度为1.0μg/ml及0.1μg/ml的annexin A2抗体预处理后小鼠囊胚在其上的黏着率分别为45.6%及53.6%;而抗体浓度为1.0μg/ml的正常IgG对照及未经抗体处理的空白对照组的黏着率分别为55.4%及59.0%。经过1.0μg/ml的annexin A2抗体预处理组与两组对照组之间的黏着率比较,差异无统计学意义。免疫组化实验发现,经过annexin A2抗体预处理后,未见到annexin A2表达明显降低。结论 annexin A2在第4天的子宫内膜组织表达明显高于第1天的子宫内膜组织。运用抗体进行阻滞实验时并不能显著降低体外胚胎在子宫内膜组织的黏着率。     

胚胎着床的子宫内膜免疫学研究现状与展望

胚胎着床的过程极为复杂,包括定位、黏附和侵入三个阶段.着床仅发生在一个极其有限的时间与空间范围内(即所谓的"着床窗"),需要子宫内膜和胚胎准确的同步化、相互作用和配合.     

氧浓度对关节软骨细胞体外培养的影响

关节软骨在体内属缺氧组织,且组织内氧浓度水平呈现梯度,表现为软骨组织表层为10%,而至深层则下降到1%,因此采用空气中20%氧浓度对软骨细胞进行体外培养,显然不适宜。通过对关节软骨组织的生物学特性、生存环境以及不同氧浓度下软骨细胞体外培养的实验研究分析,认为5%氧浓度是体外培养关节软骨细胞的适宜浓度,同时在软骨细胞的不同生长时期对培养基氧浓度进行控制,可将软骨细胞处于较好的生长增殖状态。     

白血病抑制因子在小鼠胚胎着床机制的体外探究

目的 运用已有的小鼠体外三维着床模型观察LIF抑制状态下对胚胎着床这一过程中的影响以及其转导通路中下游STAT3和pSTAT3蛋白表达水平的变化,从而探究LIF及其转导通路在胚胎着床中的功能.方法 将小鼠内膜组织置于有不同浓度LIF抗体（0.1和1.0μg/ml）及正常IgG对照和阴性对照的培养基中预培养0.5h.然后进行内膜组织和囊胚的共培养,观察比较胚胎与内膜的黏着率的不同,并对抗体处理后的内膜进行STAT3及pSTAT3的免疫组化染色.结果 运用1.0％抗体预处理组的黏着率与正常IgG对照组及阴性对照组之间均有统计学差异.pSTAT3的表达在经LIF抗体预处理的内膜中明显高于对照组.结论 LIF在小鼠胚胎着床中起着非常重要的作用,通过LIF表达的降调节可以显著降低胚胎黏着率.LIF对胚胎黏着的作用可能是通过JAK/STAT通路中STAT3的磷酸化活化而实现的.     

不同氧浓度通气对胃癌手术患者的影响

目的：不同氧浓度通气对胃癌手术患者过氧化反应及动脉氧合的影响。方法：选择行胃癌根治术病人40例，随机分4组（n=10）。根据吸入氧浓度分为35%FiO2（A组）、50%FiO2（B组）、75%FiO2（C组）和100%FiO2（D组）。从麻醉诱导开始，采用不同氧浓度行IPPV机械通气。分别于T0、T1、T2、T3抽取动脉血行血气分析，抽取外周静脉血行SOD、MDA检测。随机抽取10例非肿瘤手术病人作对照组（C1组）。结果：（1）各组SOD活力随着麻醉时间逐渐下降，MDA含量随着麻醉时间逐渐增高。SOD活力和MDA含量与A组相比，D组于诱导后120分钟出现差异（P〈0.05）。（2）各组的PaO2随吸氧浓度的增加相应升高。A组PaO2持续增高。其他组手术结束时较术中有所降低。与A组相比，C、D组于诱导后60分出现显著差异（P〈0.01）。结论：35%吸入氧浓度对上腹部手术病人SOD和MDA影响最小，PaO2持续升高。     

针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜CCR2的影响

目的观察针刺对胚胎着床障碍大鼠子宫内膜趋化因子受体CCR2表达的影响。方法将72只孕鼠随机分为正常组（N ）、胚胎着床障碍组（M ）、针刺治疗组（A ）和黄体酮治疗组（W ）,每组随机再分为第6天组（D6）、第8天组（D8）、第10天组（D10）。其中M 组、A 组和W 组大鼠妊娠第1天给予米非司酮麻油溶液造模,N 组仅给予等量麻油溶液。同时,A 组固定并每天针刺三阴交、后三里,N 组和M 组仅固定,W 组肌肉注射黄体酮,直至处死。用免疫组织化学法、Western blot 和 Real-time PCR等方法测定着床点子宫内膜 CCR2的表达。结果与 N 组相比,M 组大鼠子宫内膜 CCR2蛋白和mRNA的表达均明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;与 M 组相比,A 组和 W 组大鼠子宫内膜CCR2蛋白和 mRNA 的表达则明显增高（P＜0.05）。结论针刺能上调胚胎着床障碍大鼠母胎界面CCR2的表达,从而促进胚胎的着床和胎盘的形成。     

超声波对小鼠胚胎表达整合素及其着床能力的影响

目的：研究超声波照射对小胎胚表达整合素α1、α5、β1、β3的影响充及与其着床能力的关系。方法：取小鼠二细胞胚经超声波照射后体外培养至囊胚期,用免疫组化法检测其整合素α1、α5、β1、β3的表达及其着床能力的改变,并与未经照射的正常胚胎比较,结果：1、超声波照射组胚贴附率,滋养细胞外延生长率均显著低于正常胚胎。2、正常胚胎桑椹胚期即有α5、β1、β3整合素表达,而无α1表达：囊胚期α5、β1、β3表达增强,仍无α1表达：α1只出现在外延生长的滋养细胞。3、超声波照射组胚胎β3整合素的表达明显弱于正常组。且未见α1表达,而α5、β1的表达两组间无差异。结论：超声波照射使胚胎着床能力明显降低。可能与其影响胚胎细胞α1、3整合素的正常表达有关。     

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮（NO）在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制,进行小鼠胚胎着床实验,分3个实验进行。实验1及实验2,于小鼠妊娠第3d和第1－6d分别腹腔内注射N－硝基－L－精氨酸甲酯[L－NAME,一氧化氮合酶（NOS）的非特异性竞争抑制剂]0.5-5mg和3mg,观察其对胚胎着床的影响。实验3,给予L－NAME＋L－精氨酸（NO的前体）,观察L－精氨酸对L－NAME作用的影响,并评价胚胎发育情况。上术3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现：与对照组相比,妊娠第3d腹腔注射L－NAME1－5mg可减少胚胎的着床位点数（P＜0.05）,腹腔注射4、5mg的L－NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期（妊娠3－5d）给予L－NAME均可减少胚胎着床位点数。此时,子宫内膜血管通透性的改变被抑制,缺少蜕膜样变,同时胚胎发育阻滞。L－NAME的这种抑制作用可被同时给予的L－精氨酸抵消。提示NO通过增加子宫内膜的血管通透性、子宫内膜的蜕膜化以及胚胎的发育而促进小鼠胚胎着床的发生。     

体外低氧培养系统下的高质量早期人胚形态学特征

目的：探讨低氧（7.5%O2）和高氧（20%O2）培养体系对人早期胚胎（D1-D3）体外发育及胚胎移植临床结局的影响．方法选取2012年2月至2013年8月在云南省第二人民医院生殖医学中心接受常规IVF-ET治疗,行D3新鲜胚胎移植的周期资料,共280个周期,比较7.5%O2低氧组（120个周期）和20%O2高氧组（160个周期）早期胚胎体外发育的结果和胚胎移植的临床结局．结果低氧组D3优级胚胎形态外观上明显有别于次优级胚胎（即传统优级胚胎）,呈卵裂球紧贴,裂球边界渐模糊的形态学特征,且优级胚胎率显著高于高氧组（66.22%与47.54%）,但2组受精率、卵裂率和可用胚胎率比较差异无统计学意义．低氧组胚胎的着床率显著高于高氧组（42.94%与31.01%）,生化妊娠率（62.22%与47.06%）和临床妊娠率（53.33%与39.22%）也均比高氧组高．结论体外低氧培养系统能产生质量更高的人早期胚胎,对提高IVF临床结局有益．     

氧张力对培养的血管内皮细胞内超氧化物歧化酶活性的影响

目的：研究氧张力对培养的人脐静脉血管内皮细胞（VEC）内超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响，探讨缺血再灌注损伤的机理。方法：用胶原酶消化法获取VEC，在不同氧张力下培养8天，检测其SOD活性。结果：在高氧张力下培养的VEC其SOD活性比在低氧张力下培养的高（P＜0．01）。结论：氧张力对培养的VEC内SOD活性有调节作用。     

吲哚美辛对小鼠胚胎着床的影响

目的观察吲哚美辛对胚胎着床的影响,探讨吲哚美辛在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制。方法小鼠妊娠第3天和第4天皮下注射吲哚美辛,观察其对胚胎着床的影响,经组织学切片,采用苏木精-伊红染色和透射电镜,观察用药后子宫内膜组织结构和细胞超微结构变化。结果①小鼠妊娠第3天和第4天皮下注射吲哚美辛50mg/kg可完全抗着床;②苏木精-伊红染色提示,给药后第5天和第8天小鼠子宫内膜基质致密,不见透明样改变;腺体增生,与基质发育不同步;血管明显减少;子宫内膜可见大量炎性细胞浸润;③超微结构示,给药后第5天小鼠子宫内膜全层脂滴,空泡变性呈不同程度增多,腔上皮细胞受损;第8天子宫内膜腺体少量细胞出现坏死。结论吲哚美辛通过多因素协同作用对小鼠具有较强抗着床作用。     

3种内膜准备方案对冷冻胚胎移植结局的影响

目的探讨3种不同的内膜准备方案对冷冻胚胎移植结局的影响。方法回顾性分析1395个冷冻胚胎移植周期,探讨其与妊娠结果的关系。结果 3种方案中病人的年龄、不孕年限、子宫内膜厚度、移植胚胎数间差异无统计学意义。3组移植周期临床妊娠率分别为29.14%、29.55%和28.57%（P〉0.05）,流产率为13.86%、14.77%和25%（P〉0.05）,宫外孕发生率为2.90%、2.80%和0（P〉0.05）,无明显差异。结论在冷冻胚胎移植周期,采用自然周期、激素替代周期或促排卵周期准备内膜的妊娠率、流产率无明显差异,对于排卵正常患者采用自然周期法更经济、简单。     

胰岛素样生长因子系统对卵巢生理和胚胎种植的影响

随着辅助生殖技术的发展,卵泡发育和胚胎种植的机制越来越受到生殖领域的关注。胰岛素样生长因子系统可在卵巢和子宫内膜分泌,本文通过总结胰岛素生长因子和胰岛素样生长因子结合蛋白在卵巢和子宫内膜不同时期分泌的变化,探讨其对卵巢生理和胚胎种植的影响。     

输卵管积水的处理方式对体外受精-胚胎移植结局的影响

【目的】探讨输卵管积水不同处理方式对体外受精-胚胎移植（IVF-ET ）结局的影响。【方法】收集因输卵管因素（102例输卵管积水）行IVF-ET患者154例,根据IVF-ET 术前对输卵管积水不同处理方式将患者分为五组：A 组积水未处理16例;B组输卵管积水抽吸35例;C组腹腔镜下输卵管积水切除15例;D组腹腔镜下输卵管积水近端结扎远端造口36例;E组（对照组）输卵管梗阻,无积水52例,比较各组促性腺激素（Gn）用量、促排天数、人绒毛膜促性腺激素（HCG）日雌二醇（E2）水平、取卵数、移植胚胎数、受精率、妊娠率、流产率、异位妊娠率等指标。【结果】各组的Gn用量、促排天数、hCG日E2水平、移植胚胎数、受精率、异位妊娠率间差异无统计学意义（P ＞0．05）;获卵数C组最少,与其他组相比有统计学意义（P ＜0．05）。临床妊娠率A组最低（25％）,D组最高（56％）,A组与C、D、E组比较有统计学差异（ P ＜0．05）,与B组比较无统计学差异;流产率A 组最高（67％）,D组最低（10％）,A组与C、D、E组比较有统计学差异（ P ＜0．05）,与B组比较无统计学差异。【结论】输卵管积水降低胚胎种植率和临床妊娠率,增加流产率,在IVF-ET 治疗前处理输卵管积水有助于提高胚胎种植率,改善妊娠结局。采用腹腔镜下输卵管近端结扎远端造口术是治疗输卵管积水比较适宜的方式。     

囊胚培养及移植在体外受精周期中的应用

目的 探讨囊胚培养及移植在体外受精周期中的应用. 方法 整群选取2012年1月—2014年12月期间来该院接受体外受精-胚胎移植的64例患者作为该次研究对象,按照选择胚胎培养及移植时期的不同将64例体外受精-胚胎移植患者分成研究组和对照组,研究组为选择囊胚期胚胎培养及移植的患者,共33例,对照组为选择卵裂期胚胎培养及移植的患者,共31例. 受精成功后采用G1进行早期胚胎培养,采用G2进行囊胚培养. 结果 两组患者中各有1例消移植周期病例, 实际移植周期数分别为32个和30个, 研究组患者的胚胎植入率为37.1%, 妊娠率为53.1%,与对照组患者的19.4%和33.3%比较,差异有统计学意义(P<0.05).两组患者的流产率和异位妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05),但对照组患者的多胎率明显高于研究组患者(P<0.05). 结论 选择囊胚期胚胎培养及移植可有效提高胚胎植入率和妊娠率,降低不良妊娠结局发生率和移植周期取消率.