H2型松弛素对血管平滑肌细胞增殖的效应及机制

目的探讨H2型松弛素对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的作用及分子机制。方法应用不同浓度H2型松弛素(10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol·L-1)处理人VSMC,采用细胞计数试剂盒、氚标记胸腺嘧啶核苷(3HTdR)掺入实验和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)掺入实验检测其对VSMC增殖的作用,免疫印迹法检测其对细胞表型蛋白、细胞周期蛋白和信号蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、核转录因子κB p65(NF-κB p65)的影响。结果 CCK-8试剂盒检测结果显示,10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol·L-1H2型松弛素对人VSMC的增殖效应高于0 mol·L-1(P<0.05),且浓度越高,增殖效应越明显(P<0.05)。Ed U掺入和3H-TdR掺入实验进一步证实H2型松弛素对人VSMC有增殖效应。H2型松弛素处理12 h可降低VSMC收缩表型蛋白标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌肌动蛋白-22α(SM22α)的蛋白表达,但可增加VSMC合成表型蛋白标志物骨桥蛋白的表达。H2型松弛素处理VSMC可以激活Akt、ERK和NF-κB p65等关键信号蛋白。结论 H2型松弛素可能通过调控细胞周期蛋白及激活Akt、ERK和NF-κB等细胞增殖的关键信号通路,并能促进VSMC表型的转变,进而引起VSMC过度增殖。     

舒脉胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

目的 观察舒脉胶囊及其拆方药物血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)迁移的影响.方法 采用组织贴块法进行VSMC培养,AngⅡ 10-7 mol/L作为刺激因子,将药物血清分为舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组和补脾益肾拆方组,测微尺测量细胞迁移的距离,免疫组织化学法测量基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)的表达情况.结果 与AngⅡ组比较,舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组细胞迁移距离显著减小(P<0.01),MMP-2表达减少(P<0.01),其中舒脉胶囊全方组细胞迁移距离显著小于活血化瘀拆方组(P<0.01).结论 舒脉胶囊通过抑制MMP-2的表达而抑制VSMC迁移,全方作用优于拆方.     

舒脉胶囊对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

目的观察舒脉胶囊及其拆方药物血清对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)迁移的影响。方法采用组织贴块法进行VSMC培养,AngⅡ10-7 mol/L作为刺激因子,将药物血清分为舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组和补脾益肾拆方组,测微尺测量细胞迁移的距离,免疫组织化学法测量基质金属蛋白酶-2(metalloproteinase-2,MMP-2)的表达情况。结果与AngⅡ组比较,舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组细胞迁移距离显著减小(P<0.01),MMP-2表达减少(P<0.01),其中舒脉胶囊全方组细胞迁移距离显著小于活血化瘀拆方组(P<0.01)。结论舒脉胶囊通过抑制MMP-2的表达而抑制VSMC迁移,全方作用优于拆方。     

舒脉胶囊对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

目的　观察舒脉胶囊及其拆方药物血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响。方法　组织贴块法进行血管平滑肌细胞(VSMC)培养,AngⅡ10_-7mol/L作为刺激因子,将药物血清分为舒脉胶囊全方组、活血化瘀拆方组和补脾益肾拆方组,测微尺测量细胞迁移的距离,免疫组化测量MMP-2的表达情况。结果　舒脉胶囊全方组和活血化瘀拆方组迁移距离及MMP-2阳性表达率比AngⅡ组和补脾益肾拆方组低,并有统计学差异。结论　舒脉胶囊具有抑制细胞迁移的效应,并且是通过抑制MMP-2的表达而发挥作用,全方作用强于活血化瘀拆方组,而补脾益肾拆方组不但没有抑制细胞迁移的作用,相反还有促进细胞迁移的作用。     

血管紧张素Ⅱ对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对培养人血管平滑肌细胞钙化的影响,以探讨血管钙化发生的机制。方法:体外培养人动脉平滑肌细胞,用β甘油磷酸(βGP)诱导细胞钙化。培养细胞分4组:正常对照组;βGP组:βGP终浓度为10mmol·L-1;AngⅡ组:AngⅡ终浓度为10-7mol·L-1;βGP+AngⅡ组:同时加入相同浓度的βGP和AngⅡ,连续培养10d。采用Vonkossa染色、细胞层钙沉积定量和细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断钙化程度,用流式细胞仪测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果:βGP组细胞Vonkossa染色见大量黑色颗粒状沉积物弥漫分布于细胞层,βGP+AngⅡ组细胞之间散在分布黑色沉着点;βGP+AngⅡ组细胞钙沉积显著低于βGP组[分别为(1.336±0.096)和(2.056±0.441)μmol·L-1,P<0.01];βGP+AngⅡ组细胞内ALP活性显著低于βGP组[分别为(277.57±87.81)和(691.27±128.06)IU·L-1,P<0.01]。正常对照组与AngⅡ组细胞比较,Vonkossa染色、细胞钙沉积量和ALP活性均无显著性差异。流式细胞仪结果显示,βGP+AngⅡ组细胞凋亡率显著低于βGP组,G0/G1期细胞比例降低,S期的比例升高(P<0.05)。结论:10-7mol·L-1的AngⅡ可抑制钙化血管平滑肌细胞的体外钙化进程。其作用可能与抑制ALP活性和促进细胞增殖、抑制凋亡有关。     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞促增生作用的研究

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）对血管平滑肌细胞的致增生效应及洛沙坦的拮抗作用。方法：采用贴块法培养幼兔主动脉平滑肌细胞,通过检测细胞甲基－＾３Ｈ胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入、ＭＴＴ廓清和细胞数量赤评价不同浓度ＡｎｇⅡ及／或洛沙坦预自理对血管平滑肌细胞增生的影响。结果：ＡｎｇⅡ呈剂量依赖性地增加平滑肌细胞的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入和ＭＴＴ廓清而对血管平滑肌细胞数量无明显影响;洛沙坦预处理可显著地     

大蒜素对大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响及机制研究

目的:观察大蒜素对大鼠血管平滑肌细胞迁移的作用,并初步探讨其作用机制.方法:采用组织块贴壁法获取SD大鼠原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC),并将VSMC分为对照组、模型组[1 mg·L-1脂多糖(li-popolysaccharide,LPS)]、大蒜素组(1 mg·...     

C肽在血管平滑肌细胞增生和迁移中的作用

C肽是胰岛B细胞分泌的,是胰岛素原转化成胰岛素的副产物。长期以来,一直认为C肽无生物活性,在临床上一直作为判断B细胞功能的指标。随着近年来的研究进展,多项基础和临床研究都显示C肽水平与心血管、神经功能密切相关,从而日益受到重视。现从C肽对血管平滑肌细胞增生与迁移的作用以及可能的信号通路和相关基因等方面的研究进展进行综述。     

松弛素对血管作用的研究进展

随着人们生活水平的提高和人均寿命的延长,心脑血管疾病正成为威胁人类健康的头号杀手,如何有效改善血管的结构和功能、减少心脑血管临床事件的发生也随之成为医学界的研究热点。众所周知,血管的功能受血管内皮、平滑肌和结缔组织等多方面的影响,其中尤以内皮功能对血管整体情况的影响更为显著。近年来,人们发现了松弛素(relaxin,RLX)、前列     

糜酶对培养人血管平滑肌细胞血管紧张素Ⅱ生成及细胞增殖的作用

目的 拟从细胞水平观察阻断糜酶途径后对人血管平滑肌细胞生成血管紧张素（AngⅡ）及细胞增殖的影响。方法 通过植块培养法获得人脐动脉血管平滑肌细胞,并分组为：①DMEM组（空白培养液对照组）;②AngⅠ组;③AngⅠ＋卡托普利组;④AngⅠ＋糜酶抑素组;⑤AngⅠ＋缬沙坦组。分别阻断血素紧张素转换酶、糜酶和AngⅠ受体,进行细胞计数、细胞增殖指数及培养液中AngⅡ含量的测定。结果 药物干预组较AngⅠ组细胞数量减少（P〈0.01）;糜酶抑素组与缬沙坦组能明显抑制细胞增殖（P〈0.01）;糜酶抑素组的AngⅡ含量明显降低（P〈0．01）,缬沙坦组则明显升高（P〈0．01）。结论 糜酶途径在血管平滑肌细胞AngⅡ生成及细胞增殖中起重要作用．     

KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨KCa3.1通道对增殖表型大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法组织贴壁法培养大鼠血管平滑肌细胞,采用光学显微镜、电镜和免疫细胞化学染色法观察初代和9代平滑肌细胞形态学特征。RT-PCR和免疫细胞化学染色法检测初代和9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA和蛋白表达。MTT和Transwell法观察KCa3.1通道对平滑肌细胞增殖和迁移的影响。结果初代和9代平滑肌细胞分别表现出收缩表型和增殖表型特征,9代平滑肌细胞KCa3.1通道mRNA、蛋白表达水平、增殖和迁移能力显著高于初代细胞(P<0.01),KCa3.1通道阻断剂TRAM-34可显著抑制9代细胞的增殖和迁移(P<0.01),对初代细胞无明显影响。结论增殖表型血管平滑肌细胞KCa3.1通道表达增加可能促进了细胞的增殖和迁移。     

Role of angiotensin Ⅱ and angiotensin Ⅱ receptors in vascular smooth muscle cell migration in vitro

ObjectiveTo determine the biotic effects of angiotensin Ⅱ (Ang Ⅱ) on the migration of rat smooth muscle cells (VSMCs) and investigate the mechanisms involved in the development of vascular injury. Methods VSMCs isolated from aortic media of Wistar rats and cultured by the modified explant method were adopted. In the presence and absence of Ang Ⅱ, the expression of Ang Ⅱ receptor (ATR) and reorganization of the actin cytoskeleton and focal adhesion of VSMCs were studied by an immunocytochemistry technique and fluorocytochemistry technique. Migration assays were performed with a modified Boyden’s chamber. The effects of AT(1)R antagonist (CV- 11974), AT2R antagonist (PD123319) on the aforementioned target were studied. Results VSMCs migration was stimulated by adding Ang Ⅱ. The dynamic reorganization of actin cytoskeleton and focal adhesions may be an important mechanism by which Ang Ⅱ facilitates VSMCs motility. The expression of AT(1)R in VSMCs could be upregulated initially after treatment with Ang Ⅱ, then decreased gradually. The expression of AT(1)R was downregulated by AT(1)R antagonists. The effect of Ang Ⅱ on VSMCs migration was mediated by AT(1)R, while AT2R had no significant effect. Conclusions The dynamic reorganization of focal adhesions and the actin cytoskeleton is required for Ang Ⅱ- induced VSMCs migration. This effect is mediated by AT(1)R.     

他汀类药物对血管平滑肌细胞的影响及机制

心血管疾病尤其是冠状动脉硬化性心脏病具有很高的死亡率和发病率,对这些冠脉疾病的病因分析,认为动脉粥样硬化是主要原因。动脉壁脂质沉积和血管平滑肌细胞的异常迁移与增殖是动脉粥样硬化形成的两个关键步骤。目前抗动脉粥样硬化以调脂药物如三羟基三甲基戊二酰辅酶A（HMG-COA）还原酶抑制剂（即他汀类药物）为主,临床实验和基础研究表明：他汀类药物不仅具有调控血浆胆固醇的主要作用,而且还涉及其非调脂的抗动脉粥样硬化作用,如抗炎症反应、抑制血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞增殖与迁移、促进血管平滑肌细胞凋亡和改善内皮功能等。本文主要就他汀类药物对血管平滑肌细胞增殖、迁移、凋亡的影响及其机制做如下综述。     

白藜三醇抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 探讨植物雌激素白藜三醇（RV）对大鼠血管平滑肌细胞增殖的调控及可能机制.方法 用植块贴壁法体外培养大鼠血管平滑肌细胞,使用Western blotting检测各组雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、P38、P-P38、C-myc蛋白的表达水平.实验分为6组（每组n=6）：正常对照组（NC组）,含10% 胎牛血清（FBS）的DMEM; RV干预组（RV组）,50 μmol/L RV干预24 h; 血管紧张素Ⅱ组（AngⅡ组）,1 μmol/L AngⅡ干预12 h;RV＋ AngⅡ组,1 μmol/L AngⅡ干预12 h,然后加入50 μmol/L RV干预24 h;RV＋ICI182780组,1 μmol/L ICI182780干预2 h,然后加入50 μmol/L RV干预24 h;RV＋ICI182780＋AngⅡ组,1 μmol/L ICI182780干预2 h,然后加入1 μmol/L AngⅡ干预12 h,最后加入50 μmol/L RV干预24 h.结果 各组P38蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）;ERα、ERβ蛋白的表达：RV组ERα、ERβ蛋白的表达水平较正常对照组增高（P＜0.01）,而RV＋ICI182780组与RV组比较表达降低（P＜0.01）;C-myc蛋白的表达：RV组与NC组比较表达降低（P＜0.01）,AngⅡ组与NC组比较表达增高（P＜0.01）,AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋ICI182780＋AngⅡ组与RV＋AngⅡ组比较表达降低（P＜0.05）;P-P38蛋白的表达：RV组与NC组比较表达降低（P＜0.01）,AngⅡ组与NC组比较表达增高（P＜0.01）,AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋AngⅡ组与RV组比较表达增高（P＜0.01）,RV＋ICI182780＋AngⅡ组与RV＋AngⅡ组比较表达降低（P＜0.01）.结论 白藜三醇可以抑制C-myc的表达,抑制P38的磷酸化,此作用可被ICI182780阻断,说明白藜三醇可能是通过ER进而抑制C-myc的表达和P38的磷酸化发挥抗平滑肌细胞增殖的作用.     

巨噬细胞ADAM8诱导血管平滑肌细胞去分化

目的研究巨噬细胞去整合素金属蛋白酶8(ADAM8)过表达对血管平滑肌细胞去分化的影响。 方法利用生物信息学筛选小鼠腹主动脉瘤和人胸主动脉夹层差异表达基因。巨噬细胞转染ADAM8过表达质粒,并收集巨噬细胞培养基处理血管平滑肌细胞。qPCR和Western blotting检测细胞ADAM8表达水平;细胞划痕实验、Edu染色实验分别检测血管平滑肌细胞迁移能力和增殖能力。qPCR检测过表达ADAM8的巨噬细胞培养基对血管平滑肌细胞分化标志基因表达水平的影响。 结果ADAM8基因在人胸主动脉夹层和小鼠腹主动脉瘤病变过程中显著上调(P＜0.05),且在脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应过程中也显著增加(P＜0.05)。巨噬细胞过表达ADAM8诱导细胞炎症反应和基质金属蛋白酶(MMP)表达,同时过表达ADAM8的巨噬细胞培养基促进血管平滑肌细胞的迁移和增殖能力,但显著抑制血管平滑肌细胞分化标志基因α-actin和α-tropomyosin的表达水平(P＜0.05)。 结论巨噬细胞ADAM8促进炎症因子和MMP表达并诱导血管平滑肌细胞的去分化。     

过表达趋化因子受体4的内皮祖细胞影响血管平滑肌细胞迁移、增殖

目的 研究过表达趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)迁移、增殖的影响.方法 分离培养并鉴定大鼠骨髓来源EPCs.CXCR4的重组腺病毒感染EPCs后,流式细胞术、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测细胞膜CXCR4受体及mRNA表达,CCK-8法、Transwell法分别检测EPCs增殖活性、迁移能力.建立过表达CXCR4的EPCs与VSMCs非接触共培养模型,Transwell法、CCK-8法检测EPCs对VSMCs的迁移、细胞存活的影响.结果 CXCR4重组腺病毒感染EPCs 48 h后,EPCs细胞膜CXCR4受体和mRNA表达明显增高(P＜0.01),过表达CXCR4对EPCs增殖活性无明显影响,但可增强EPCs定向迁移能力(P＜0.01).共培养模型中,SDF-1α诱导下,CXCR4组VSMCs迁移、细胞存活率明显降低(P＜0.05),无SDF-1α诱导下空白对照组、GFP组及CXCR4组VSMCs的迁移、细胞存活率整体高于SDF-1α诱导下各组(P＜0.05).结论 过表达CXCR4可增强EPCs的迁移能力,在SDF-1/CXCR4调控轴中加强EPCs对VSMCs迁移和增殖的抑制作用,可用于防治血管再狭窄的细胞治疗.     

Eukaryotic Expression of Human Arresten Gene and Its Effect on the Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells

Arresten,human noncollagenous domain 1 oftheα1 chain of type Ⅳcollagen,is derived fromthe carboxy terminal of type Ⅳcollagen[1].It wasidentified as a powerful inhibitor of angiogenesisrecently .In earlier studies , human arresten wassuccessfully amplified from placenta tissue , andmolecular cloning and DNA sequencing verifiedthat the coding sequence obtained was correct[2].Prokaryotic expression vector of arresten gene hasbeen constructed[3]. Excessive proliferation andmigration to endome…     

选择性环氧合酶抑制剂ｃｅｌｅｃｏｘｉｂ对血管平滑肌细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用和分子机制

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞莱昔布(celecoxib)对血管平滑肌细胞的增殖抑制作用及分子机制.方法:给予原代培养的大鼠平滑肌细胞不同浓度的celecoxib处理,WST-1细胞增殖实验观察细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测凋亡;Western blot方法检测血管平滑肌细胞COX-2的表达、caspase-3蛋白的裂解激活、磷酸化Akt的表达.结果:WST-1实验结果显示.经0、6.25、12.50、25.00、50.00 μmol/Lcelecoxib作用24 h后,细胞的增殖率分别为100%、81.15%、66.72%、54.93%和11.41%:50 μmol/L celecoxib作用24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率为30.72%;Western blot实验显示,血管平滑肌细胞中COX-2有表达,celecoxib作用于细胞后caspase-3蛋白裂解片段激活,磷酸化Akt的表达减弱或消失.结论:celecoxib对血管平滑肌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能部分涉及到Akt/caspase途径.     

caveolae对血管平滑肌细胞增殖的影响及可能机制

目的 观察caveolae对血管平滑肌细胞增殖的影响及可能机制.方法 取培养第3代VSMCs培养皿中培养.干扰组细胞加甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,MβCD)(5mmol/L,DMEM配置)作用2h;对照组加入与MβCD等量的DMEM作用2h后以DMEM冲洗3次后正常培养48 h.采集细胞进行RT-PCR检测Caveolin-1、pSmad2 mRNA表达变化,Western blot法检测Caveolin-1、pSmad2蛋白表达变化,免疫组化检测Caveolin-1、TGF-β受体1(TGF-βR1)在细胞中的表达分布,CCK-8法检测细胞增殖能力.结果 Caveolin-1在MβCD干扰后,基因和蛋白表达水平明显下降(P＜0.01),并且以细胞膜和细胞质高表达为主;而Smad2在MβCD干扰后,基因和蛋白表达水平明显上升,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);并且TβR-1在MβCD干扰后细胞内表达增加.CCK-8检测结果显示,MβCD干扰后,VSMCs增殖被显著抑制(P＜0.01).结论 破坏caveolae结构后可以抑制VSMCs的增殖,其可能的机制是caveolae被破坏后,TGF-β/Smad信号通路增强,不能抑制Smad2磷酸化和下游的信号转导,从而达到抑制VSMCs的增殖的作用.     

Different responses of cell cycle between rat vascular smooth muscle cells and vascular endothelial cells to paclitaxel

Summary： Although previous reports showed dmg-eluting stent （DES） could effectively inhibit neointima formation, in-stent restenosis （ISR） remains an important obstacle. The purpose of this study was to investigate different effects of paclitaxel on proliferation and cell cycle regulators between vascular smooth muscle cells （VSMCs） and vascular endothelial cells （VECs） of rats in vitro. The cultured VSMCs and VECs of rats from the same tissues were examined by using immunohistochemistry, flow cytometry and Western blotting in control and paclitaxel-treated groups. The results showed paclitaxel could effectively inhibit proliferation of VSMCs and VECs. However, as compared with VECs, prolif- eration of VSMCs in paclitaxel-treated group decreased less rapidly. The percentage of cells in G0-G1 and G2-M phases was reduced, and that in S phase increased after treatment for 72 h. The expression of cyclin D1 and B1, p27 and PCNA in VSMCs of paclitaxel-treated group was up-regulated, but that of p21 down-regulated as compared with VECs. It is concluded that there are significant differences in the expression of cell cycle regulators and proliferation rate between paclitaxel-treated VSMCs and paclitaxel-treated VECs, suggesting that the G1 S checkpoint regulated by paclitaxel may play a critical role in the development of complications of DES, which provides new strategies for treatments of ISR.