大肠杆菌DNA对小鼠致死作用的初步研究

目的：探讨细菌DNA是否参与细菌感染引起的失控性炎症反应综合征（SIRS）的发生。方法：清洁级昆明种小白鼠100只，随机分为30、20、10、5、1mg/kgE.coli DNA和30mg/kg^60Co DNA、DNased DNA、CT DNA、DNA抽提流程有机残留物以及空白对照10组，后两组经腹腔注射600mg/kg D-氨基半乳糖敏化。采用尾静脉给药方式，观察给药后48h内小鼠的一般情况及其死亡率。结果：①双链E.coli DNA对小鼠的致死作用有明显的量效关系，LD50=11.51mg/kg；②30mg/kg E.coli DNA、^60Co DNA组小鼠死亡率差异无显著性（8/10、10/10，P＞0.05)；③DNased DNA、DNA抽提流程有机残留物和CT DNA组均无小鼠死亡（0/10）。结论：细菌DNA参与了SIRS的发生。     

三种常用抗菌药物对小鼠肠道大肠杆菌和肠球菌影响的实验研究

目的观察临床常用的三种抗菌药物对小鼠肠道菌群的影响。方法采用3×2析因设计,将48只昆明小鼠随机分为8组,处理因素和水平分别为头孢氨苄(0,500mg/kg)、丁胺卡那霉素注射液(0,200mg/kg)、环丙沙星(0,150mg/kg),每组按析因设计方案给予处理,给药14d,动态观察动物粪便大肠杆菌和肠球菌变化的情况。结果①药物作用6d,三种药物均导致小鼠肠道大肠杆菌数量显著减少,而肠球菌数量增加,作用前后以及与对照组比较差别有统计学意义;②作用14d,大肠杆菌数回升,有些组甚至高于实验前,而肠球菌数减少显著;③三种药物的交互效应:药物作用6d,对大肠杆菌的影响方面,头孢氨苄和环丙沙星联合作用有拮抗作用;头孢氨苄和丁胺卡那霉素、环丙沙星和丁胺卡那霉素则有协同作用;头孢氨苄、丁胺卡那霉素和环丙沙星三者联合使用有协同作用。对肠球菌的影响三者抗菌药物之间交互效应有协同作用。药物作用14d,仅丁胺卡那霉素与环丙沙星之间对肠球菌作用的交互效应有统计学意义,两者有协同作用。结论头孢氨苄、丁胺卡那霉素和环丙沙星三种抗菌药物均可对小鼠造成肠道菌群失调,特别是环丙沙星导致的菌群失调持续时间较长;抗菌药物对大肠杆菌和肠球菌数量影响的规律不同;三种抗菌药物联合使用有交互作用。     

当归多糖对铁超载模型小鼠铁负荷的影响

目的：探讨当归多糖（ASP）对高铁负荷模型小鼠铁代谢的影响。方法 C57BL／6雌性小鼠随机分为模型＋ASP组、模型＋NS组和空白对照组。模型＋ASP组与模型＋NS组连续4周隔天腹腔注射150 mg／kg体重右旋糖酐铁注射液,制备高铁负荷模型小鼠;随后模型＋ASP组连续4周隔天腹腔注射200 mg／kg体重ASP,模型＋NS组连续4周隔天腹腔注射同体积生理盐水;空白对照组持续8周隔天腹腔注射同体积生理盐水。多功能全自动生化分析仪测定小鼠血清铁含量,空气－乙炔原子吸收法测定小鼠肝、脾和心脏中铁含量,HE染色观察小鼠肝、脾、心脏组织铁沉积。结果与空白对照组相比,高铁模型组小鼠血清铁含量升高（ P＝0．000）,高铁小鼠模型造模成功;模型＋ASP组小鼠肝脏、脾脏和心脏铁含量均明显低于模型＋NS组（ P＝0．000）;模型＋ASP组小鼠血清铁含量明显高于模型＋NS组（P＝0．000）。结论 ASP能够减轻高铁负荷模型小鼠组织铁负荷。     

大肠杆菌L型对小鼠致病性的研究

本文应用人工诱导的大肠杆菌L型经血行和膀胱感染小鼠,通过细菌学和病理学检查发现,大肠杆菌L型直接感染可引起小鼠多个脏器的间质性炎症,并观察到注射免疫抑制剂的小鼠较正常小鼠发病率高、病变重;血行感染较膀胱感染发病率高。     

大肠杆菌致小鼠急性腹膜炎模型的建立

目的建立一种简便、稳定、符合临床特征的小鼠感染大肠杆菌致细菌性腹膜炎的模型。方法小鼠腹腔分别注射9种浓度的2株大肠杆菌菌液,分别于4、6、8、16、24h记录小鼠外周血白细胞总数的变化;记录实验组小鼠死亡时间,并解剖死亡小鼠,观察其腹腔情况以及肝、脾组织的病理变化。结果各实验组小鼠均表现出细菌性腹膜炎临床征象,高于2×10^8cfu/ml浓度的实验组小鼠细菌性腹膜炎尤为典型;小鼠外周血白细胞总数随着注射菌液后时间的延长呈现先升高后降低的趋势;病理检查显示实验组小鼠肝、门管、脾窦内有不同程度的中性粒细胞浸润。标准菌株的MLD为3×10^8cfu/ml。结论小鼠大肠杆菌细菌性腹膜炎模型建立成功;小鼠死亡率因不同菌株、不同浓度而有所差异。     

去铁胺对小鼠糖尿病随意型皮瓣成活影响研究

目的:观察去铁胺(DFO)对小鼠糖尿病随意性皮瓣成活面积的影响。方法:C57/BL6小黑鼠被链脲佐菌素诱导成糖尿病后,在其背部制成1 cm×3 cm随意性皮瓣,将DFO用PBS溶解后,腹腔注射,通过图像分析技术和激光多普勒分析皮瓣的成活率和血流状况。结果:DFO组皮瓣的存活面积(88.44±6.56)%明显大于PBS介质组(61.64±7.63)%(P0.01)。激光多普勒结果显示,DFO处理组皮瓣各部分血流值均大于PBS组(P0.01)。结论:DFO能够增加糖尿病C57/BL6小鼠背部随意皮瓣的血流量和存活面积。     

雌二醇对小鼠肝脏铁调素和膜铁转运蛋白表达的影响

目的研究雌二醇（E2）在小鼠铁调素和膜铁转运蛋白表达调节中的作用。方法在不同时间、使用不同浓度雌激素对小鼠进行腹腔注射,应用RT-PCR法检测肝脏铁调素和膜铁转运蛋白mRNA。结果注射50μgE212h和24h后小鼠铁调素表达增加（P〈0.05）,而注射100μgE212h后小鼠膜铁转运蛋白表达也出现上调（P〈0.05）。结论 E2可通过调节小鼠肝脏铁调素和膜铁转运蛋白表达而影响铁代谢。     

羰基铁-聚苯胺复合吸波材料的制备及性能

为提高材料在低频段下的吸波性能,采用化学氧化聚合法和物理共混法制备聚苯胺和羰基铁聚苯胺复合材料。通过X射线衍射(XRD)、红外光谱(FT-IR)、矢量网络分析(PNA)等测试手段对材料的物相和性能进行了表征和分析。结果表明：在0~6 GHz,羰基铁-聚苯胺复合材料的吸波性能较纯羰基铁有了很大提高,而且其吸收峰向低频区移动,当导电聚苯胺的质量分数为0.06时,其吸波性能最佳,最大吸收峰值为-39.1 dB,-10 dB以下频宽为1 639 MHz。     

人胸腺素α1原核表达重组体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的：以基因工程方法获得人胸腺素α1（Tα1）多肽产品。方法：通过PCR扩增人工合成模板的方法获得人Tα1基因，然后将其克隆入原核细胞表达载体pGEMEX1，用重组体转化大肠杆菌，并从mRNA和蛋白质水平检测重组体在大肠杆菌中的表达情况。结果：构建人Tα1克隆重组体pUC18-Tα1，经序列分析证实对码、序列无误；成功构建了人Tα1原核细胞表达重组体pGEMEX1-Tα1;从mRNA水平证实pGEMEX1-Tα1在大肠杆菌JM109（DE3）中能够转录；转化大肠杆菌JM109（DE3），经IPTG诱导，能产生-36kD左右的融合蛋白。结论：构建成功重组体pGEMEX1-Tα1，并在大肠杆菌中得以表达。     

莱姆病螺旋体重组质粒pBX1的DNA序列分析及其在大肠杆菌中的诱导表达

目的 为莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制提供靶抗原。方法 采用377型DNA自动测序仪对莱姆病螺旋体重组质粒pBX1的插入片段进行DNA序列测定,并通过计算机软件对其进行限制性内切酶酶谱分析。然后将重组质粒pBX1在大肠杆菌中进行诱导表达,并对其表达产物进行免疫印迹分析。结果 （1）重组质粒pBX1插入片段大小为477bp,其核酸序列与文献报道的p83基因全序列相应区段相比较仅有一个碱基的变异,（2）成功绘制了该插入片段的限制性内切酶酶谱;（3）重组质粒在大肠杆菌中诱导表达后获得了29kd的融合蛋白;（4）Western-blotting分析表明该融合蛋白能与莱姆病多价抗血清呈强阳性印迹反应。结论 该研究成功地对莱姆病螺旋体83kd抗原蛋白特异性区段进行了基因重组和表达,为进一步研究其在莱姆病血清学诊断和基因工程亚单位疫苗研制中的应用奠定了基础。     

重组小鼠Raf-1蛋白在大肠杆菌中表达的实验研究

目的:表达小鼠重组Raf-1蛋白,为进一步研究其在信号传导中的功能奠定基础。方法:提取小鼠肝脏组织总RNA,逆转录合成cDNA,巢式PCR扩增Raf-1基因编码区。将Raf-1基因克隆入原核表达载体pETDuet-1,IPTG诱导表达,表达产物行Western Blot鉴定。结果:经SDS-PAGE及Western Blot证实,在大肠杆菌中有重组鼠Raf-1的表达,表达产物主要存在于包涵体中。结论:实现了重组小鼠Raf-1的表达。     

活动性结核病铁过载小鼠模型建立及相关指标分析

目的 建立一种外源性铁过载结核病小鼠模型。方法 采用完全随机法将20只C57BL/6N小鼠分为阴性对照、低剂量、中剂量和高剂量组,每组5只,分别经腹腔注射右旋糖酐铁溶液(0、3.75、7.50、15.00 mg/次,3 次/周,共4周)。建模结束后对铁过载小鼠的器官组织形态及体质量进行评估,ELISA法检测血清铁、铁蛋白、转铁蛋白及可溶性转铁蛋白受体含量。心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏和小肠等器官进行组织铁含量和铁沉积病理分析。经尾静脉注射结核分枝杆菌(Mtb)标准株H37Rv感染中等剂量铁过载小鼠建立活动性结核病铁过载小鼠模型,采用HE染色和Mtb培养分析肺、脾脏和肝脏等组织结核性病变和荷菌量。结果 铁过载小鼠肝脏颜色加深,呈暗褐色,其他脏器组织无明显颜色和形态改变。阴性对照组,低、中、高剂量组小鼠的体质量增长百分比分别为25.47%、25.22%、24.74%、21.36%,其中,高剂量组的体质量增长明显低于阴性对照组(F=17.235,P=0.027)和低(F=15.206,P=0.031)、中剂量组(F=11.061,P=0.036)。肝脏组织铁含量最高,其他依次为脾脏、肾脏和小肠,低剂量组小鼠心脏和肺组织铁含量与阴性对照组相比差异无统计学意义(F=19.023,P=0.715;F=23.193,P=0.902)。铁过载小鼠外周血血清铁和铁蛋白水平随铁剂注射量增加而升高,转铁蛋白和可溶性转铁蛋白受体无明显变化。各脏器组织HE染色与普鲁士蓝染色结果发现,铁过载动物各脏器均出现不同程度铁沉积,且高剂量铁剂引发小鼠肝肾损伤。铁过载Mtb感染组小鼠的肺(F=23.227,P=0.017)、脾脏(F=19.023,P=0.021)和肝脏(F=17.392,P=0.009)细菌培养报阳时间明显低于Mtb感染对照组,肺(F=21.012,P=0.007)、脾脏(F=20.173,P=0.002)和肝脏(F=19.091,P=0.005)荷菌量明显高于Mtb感染对照组。结论 腹腔注射中等剂量(7.50 mg/次,3 次/周,共4周)右旋糖酐铁溶液成功构建与临床铁过载疾病患者症状类似的外源性铁过载小鼠模型,通过尾静脉注射Mtb可构建活动性结核病铁过载小鼠模型。     

牛磺酸对小鼠脾细胞DNA损伤的影响

１．目的 探讨牛磺酸对紫外线所致小鼠脾细胞ＤＮＡ损伤的影响。２．方法 小鼠饲料中分别添加牛磺酸、维生素Ｃ（Ｖｉｔ Ｃ）和维生素Ｅ（Ｖｉｔ Ｅ）喂养１１２ｄ后,荧光法（ＦＡＤＵ法）检测小鼠脾细胞ＤＮＡ链的断裂程度,并与对照组比较。３．结果 紫外弛照射前,小鼠脾细胞ＤＮＡ链断开明程度各组间差异无显著性（Ｆ＝０．８７５６,Ｐ〉０．０５）,紫外线照射后,牛磺酸、Ｖｉｔ Ｃ,Ｖｉｔ Ｅ各组脾细胞ＤＮＡ双链剩余     

使用大肠杆菌0_(111)诱导小鼠腹泻模型

目的:为临床研究提供腹泻病动物模型。方法:使用致病性大肠杆菌0111菌株,通过腹腔注射和经口灌胃两种途径感染小鼠。结果:经腹腔注射,可诱导小鼠腹泻,大便培养阳性,半数致死量为3.0亿/只,半数致腹泻量为2.4亿/只;经口灌胃30亿/只,小鼠未致端正。结论:经腹腔注射致病性大肠杆菌0111菌株可诱导出小鼠腹泻模型。     

甲壳低聚糖对小鼠肠道正常菌群的影响

目的：观察甲壳低聚糖对小鼠肠肠道菌群的影响。方法：取昆明种小鼠20只,随机分为观察和对照组,分别用甲壳低聚糖600mg(kg.d)和等体积的生理盐水灌胃,连续7d,而后检测两组肠道菌群的变化。结果：观察组双歧杆菌数量比对照组明显增多（P＜0．05）,乳杆菌数量在两组间无明显差异,观察组大肠杆菌、肠球菌数量较对照组有减少趋势。结论：甲壳低聚糖具有调节小鼠肠道菌群及促进双歧杆菌增殖功能。     

内毒素和大肠杆菌繁殖对小鼠胚胎体外发育的影响

目的：通过了解内毒素和大肠杆菌繁殖对小鼠胚胎发育的影响,探讨污染胚胎对内毒素的耐受性及胚胎污染的解决办法。方法：将150枚小鼠2-细胞胚胎随机分成5组,A组作为对照,B、C组分别加入细菌内毒素0.25 EU/ml、0.5 EU/ml,D、E组均加入大肠杆菌,中途对E组换液,终止细菌污染。在第2天和第4天观察各组胚胎发育情况,对胚胎质量进行评估。结果：（1）对照组存活率和囊胚形成率均100%,内毒素B、C 2组存活率和囊胚形成率均为100%,囊胚形态学观察与对照组无差别。（2）D、E组第２天存活无统计学差异（P>0.05）,第4天E组囊胚形成率明显高于D组（P<0.01）,但囊胚质量较差。结论：菌体繁殖代谢对胚胎的影响大于单纯的内毒素,及时终止污染可部分缓解细菌污染对胚胎发育的影响。     

胸腺肽对HBV转基因小鼠表达HBV DNA的影响

应用胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠进行腹腔内注射（３ｍｇ／只）连续３个月，同时设促肝细胞生长素及生理盐水对照组，定期取血检测ＨＢＶＤＮＡ，结果发现胸腺肽组ＨＢＶＤＮＡ阴转率为２２％～５５％，停药２２ｄ后阴转率为２２％，而对照组小鼠ＨＢＶＤＮＡ无阴转，结果提示胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠表达ＨＢＶＤＮＡ有抑制作用。     

指状青霉提取物对大肠杆菌infA基因的致突变研究

为了研究分离获得的引发桔子霉烂的优势真菌指状青霉提取物的致突变作用。方法：将Ｅ．ｃｏｌｉ ｋ１２菌株作为诱变对象，利用ＰＣＲ扩增得到ｉｎｆＡ基因片段，通过Ｔ载体克隆并作序列分析。结果：ｉｎｆＡ基因片段中 有５个点突变存在；推导氨基酸序列有一个氨基酸变异（Ｌｙｓ→Ｖａｌ）。结论：指状青霉提取物可引起 Ｅ．ｃｏｌｉ ｋ１２菌株 基因突变。     

头孢曲松钠对菌血症小鼠肠道膜菌群的影响

目的观察静脉注射头孢曲松钠对小鼠肠道菌群的影响。方法小鼠随机分为空白对照组（A组）30只、菌血症组（B组）48只及菌血症＋抗生素组（C组）48只。B、C组制作菌血症模型24h后,C组小鼠尾静脉注射头孢曲松钠100mg/（kg·d）。在实验第4、11及18天,对各组小鼠结肠与回肠肠黏膜肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌进行定量分析,并取小鼠肝脏、脾脏、肾脏、血液做细菌培养。结果A、B两组小鼠肠道各菌群比较,差异无显著性（F=2.826,P〉0.05）。C组小鼠静脉注射头孢曲松钠4d,其肠道各菌群的数量与A、B组比较,差异均无显著性（F=1.663～2.093,P〉0.05）。C组小鼠用药11d与A、B组比较,除肠球菌外其他菌群数量均有所减少,差异均有显著意义（F=3.501～22.563,q=2.617～9.441,P〈0.05、0.01）;用药18d肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳酸杆菌数量较A、B组减少,差异均有显著意义（F=4.166～29.865,q=2.617～9.441,P〈0.05、0.01）。小鼠用药18d时发生肝脏、脾脏、肾脏、血液细菌易位,易位细菌主要是肠球菌与凝固酶阴性的金黄色葡萄球菌。结论长时间应用头孢曲松钠可造成小鼠肠道微生态的明显紊乱,导致细菌易位。