首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到19条相似文献,搜索用时 140 毫秒
1.
目的 克隆产甲酸草酸杆菌甲酰辅酶A转移酶基因(frc),检测其在真核细胞中的表达。方法 用聚合酶链式反应技术从产甲酸草酸杆菌基因组DNA中扩增frc基因片段并插入真核表达载体获取重组质粒pEGFP-frc,通过限制性内切酶酶切电泳和测序鉴定重组质粒。重组质粒转染人胚。肾293细胞,检测frc基因在mRNA和蛋白水平上的表达。被转染细胞在含草酸培养液中培养,检测0~72h培养液中草酸浓度的变化。结果 frc基因的真核表达载体构建成功。转染293细胞后24~72h,可观察到明亮的绿色荧光,在mRNA和蛋白水平上可检测到frc基因在真核细胞中的表达。转染pEGFP-frc细胞12~72h培养液中草酸浓度明显低于转染空载体的细胞(P〈0.05)。结论 中国人肠道产甲酸草酸杆菌中可分离出frc基因;frc基因可在真核细胞293细胞中表达并使293细胞获得代谢草酸的能力。  相似文献   

2.
GDNF基因转染诱导神经干细胞向神经元分化的作用   总被引:1,自引:1,他引:1  
目的探索转染GDNF基因到大鼠神经干细胞(neural stemcell,NSC)的方法,并研究其诱导大鼠神经干细胞向神经元和多巴胺能神经元分化的作用。方法体外扩增GDNF基因,并构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的表达载体PcDNA3-GDNF-GFP质粒。悬浮培养大鼠胚胎神经干细胞,脂质体介导PcDNA3-GDNF-GFP质粒转染神经干细胞,荧光显微镜观察转染及表达情况;免疫细胞化学鉴定β-微管蛋白Ⅲ(β-Tubulin III)和酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH),以确定神经干细胞的分化为神经元和多巴胺能神经元情况。结果转染后72 h,荧光蛋白大量表达。脂质体介导PcDNA3-GDNF-GFP质粒转染神经干细胞后,神经干细胞分化为神经元和多巴胺神经元的比例明显增高。结论脂质体介导GDNF基因转染神经干细胞的方法简单、有效,是一较为理想的基因转染方法。GDNF基因能明显促进神经干细胞分化为神经元和多巴胺神经元的比例。  相似文献   

3.
目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。  相似文献   

4.
小鼠Retn基因siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:设计小鼠Retn基因特异性的siRNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些siRNAs的表达质粒,以便为在体外研究Retn基因的功能打下基础.方法:(1)设计并合成小鼠Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段,并克隆到pSilencerEM1.0-Neo载体;(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能稳定表达相应siRNAs的一组3T3-L1细胞克隆;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用RT-PCR分析这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平.结果:设计并构建了4个小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达质粒,并证明其中的2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的siRNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平.结论:本研究设计并构建出的小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达载体,所表达的siRNAs具有较强的RNA干涉功能,为Retn基因的功能研究奠定了实验基础.  相似文献   

5.
目的 制备稳定高效表达血管生成素-1(Ang-1)的转基因工程骨髓基质干细胞。方法 应用基因重组的方法构建Ang-1真核表达质粒pEGFP/Ang-1,利用脂质体将pEGFP/Ang-1转入骨髓基质干细胞,用流式细胞仪检测转染率,用荧光显微镜和免疫细胞化学方法检测蛋白质的表达。结果 质粒酶切电泳显示重组质粒构建成功,转染pEGFP/Ang-1质粒的骨髓基质干细胞在荧光显微镜下可见绿色荧光;流式细胞仪检测转染率约50%;免疫细胞化学检测可见转基因骨髓基质干细胞表达Ang-1蛋白。结论 成功制备表达外源性基因Ang-1的骨髓基质干细胞,制备方法是可行的。  相似文献   

6.
建立高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系的研究   总被引:2,自引:2,他引:0       下载免费PDF全文
目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系.方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn.(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系.(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用实时荧光RT-PCR法分析这些脂肪细胞内Retn基因mRNA的水平.结果:构建了一个能在真核细胞内表达小鼠Retn基因的表达载体;建立了一个携带有pcDNA3-mRetn载体并组成性地高表达小鼠Retn基因的细胞系.结论:成功地建立了一个组成性地高表达小鼠Retn基因细胞系,为进一步研究Retn基因的功能和小鼠Resistin蛋白的获得奠定了基础.  相似文献   

7.
目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以Xholl和BdmHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer—N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer—N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer—N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer—N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表选为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。  相似文献   

8.
目的 研究Fas基因转染对舌鳞癌Tca8113细胞的体外抑制作用,构建Fas基因真核表达质粒pBK-Fas并将其转导入舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的Fas基因治疗提供实验基础.方法 采用RT-PCR反转录成cDNA扩增Fas基因全长,亚克隆到真核表达载体pBK-CMV内,构建出重组真核表达质粒pBK-Fas,酶切鉴定并测序.脂质体法将pBK-Fas转染入Tca8113细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达及半定量分析,琼脂糖凝胶电泳检测Fas转染细胞凋亡,流式细胞仪检测Fas蛋白表达.通过细胞生长曲线描记和软琼脂集落形成实验研究Fas基因的体外抑瘤效应.结果 PCR扩增后的产物在约1 008 bp处出现明显的特异性条带,重组质粒pBK-Fas经酶切和测序鉴定,表明均含有大小正确的Fas基因片段.经检测Fas基因转染能提高Fas mRNA 表达水平、Fas 蛋白表达强度,以及细胞凋亡指数.Fas基因转染能提高Fas蛋白的表达强度,由转染前的34.01±4.76上升到转染后的55.72±7.33,差异有统计学意义(P<0.01).Fas转染细胞株在Fas抗体作用下能够有效启动Fas介导的细胞凋亡途径.MTT法检测细胞增殖抑制率的结果显示PBK-Fas转染组 Tca8113细胞的增殖抑制作用最明显,表明Fas基因转染能增加舌鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制率,结果与细胞生长曲线测定(计数法)结果具有一致性.软琼脂集落形成实验结果显示,与未转染细胞相比,重组质粒转染的Tca8113细胞群体倍增时间延长,克隆形成能力降低.结论 Fas基因片段被成功插入真核表达载体pBK-Fas质粒的多克隆位点.Fas基因转染能有效的抑制体外培养的舌鳞癌Tca8113细胞的生长.  相似文献   

9.
目的 将重组结核分枝杆菌Rv0901基因的重组质粒pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠腹腔巨噬细胞,研究结核分枝杆菌Rv0901基因在结核分枝杆菌感染巨噬细胞的过程中所起的作用.方法 制备小鼠腹腔巨噬细胞,分别将pcDNA3.1、pcDNA3.1-Rv0901质粒DNA与绿色荧光蛋白(GFP)的质粒DNA混合,以脂质体转染的方式共转染小鼠腹腔巨噬细胞.转染后72 h,分别收集细胞用流式细胞仪检测GFP的表达和细胞凋亡的发生情况,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测质粒的转染情况.收集转染72 h后的细胞培养液上清,检测细胞NO、IFN-γ的释放水平.结果 pcDNA3.1和pcDNA3.1-Rv0901转染的巨噬细胞中均检测到了GFP的表达,转染后的巨噬细胞RT-PCR能扩增出Rv0901的目的 片段,pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞的凋亡率高于空载体对照组[(56.4±2.0)% vs (19.9±1.5)%,P<0.05], pcDNA3.1-Rv0901转染巨噬细胞后细胞培养液上清中NO和IFN-γ的释放量高于空载体对照组[NO:(40.4±3.0) μmol/L vs (27.5±3.2) μmol/L, IFN-γ:(2.11±0.031) ng/mL vs (0.62±0.025) ng/mL,P均<0.05].结论 pcDNA3.1-Rv0901转染小鼠巨噬细胞后使巨噬细胞的凋亡增加,NO和IFN-γ的释放量增加,提示结核分枝杆菌Rv0901基因可能导致巨噬细胞的活性增强,与结核分枝杆菌感染巨噬细胞的机理有关.  相似文献   

10.
目的:通过转染含有绿色荧光蛋白(GFP)和PbfMSP1片段的重组质粒,建立伯氏疟原虫转染技术和表达恶性疟原虫MSP-1 19 000片段(PfMSP1-19)的转基因伯氏疟原虫.方法:构建重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.伯氏疟原虫ANKA株经培养和分离后用电转化方法转入重组转染质粒,药物筛选转化原虫后进行PCR检测,并于荧光显微镜下检测报告基因GFP的表达.结果:构建了重组转染质粒PyrFlu/PbfMSP1.荧光显微镜下观察到呈绿色荧光的伯氏疟原虫.PCR检测显示转染伯氏疟原虫存在GFP和PbfMSP1基因.结论:重组质粒已成功转染伯氏疟原虫并表达了GFP报告基因,建立了伯氏疟原虫转染技术.  相似文献   

11.
The cloning and identification of frc gene from Oxalobacter formigenes in the intestines of Chinese people were conducted. The genomic DNA of Oxalobacter formigenes was extracted. frc gene fragment was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and linked with pEGFP-C1. The recombinant plasmid was designated pEGFP-frc and was identified by restriction-enzyme digestion and sequencing. Human embryo kidney 293 cells were transfected with pEGFP-frc, then RT-PCR and Western blotting were performed to detect the expression of frc gene. The length of frc gene was found to be 1287 bp, and the homology of nucleotides and amino-acid residue with the sequence in GenBank was 95.88% and 99.07%. Bright green fluorescent light could be observed in 293 cells transfected with the pEGFP-frc. frc mRNA and fusion protein FCoAT-EGFP were detected in the cells. It is concluded that frc gene cloned from the Oxalobacter formigenes in the intestines of Chi- nese people can be expressed in eucaryotic 293 cells and keep its enzyme activity.  相似文献   

12.
小干扰RNA阻断MBD1基因对胰腺癌抑癌基因表达的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 观察阻断MBD1基因对胰腺癌抑癌基因表达的影响,探讨MBD1基因在胰腺癌发生发展中的作用.方法 设计并合成2条MBD1小干扰RNA(siRNA)序列,克隆进入pGCsi-U6/Neo/绿色荧光蛋白(GFP)构建重组质粒.重组质粒和空质粒转染人胰腺癌细胞系BxPC-3,将3组细胞(转染MBD1-siRNA重组质粒组、转染空质粒组和未转染组)接种于裸鼠,8周后取移植瘤行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MBD1基因和甲基化相关抑癌基因的表达情况.结果 成功构建MBD1-siRNA重组质粒并稳定转染胰腺癌细胞系BxPC-3,转染组中MBD1基因表达明显低于空质粒组和未转染组,而CDH1、RASSF1A、TIMP3、P14ARF、Rb等甲基化相关抑癌基因的mRNA水平转染组(179.7±8.1、155.6 4±10.0、256.7 ±15.7、199.0±7.9、210.1 q±9.4)要高于空质粒组(21.0±6.8、22.0±2.7、99.4±10.3、86.0±5.4、15.0 ±4.9)和未转染组(11.4±6.0、15.3±1.9、110.7±14.1、74.3±4.8、17.4±7.8,均P<0.05).结论 通过RNA干扰技术,可降低MBD1在胰腺癌中的表达,上调抑癌基因的转录,MBD1介导的转录抑制作用可能在胰腺癌的发生发展中起重要作用.  相似文献   

13.
毕华强  李晓武  刘辉  张曦 《重庆医学》2017,(36):5044-5046
目的 探讨过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)对肝缺血再灌注损伤的保护作用.方法 构建大鼠肝缺血再灌注损伤模型,恢复灌注后12 h,以蛋白免疫印迹(Western blot)检测PGC-1α表达情况,并检测肝脏活性氧、三磷酸腺苷(ATP)水平及血丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性变化,评估肝功能情况.另一方面,构建PGC-1α慢病毒过表达载体,并在大鼠缺血再灌注前转染,于缺血再灌注后,再以Western blot检测PGC-1α表达,肝脏活性氧、ATP水平和血肝酶活性变化,评估PGC-1α表达对肝缺血再灌注损伤的保护作用.结果 缺血再灌注肝脏PGC-1α表达较假手术组及对照组(未手术)明显降低(均P<0.05),同时肝脏活性氧族水平及ALT活性显著升高,而肝ATP产生减少(均P<0.05).PGC-1α慢病毒过表达载体转染显著上调缺血再灌注肝脏PGC-1α表达,同时肝脏活性氧族水平及ALT活性较未转染组显著降低,而肝ATP产生增加(均P<0.05).结论 PGC-1α表达有利于保护肝缺血再灌注损伤.  相似文献   

14.
目的探讨脂质体和电穿孔法在HBV X基因转染L02细胞中的差别及X基因蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响。方法构建HBV X基因重组表达质粒,通过电穿孔和脂质体法转染人正常肝细胞L02细胞,以绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)表达水平评价转染效率,流式细胞技术检测L02细胞HBV X蛋白的表达水平。RT-PCR、流式细胞技术及western-blot分析L02细胞、转染空载体以及转染HBV X基因重组表达质粒的L02细胞CⅡTA和HLA-DR的表达差别。结果采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000的转染效率为(6.4±3.5)%,显著低于电穿孔法(41.46±5.8)%,P<0.01。脂质体法转染的L02细胞HBV X蛋白表达水平为(5.1±3.9)%,显著低于电穿孔方法(37.5±4.1)%表达,P<0.01。转染了HBV X基因重组表达质粒的L02细胞检测到CⅡTA和HLA-DR mRNA和蛋白表达,而L02细胞本身及转染空载体的L02细胞未检测到CⅡTA和HLA-DR的表达。结论 HBV X基因真核表达载体pHBx-IRES2-EGFP通过电穿孔法转染L02细胞较脂质体法有明显较高的转染效率和更高的目的基因的表达,HBV X基因诱导了L02细胞中CⅡTA和HLA-DR的表达。  相似文献   

15.
目的:运用RNA干扰(RNAi)技术抑制HER2基因的表达,探讨其对胃癌SGC‐7901细胞侵袭及迁移能力的影响。方法设计、构建RNAi片段靶向抑制HER2高表达的胃癌细胞株(HER2‐RNAi组),以转染阴性对照系列(阴性对照组)及未转染的SGC‐7901细胞(空白对照组)为对照组。利用RT‐PCR和Western blot法检测各组胃癌SGC‐7901细胞中 HER2的表达情况;采用Transwell小室模型及划痕实验检测RNAi对胃癌细胞体外的侵袭和迁移能力的影响。结果 RNAi片段转染后SGC‐7901细胞的HER2 mRNA和蛋白表达水平明显下降(P<0.05);侵袭实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[(31.5±3.8)个/视野]显著低于未转染组[(103.6±4.5)个/视野];迁移实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[(63.6±5.1)个/视野]显著低于未转染组[(193.5±6.2)个/视野],各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RNAi沉默 HER2基因可以抑制胃癌SGC‐7901细胞的侵袭和迁移能力,提示RNAi基因沉默技术有可能成为进展期胃癌治疗的新方法。  相似文献   

16.
目的:探讨铬酸盐接触对工人肺通气功能的影响。方法:选择河南省某铬酸盐生产企业铬酸盐接触的95人为接触组,非铬酸盐接触的42人为对照组,于2010年冬季和2011年冬季,进行了连续2次职业健康体检,比较该人群肺通气功能的变化。结果:2010年铬酸盐接触组与对照组比较,发现肺通气功能指标用力肺活量[forcedvital capacity,FVC,(75.38±15.23)L vs.(83.99±26.52)L]、一秒用力呼气容积[(forced expiratory volume in onesecond,FEV1,(82.13±16.51)L vs.(91.24±30.03)L]、用力肺活量/一秒用力呼气容积(FEV1/FVC,112.10±13.23 vs.116.18±11.32)、呼气峰值流速[peak expiratory flow,PEF,(74.31±28.09)L vs.(78.13±28.34)L]、最大呼吸流量[maximal expiratory flow,MEF,(101.23±46.37)L/s vs.(110.02±41.40)L/s]、每分钟最大通气量[maximum ventilation volume,MVV,(90.82±16.89)L/min vs.(99.95±22.61)L/min]均显著下降(P0.05)。2011年铬酸盐接触组与对照组比较,肺通气功能指标FVC[(72.34±14.18)L vs.(81.01±20.79)L)、FEV1[(76.04±16.20)L vs.(86.71±24.53)L]、FEV1/FVC(109.10±16.18 vs.114.08±10.79)、PEF[(71.35±24.87)L/s vs.(75.36±20.67)L/s)、MEF[(96.51±30.17)L/s vs.(107.11±34.81)L/s]、MVV[(84.85±21.22)L/minvs.(96.77±22.63)L/min]亦有显著下降(P0.05),并且2011年与2010年相比较,接触组肺通气功能指标FEV1[(76.04±16.20)L vs.(82.13±16.51)L]、MEF[(96.51±30.17)L/s vs.(101.23±46.37)L/s]、MVV[(84.85±21.22)L/min vs.(90.82±16.89)L/min]均显著下降(P0.05)。由FVC、FEV1、FEV1/FVC,这3种指标对肺功能损伤进行分级和分型发现,接触组损伤程度的分布与对照组无区别,而损伤类型则以限制型为主,且未观察到随时间的变化。对铬酸盐接触工人进行工种分层分析后发现,不同工种肺功能差异有统计学意义,提示工种对肺功能损伤影响显著。结论:提示长期铬酸盐接触对肺通气功能损伤明显,并受工种影响显著。  相似文献   

17.
目的研究TRAIL基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSC)联合吉西他滨对人胰腺癌细胞的杀伤作用。方法构建重组腺病毒Ad-CMV-TRAIL,体外转染人骨髓间充质干细胞。通过观察绿色荧光的表达强度,确定最佳转染条件。MTT法检测Ad-CMV-TRAIL转染对MSC细胞生长状态的影响。Transwell小室共培养携带TRAIL的MSC和胰腺癌细胞Panc-1,联合应用吉西他滨,AnnexinⅤ-FITC双标法检测凋亡的发生。Western blot法检测Caspase凋亡相关蛋白的表达变化。结果 Ad-CMV-TRAIL以MOI=10体外感染MSC 24h,显微镜下观察80%以上的MSC表达绿色荧光,转染组细胞高表达TRAIL。Ad-CMV-TRAIL转染之后的MSC仍然可以增殖,活力无明显改变。携带TRAIL的MSC与Panc-1细胞共培养之后,可诱导部分Panc-1细胞发生凋亡,凋亡率达(13.38±3.42)%。而携带TRAIL的MSC与Panc-1细胞共培养之后可以增强吉西他滨的杀伤效果,与单独吉西他滨处理组相比差异显著[(52.10±3.41)%vs.(29.68±1.71)%,P=0.002]。Western blot检测结果显示MSC-TRAIL和吉西他滨共同处理可以诱导凋亡相关的Caspase-8和Caspase-3蛋白活化。结论 MSC可能作为TRAIL的肿瘤靶向载体在胰腺癌的治疗中发挥作用。  相似文献   

18.
目的:探讨高压氧(HBO)对兔颈内动脉和基底动脉内皮细胞 Caspase-3和 Bcl-2 mRNA 表达的影响。方法健康成年新西兰白兔24只,随机分为 HBO 组和对照组各12只。HBO 组每日持续暴露于2.2 ATA HBO 下60 min,连续3 d;对照组正常饲养,不予任何处理。实时荧光定量 PCR 法检测 Caspase-3、Bcl-2 mRNA 在2组颈内动脉和基底动脉内皮细胞的表达水平。结果HBO 可使颈内动脉内皮细胞 Caspase-3 mRNA 表达明显下降[(0.038±0.006)vs .(1.000±0.225)],Bcl-2 mRNA 表达明显增高[(1.877±0.169)vs .(1.000±0.364)];使基底动脉内皮细胞 Caspase-3 mRNA 表达明显降低[(0.419±0.091)vs .(1.000±0.175)],Bcl-2 mRNA 的表达明显升高[(1.269±0.270)vs .(1.000±0.117)],差异均有统计学意义(P <0.01)。结论HBO 对兔脑血管内皮细胞凋亡的发生有抑制作用,其机制可能与 HBO 对促凋亡基因 Caspase-3的抑制和抗凋亡基因 Bcl-2的促进作用有关。  相似文献   

19.
目的 观察丝氨酸/苏氨酸激酶31(STK31)在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤恶性生物学行为的影响.方法 收取15例骨肉瘤组织标本及瘤旁正常组织标本,利用免疫组织化学技术、实时定量PCR技术和Western blot技术检测肿瘤组织及瘤旁正常组织中STK31的表达;构建STK31敲除质粒pGenesil-STK31-shRNA,以骨肉瘤细胞系MG63细胞为靶细胞转染pGene-sil-STK31-shRNA或对照质粒pGenesil-1,通过CCK8细胞活性实验,检测STK31对MG63细胞增殖能力的影响;Tanswell实验观察STK31对骨肉瘤细胞迁移能力的影响.结果 免疫组织化学显示肿瘤组织中STK31表达明显高于瘤旁正常组织;实时定量PCR检测骨肉瘤STK31 mRNA的表达量显著高于瘤旁正常组织[(3.65±0.83)vs.(1.05±0.14),P<0.05];Western blot显示肿瘤组织中STK31蛋白表达显著高于瘤旁正常组织(P<0.05);CCK8细胞活性实验显示敲除STK31后MG63细胞增殖能力明显降低,36 h后与对照组相比[(1.71±0.17)vs.(1.39±0.11),P<0.05],72 h后与对照组相比](2.15±0.21) vs.(1.54±0.14),P<0.05],差异均有统计学意义;Tanswell实验显示转染pGenesil-STK31-shRNA后,MG63细胞迁移能力明显受到抑制[(13±4)个vs.(55±8)个,P<0.05].结论 STK31在骨肉瘤组织中的表达升高,具有增加骨肉瘤细胞生物学活性的作用.  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号