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相似文献
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1.
用电泳迁移分析及DNaseⅠ足迹实验研究了脱氧寡核苷酸与乙直病毒核衣壳启动子片段形成三链DNA中的K^+效应。K^+对三链DNA形成的抑制作用大小取决于不同的脱氧寡核苷酸。碱基的错配可使K^+的抑制作用显著弱强,提示K^+的效应强弱可能与三链结构中碱基堆积的连续程度有关。  相似文献   

2.
基因原位修复的研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
基因原位修复是一种新的基因治疗策略。用三链形成寡核苷酸(TFO)、RNA/DNA嵌合体(RDO)和单链脱氧寡核苷酸(ODN)可以对质粒和基因组DNA的特定位点进行修复,它可能通过细胞自身修复系统起作用。该治疗策略有望在基因治疗及功能基因组学研究中发挥重要作用。  相似文献   

3.
目的:探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段对人肝癌细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)法,以次黄嘌吟磷酸核糖转移酶(hypoxanthine phosphoribosyltransferase.HPRT)为内标.分析从1.6~3.2μmol/L浓度的EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段在84h时对人肝癌细胞VEGF基因mRNA表达水平的影响。结果:EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段有明显的抑制人肝癌细胞表达VEGF的作用.且这种抑制作用随着EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段浓度的增高而加强。结论:EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段能抑制人肝癌细胞VEGF基因的表达.为肝癌的抗血管治疗提供了新的途径和方法.  相似文献   

4.
 【目的】 在体外观察K^+、Na^+对富含端粒重复序列寡核苷酸二级结构的影响。【方法】在K^+、Na^+存在下,利用核磁共振光谱仪观察含端粒重复序列的核苷酸d(TTAGGGT)光谱的变化;利用非变性凝胶电泳观察d(ITAGGG)3、d(TTAGGG)4和d(TTAGGG),迁移速度的变化。【结果】在含K^+或Na^+缓冲液中,d(TTAGGGT)在化学移位δ11~12区域内出现代表有鸟嘌呤四分体形成的波峰;K^+比Na^+具有更强的稳定四链体能力。K^+、Na^+均可加速d(TFAGGG)4、d(TTAGGG),在凝胶中迁移速度。【结论】在体外K^+、Na^+可诱导含端粒重复序列的核苷酸形成鸟嘌呤四链体结构。  相似文献   

5.
【目的】 在体外观察K^+、Na^+对富含端粒重复序列寡核苷酸二级结构的影响。【方法】在K^+、Na^+存在下,利用核磁共振光谱仪观察含端粒重复序列的核苷酸d(TTAGGGT)光谱的变化;利用非变性凝胶电泳观察d(ITAGGG)3、d(TTAGGG)4和d(TTAGGG),迁移速度的变化。【结果】在含K^+或Na^+缓冲液中,d(TTAGGGT)在化学移位δ11~12区域内出现代表有鸟嘌呤四分体形成的波峰;K^+比Na^+具有更强的稳定四链体能力。K^+、Na^+均可加速d(TFAGGG)4、d(TTAGGG),在凝胶中迁移速度。【结论】在体外K^+、Na^+可诱导含端粒重复序列的核苷酸形成鸟嘌呤四链体结构。  相似文献   

6.
【目的】研究反义ClC-3寡核苷酸对Thapsigargin(TG)触发的Ca^2+运动的影响。【方法】在PC12细胞中转染反义ClC-3寡核苷酸,利用生物荧光影像分析系统测定胞浆Ca^2+技术探讨ClC-3寡核苷酸对TG触发的Ca^2+运动的影响。【结果】与对照组相比,反义寡核苷酸转染对TG触发的PC12细胞静息[Ca^2+]i的Ratio值和Ca^2+释放量的Ratio值无显著影响(P〉0.05)。但使Ca^2+内流量明显升高(P〈0.05)。Ca^2+池操纵性Ca^2+通道(store-operatedCa^2+channels,SOCC)阻断剂SK&F96365可以浓度依赖的抑制TG触发的PC12细胞Ca^2+内流,但与随义、正义寡核苷酸转染组相比,SK&F96365对反义转染组细胞Ca^2+内流的抑制作用明显增强(P〈0.05)。【结论】ClC-3蛋白参与TG触发的Ca^2+池操纵的Ca^2+内流(store-operatedCa^2+entry,SOCE),但对细胞静息钙水平及钙释放过程没有影响。  相似文献   

7.
反义寡核苷酸技术研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3  
吕艳秋  石刚刚 《广东医学》2006,27(8):1270-1272
反义寡核酸技术,是应用反义寡核苷酸类药物通过Waston-Crick碱基配对与细胞内核酸(DNA或RNA)特异结合形成杂交分子,从而在转录和翻译水平抑制特定基因表达的基因治疗技术,是一种新的药物开发方法。其机制是:①反义寡核苷酸与靶mRNA结合形成DNA-RNA杂合分子,可以激活RNase H。该酶可以切割杂合分子中的RNA链,导致靶mRNA降解。②不能激活RNase H活性的反义寡核苷酸可以通过空间位阻效应阻止核糖体结合来抑制靶mRNA的翻译:另外还可以通过封闭剪接位点有选择的促进蛋白某个可变剪接体的表达,从而纠正错误的剪接。  相似文献   

8.
目的通过构建骨桥蛋白(osteopontin,OPN)shRNA表达载体,探索卵巢癌基因治疗新途径。方法根据基因库上的OPN—mRNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilence质粒中,并对重组质粒进行酶切及序列鉴定。结果OPNsiRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论靶向OPNshRNA表达载体的构建成功为研究降低卵巢癌OPN表达的抗肿瘤效应,及与放化疗的协同效应打下了基础。  相似文献   

9.
用合成的反义脱氧寡核苷酸,包括修饰的和非修饰的,同聚的和异聚的脱氧寡核苷酸对SRS病毒感染细胞的增殖、细胞群落形成,XC融合细胞产生的抑制作用。结果表明,上述的寡聚物对病毒都有抑制活性。各种寡聚物的作用机制不同。  相似文献   

10.
胸苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)在嘧啶代谢中发挥重要作用,是DNA合成的关键酶.它能与甲基辅基将一磷酸脱氧尿苷(deoxy uridine monophosphate, dUMP)甲基化成脱氧胸苷三磷酸(deoxythymidine triphosphated,dTMP)作为嘧啶的类似物,5-FU代谢物氟脲嘧啶脱氧核苷酸(5-fluoro-2-deoxyuridylate,FdUMP)与TS及甲基辅基形成三聚物,阻断dTMP形成,  相似文献   

11.
本文对夹竹桃甙抑制Na~+、K~+-ATP酶的动力学作了探讨,并与乌本甙的作用进行了比较。结果表明:夹竹桃甙抑制Na~+、K~+-ATP酶,在Na~+、K~+浓度改变对均为非竞争性抑制,Na~+/K~+比例6:1时,为混合性抑制,而ATP对夹竹桃甙的作用几无影响。  相似文献   

12.
新一代抗消化性溃疡新药奥咪拉唑(omeprazole)在发挥强力抑制胃酸分泌的同时,国外不少文献报道可引起腹泻等消化吸收障碍现象。本研究通过在胃酸分泌抑制状态下,对空肠上皮细胞膜酶活性的测定,提出引起消化吸收障碍的机制与Na+,K+-ATP酶活性低下及二次性主动转运机能障碍所致的糖,氨基酸吸收障碍有关。  相似文献   

13.
目的 探讨血浆对Cyanea capillata水母触手提取物(TOE)溶血活性的影响和孔道形成在其溶血机制中的作用。方法 在具有相同红细胞浓度的1%稀释的全血和0.5%红细胞悬液中,检测不同浓度(100、200、400 μg/ml)的TOE产生的溶血效应,并在两套体系中分别加入20、50或100 mmol/L的K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+、La3+、NH4+等阳离子和离子螯合剂EDTA,观察其对TOE溶血活性的影响。结果 在两套溶血检测体系中,TOE均呈现出剂量依赖性的溶血效应,TOE为200 μg/ml时在红细胞悬液产生的溶血强度高于稀释的全血;Mn2+、Zn2+、La3+、Cu2+、Fe2+和EDTA均明显降低TOE溶血活性(P<0.05),其中以Zn2+的抑制作用最强,而K+、Ca2+、Mg2+、NH4+可不同程度地增强其溶血活性(P<0.05)。结论 血浆对TOE的溶血作用有一定的保护作用,而孔道形成可能在TOE的溶血机制中具有重要作用。  相似文献   

14.
目的 探讨心钠素(ANP)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉平滑肌细胞膜(ASMC)Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α,亚单位、Ca+-ATP)酶亚型1(PMCA1)mRNA表达的影响.方法 对SHR大鼠,予不同浓度ANP和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)干预,通过放射免疫、生化酶学和逆转录-聚合酶链反应等方法,检测ASMC的ANP、AngⅡ含量,ATP酶活性及其mRNA表达变化并设WKY大鼠为对照.结果 SHR大鼠ANP含量比WKY大鼠下降[(7.3±2.4)pg·10-6比(19.3±3.3) Pg·10-6,P<0.01],Ang Ⅱ含量增加[(57±4)pg·10-6比(44±4) pg·10-6,P<0.01],Na+,K+-ATP酶、Ca2+-A11)酶活性及Na+,K+-ATP酶α1亚单位、PMCA1 mRNA表达均显著降低[Na+,K+-ATP:(4.3±0.8) μmol·h-1·mg-1比(5.3±1.0) μmol·h-1·mg-1,Ca2+-ATP酶:(3.2±0.7)μmol·h-1·mg-1比(4.5±0.7) μmol·h-1·mg-1,α1亚单位:0.524±0.025比0.704±0.116,PMCA1:0.193±0.030比0.547±0.045](P<0.05~P<0.01).ANP可增加SHR大鼠Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α1,亚单位及PMCA1 mRNA表达(均P<0.01),Ang Ⅱ则抑制Ca2+-ATP酶活性和PMCA1 mRNA表达(P<0.05~P<0.01),仅1×10-7 mol/L AngⅡ抑制Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性及其mRNA表达的效应.ANP也能拮抗AngⅡ对WKY大鼠Ca2+-ATP酶活性及PMCA1mRNA表达的效应,对Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达无影响(P>0.05).结论 高血压大鼠ASMC两种ATP酶活性和基因表达下降与局部ANP和AngⅡ分泌异常有关,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性和基因表达的效应.  相似文献   

15.
本文报道神经节苷脂单组分GM_2、GM_3、GD_3及脑苷脂对猪肾Na+、K~+-ATP酶活性的影响。实验结果表明,GM_3对Na~+、K~+-ATP酶有明显抑制作用。结构上比GM_3多一个唾液酸的GD_3和多一个乙酰糖基的GM_2均无抑制怍用。即使去除唾液酸的CDH,或是在此基础上再去除一个半乳糖基的脑苷脂(CMH)及唾液酸,对该酶也无抑制作用。提示GM_3结构完整的重要性。动力学研究表明,在不同Na~+、K+浓度对,GM_3对Na~+、K~+-ATP酶的抑制作用,均呈非竞争性抑制。  相似文献   

16.
报道在离体条件下各种单体柴胡皂甙抑制Na+、K+-ATP酶活性构效关系。结果表明,各种柴胡皂甙抑制Na+、K+-ATP酶活性作用强度依次为:b2>d>b1>b4>a>b3>e>c。其中柴胡皂甙结构中的C23-OH,C16-OH以及C11和C13的共轭双烯可能对其抑制活性起重要作用。证明,柴胡皂甙d对Na+、K+-ATP酶的抑制为非竟争性抑制。  相似文献   

17.
目的探讨冠状动脉粥样硬化性心脏病(CAHD)患者血电解质紊乱的特点及其与CAHD危险因素的相关性。方法 474例疑似CAHD患者根据冠状动脉造影结果分为CAHD组278例和对照组196例(无冠状动脉粥样硬化改变),对比2组患者血Na+、K+、Ca2+和Mg2+水平,分析CAHD组患者血Na+、K+、Ca2+和Mg2+水平与CAHD易患因素的相关性。结果 CAHD组患者血Na+和Ca2+水平显著高于对照组(P<0.01),血K+和Mg2+水平显著低于对照组(P<0.01)。CAHD组患者CAHD易患因素发生率显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。CAHD患者的血Na+和Ca2+水平与高血压呈正相关(P<0.05),血K+和Mg2+水平与高血压呈负相关(P<0.05);CAHD患者的血Na+、K+和Ca2+水平与糖尿病呈负相关(P<0.05),血Mg2+水平与糖尿病呈正相关(P<0.05);血Na+、K+和Ca2+水平与血脂异常呈正相关(P<0.05),血Mg2+水平与血脂异常呈负相关(P<0.05);血Na+、K+、Ca2+和Mg2+水平与高血压并发糖尿病均呈正相关(P<0.05);血Na+、K+和Ca2+水平与高血压并发血脂异常呈正相关(P<0.05),血Mg2+水平与高血压并发血脂异常呈负相关(P<0.05);血Na+、K+、Ca2+和Mg2+水平与糖尿病并发血脂异常均呈正相关(P<0.05);血Na+、K+、Ca2+和Mg2+水平与高血压并发糖尿病和血脂异常呈正相关(P<0.01)。结论 CAHD患者存在电解质紊乱,CAHD患者电解质紊乱与CAHD易患因素有相关性。  相似文献   

18.
目的:探讨丹参多酚酸对大鼠心肌缺血再灌注过程中线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的影响。方法:采用健康Wistar大鼠(n=40)建立Langendorff离体心脏灌注模型,并分为4组。对照组用Krebs液持续灌注120 min;缺血再灌注组平衡30 min后全心缺血30 min,再灌注60 min;丹参多酚酸预处理组平衡5 min后加入丹参多酚酸使其在灌流液中终浓度为14μmol/L,持续灌注25 min后全心缺血30 min,再灌注60 min;丹参多酚酸后处理组平衡30 min后全心缺血30 min,加入丹参多酚酸使其在灌流液中终浓度为14μmol/L,再灌注60 min。TTC染色观察心肌梗死面积,并用心肌梗死面积、乳酸脱氢酶(LDH)活性和心脏血流动力学(包括心率、主动脉流量、冠状动脉流量和心输出量)的变化评估大鼠心肌的损伤程度。利用差速离心法提取线粒体,并通过紫外分光光度法测定心肌线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性。结果:丹参多酚酸预处理组的心肌梗死面积和LDH活性均显著低于缺血再灌注组([24.47±2.14)%比(34.30±2.31)%、(81.46±13.39)U/g比(142.6±6.46)U/g,均P<0.05],缺血再灌注组与后处理组无明显差异。丹参多酚酸对缺血再灌注心肌的血液动力学没有明显作用,只是冠脉流量有较小幅度的增加。丹参多酚酸预处理组线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性显著高于缺血再灌注组([6.12±0.42)U/mg比(4.29±0.28)U/mg、(3.42±0.16)U/mg比(2.62±0.96)U/mg,均P<0.05],而与对照组无明显差异。丹参多酚酸后处理组线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性与缺血再灌注组无统计学差异。结论:丹参多酚酸可以维持心肌线粒体Na+,K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶的活性,通过降低缺血再灌注对心肌线粒体的损伤保护心肌。  相似文献   

19.

目的  探讨胃癌(GC)患者术前血液电解质离子钾、钠、氯、镁、磷的相关性,以及与患者临床资料的相关性和对生存预后的影响。方法  收集该院320例大样本GC手术患者的临床资料,术前检测血液电解质水平,以及进行术后随访(最长随访时间为10年7个月)。统计学分析GC患者术前血液电解质水平的相关性、与侵袭转移的关系以及对患者生存预后的影响。结果  ①电解质离子与GC患者临床资料间的相关性:钾离子水平与癌细胞分化程度相关(P =0.022),氯离子水平与年龄相关(P =0.042)。②GC患者电解质离子水平之间存在相关性:如氯离子与钠离子相关(r =0.610,P =0.000),氯离子与钾离子相关(r =0.206,P =0.000),氯离子与镁离子相关(r =0.115,P =0.047)。③GC患者电解质水平对生存预后的影响:按正常范围分组,钾离子水平在3.5~5.3 mmol/L时患者生存预后最好,>5.3 mmol/L时预后最差(P =0.005);按中位数分组,磷离子水平≥1.04 mmol/L组预后明显好于≤1.04 mmol/L组(P =0.008)。结论  钾离子水平与GC细胞分化程度相关,并影响患者生存预后。磷离子水平高低也影响患者生存预后。结合临床和影像诊断,GC患者术前检测血液电解质水平作为潜在的预警信号,可以对生存预后进行评估,将有助于制定最佳手术方案、术后放射和化学药物治疗策略,从而尽可能地提高治疗质量及延长生存时间。

  相似文献   

20.
用酶解法和H2O2分解法分别测定28例风心瓣膜病变患者红细胞膜钠泵(Na+、K+-ATP酶)、钙泵(Ca2+、Mg2+-ATP酶)活性和膜过氧化氢酶(CAT)活性,并用硫代巴比妥酸比色法测定患者红细胞膜脂质过氧化物(LPO)含量。患者红细胞膜Na+、K+-ATP酶活性和Ca2+、Mg2+-ATP酶活性分别显著低于正常人34.75%(P<0.01)和26.77%(P<0.01);CAT活性显著低于正常人20.07%(P<0.01);而患者LPO含量却显著高于正常人97.50%(P<0.01)。结果提示风心病患者瓣膜病变与质膜钠、钙泵活性变化以及膜脂质过氧化作用有关。  相似文献   

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