胰岛素样生长因子-1对血管异位钙化作用的研究

目的：胰岛素样生长因子（IGF－1）对动脉粥样硬化的形成和发展及骨骼组织的矿化均起重要作用，鉴于动脉钙经广泛存在于动脉粥样硬化病变中而且与骨骼矿化过程的相似性，本研究试图研究IGF－1在动脉钙化中的作用。方法：体外培养牛主动脉平滑肌细胞，建立血管钙化模型，在培养液中加入不同浓度的IGF－1，观察细胞钙沉积变化，以及与之密切相关的细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌情况。结果：10^-9mol／L的IGF－1培养10d后，普通对照培养细胞的钙沉积无明显变化，钙化培养细胞的钙沉积增加了11．82％（P＞0．05），在此过程中细胞内碱性磷酸酶活性增加了168．7％，骨钙素分泌增加了58．3％；增加IGF－1的浓度至10^-8mol／L和10^-7mol/L，细胞的钙盐沉积进一步增加，分别提高了22．74％（P＜0．05）和40．7％（P＜0．01）。结论：IGF－1可呈剂量依赖性的促进钙化血管细胞的钙质沉积，其作用可能与促进钙化血管合成碱性磷酶及促进细胞向成骨细胞转化有关。     

胰岛素样生长因子-1对成骨细胞增殖影响的实验研究

目的：研究不同浓度胰岛素样生长因子－1（IGF－1）对兔成骨细胞增殖的影响。方法：采用组织块细胞培养技术进行兔成骨细胞分离培养,取第2代成骨细胞分别与0．1ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,20ng/mlIGF-1培养,培养24、36小时后行四唑盐比色法检测细胞增殖情况。结果：IGF－1与成骨细胞培养24、36小时,经MTT法检测,不同浓度IGF－1与对照组比较,有显著性差异（P＜0．01）。IGF－1浓度为0．1、1、10ng/ml,各组之间相比存在显著性差异（P＜0．05）,结论：IGF－1对成骨细胞有明显促进增殖作用,在0．1－10ng/ml范围,存在浓度的依赖性。     

表皮生长因子对人绒毛膜促性腺激素分泌的影响及其受体在滋养层细胞中的表达

目的：探讨表皮生长因子（EGF）,表皮生长因子受体（EGFR）在胚胎发育过程中的作用。方法：应用免疫组织化学的方法对滋养层细胞EGFR表达进行定位,定量分析,同时观察不同浓度的EGF对体外培养绒毛组织分泌人绒毛膜促性腺激素（HCG）的影响。结果：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,其中孕早期较妊娠中期,晚期表达强,平均A值高,而在孕早期不同阶段EGFR的表达也有差异,妊娠4－6周,7－9周滋养层细胞表达低于10－12周,EGF具有促进体外培养的绒毛组织分泌HCG的功能,且随浓度增加而分泌功能增强,当EGF浓度为100ng／ml时,HCG的分泌量达到峰值,EGF浓度达到200ng/ml时,HCG的分泌量不再增加。结论：EGFR在不同孕期滋养层细胞表达的强度不同,与妊娠期间孕妇体内HCG的浓度变化具有一致性;EGF在一定范围内具有促进滋养细胞分泌HCG的功能,由于EGFR在滋养层细胞上表达的数量是一定的,当EGF饱和了EGFR所有结合位点HCG分泌不再增加,所以EGF,EGFR可能是通过影响滋养层细胞HCG的分泌来调节胚胎的发育。     

胰岛素样生长因子在人胎盘绒毛滋养层细胞的基因表达

目的探讨胰岛素样生长因子系统（IGFs）在体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞中的基因表达及其作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测58例体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞中IGF—ⅠmRNA、IGF—ⅡmRNA、IGF—IRmRNA、IGF-ⅡRmRNA、IGFBP-1mRNA、IGFBP-2mRNA、IGFBP-3mRNA、IGFBP-4mRNA、IGFBP-5mRNA、IGFBP-6mRNA等10种胰岛素样生长因子的基因表达。结果58例体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞均有IGF—ⅠmRNA、IGF—ⅡmRNA的基因表达；56例存在IGF—ⅠRmRNA、IGF—ⅡmRNA、IGFBP-3mRNA的基因表达；2例同时检测出上述10种基因。结论IGFs可能在早期细胞滋养层的侵入、增殖分化、胎盘形成和胚胎生长发育过程中以自分泌或旁分泌方式发挥重要的调节作用。     

胰岛素样生长因子-II对卵巢癌细胞AO、3AO中MMP-2表达的调节

目的:探讨胰岛素样生长因子鄄II(insulin鄄likegrowthfactor鄄II,IGF鄄II)对卵巢癌细胞AO、3AO基质金属蛋白酶鄄2(matrixmetalloproteinase鄄2,MMP鄄2)表达的诱导调节。方法:以IGF鄄II处理卵巢癌细胞AO、3AO,用明胶酶谱法和RT鄄PCR法检测MMP鄄2蛋白的分泌以及基因表达。结果:IGF鄄II能双相调节浆液性囊腺癌细胞AO中MMP鄄2的分泌,低浓度(10ng/ml)时能上调MMP鄄2的分泌,随着IGF鄄II的浓度增加该作用增强;但高浓度时(100ng/ml),诱导作用显著下降;IGF鄄II不增加粘液性囊腺癌细胞3AO培养上清中MMP鄄2蛋白的分泌。此外,IGF鄄II不影响两种卵巢癌细胞中MMP鄄2的基因表达。结论:IGF鄄II在一定程度上能刺激上皮性卵巢癌MMP鄄2蛋白表达,可能在卵巢癌的侵袭转移方面起重要作用。     

bFGF对人牙周膜细胞增殖的影响

目的 检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养人牙周膜细胞的增殖效应,探讨bFGF参与正畸牙移动的作用机制。方法 体外培养人牙周膜细胞,将第5代细胞按细胞数约为4×10<'3>/孔接种在96孔培养板的50孔中,每5孔为一组,共分为10组。根据每组bFGF浓度不同,分为无bFGF组、0.5 ng/mL bFGF组、1.0 ng/mL bFGF组、2.0 ng/mL bFGF组、4.0 ng/mL bFGF组、8.0 ng/mL bFGF组、16.0 ng/mL bFGF组、32.0 ng/mL bFGF组、64.0 ng/mL bFGF组及128.0 ng/mL bFGF组。显微镜下观察各组细胞均进入对数生长期时,用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法染色,在酶联免疫检测仪上测出各孔吸光度(opficM density,OD)值,并计算各组OD均值。结果 与对照组OD均值比较：实验组OD值随bFGF浓度(0.5～16.0 ng/mL)的增加先逐渐增加(P<0.05,0.01),达到峰值(16.0 ng/mL)后,又随bFGF浓度(32.0～128.0 ng/mL)的增加而逐渐减少(P<0.05,0.01)。结论 bFGF可能参与了正畸牙移动中牙周组织的改建,bFGF较低浓度时有促进人牙周膜细胞增殖的作用,而较高浓度时有抑制人牙周膜细胞增殖的作用。     

bFGF对牙周膜细胞合成纤维连接蛋白的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜细胞(PDLF)合成纤维连接蛋白(Fn)的影响. 方法 取体外培养的PDLF,按加入的bFGF终浓度分为0 ng/ml(对照),1 ng/ml,10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml bFGF五组,继续培养72 h后应用免疫细胞化学方法 观察细胞胞质中Fn的合成情况. 结果 与对照组相比,PDLF中Fn的表达在1-100 ng/ml bFGF都明显增多,差异均有统计学意义(P<0.05),其中在10-50 ng/ml bFGF时增加水平最为显著,达到最佳效果. 结论 bFGF有促进PDLC合成纤维连接蛋白的作用.     

雌激素和胰岛素样生长因子-I对子宫内膜癌孕激素受体亚型的调控研究

目的：通过研究雌激素、胰岛素样生长因子（IGF）－I对子宫内膜癌孕激素受体亚型A和B的调控作用,探讨孕激素对子宫内膜癌的作用机制及影响因素,为临床孕激素治疗子宫内膜癌提供理论依据。方法：对体外培养子宫内膜癌细胞系HEC－IB和乳腺癌细胞系MCF－76,分别给予雌二醇（E2）10nmol/L和IGF－I 20ng/ml作用3d,用Western印迹方法观察两种孕激素受体亚型的蛋白质含量变化;从细胞中提取RNA,通过逆转录－多聚酶链反应（RT－PCR）,观察孕激素受体B亚型的mRNA水平的调控。结果：（1）Western印迹试验显示,HEC－IB细胞给予E2作用72h后,人孕激素受体（hPR)-A、hPR-B光密度值用药前后差异无显著意义,P．0．716,P＝0．391。给予IGF－I作用72h,hPR-A、hPR-B明显下调（P＝0．008,P＝0．002）。（2）RT－PCR显示,HEC－IB细胞中hPRB mRNA未见表达,给予10nmol/L雌激素刺激72h后,hPRB mRNA阳性,呈上调作用;经IGF－I 20ng/ml作用后,hPRB mRNA阳性,IGF－I对其有上调作用,但IGF－I的上调作用弱于雌激素。MCF－7细胞中hPRB mRNA未见表达,经10nmol/L雌激素刺激72h后,hPRB mRNA阳性,呈上调作用,但雌激素对hPRB mRNA的上调作用在MCF－7细胞中弱于HEC－IB细胞。结论：（1）E2和IGF－I对hPR亚型均有调控作用,且具有不同组织细胞特异性。（2）E2和IGF－I在基因水平或转录水平使hPRB mRNA上调,但在转录后可能存在某种抑制因素使hPRB蛋白质产生受到抑制。     

IGF—1在成骨样细胞增殖中的作用及与钾离子通道的关系

目的：研究胰岛素样生长因子－1（IGF－1）促大鼠成骨样肉瘤细胞（UMR106）增殖作用及钾离子通道活动的关系。方法：采用磺基罗丹明（SRB）染色法观察细胞增殖并用膜片钳技术记录细胞膜钾离子通道电流的变化。同时用3H－TdR掺入测定DNA合成的改变。结果：IGF－1可以明显地促进UMR106细胞的增殖，且使3H－TdR掺入率增加93．57％，在含有生长因子IGF－1（10^-8M)的培养液中培养12h后，钾通道电流比对照有明显增加，而且用钾通道阻断剂后，3H－TdR掺入率下降。结论：IGF－1可促进大鼠成骨样肉瘤的DNA合成和细胞增殖，且细胞膜钾通道的活动与此促增殖活动密切相关。     

激活素A和卵泡抑素对冻融人胎儿卵巢雌二醇分泌的影响

目的：研究组织培养条件下冻融人胎儿卵巢雌二醇（E2）的分泌及激活素A（Act A）和卵泡抑素（FS）对E2分泌的影响。方法：冻融人胎儿卵巢组织体外培养，分别加入基础培养液（对照组，即MEM组）、基础培养液＋100ng／ml Act A（Act A组）、基础培养液＋100ng／ml FS（FS组）和基础培养液＋100ng／ml Act A＋100ng／ml FS（A＋F组），每组4块组织，培养8d。收集培养2d、4d、6d、8d各组培养液，测定比较其E2值。结果：培养4d、6d、8d卵巢组织分泌的E2值均高于2d的E2值（均P〈0．05），随培养时间延长，E2分泌量先增加后减少，在培养后6d可达较高分泌水平；Act A组E2分泌量明显高于对照组、FS组和A＋F组（均P〈0．01）。结论：冻融人胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2，Act A能促进体外培养胎儿卵巢E2的分泌，其作用可能受到FS的调节。     

正畸力对炎症牙周组织中胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的：：对比分析 IGF-Ⅰ对炎症和健康正畸牙移动牙周组织改建的影响。方法：72只 wistar大鼠随机分为炎症牙移动和健康牙移动1、3、7、14、21 d 组及对照组,近中移动各组大鼠上颌第一磨牙,分别测量各组大鼠牙齿移动距离并进行 IGF-Ⅰ免疫组化染色分析。结果：在相同的牙移动时间内,炎症组大鼠牙移动距离大于健康组;健康牙移动组的 IGF-Ⅰ含量高于炎症牙移动组,压力侧和张力侧的 IGF-Ⅰ含量都与牙周组织状态和加力时间相关。结论：由于慢性炎症环境的存在,炎症牙移动组 IGF-Ⅰ表达水平明显降低。为了获得快速有效的正畸治疗效果,可通过局部应用 IGF-Ⅰ调节牙周细胞活性,加速牙周组织改建。     

Effects of Shuanghuangbu on the total protein content and ultrastructure in cultured human periodontal ligament cells

Background Successful periodontal regeneration depends on the migration, proliferation and differentiation of periodontal ligament cells in periodontal defects. The total protein content and the ultrastructure demonstrate the metabolizability and activity of periodontal ligament cells. This study wasconducted to observe the effects of Shuanghuangbu, a mixture of medicinal herbs, on the total protein content and the ultrastructure of human periodontal ligament cells.Methods Periodontal ligament cells were grown to confluence and then cultured in Dulbecco‘ s modified eagle medium (DMEM) supplemented with Shuanghuangbu over the concentration range of 0 to 1000 μg/ml. The total protein content in cultured cells was determined by using Coommasie brilliant blue technique. Periodontal ligament cells were incubated in 0 and 100 μg/ml Shuanghuangbu decoction for 5 days, then observed through transmission electron microscope.Results The total protein content of human periodontal ligament cells increased in each experiment group added 10 -1000 μg/ml Shuanghuangbu respectively, and the effect of 100 μg/ml was excellent. Under the transmission electron microscope, there were more rough endoplasmic reticulumsand mitochodrias in the experiment group than those in the control group.Conclusion Shuanghuangbu stimulates the protein synthesis of human periodontal ligament cells and improves human periodontal ligament cells‘ metabolizability and activity.     

性早熟儿童IGF—Ⅰ和IGFBP—3水平的观察

目的：通过对胰岛素生长因子－Ⅰ（IGF－Ⅰ）、胰岛素生长因子结合蛋白－3（IGFBP－3）、生长激素（GH）及雌二醇（E2）的检测,观察性早熟儿童的生长发育轴系发育情况及与性激素的关系。方法：分别对42例真性性早熟、14例正常儿童用放射免疫及免疫放射法检测GH、IGF－Ⅰ、IGFBP－3及E2水平。结果：真性性早熟组IGF-Ⅰ、IGFBP－3及E2水平与对照组7比较差异均有非常显性意义（P＜0.01）;GH水平高于对照组,但无统计学意义（P＞0.05）。将观察组IGF－Ⅰ、IGFBP－3、GH与E2值行相关分析,结果E2与IGF－Ⅰ及IGFBP-3均有非常显的相关性（P＜0.01）,E2与GH无相关关系（P＞0.05）,IGF-Ⅰ与IGFBP－3比较有显的相关性（P＜0.05）。结论：性早熟儿童生长激素介质IGF－Ⅰ、IGFBP－3水平显升高,IGF－Ⅰ、IGFBP－3的升高与E2水平有密切的关系。     

IL-6对牙周膜成纤维细胞分泌肌动蛋白的影响

目的探讨白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLFs)合成肌动蛋白(actin)的影响。方法取体外培养的第5代HPLFs,分别用0 ng/ml(对照),0.1,1,10,100 ng/ml浓度的IL-6干扰48 h后应用免疫细胞化学方法观察细胞胞质中actin的合成情况。结果与对照组相比,HPLFs中actin的表达在1-100ng/ml IL-6干预后都明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-6有抑制HPLFs合成肌动蛋白的作用。     

在全凭静脉麻醉下后腹腔镜手术中应用脑电双频指数调控的意义

目的探讨在全凭静脉麻醉下后腹腔镜手术中应用脑电双频指数(BIS)调控对麻醉质量的影响。方法择期行后腹腔镜手术患者60例,随机分为BIS调控下丙泊酚持续泵入组(A组)和丙泊酚持续泵入组(B组),比较两组术中血流动力学、麻醉药用量、拔管时间、定向力恢复时间及术中知晓率。测定两组各时点血清白细胞介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)的浓度。结果两组间术中血流动力学无统计学差异,两组间IL-6和CRP的浓度无统计学差异。A组丙泊酚用量明显低于B组(P<0.05),A组拔管时间、定向力恢复时间短于B组(P<0.05),两组均无术中知晓发生。结论在后腹腔镜手术中应用BIS监测可维持患者血流动力学稳定,减少麻醉药用量并缩短拔管时间及定向力恢复时间,提高麻醉质量,对手术的应激反应无影响。     

大蒜素对内毒素作用下hPDLCs胶原代谢的影响

目的：研究大蒜素对内毒素作用下体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLCs）Ⅰ型胶原合成及胶原分泌的影响,探讨大蒜素在牙周疾病治疗中的作用。方法：建立hPDLCs有限细胞系,用大蒜素作用于第5代hPDLCs,培养液中加入牙龈卟啉单胞菌脂多糖（LPS）,采用细胞免疫荧光化学方法检测细胞内Ⅰ型胶原含量,化学比色法测定细胞培养上清液中羟脯氨酸含量。结果：大蒜素可显著降低LPS对hPDLCsⅠ型胶原合成及胶原分泌的抑制作用（P〈0.05）,且具有剂量依赖效应。结论：大蒜素可降低LPS对hPDLCsⅠ型胶原合成及胶原分泌的抑制作用,在牙周疾病治疗中具有一定意义。     

实时定量反转录-聚合酶链反应检测机械力对人牙周膜细胞骨钙素表达的影响

目的观察周期性牵张力作用下人牙周膜细胞(HPDLCs)成骨分化关键基因骨钙素的表达变化,以明确周期性牵张力对HPDLCs成骨分化的诱导作用。方法利用自行研制的多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的HPDLCs施加12%形变率、0.1Hz周期性牵张力1,2,3,5d,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨分化基因骨钙素(BGLAP)表达的时序性变化。结果体外培养HPDLCs骨钙素基因表达量极低,加力1、2、3、5d后骨钙素基因表达依次升高,并且在加力5d时表达量明显增高为对照组的71.6倍。结论周期性牵张力可以诱导HPDLCs向成骨方向分化,骨钙素在机械力诱导成骨分化的后期发挥作用。     

壳聚糖胶原支架复合胰岛素样生长因子-1在牙周组织工程中的应用

目的:观察复合胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的壳聚糖胶原支架对体外培养的人牙周韧带细胞(PDLC)的影响,以探讨复合IGF-1的壳聚糖胶原支架在人PDLC增殖中的作用。方法:将体外培养PDLC接种于复合IGF-1的壳聚糖胶原支架上,通过MTT法测定对细胞增殖的影响,同时通过半定量PCR检测细胞mRNA合成变化。结果:PDLC在两种不同支架上的增殖及mRNA合成情况有显著性差异(P<0.5)。结论:该复合支架可以作为IGF-1的载体;复合在支架上的IGF-1对PDLC的粘附与增殖及细胞外基质的合成均有较好地促进作用。