从体外培养的人角朊细胞中提取蛋白

０引言我们和其他作者先前的研究表明，在正常人血清中存在着抗角蛋白自身抗体．目前尚不清楚该抗体群的功能作用．但已有实验提示，血清抗角蛋白抗体量或质的变化与某些病变相关．体外实验证明，纯化的抗角蛋白自身抗体可以影响皮肤角航细胞的代谢活动和生长特性．为了深入开展对抗角蛋白自身抗体的实验研究，我们从培养的人角肮细胞中提取纯化了人角蛋白，报告如下．回方法１．１角航细胞取自包皮环切术切下的包皮组织，按以前报道的方法进行无血清培养‘”，使细胞融合生长，覆盖培养瓶壁．１．２抗角蛋白单克隆抗体共４株，即ＤＨＤ，Ｉ…     

在空气—液体交界面培养角朊细胞

为使体外培养的角朊细胞在近似体内状况下生长,本实验将人体表皮角朊细胞置于塑料培养环内的胶原基质上进行空气—液体交界面培养。培养14d后,将培养物冰冻切片,行普通细胞染色和免疫细胞化学检查,结果显示,有多层细胞形成,且在上层细胞中出现filaggrin。提示此培养技术可用于研究人体表皮细胞的生长和分化。     

hEGF cDNA导入培养的人角朊细胞及其表达

目的 观察外源性人表皮细胞生长因子（ｈＥＧＦ）基因导入正常导入正常角朊细胞后,能否表达及分泌ｈＥＧＦ;为深入探讨ｈＥＧＦ的作用机制及临床应用奠定物质基础。方法 脂质体包埋ｈＥＧＦ－ｃＤＮＡ的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｈＥＧＦ转染人角朊细胞,经Ｇ４１８筛选,克隆,扩大及传代培养转基因的角朊细胞,特异性ｎｃｏ探针原位杂交显示转基因细胞内的质粒载体,ｈＥＧＦ抗体免疫细胞化学法观察转基因细胞内ｈＥＧＦ的表     

抗角蛋白自身抗体对白细胞介素1β诱发角朊细胞增殖的影响

目的：研究抗角蛋白自身抗体（ＡＫ ａｕｔｏ Ａｂ）对白细胞介素１β（ＩＬ－１β）诱发角朊细胞增殖的影响。方法：采用角朊细胞无血清培养方法，以＾３Ｈ－ＴｄＲ标示角朊细胞增殖程度，检测ＩＬ－１β刺激角朊细胞及ＡＫａｕｔｏ Ａｂ处理角朊细胞的增殖代谢。结果：１６００Ｕ／ｍｌ及以上浓度ＩＬ－１β对角朊细胞增殖作用有明显促进作用（Ｐ〈０．０１），正常血清浓度ＡＫ ａｕｔｏ Ａｂ对ＩＬ－１β引起的角朊细胞增殖     

人角朊细胞培养的实验研究

目的 :探讨实验室条件下人体角朊细胞的培养技术 ,观察角朊细胞培养生长过程。方法 :采用改良的有血清培养技术进行人体角朊细胞的培养。结果 :培养的角朊细胞 5天融合达 70 % ,9天达 90 % ,1 1天左右完全融合 ,细胞分裂指数高峰在 9天左右 ,可达 1 1 %。结论 :利用改良的有血清培养技术体外培养角朊细胞生长好 ,9～ 1 1天即可形成膜片 ,可达到移植条件 ,对临床上救治大面积烧伤病人具有重要意义     

表皮细胞生长因子对培养表皮角朊细胞DNA合成的影响

目的 :选择培养表皮角朊细胞时添加表皮细胞生长因子 ( EGF)及小牛血清的最适浓度。方法 :添加不同浓度的 EGF及小牛血清 ,测定 3 H- Td R掺入量。结果 :添加 2 0μg· L-1EGF时3 H- Td R掺入量明显高于添加 5和 1 0 μg·L-1EGF时。结论 :2 0 μg·L-1EGF、2 0 %小牛血清为培养表皮角朊细胞的最适浓度。     

表皮角朊细胞的分离、培养和鉴定

表皮角朊细胞的分离、培养和鉴定马刚１，２陈世义２刘晋宇１敖艳霞＊张林２（１应用基础医学研究所２第一临床学院皮肤科）关键词Ｄｉｓｐａｓｅ角朊细胞免疫组织化学中图号Ｒ３２９．３４表皮角朊细胞培养技术正越来越广泛地应用于医学领域的科研工作中〔１〕。我们已开...     

培养的角朊细胞原位固定石蜡包埋技术

培养的角朊细胞原位固定石蜡包埋技术Ｉｎｓｉｔｕｆｉｘａｔｉｏｎａｎｄｐａｒａｆｆｉｎｅｍｂｅｄｄｉｎｇｏｆｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓｉｎｃｅｌｌｃｕｌｔｕｒｅ￥／／钟白玉，聂祝湘，刘荣卿（重庆第三军医大学附属西南医院皮肤科）重庆，６３００３８近年来，...     

人皮肤角质形成细胞的分离与原代无血清培养

目的 :建立一种体外人皮肤角质形成细胞分离与原代培养的方法。方法 :采用两步消化法对皮肤进行消化 ,获取角质形成细胞进行体外无血清培养基培养 ,进行细胞形态学观察、免疫组织化学、透射电镜鉴定及生长曲线的绘制与分析。结果 :该方法可获取较多高纯度的角质形成细胞 ,且在体外可快速稳定增殖。结论 :两步消化法和体外无血清培养是一种理想的皮肤角质形成细胞分离培养的方法     

人角质形成细胞体外扩增与生物学特征变化

目的 研究人角质形成细胞体外扩增过程中生物学特征的变化,观察其角蛋白19(K19)mRNA表达及克隆形成率与扩增受限的关系。方法 取2-3岁健康儿童包皮20例,通过2.4 U/mL dispase和0.05％胰酶(tripsin)分离,获得角质形成细胞体外培养。细胞计数仪计数描绘生长曲线。光镜观察细胞体外扩增过程中形态学改变,同时计数克隆形成率。RT-PCR检测角质形成细胞K19和Involucrin的mRNA表达情况。结果 儿童包皮角质形成细胞体外平均最大扩增能力为(700±37)倍。细胞平均获得率为(1.64±0.297)×106/cm2包皮。角质形成细胞原代(P0)、第2代(P2)、第4代(P4)、第5代(P5)克隆形成率分别为:(45±4)％,(37±4)％,(28±3)％,(9±2)％,第6代(P6)克隆形成率消失。RT-PCR检测发现P0、P2、P4、P5有K19 mRNA表达,P6未见表达;Involucrin各代均可见表达。结论 人角质形成细胞体外扩增能力随传代逐渐降低,扩增受限与角质形成细胞中K19 mRNA表达及克隆形成率消失相关。     

人角质形成细胞体外扩增与生物学特征变化

目的研究人角质形成细胞体外扩增过程中生物学特征的变化,观察其角蛋白19(K19)mRNA表达及克隆形成率与扩增受限的关系.方法取2～3岁健康儿童包皮20例,通过2.4 U/mL dispase和0.05%胰酶(tripsin)分离,获得角质形成细胞体外培养.细胞计数仪计数描绘生长曲线.光镜观察细胞体外扩增过程中形态学改变,同时计数克隆形成率.RT-PCR检测角质形成细胞K19和Involucrin的mRNA表达情况.结果儿童包皮角质形成细胞体外平均最大扩增能力为(700±37)倍.细胞平均获得率为(1.64±0.297)×106/cm2包皮.角质形成细胞原代(P0)、第2代(P2)、第4代(P4)、第5代(P5)克隆形成率分别为:(45±4)%,(37±4)%,(28±3)%,(9±2)%,第6代(P6)克隆形成率消失.RT-PCR检测发现P0、P2、P4、P5有K19 mRNA 表达,P6未见表达;Involucrin各代均可见表达.结论人角质形成细胞体外扩增能力随传代逐渐降低,扩增受限与角质形成细胞中K19 mRNA表达及克隆形成率消失相关.     

正常人脑Glob-N的分离及其结构的初步分析

目的 探索一种新的脑胶质瘤生长抑制因子Glob-N的分离鉴定方法。方法 人脑中性鞘糖脂经过加压柱层析,梯度甲醇/氯仿溶液洗脱。对所得到的产物行1H-NMR和13C-NMR测定。结果 含甲醇60%的甲醇/氯仿溶液的洗脱物为纯化Glob-N,层析展开后呈单一清晰条带,Rf值0.45。初步结构分析表明人脑Glob-N含N-乙酰半乳糖,共3个糖基,其神经酰胺部分共有33个碳原子。结论 柱层析分离中性鞘糖脂单一组分效果好,纯度高;人脑Glob结构中含3个糖基。     

Purification and identification of natural antikeratin autoantibody from normal human sera and its effects on the cultured keratinocytes

Objective: To purify the natural antikemtin autoantibody (AK auto-Ab) and observe its effects on the proliferation of the cultured keratinocytes. Methods: Natural AK auto-Ab was purified by using keratin affinity column, and then the titre and specificity of the Abs were studied by ELISA, immunoperoxidase staining and immuno-electronicmi-croscope. The effect of the purified Abs on the cultured keratino-cytes was assayed by ^3H-TdR incorporation. Results:Natural AK auto-Ab was obtained. The binding activity oflgG AK auto-Ab in purified Ab remained similar to that in pooled human sera, and the specificity of the obtained antibody is strong. The purified antibody could decrease the ^3H-TdR incorporation of the cultured keratinocytes in a dose-dependent manner. Conclusion: The method of purifying AK auto-Ab is simple, practicable and reliable. Natural AK auto-Ab, existing in normal human individuals, has inhibitory effect on the proliferation of the cultured keratinocytes.     

KGF-transfected cells can stimulate growth and proliferation of human cultured keratinocytes in vitro

Objective: To establish two stably KGF-transfected, immortalized cell lines. Methods: HaCaT-keratinocytes and KMST-6-fibroblasts were transfected by liposome mediated gene transfer. Transfection effectivity, gene integration and configuration of the transgenic protein were investigated by ELISA, DANN-PCR and β-Gal-staining. Results: Most effective GF producing clones were tested by a colorimetric XTT-test. Conclusion: This is a significant acceleration of cell proliferation and mitosis of human keratinocytes in an Air Liquid Interface (ALI) test system.     

脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究

目的 探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞(NSCs)标志物mRNA的表达.方法 使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞,用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞(MSCs),观察培养过程中脐血MSCs形态的变化,通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达,使用NGF和RA联合诱导后,用RT-PCR方法鉴定诱导前后NSCs标志物巢蛋白(nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达.结果 脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形,诱导后可分化为神经元样细胞.流式细胞仪检测该细胞不表达CD34、CD11a、CD11b和强表达CD29,符合MSCs特征.诱导后,NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强,48h达高峰,然后逐渐减弱.结论 脐血中存在间质干细胞,分离后可以体外扩增,诱导后分化为神经元样细胞,并表达NSCs表面标志.脐血能够成为NSCs的新来源.     

酪氨酸蛋白激酶抑制剂对正常人角质形成细胞增殖的影响

目的　观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein对体外培养的正常人角质形成细胞增殖代谢的影响 .方法　将不同浓度的 genistein(GST)作用于体外培养的正常人角质形成细胞 ,测定 MTT值及 3 H- Td R参入量 ,并用流式细胞仪测定细胞周期的变化 .结果　以对照组 MTT和 A490 nm值作为百分之百 ,不同浓度的 GST(10 - 7,10 - 6,10 - 5m ol· L- 1 )的 MTT和 A490 nm值变化率分别为 (90 .8± 5 .2 ) % ,(76 .5± 4.8) %和(6 4.3± 5 .7) % (P<0 .0 1) ,cpm值的变化率分别为 (87.1±4.9) % ,(73.4± 5 .3) %和 (5 7.6± 5 .6 ) % (P<0 .0 1) .表明不同浓度的 GST可明显抑制角质形成细胞的代谢与 DNA合成 ,并存在着剂量效应 .与对照组相比 ,10 - 5mol· L- 1的GST作用 2 4h可使体外培养的正常人角质形成细胞 G1 期细胞比例明显增加 (4 0 .3% vs 71.6 % ,P<0 .0 1) ,而 G2 +S期细胞比例则明显下降 (5 9.7% vs2 8.4% ,P<0 .0 1) .结论　GST在体外能明显抑制体外培养的正常人角质形成细胞的增殖与代谢 .