宫颈癌放射增敏治疗的研究新进展

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,发展中国家的发病率和病死率远远高于发达国家,在我国偏远地区及农村仍存在大量中晚期宫颈癌患者。对于早期宫颈癌可采用手术或联合放疗的方法,但晚期宫颈癌主要采用单独放疗或放疗合并化疗。近几十年来,虽放疗方法多种多样,但部分患者接受根治性放疗之后仍有转移及复发。因此,如何提高宫颈肿瘤组织对放射线的敏感性是近年来研究的热点问题之一。     

蛋白酶体抑制剂MG-132增强4-羟苯基维胺脂诱导的肺癌细胞凋亡

[目的]观察4-羟苯基维胺脂(4-HPR)联合应用蛋白酶体抑制剂MG-132对肺癌A549细胞凋亡的影响.[方法]用倒置显微镜和TUNEL染色观察4-HPR或(和)MG-132联合应用后A549细胞形态学变化及对细胞生长的抑制作用;免疫印迹法检测核转录因子-κB(NF-κB)的表达.[结果]不同给药组细胞数量明显变少,失去正常的生长,细胞密度低,光泽度下降,肿胀变形,变圆;4-HPR加MG-132组细胞凋亡率明显升高,MG-132明显增强4-HPR诱导的A549细胞凋亡;免疫印迹观察显示,MG-132降低4-HPR诱导的NF-κB的表达.[结论]MG-132是通过降低NF-κB的表达而增强4-HPR诱导的A549细胞凋亡.     

4-HPR联合阿霉素对人膀胱癌细胞株体外生长的影响

目的:观察4-羟苯维胺脂(4-HPR)联合阿霉素对人源性膀胱移行细胞癌细胞株T24的生长抑制和凋亡诱导作用,探讨两者是否存在协同作用。方法:采用MTT法评价4-HPR、阿霉素对T24细胞毒作用,应用流式细胞仪检测4-HPR、阿霉素或两者联合应用时对T24细胞生长抑制率。结果:4-HPR具有诱导T24细胞凋亡的作用,4-HPR与阿霉素联合用药有明显生长抑制和凋亡诱导的协同作用。结论:4-HPR对T24细胞的凋亡作用存在浓度和时间依赖性,与阿霉素联合用药能缩短抑瘤效果的作用时间,减少阿霉素的用量。     

吉西他滨对人子宫颈癌HeLa细胞系的放射增敏作用

目的 探讨化疗药物吉西他滨对人子宫颈癌(HeLa)细胞系的放射增敏作用.方法 MTT法确定细胞抑制率≤10%的吉西他滨(dFdC)浓度(IC10),用该浓度吉西他滨分别孵育细胞4、8、12及24h,于弃药前、弃药后立刻及弃药后12h,分别行2、4及6 Gy 60Co γ线照射.计数细胞存活分数,计算增敏比.结果 吉西他滨IC10浓度为0.01μmol/L,该浓度吉西他滨分别作用于细胞4、8、12及24 h,弃药后立刻照射,增敏比分别为1.19、1.35、1.72、1.93.作用24h,弃药前、弃药后立刻及弃药后12 h照射,增敏分别为1.91、1.93、1.52.结论 吉西他滨对HeLa细胞具有放射增敏作用.增敏作用随药物作用时间的延长而增加,持续作用短时间(4 h)就可产生放射增敏作用,作用24 h效果显著.弃药前照射及弃药后立刻照射,增敏效果好于弃药后12 h照射.     

Apoptin对宫颈癌Hela细胞放疗增敏作用实验研究

目的探讨Apoptin增加宫颈癌Hela细胞的敏感性及作用机制。方法应用脂质体转染方法将表达Apoptin的重组载体pEGFP—Apoptin转染入人宫颈癌Hela细胞。其中转染pEGFP-Apopti为实验组,转染pEGFP—C2组为阳性对照组,未转染组为阴性对照组。上述各组经射线干预后利用平板克隆形成实验、流式细胞术、MTT及蛋白印迹western—blot等方法分别检测细胞凋亡、周期及相关蛋白表达水平。结果pEGFP—Apoptin在人宫颈癌Hela细胞中稳定表达。Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞对放射线的敏感性,Apoptin可使p21、p27的表达量上调,使Rad50及Ku80的表达量下调,而对XLF的表达量则无影响。结论Apoptin可增加宫颈癌Hela细胞的放疗敏感性,其机制可能与细胞周期阻滞及同源与非同源重组修复相关蛋白的表达水平改变有关。     

三氧化二砷对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞的放射增敏作用及其机制。方法:MTT法确定As2O3对Hela细胞的半数致死浓度(ID50);克隆形成法观察20%ID50的As2O3对Hela细胞的放射增敏作用;流式细胞仪测定细胞周期。结果:细胞生长抑制率随As2O3浓度增加而增高;As2O3+照射组的细胞存活率、D0值和Dq值均小于单纯照射组(P<0.05);存活曲线肩区(Dq)变小,放射增敏比(SER)为1.39;As2O3和γ-射线均能使细胞阻滞在G2/M期,联合应用比单独应用抑制作用显著(P<0.01)。结论:As2O3对宫颈癌Hela细胞株有明显的放射增敏作用;可能与As2O3改变细胞周期有关。     

维胺脂乳膏治疗痤疮的疗效观察

痤疮是一种毛囊与皮脂腺的慢性炎症性皮肤病.俗称"粉刺"、"青春痘".本病原因复杂,机制尚未明了.一般认为与内分泌、皮脂和微生物感染有关.痤疮极为常见,多见于青春期,男多于女,病程缓慢,30岁以后可减轻或自愈.笔者所在医院皮肤科自2008年4月至2009年2月采用维胺酯乳膏治疗寻常性痤疮34例,并以痤疮平软膏治疗30多例为对照组,现将临床资料报道如下.     

4HPR 对人宫颈癌细胞凋亡的影响

目的 研究Ｎ-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺（4HPR）对人宫颈癌细胞凋亡的影响。方法 应用光学显微镜、激光共聚焦显微镜、电子显微镜、荧光显微镜从细胞形态学方面观察4HPR对人宫颈癌细胞凋亡的影响;应用流式细胞仪、细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法分析4HPR诱导人宫颈癌细胞凋亡的细胞特征、生物化学特征及凋亡细胞百分率。结果 电子显微镜和激光共聚焦显微镜镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;光学显微镜和荧光显微镜下可见凋亡小体;细胞DNA被降解,在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的“阶梯状”图谱;流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征,在DNA直方图上,G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型;凋亡百分率结果显示4HPR可诱导宫颈癌细胞凋亡,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.01）。结论 4HPR可诱导人宫颈癌细胞凋亡, 且呈时间和浓度依赖性。     

hsa-miR-214-5p通过下调PAK4对子宫颈癌HeLa细胞活力和凋亡的调控作用

目的:探究微小RNA-214-5p(micro RNA-214-5p、miR-214-5p)对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的作用及机制。方法:将细胞分为HeLa组、mimic-scramble组、miR-214 mimic组和miR-214 inhibitor组,用miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,qRT-PCR检测miR-214和p21活化激酶4(P21-activated kinases 4, PAK4)的表达;生物信息学方法预测miR-214-5p与PAK4的关系,荧光素酶报告实验验证miR-214-5p与PAK4的关系;用pcDNA-PAK4(pc-PAK4)、miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,Western blot检测PAK4的表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:miR-214 mimic组miR-214-5p mRNA的表达水平(46.02±5.23)较HeLa组(1.00±0.01)明显升高(LSD-t=31.423,P=0.000),miR-214 mimic组PAK4...     

苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的:观察不同浓度的苦参碱对宫颈癌HeLa细胞的作用。方法:浓度分别为0.5,1.0,1.5,2.0 g/L的苦参碱体外培养HeLa细胞24,48,72 h后,分别用MTT法观察苦参碱对HeLa细胞的生长抑制作用、AnnexinV-PI双标染色用流式细胞仪检测苦参碱对HeLa细胞凋亡的影响。结果:不同浓度(0.5,1.0,1.5,2.0 g/L)的苦参碱具有抑制宫颈癌HeLa细胞增殖的作用,呈明显的时间、剂量依赖性。各浓度和时间之间比较具有显著差异性(P<0.01)。FCM检测结果显示苦参碱作用后,细胞的凋亡率增加,呈现随时间和剂量依赖性。各浓度和时间之间比较也具有显著差异性(P<0.01)。结论:苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显的抑制作用,能诱导细胞凋亡的凋亡。     

Effects of Smac gene over-expression on the radiotherapeutic sensitivities of cervical cancer cell line HeLa

Background　Thesecondmitochondria derivedactivatorofcaspases(Smac) isanovelproapoptoticgene,whichplaysanimportantroleintheapoptosis inducingeffectsofirradiationontumorcells ThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheeffectsofextrinsicSmacgenetransferanditsover expressioninradiotherapeuticsensitivitiesofcervicalcancercells Methods　AftertheSmacgenewastransferredintothecervicalcancercelllineHeLa, subclonedcellswereobtainedbypersistentG418selection CellularSmacgeneexpressionwasdetectedbyRT PCR…     

抗HPV16E6核酶对宫颈癌CaSKi细胞放疗影响的研究

目的人乳头瘤病毒（HPV）是官颈癌最主要的致病因素，E6是主要的致癌基因之一，高危HPV基因型，如HPV16的E6蛋白表达水平是维持宫颈癌恶性表型的必要条件；放射治疗是目前宫颈癌治疗的标准和有效的方法；该研究旨在探讨抗HPV16E6核酶（ribozyme）对宫颈癌CaSKi细胞放疗敏感性的影响。方法以脂质体法将抗HPV16E6-ribozyme、空载体质粒分别导入CaSKi细胞，命名为CaSKi—R、CaSKi—P细胞。点杂交交检测核酶在细胞中的表达，Northem杂交检测3种细胞中E6基因的表达。用克隆形成试验检测3种细胞对放疗的敏感性，Annexine/PI双标法检测细胞凋亡率，流式细胞术检测bcl-2、p53、bax蛋白表达。结果点杂交证实核酶能在CaSKi—R细胞中稳定表达，Northern杂交证实CaSKi-R中E6表达较CaSKi—P、CaSKi中明显降低。CaSKi—R细胞生长速度较CaSKi-P、CaSKi明显减慢（P〈0.01）；CaSKi-R细胞对X射线的敏感性较CaSKi—P、CaSKi明显增加，克隆形成率明显下降（P〈0．05），CaSKi-R细胞照射前后的凋亡率较x射线照射后CaSKi—P、CaSKi明显增加（P〈0．（31）；CaSKi—R细胞p53、bax蛋白表达较CaSKi—P、CaSKi明显升高山bcl-2明显减少（P〈0．01）。结论转染抗HPV16E6-Ribozyme的CaSKi—R细胞出现一定程度的生长抑制，且时放射治疗的敏感性增加。     

白杨素增强辐射诱导宫颈癌 HeLa 细胞系球形成细胞凋亡

目的：研究白杨素对宫颈癌 HeLa 细胞系球形成细胞（SFCs）放疗增敏作用。方法：干细胞条件培养基悬浮培养得到人宫颈癌 HeLa 细胞系 SFCs。DNA/组蛋白酶联免疫吸附试验（ELISA）检测辐射诱导 SFCs 和亲本细胞凋亡作用。Western blot 分析 SFCs 和亲本细胞 p-STAT3蛋白表达。结果：与亲本细胞相比,HeLa 细胞系 SFCs耐受细胞凋亡。20.0μmol/L 白杨素增强辐射诱导 SFCs 凋亡作用。20.0μmol/L 白杨素降低 SFCs STAT3磷酸化水平。结论：白杨素增强辐射诱导人宫颈癌 HeLa 细胞系 SFCs 凋亡作用与其抑制 STAT3活性相关。     

白细胞介素-2对培养的宫颈癌细胞HeLa增殖的促进作用

目的 研究白细胞介素-2(IL-2)对人宫颈癌HeLa细胞系增殖的影响，并探讨其可能的机制。方法 以培养的HeLa细胞进行以下实验：以MTT比色法，测定IL-2对该细胞增殖的剂量效应；用流式细胞技术，观察IL-2对该细胞周期各阶段DNA含量的影响；用激光共聚焦显微镜技术，检测IL-2对该细胞内Ca^2 水平的影响。结果 IL-2(10-1000U／ml)可显著促进HeLa细胞的增殖。用流式细胞技术检测细胞DNA的含量发现，IL-2(100U／ml)可提高该细胞由G1期进入S期的比例。激光共聚焦法检测到IL-2(100U／ml)可升高细胞内的Ca^2 浓度。结论 IL-2参与了对宫颈癌细胞增殖的调节，其促进增殖作用与该细胞周期DNA含量的变化和Ca^2 浓度的改变有关。     

土贝母苷甲诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护作用

目的 观察土贝母苷甲(TBMS1)诱导的人宫颈癌HeLa细胞凋亡的超微结构变化及环孢菌素A的保护效果,探讨以线粒体为中心的内源性凋亡途径在TBMS1诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡时的作用.方法 利用透射电镜观察不同浓度TBMS1作用不同时间引起的细胞超微结构的变化,以及环孢菌素A预处理对TBMS1作用的影响.结果 随着土贝母TBMS1浓度的增高和作用时间的延长,人HeLa细胞的结构发生了连续性变化.肿瘤细胞逐渐减小,细胞间隙逐渐增大,线粒体逐渐肿胀、退化,粗面内质网逐渐扩张,核逐渐变小、核碎裂.在TBMS1低浓度时,环孢菌素A能够在一定程度上保护细胞免受TBMS1的损伤.环孢菌素A对TBMS1的损伤有保护效果.但当TBMS1浓度增大时,环孢菌素A的这种保护就不起作用了.结论 TBMS1诱导HeLa细胞发生一系列凋亡特征的超微结构变化,线粒体肿胀、退化为其特征之一,从形态学角度提供了以线粒体为中心的内源性凋亡途径起一定作用.     

松油烯-4-醇对人宫颈癌HeLa细胞增殖活性的影响

目的分析天然成分松油烯-4-醇对人宫颈癌HeLa细胞增殖活性的影响。方法体外培养人宫颈癌细胞HeLa,经不同浓度（0．001％-0．010％）松油烯-4-醇作用24h后,倒置显微镜观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性。结果细胞形态明显改变,可见显著凋亡的特征;在药物浓度为0．001％-0．006％时,随着浓度增加,抑制率从14．0％上升至95．1％,松油烯-4-醇对HeLa细胞的抑制作用明显增强;在药物浓度为0．006％-0．01％时,抑制率维持在95．1％-96．3％,抑制作用未见增强。结论天然成分松油烯-4-醇对人宫颈癌HeLa细胞增殖有明显的抑制作用。     

苯丁酸钠和全反式维甲酸对宫颈癌细胞株Hela的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂苯丁酸钠(Sodium 4-Phenylbutyrate,SPB)和全反式维甲酸(all transretinoic acid,ATRA)单独及联合运用对宫颈癌细胞株Hela生长及侵袭能力的影响,探讨苯丁酸钠和全反式维甲酸联用的效果。方法体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞,根据处理因素不同分为4组,A组:对照组,PBS液(1ml)处理组;B组:1μmol/L ATRA单药处理组;C组:1 mmol/L SPB单药处理组;D组1μmol/L ATRA+1 mmol/LSPB处理组。应用细胞生长曲线、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、细胞克隆形成试验观察细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化;用Transwell小室法检测药物处理前后细胞侵袭力的变化。结果与对照组、单用药组相比,ATRA和SPB联用时宫颈癌细胞株Hela细胞的生长速度明显减慢,克隆形成抑制率达80.37%(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;药物处理后宫颈癌细胞株Hela的侵袭能力降低,和对照组、单用药组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠和全反式维甲酸联用时有明显的增效作用。     

抑制c-raf-1基因对人宫颈癌细胞放射敏感性影响的实验研究

目的:探讨用反义技术抑制癌基因c-raf-1对宫颈癌细胞(HeLa)放射敏感性的影响.方法:设立空白对照组、c-raf-1正义寡核苷酸组和脂质体组(仅加入等量的脂质体)作对照,用RT-PCR检测宫颈癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化.用集落形成试验检测各实验组照射后人宫颈癌HeLa细胞株集落形成率,AO/EB荧光染色法检测细胞凋亡率的变化,流式细胞仪测定Bcl-2蛋白的表达.结果:c-raf-1反义寡核苷酸能有效抑制c-raf-1癌基因的表达,经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的宫颈癌细胞经60Coγ射线照射后其集落形成率较正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下降,而凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白的表达显著下调,与对照各组比较有显著差异(P＜0.01).结论:c-raf-1反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1基因降低人宫颈癌HeLa细胞放射抗性.其辐射增敏作用可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了辐射抵抗信号转导途径,增加照射后肿瘤细胞的凋亡率有关.     

钾通道阻断剂四氨基吡啶增加宫颈癌细胞对中子照射的敏感性

目的 研究钾通道阻断剂四氨基吡啶(4-amino-pynidine,4-AP)对宫颈癌HeLa细胞中子照射的影响.方法 宫颈癌HeLa细胞分别设小同浓度(0、1、5、10、20 mmol/L)4-AP组,0.67 Gy 252Cf中子照射后48 h,用MTT法和流式细胞仪检测各组细胞活性、凋亡率.0、20 mmol/L 4-AP组自照射后24、48、72 h分别用RT-PCR法、Western blot法检测HIF-1α mRNA及蛋白表达情况.结果 在中子照射48 h后,4-AP浓度为0、1、5、10、20 mmol/L时,对HeLa细胞增殖的抑制率分别为0、(38.81±3.45)%、(46.63±3.88)%、(63.58±6.19)%、(77.51±8.87)%,凋亡率(%)分别为(3.15 ±0.85)%、(8.01±1.19)%、(16.00±1.58)%、(47.20±3.18)%、(62.56±4.27)%,差异有统计学意义(P＜0.05).说明4-AP能抑制HeLa细胞的增殖,诱导凋亡,并呈现明显的剂量依赖性.当4-AP浓度大于5 mmol/L时,其作用明显(P＜0.01).0.67 Gy 252Cf中子照射0、24、48、72 h后,4-AP浓度为0 mmol/L组,HIF-1α mRNA/β-actin值分别为(0.423±0.116)、(0.464±0.111)、(0.487±0.121)、(0.415±0.099),Western blot灰度扫描结果HIF-1α/β-actin分别为(0.723±0.116)、(0.664±0.111)、(0.617±0.121)、(0.515±0.099),HIF-1α mRNA及蛋白表达均无明显降低,差异均无统计学意义(P＞0.05).4-AP浓度为20 mmol/L组,HIF-1α nRNA/β-actin值分别为(0.401 ±0.121)、(0.364±0.142)、(0.257±0.137)、(0.165±0.099),Western blot灰度扫描结果HIF-1α mRNA/β-actin分别为(0.879±0.117)、(0.645±0.115)、(0.312±0.114)、(0.130±0.118),HIF-1α mRNA及蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 钾通道阻断剂4-AP能降低中子放射治疗后缺氧诱导因子(HIF-1α)表达,降低HeLa细胞增殖,促进凋亡,提高HeLa细胞中子射线的敏感性.