利用TALEN技术高效制备TXNIP基因敲除小鼠模型

目的 利用显微注射技术注射敲除Txnip基因的TALEN mRNA获得TXNIP敲除小鼠。方法 在线设计Txnip敲除位点, 构建TALEN载体并在细胞水平验证剪切活性, 体外转录TALENs成mRNA并通过显微注射技术注射到C57BL/6J小鼠受精卵, 对F0代小鼠进行DNA水平鉴定获得TXNIP敲除小鼠。结果 在Txnip第一外显子上设计了TALEN识别剪切位点, 并在细胞水平验证具有剪切活性, 注射mRNA到受精卵获得了4只敲除小鼠, 其中2只Txnip发生移码突变, 成功制备了TXNIP敲除小鼠。结论 通过注射TALENs mRNA可以高效制备TXNIP敲除小鼠。     

斑马鱼Tbx2基因阻抑先天性心脏病模型的建立与研究

目的建立斑马鱼Tbx2基因阻抑先天性心脏病动物模型,并研究Tbx2基因对心脏发育的影响。方法通过吗啉环寡聚核苷酸显微注射介导的翻译抑制,观察Tbx2基因阻抑胚胎的心脏发育,并通过心脏特异性分子标记整胚原位杂交技术进一步阐明Tbx2在心脏发育中的作用。结果600枚Tbx2基因阻抑的斑马鱼胚胎受精后8h27．2％（163／600）胚胎死亡,24～96h出现轻、中、重度不同程度的心脏发育异常,比例分别为21．3％（128／600）、32．8％（197／600）、18．7％（112／600）,心脏缺陷包括心室发育不良、心房扩张、房室区异常、心率缓慢、心律不齐、血液反流等,整胚原位杂交结果显示了房室区特异性分子标记多能聚糖（versican）基因表达的异常。结论斑马鱼是研究心脏发育的理想模式生物,吗啉环寡聚核苷酸基因阻抑是研究基因功能的良好方法。Tbx2基因在房室特异性分化和房室管形成方面起了重要的作用。     

GATA4基因多态性与先天性心脏病相关性研究

目的探讨GATA4基因多态性与先天性心脏病(CHD)的相关性。方法收集甘肃省人民医院心脏外科300例无血缘关系的CHD患者的临床资料和血标本,以同期在本院体检中心体检的300名无血缘关系的健康者为对照组。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,对纳入的研究对象GATA4基因P66A(rs1139244)多态性进行检测。采用Excel建立数据库,SPSS 17.0软件进行统计学分析。结果 CHD患者中检测到GATA4基因P66A(rs1139244),该位点存在多态性,与先天性房间隔缺损、室间隔缺损发生有关。结论 GATA4基因P66A(rs1139244)与CHD有明显的相关性。     

斑马鱼模型在中医药研究中的应用现状

中药及中药复方是一个复杂系统,中药药效物质是中医药发挥临床治疗作用的基础,中药药效筛选和评价方面的新技术新方法引进已成为学术界关注的问题。斑马鱼作为新型模式动物的优势正在逐渐被人们所认识,应用的领域也越来越宽广,其在中药药效筛选和评价中的应用日见广泛,并逐步扩展至毒性评价、药物代谢等多个方面。本文介绍了近年国内外斑马鱼模型在中医药研究中的应用概况,以期有利于中医药基础研究。     

TBX5 基因靶序列单核苷酸多态性 与先天性心脏病的关系

目的 探讨TBX5 基因3'' 非翻译区靶序列SNPs 与先天性心脏病（CHD）遗传易感性的关系, 为CHD 的分子机制研究提供线索。方法 利用HaploView 软件筛选TBX5 基因3'' 非翻译区功能性单核苷酸 多态性（SNP）,并应用高分辨率熔解曲线检测TBX5 基因3'' 非翻译区SNP。采用病例对照研究分析SNP 位 点与CHD 的关联。结果 HaploView 软件筛选出TBX5 基因3'' 非翻译区有意义的标签SNP rs883079,高分 辨率熔解曲线法成功检测该SNP位点（rs883079）的G/G、G/A及A/A 3种基因型。TBX5 基因rs883079（ G>A） 位点等位基因或基因型分布频率比较,差异有统计学意义（P <0.05）;与CHD 易感性关联,A 是CHD 的危 险等位基因,A/A 为CHD 的危险基因型（P <0.05）。结论 TBX5 基因rs883079 位点SNP 与CHD 有关系, rs883079（G>A）携带突变纯合子基因型A/A 个体患CHD 的危险性升高。     

利用CRISPR/Cas9系统建立斑马鱼Morn3基因敲除模型

目的：采用高效基因编辑系统CRISPR/Cas9对斑马鱼的Morn3基因进行编辑,以期建立Morn3基因敲除斑马鱼模型。方法：针对斑马鱼Morn3基因用生物信息学选取靶位点,构建gRNA表达载体并体外转录,将gRNA和Cas9mRNA混合物显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中,24~48 h提取基因组DNA,PCR扩增出目的片段,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定编辑效果。结果：取3个靶位点（M1、M2、M3）进行试验,选择gRNA浓度较高的M2和M3进行注射。限制性酶切及测序的结果显示M3已产生基因编辑效应。结论：本研究通过CRISPR/Cas9系统成功获得Morn3基因编辑的突变体,为进一步探讨Morn3基因的作用提供研究基础。     

先天性心脏病患者GATA4基因新突变的识别

目的 识别先天性心脏病(CHD)患者新的分子病因.方法 收集120例特发性CHD患者的临床资料和血标本,以100名健康者为对照.应用聚合酶链反应扩增GATA4基因的全部外显子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序.借助BLAST程序将所测序列与GenBank中的已知序列进行比对以识别基因突变,并用Clustal W 软件分析突变氨基酸的保守性.结果 3例CHD患者的GATA4基因各识别出1个新的杂合错义突变,即第90、95和329位的密码子分别由AGC、GAC和AAG变为AGA、GAG和AAT,导致第90、95和329位的氨基酸分别由丝氨酸、天冬氨酸和赖氨酸变为精氨酸、谷氨酸和天冬酰胺,即S90R、D95E和K329N突变.这些突变在正常对照者中均不存在,多物种GATA4序列比对显示第329位的赖氨酸在进化上高度保守.此外,还发现了1个不改变氨基酸的单核甘酸多态,即c.99 G>T多态,但这些多态在CHD患者和健康对照者间的频率分布差异无统计学意义(P>0.05).结论 特发性CHD具有显著的遗传异质性,GATA4基因突变可能是部分特发性CHD患者的分子病因.     

TALEN构建Fndc5基因敲除小鼠及初步分析

目的通过构建Fndc5基因敲除小鼠,为后续的研究提供动物模型。方法运用TALEN技术在Fndc5基因FNIII domain中造成缺失突变,并通过测序进行基因型鉴定。通过配对建立稳定遗传系并在mRNA和DNA水平鉴定出生小鼠基因型;对不同年龄段出生小鼠进行体重、血糖分析;通过q PCR确定Fndc5在肾脏、肝脏、大脑、肌肉、心脏等组织中的表达情况。结果成功构建并鉴定得到4种不同的Fndc5基因敲除小鼠品系;不同年龄段出生小鼠体重、血糖未见显著性差异;确定Fndc5在肌肉、心脏等组织中高表达。结论本实验在国际上成功构建了Fndc5基因敲除小鼠,并进行了初步分析,为深入研究Fndc5基因在体内中的功能提供了动物模型。     

GATA4基因突变与散发型先天性心脏病

目的识别GATA4基因在中国汉族先天性心脏病人群中的变异。方法对348例散发型先天性心脏病病例的GATA4基因进行直接测序筛查,以寻找新的变异。结果在2例先天性心脏病患者中发现2个不同的杂合错义突变（G21V和P407Q）,其中G21V为首次报道。GATA4基因在本次研究中的总突变率为0．6％。结论结合之前的研究,本研究更进一步证实GATA4基因在心脏发育及先天性心脏病的发病机制中具有重要作用。     

先天性心脏病家系中相关易感基因的研究进展

先天性心脏病(CHD)是出生缺陷的最常见类型,是导致婴幼儿非感染性死亡的重要原因,全球范围内其患病率仍居高不下.CHD在威胁婴幼儿健康的同时,也给社会及家庭带来巨大压力.目前认为,CHD的发病是由遗传因素与环境因素共同作用导致,其中遗传是主要的致病因素,包括染色体异常、基因突变和表观遗传修饰等.CHD具有一定的家族倾向...     

斑马鱼uba6和uba7突变体的构建与鉴定

目的 构建斑马鱼uba6和uba7突变体。方法 运用TALEN技术在斑马鱼uba6和uba7基因编码区引进突变,并测序鉴定突变类型。结果 成功获得了两种突变类型的uba6和三种突变类型的uba7斑马鱼突变体。结论 成功构建了斑马鱼uba6和uba7突变体,为进一步研究斑马鱼uba6和uba7基因的功能提供了材料。     

GATA4 and NKX2.5 gene analysis in Chinese Uygur patients with congenital heart disease

Background Congenital heart disease （CHD） is the most common developmental anomaly in newborns. The germline mutations in GATA4 and NKX2.5 genes have been identified as responsible for CHD. The frequency of GATA4 and NKX2.5 mutations in Chinese Uygur patients with CHD and the correlation between their genotype and CHD phenotype are unknown.
Methods We examined the coding region of GATA4 and NKX2,5genes in 62 Chinese Uygur patients with CHD and 117 Chinese Uygur individuals as the controls by denaturing high pedormance liquid chromatography （DHPLC） and sequencing.
Results Two heterozygous missense mutations of c.1220C〉A and c.1273G〉A in GATA4 gene, which cause the amino acid residue changes of P407Q and D425N in GATA4, were found in a patient with tetralogy of Fallot and a patient with ventricular septal defect, respectively. The two patients did not have atrioventricular conduct defects or non-cardiac abnormalities. The two mutations are expected to affect the protein function. There were no reported NKX2.5 mutations in the patients.
Conclusion Our results provided the primary data on CHD phenotype associated with GATA4 mutation in the Chinese Uygur population.     

超声心动图下胎儿先天性心脏病的疾病分布状况分析

目的 探讨超声心动图下胎儿先天性心脏病的疾病分布状况。方法 收集2009-2013年行胎儿超声心动图检查的15 648例孕妇的临床资料,其中诊断患有胎儿先天性心脏病的孕妇419例,根据胎儿心脏超声检查结果对疾病分布状况进行分析,并与引产者胎儿尸解结果或出生后新生儿超声心动图诊断结果比较。结果 419例行新生儿超声心动图检查或尸检确诊,其中398例得到确诊,另外21例无异常,准确率为95.0%。产前诊断与产后确诊差异无统计学意义（P〉0.05）,产前诊断的4例左心室发育不良综合征产后确诊为主动脉瓣狭窄,5例动脉单干产后诊断为肺动脉闭锁,3例动脉单干诊断为重型法洛四联征,3例右心室双出口产后诊断为大血管转位,根据产后确诊结果分析,其中畸形比例最多的为肺动脉闭锁,占24.37%,再次为法洛四联征,为15.08%,其次为单纯性室间隔缺损,为13.31%。结论 超声心动图能有效诊断胎儿先天性心脏病,并能对常见的先天性心脏病准确诊断,对后期的治疗方案具有重要的指导意义。     

先天性心脏病封堵术后经胸超声心动图血流动力学随访观察

目的评价先天性心脏病封堵术前后各房室形态及左室功能的改变以及超声心动图检测价值。方法应用超声心动图对32例采用国产封堵器行ASD、VSD、PDA封堵术患者术前及术后24h、1个月,分别对三尖瓣口、肺动脉瓣口、二尖瓣口血流峰值流速以及各心室容积、左室功能变化进行检测,用定量的方法说明封堵术对心功能的改善情况。结果先天性心脏病封堵术后及随访期右心室内径缩小,三尖瓣口、肺动脉瓣口血流峰值降低,右心前负荷的降低,短期内右心-肺循环高动力状态逆转,在新的前负荷水平达到新平衡;左室前负荷、收缩功能改善。结论应用先天性心脏病介入治疗根治了患者先天性的解剖畸形,纠正了血流动力学紊乱,患者左右心室形态、血流动力学进行性改善。     

先天性心脏病心导管检查术的临床应用

目的探讨心导管检查术对先天性心脏病明确诊断的临床价值。方法经心脏超声诊断为先天性心脏病的患者216例,行左、右心导管检查术。结果216例诊断为法乐氏四联征、法乐氏五联征组共73例,复杂性先心21例,动脉导管未闭、室间隔缺损、房间隔缺损、肺动脉狭窄共122例。结论心导管检查术是明确诊断先天性心脏病的性质、部位及程度的可靠方法,对提供手术适应证及制定手术方式有较好的参考价值。     

超声诊断胎儿先天性心脏病的应用价值

目的探讨超声诊断胎儿先天性心脏病的临床价值。方法选择2011年6月～2013年6月我院产前超声检出的胎儿先天性心脏畸形100例作为观察对象。结果 100例产前诊断的先天性心脏畸形(除外联合畸形)的胎儿中,单心房、单心室7例,占7%;法洛四联症16例,占16%;心内膜垫缺损8例,占8%;室间隔缺损21例,占21%;房间隔缺损13例,占13%;主动脉狭窄10例,占10%;肺动脉狭窄14例,占14%;三尖瓣狭窄5例,占5%。三尖瓣下移6例,占6%。合并唇腭裂6例,脊柱裂2例,膈疝5例,多指多趾4例,并指2例。结论超声诊断胎儿先天性心脏病具有重要的临床价值,值得推广和应用。     

微创先天性心脏病纠治术

目的 总结分析微创先生心脏病纠治术的结果和经验。方法 １９９８年８月至１９９９年１０月通过胸部不上切口施行微创先天性心脏病纠治术４５例。胸骨上端部分劈开７例,胸骨下端部分壁开３０例,右前外侧肋间切口８例。结果 １例术后１周死于脑梗死,手术死亡率２．２％。平均体外循环时间５１ｍｉｎ,平均主动脉阻断时间２６ｍｉｎ。术后平均胸腔引渡以最和输血量分别为２０４ｍｌ、８６ｍｌ。平均重症监护（ＩＣＵ）时间１ｄ,     

应用二维超声心动图和三节段概念诊断复杂先天性心脏病

目的 将心脏解剖三节段概念引入二维超声心动图（２ＤＥ）诊断复杂先天性心脏病（先心病）中,使２ＤＥ诊断复杂先心病简单化,条理化。方法 应用２ＤＥ对９２０例复杂先心病根据心脏解剖三节段概念进行分型诊断,８２２例心血管造影对照,５８４例手术证实。结果 根据心脏解剖三节段概念其中心房正位８５５例（包括８９例永存左上腔静脉和３１例完全肺静脉异位引流）、心房反应５３例、心房不定位１２例;２组房室瓣开放７４７例、一侧房室瓣闭锁１１２例、一组共同房室瓣６１例;心室右袢６０６例、心室左袢１１１例、单心室２０３例（包括２４例双腔心）;大动脉关系正常位３２例、永存动脉干２５例。２ＤＥ诊断正确８２３例,总诊断准确率８９．５％。结论 将心脏解剖三节段概念引入２ＤＥ诊断复杂先心病,对心脏逐节段分析可诊断简单化,条理化,为心脏外手术提供简单明确的诊断依据。