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相似文献
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1.
目的 观察多巴胺对人视网膜色素上皮细胞D407多巴胺D2受体表达的影响,探讨视网膜色素上皮在近视眼发生与发展中的作用.方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞D407,使用不同浓度多巴胺进行干预,共分3组:A组作为正常对照;B组使用浓度为1μg/mL多巴胺干预;C组使用浓度为10μg/mL多巴胺干预;采用免疫细胞化学剂Western blot的方法 ,观察视网膜色素上皮细胞多巴胺D2受体蛋白的表达变化.结果 多巴胺D2受体在各组中均有表达,且主要表达于细胞浆内.B组及C组中多巴胺D2受体蛋白表达上调,与A组比较差异有显著性(P<0.05).结论 多巴胺可能通过调控视网膜色素上皮多巴胺D2受体的表达,影响近视眼的发生与发展.  相似文献   

2.
目的 用DOI诱导大鼠头部抽动建立Tourette综合征动物模型,观察该模型大鼠脑内前额叶和纹状体多巴胺D1、D2受体基因表达.方法 将20只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,实验组大鼠腹腔注射DOI,对照组注射相同体积的生理盐水,连续给药21 d.RT-PCR法检测大鼠纹状体、前额叶皮层的多巴胺D1、D2受体基因表达.结果 实验组前额叶D1受体mRNA表达的相对灰度值(0.897±0.378)与对照组(0.417±0.299)相比增高,有显著统计学差异(P<0.05),纹状体D1受体mRNA表达无明显变化[(1.162±0.159)vs(0.996±0.479)],实验组前额叶和纹状体D2受体mRNA表达均无明显变化.结论 DOI诱导的Tourette综合征动物模型大鼠前额叶皮层多巴胺D1受体基因表达增高.  相似文献   

3.
目的研究人与小鼠的胃黏膜泌生长抑素细胞(D细胞)上多巴胺D_1、D_2受体的分布。方法采用冰冻切片免疫荧光染色的方法分别对多巴胺受体在人与小鼠胃体D细胞的分布进行检测。结果多巴胺D_1、D_2受体均分布在人与小鼠的胃体黏膜层,且D细胞上存在有D_2受体的免疫阳性表达,而未见D_1受体的阳性表达,人与小鼠结果保持一致。结论多巴胺D_2受体分布于D细胞上,可能介导多巴胺对生长抑素分泌的调节进而参与调节胃的分泌及运动功能。  相似文献   

4.
目的 验证神经前体细胞系hNPC-TERT移植入动物中枢神经系统前后多巴胺D2受体的表达.方法 免疫荧光定性鉴定体外培养hNPC-TERT的D2受体表达,并进一步应用放射受体分析方法测定hNPC-TERT细胞表达D2受体数量.实验组兔脊髓内移植3×106 hNPC-TERT,对照组动物脊髓内移植同等数量HeLa细胞,移植后第7天,以11C-raclopride为示踪剂,移植动物活体或处死动物剥离出脊髓进行D2受体PET显像,并行移植段脊髓切片免疫荧光染色,验证hNPC-TERT在体内的D2受体表达.结果 免疫荧光和放射受体分析显示体外培养hNPC-TERT细胞表面表达大量D2受体(Bmax=8×104).移植入兔脊髓后,D2受体显像显示移植部位有明显的放射性浓聚,经ROI半定量分析,与对照组差异显著(P=0.0017),离体脊髓PET显像、组织免疫荧光进一步证实了活体显像结果.结论 神经前体细胞系hNPC-TERT高表达多巴胺D2受体,并且在移植入体内后仍保持该特性,具有移植治疗帕金森综合征等D2受体缺乏性疾病的潜力.  相似文献   

5.
目的 研究刺五加体外诱导骨髓基质细胞(MSCs ) 分化为神经元样细胞.方法 采用全骨髓贴壁筛选法分离培养MSCs.含刺五加的无血清DMEM/ F12 诱导MSCs 的分化.间接免疫荧光法、Western blot及RT-PCR检测巢蛋白(nestin)、β-Tubulin III及GFAP蛋白和mRNA的表达.结果 MSCs在体外传代扩增至第3代,CD44 、CD54表达阳性已达90%以上,而CD14表达阳性下降至2.37%.刺五加诱导后,MSCs胞体收缩,突起伸出,类似神经元;免疫荧光、Western blot及RT-PCR均显示刺五加诱导后的细胞nestin、β-Tubulin III蛋白和mRNA表达阳性,而GFAP表达阴性.结论 刺五加可以在体外诱导MSCs分化为神经元样细胞.  相似文献   

6.
诱导胶质纤维酸性蛋白阳性神经前体细胞系向神经元分化   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨来源于人胚胎脑室下区(SVZ)的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性神经前体细胞系向神经元分化的潜能。方法:分别采用定量RT-PCR、Western印迹分析及免疫荧光染色检测被全反式视黄酸诱导前后GFAP阳性神经前体细胞系中神经干细胞和神经元特异性标志物表达量的变化情况。采用免疫荧光染色检测GFAP阳性神经前体细胞系移植到动物体内后神经元特异性标志物表达情况。结果:在体外诱导后,GFAP阳性神经前体细胞系中神经元特异性标志物在mRNA和蛋白水平的表达量上升,而神经干细胞标志物表达量下降。移植动物体内,GFAP阳性神经前体细胞系可分化产生神经元。结论:GFAP阳性神经前体细胞系在体内外可以向神经元诱导分化。  相似文献   

7.
激光捕获显微切割技术检测卵巢癌组织中EphA2受体的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:检测卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平.方法:应用激光捕获显微切割技术(LCM)辅助的一步RT-PCR及Western blot方法检测30例卵巢癌组织中EphA2受体mRNA及蛋白的表达水平.结果:LCM成功地将卵巢癌细胞从卵巢癌冰冻组织切片中分离.RT-PCR结果显示,卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA表达,mRNA表达与卵巢癌患者的年龄、FIGO分期、组织学类型、组织分化程度以及残余肿瘤大小均无关(P<0.05).Western blot结果显示EphA2受体表达与mRNA表达水平一致.结论:LCM能够精确分离少量卵巢癌细胞;卵巢癌组织中有不同级别的EphA2受体mRNA及蛋白质表达.  相似文献   

8.
目的:利用RNA干扰技术,阻断VDR在小鼠成骨细胞株mc3t3-E1中的表达,观察VDR表达受抑后对小鼠成骨细胞Dmp1、Cbfa1及BMP-2基因mRNA表达的影响.方法:针对小鼠VDR mRNA 144、594、852、3 628位点设计、合成4对21核苷酸siRNA(siRNA1、siRNA2、siRNA3、siRNA4);在阳离子脂质体介导下转染mc3t3-E1细胞,以空白及非特异性siRNA作为对照,各组于转染24 h及72 h后收集细胞分别抽提RNA及蛋白.采用RT-PCR法检测细胞中VDR mRNA表达水平的改变,Western blot法检测VDR蛋白表达的变化,从而筛选有效序列.进一步应用SYBR Green荧光实时PCR方法定量检测成骨细胞功能基因-Dmp1、cbfa1及BMP-2基因mRNA表达情况.结果:与空白对照组相比,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞VDR mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01).转染siRNA1、2及非特异性siRNA的mc3t3-E1细胞VDR的表达与对照组相比无显著差异(P>0.05).荧光定量PCR结果显示,转染siRNA3、siRNA4的mc3t3-E1细胞Dmp1、cbfa1、BMP-2mRNA表达明显下调(P<0.01).结论:针对小鼠VDR mRNA 852、3 628位点设计、合成的siRNA可有效抑制小鼠成骨细胞株VDR的转录和表达;VDR表达受抑可下调mc3t3-E1细胞功能基因Dmp1、Cbfa1、BMP-2mRNA的表达;VDR在维持成骨细胞功能中起着一定的作用.  相似文献   

9.
人类多巴胺D2受体发出的神经信号影响运动控制、物质滥用、激素分泌等多种生理功能。多巴胺D2受体基因的各种多态性可通过影响受体的结构和功能表达而发挥不同的调节作用。本文就多巴胺D2受体基因的结构、各种多态现象的形成及其对于酒精、阿片、尼古丁等物质依赖和成瘾性影响方面的研究进展进行综述。  相似文献   

10.
目的:探讨多巴胺诱导白血病细胞系K562凋亡的作用机制。方法:先用与多巴胺受体相结合的带荧光的配基DP2785处理K562细胞后,分别采用紫外分光光度计和荧光分光光度计检测以及荧光显微镜观察,三方面证实K562细胞上是否存在多巴胺受体;进而检测细胞内cAMP水平;再通过受体阻断实验进行多巴胺受体亚型分析。结果:紫外分光光度计和荧光分光光度计检测结果以及荧光显微镜下观察结果显示,K562细胞上存在多巴胺受体;多巴胺可升高细胞内cAMP含量;受体阻断实验结果显示多巴胺作用于K562细胞,D1和D2受体均起作用。结论:多巴胺通过作用于K562细胞上D1和D2多巴胺受体,进而升高细胞cAMP含量起作用。  相似文献   

11.
目的 证明L1210细胞表面表达IL-2受体(IL-2R),并以此为基础建立检测以IL-2为导向的免疫毒素的杀伤细胞活性的体内、体外实验模型。方法 采用免疫荧光染色及流式细胞测定技术,测定L1210细胞表面IL-2R。用MTT法测定IL-2与两种由突变改型的绿脓杆菌毒素片段构建的两种融合蛋白(IL-2-PEZNM和IL-2-K-PEZNM)的体外杀伤细胞活性;以腹腔注射L1210细胞诱发小鼠腹水瘤  相似文献   

12.
目的:探讨普瑞德-威利/安格曼综合征区域蛋白2(NIPA2)对高糖诱导的成骨细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:将成骨细胞MC3T3-E1采用26 nmol·L-1高糖处理24 h,将细胞分为HG+si-con组(转染si-con)、HG+si-NIPA2组(转染si-NIPA2)、HG+si-NIPA2+DMSO组(转染si-NIPA2后再用DMSO处理)和HG+si-NIPA2+AG490组(转染si-NIPA2后再用AG490处理),另设对照组。采用脂质体法转染MC3T3-E1细胞,再用26 nmol·L-1高糖处理;采用qRT-PCR法检测MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞中NIPA2、P21、Cleavedcaspase-3、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,HG组MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01)。敲减NIPA2后,与HG+si-con组比较,HG+si-NIPA2组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),MC3T3-E1细胞在48和72 h时细胞增殖活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),JAK/STAT信号通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达水平明显升高(P<0.01)。与HG+si-NIPA2+DMSO组比较,HG+si-NIPA2+AG490组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显升高(P<0.01),P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),在48和72 h时细胞增殖活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论:NIPA2对高糖诱导的成骨细胞增殖和凋亡具有调控作用,其调控机制与JAK/STAT信号通路有关。  相似文献   

13.
目的 构建携带人可溶性肿瘤坏死因子受体I胞外区和IgGFc融合基因的重组腺病毒载体(Ad-sTNFRI-IgGFc),体外转染正常人气道上皮细胞株(HBE135-E6E7),探讨重组腺病毒Ad-sTNFRI-IgGFc转染气道上皮治疗支气管哮喘的可行性.方法 将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGlox△E1,3Crc共转染HEK293细胞,重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染培养HBE135-E6E7,流式细胞术检测转染效率,RT-PCR、免疫组化检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的表达和转录.结果 成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc,感染性滴度达3×1010TCID50/ml,转染后HBE135-E6E7在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达.结论 构建的Ad-sTNFRI-IgGFc可有效转染HBE135-E6E7,并在其中高效表达,并能拈抗TNF活性,为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础.  相似文献   

14.
目的:构建一个能在MC3T3-E1细胞中稳定表达,并具有生物学活性的VEGF165和VEGF121基因表达载体。方法:采用RT—PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF165和VEGF121基因,将获得的基因定向插入pcDNA3.1(+)真核表达质粒中,测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞。细胞经G418加压有限稀释筛选,采用ELISA法、Western blot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达,并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株(HUECV304)的增殖活性影响。结果:通过基因测序表明获得的yEGF165和VEGF121与GeneBank登录的序列一致,构建的质粒分别为VEGF165/pcDNA3.1(+)质粒和VEGF121/pcDNA3.1(+)质粒,ELISA及Western blot检测结果均表明VEGF165和VEGF121基因转染MC3T3-E1后能在细胞中稳定表达,表达产物能明显促进HUECV304细胞生长。结论:基因转染的MC3T3-E1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白。  相似文献   

15.
目的:评估S14G-humanin(HNG)在SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞体外氧糖剥夺/ 复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型中潜在的神经保护作用的相关分子机制。方法:将SH-SY5Y 细胞分为 对照组、OGD/R 模型组、HNG 干预组、HNG 联合FLLL32 抑制剂组。三气培养箱建立SH-SY5Y 细胞OGD/R 损 伤模型;抑制剂组给予不同剂量HNG、FLLL32(JAK2/STAT3 通路抑制剂)。CCK8 细胞检测试剂盒检测细胞活性, 流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western Blot 分析JAK2、p-STAT3(Y705)、p-STAT3(S727)的表达。结果:OGD/R 导致SH-SY5Y 细胞存活率显著降低(P<0.01),凋亡率显著增加(P<0.01)。给予0.1、1、5、10 μg·L-1 HNG 干预的 SH-SY5Y 细胞与未行HNG 干预的OGD/R 细胞相比,存活率更高(P<0.01),凋亡明显减少(P<0.01),1 μg·L-1 HNG 干预组效果最好。与对照组比较,OGD/R 降低JAK2 和p-STAT3(Y705)蛋白水平(P<0.01)。给予HNG 干预的细胞表达JAK2(P<0.01)和p-STAT3(Y705)(P<0.01)蛋白水平增加。给予1、5 μg·L-1 HNG 干预的细 胞表达JAK2(P<0.01)、p-STAT3(Y705)(P<0.01)和p-STAT3(S727)(P<0.05)蛋白水平有更显著的增加。给予 FLLL32 和HNG 干预的细胞无法增加细胞存活率。结论:HNG 通过激活JAK2/STAT3 信号通路抑制OGD/R 诱 导的细胞凋亡,有希望用于治疗脑梗死的药物。  相似文献   

16.
目的:观察前成骨样细胞(MC3T3-E1细胞)分化过程中17β-雌二醇对胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)的影响。方法:应用10mmol/Lβ-甘油磷酸钠和50mg/L抗坏血酸诱导小鼠MC3T3-E1细胞分化成熟,分别在0,6,12,18,24,30d收集细胞。17β-雌二醇干预,用半定量RT-PCR和免疫印迹法检测干预组和对照组细胞IRS-1mRNA和蛋白的表达,比较两组细胞IRS-1表达量的变化。结果:在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中,IRS-1 mRNA和蛋白的表达在MC3T3-E1细胞分化成熟过程中逐渐增高。结论:IRS-1可能在17β-雌二醇诱导的骨转换过程中起着重要作用。  相似文献   

17.
Background The synthesis of virus-like particles (VLPs) provides an important tool to determine the structural requirements for viral particle assembly and virus-host interactions. Our purpose was to express simultaneously all three structural proteins of hepatitis C virus (HCV) in insect cells to investigate the proteins assembly into VLPs and the imrnunogenicity of these particles. Methods HCV gene sequences encoding the structural proteins C, E1, and E2 were amplified with PCR, and recombinant baculoviruses were constructed using recombinant DNA techniques. The expression of HCV structural proteins in insect cells was analyzed by immunofluoresceoce and SDS-PAGE. The interaction of expressed structural proteins was investigated by immunoprecipitation and immunoblotting. The VLPs in the insect cells were visualized by electron microscopy (EM). VLPs were then purified by sucrose gradient centrifugation and used to immunize BALB/c mice. Antibodies against HCV were tested for in mouse serum samples by an ELISA assay. Results The recombinant baculoviruses reBV/C and reBV/E1-E2 were constructed successfully. Insect cells co-infected with reBV/C and reBV/E1 -E2 expressed HCV C, E1, and E2 proteins with the expected molecular weights of 20kD, 35kD, and 66kD, respectively. The results of immunoprecipitation and immunoblotting assays revealed the coimmunoprecipitation of C, E1, and E2 proteins, indicating association of the three structural proteins. Electron microscopy of insect cells coinfected with reBV/C and reBV/E1-E2 demonstrated spherical particles (40 to 60 nm in diameter) similar to the HCV virions from serum samples or hepatic tissue samples of HCV infected humans. The VLPs were partially purified. Antibodies to HCV were detectable in the serum of mice immunizedwith VLPs. Conclusion HCV structural proteins simultaneously expressed in insect cells can interact with each other and assemble into HCV-like particles, which are shown to be immunogenic in mice.  相似文献   

18.
目的:通过一步水热法合成葡萄糖酸锌碳点(Zn-CDs),探讨Zn-CDs的细胞成像及其对小鼠前成骨细胞向成骨方向分化的促进作用。方法:一步水热法合成Zn-CDs,采用透射电子显微镜(TEM)、荧光光谱仪和傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)观察检测Zn-CDs的表征。将不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00、100.00和1 000.00 mg· L-1) Zn-CDs浸提液与小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1共培养作为实验组,空白对照组仅加入细胞培养液。采用MTT法检测各组MC3T-E1细胞相对增殖率(RGR);采用激光共聚焦成像观察MC3T3-E1细胞的成像特点;采用qRT-PCR法检测各组MC3T3-E1细胞中Runt相关转录因子2基因(Runx2)、碱性磷酸酶基因(ALP)和骨钙素(OC) mRNA相对表达水平;茜素红染色检测各组细胞中钙化结节数。结果:TEM检测,成功合成粒径为5.25 nm的Zn-CDs。荧光光谱,Zn-CDs具有360 nm紫外光激发和450 nm蓝光发射的荧光性质,并表现激发波长依赖特性。FT-IR检测,Zn-CDs表面主要由羧基和羟基基团构成。与空白对照组比较,共培养24 h时1 000.00 mg·L-1Zn-CDs组MC3T3-E1细胞的RGR明显降低(P<0.01)。荧光成像,Zn-CDs与MC3T3-E1细胞共培养后,细胞呈现蓝色、绿色和红色的荧光图像,形态轮廓清楚且荧光强度细胞质比细胞核强。qRT-PCR检测,随着Zn-CDs浓度的增加,MC3T3-E1细胞中Runx2、ALP和OCmRNA相对表达水平逐渐升高。茜素红染色,诱导21 d后不同浓度Zn-CDs组MC3T3-E1细胞中钙结节数多于空白对照组。结论:Zn-CDs可以有效地进行MC3T3-E1细胞荧光成像,且Zn-CDs具有一定的促MC3T3-E1细胞向成骨方向分化的作用。  相似文献   

19.
目的:本研究探讨钠钙离子交换体(NCX)是否参与了造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤及反向模式钠钙离子交换体抑制剂KB-R7943对造影剂诱导的肾小管上皮损伤的影响。方法:鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)被分成6组:正常对照组、造影剂组、甘露醇组、钙离子拮抗剂(CCB)组、KB-R7943(10-5mol/L)和KB-R7943(10-6mol/L)组。造影剂作用1 h后,细胞损伤采用LDH检测,细胞形态变化及细胞凋亡分别由倒置显微镜和流式细胞仪检测;细胞内钙采用共聚焦微镜测定;钠钙离子交换体mRNA表达采用RT-PCR测定。结果:造影剂作用1 h后,细胞损伤、细胞凋亡、细胞内钙进行性增加,显著高于相同渗透压甘露醇组;KB-R7943显著改善了上述异常,且较相同浓度CCB具有更好的效果并显示出剂量效应;钠钙离子交换体mRNA表达没有变化。结论:经反向模式钠钙离子交换体导致的细胞内钙超载参与了造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤;反向模式钠钙离子交换体抑制剂KB-R7943以呈剂量方式对造影剂诱导的肾小管上皮细胞损伤发挥保护作用。  相似文献   

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