IFN-γ转基因治疗结肠癌小鼠肝转移的抑制效应

目的:评价IFN-γ转基因方法与肿瘤内注射重组IFN-γ对荷瘤小鼠肝转移的抑制作用。方法:手术显露脾脏后,经脾注入1×107/ml浓度的小鼠结肠癌细胞株CT26单细胞悬液0.1ml,建立小鼠结肠癌肝转移模型;小鼠分成4组(每组12只),术后第2日起分别进行不同的干预。结果:与生理盐水和空载质粒对照组比较,转基因治疗组和外源IFN-γ给药组对抑制肝转移结节的效应明显(P<0.05);转基因治疗组和外源IFN-γ给药组荷瘤小鼠平均生存期分别为(39.5±5.6)天和(40.8±4.7)天,明显长于生理盐水组(29.0±3.5)天和空载质粒组(31.1±4.7)天。结论:IFN-γ转基因治疗对荷瘤小鼠的肝转移有抑制效应,转基因治疗组能够与重组IFN-γ每日给药组取得相似的抑瘤效果。     

肝癌细胞疫苗对荷瘤小鼠脾淋巴细胞IFN-γ生成及肿瘤浸润淋巴细胞的影响

目的探讨高强度聚焦超声(HIFU)制备肿瘤疫苗对小鼠抗同源肿瘤免疫力的影响。方法以HIFU辐照或高温水浴灭活H22细胞制成HIFU瘤苗和高温瘤苗。将雌性BALB/c小鼠108只,随机分为HIFU瘤苗、高温瘤苗、生理盐水组,分别皮下注射HIFU瘤苗、高温瘤苗、生理盐水,之后接种H22细胞,观测荷瘤小鼠肿瘤体积及生存期。ELSIA检测免疫后荷瘤小鼠脾淋巴细胞在同源肿瘤再刺激下IFN-γ的生成。免疫组化检测小鼠肿瘤浸润T淋巴细胞。结果 HIFU瘤苗免疫使小鼠肿瘤生长被抑制,脾淋巴细胞IFN-γ生成增加,且较高温瘤苗组更显著(P<0.05)。瘤苗增加了肿瘤中CD4+和CD8+细胞浸润的程度。结论 HIFU瘤苗提高了实验动物的抗肿瘤免疫力,表现为增高的淋巴细胞IFN-γ生成和肿瘤内淋巴细胞浸润。     

γ-干扰素在小剂量美法仑治疗肿瘤过程中对荷瘤小鼠外周血红细胞的影响

[目的]探讨γ-干扰素(IFN-γ)在小剂量美法仑治疗肿瘤过程中对荷瘤小鼠外周血红细胞的影响。[方法]利用单一剂量美法仑治疗荷瘤野生型C57BL/6小鼠模型,取遗传背景相同、基因型不同的IFN-γ+/-和IFN-γ-/-C57BL/6小鼠各6只,观察7.5 mg/kg美法仑治疗后两组荷瘤小鼠肿瘤结节直径的变化,并且分别在美法仑用药前第3天、用药后6 h、第4、7、11、15、28天内眦静脉取血,肝素抗凝后检测外周血RBC数、Hb含量和Hct。[结果]美法仑7.5 mg/kg用药后第1天,两组荷瘤小鼠肿瘤结节缩小均不明显;用药后第4天,荷瘤IFN--γ/-小鼠肿瘤生长轻度受抑后进行性增大,并在用药后2周内所有小鼠肿瘤复发、死亡;而IFN-γ+/-小鼠肿瘤的肿瘤结节进行性缩小、肿瘤消退并治愈。7.5 mg/kg美法仑治疗后11 d内,IFN-γ免疫功能不同的荷瘤IFN--γ/-和IFN-γ+/-小鼠外周血RBC计数、Hb含量和Hct之间差异无显著性意义(P>0.05);美法仑治疗11 d后,IFN-γ免疫功能缺陷的荷瘤IFN-γ-/-小鼠外周血RBC计数、Hb含量和Hct明显低于IFN-γ免疫功能正常的荷瘤IFN...     

GM-CSF基因免疫治疗小鼠骨髓瘤的实验研究

目的:探讨mGM-CSF基因免疫小鼠是否可以诱发小鼠对肿瘤的免疫应答。方法:用SP2/0肿瘤细胞皮下接种Balb/c小鼠建立肿瘤动物模型,再以皮下或肌肉注射空质粒或重组质粒4次,共400μg。8周后观察小鼠的抑瘤率、肿瘤质量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润情况,检测血清中IFN-γ和IL-2浓度,MTT法体外检测CTL、NK细胞活性。结果:基因免疫Balb/c小鼠8周后,重组质粒皮下注射组肿瘤质量[(0.880±0.405)g]轻于对照组[(1.548±0.221)g,P<0.01];重组质粒肌肉注射组肿瘤质量[(0.378±0.411)g]明显轻于对照组[(1.554±0.249)g,P<0.001];重组质粒肌肉注射组肿瘤组织可见淋巴细胞浸润;IFN-γ和IL-2的浓度及CTL、NK细胞活性显著高于对照组。结论:GM-CSF基因免疫能诱发小鼠抗肿瘤作用,肌肉注射比皮下注射效果好。     

载紫杉醇PLGA微球在Skov3卵巢癌荷瘤小鼠体内的治疗效果

目的   应用乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备载紫杉醇(PTX)PLGA微球,评价PTX-PLGA微球对荷瘤小鼠治疗效果。方法   采用4周龄雌性BALB/c-nu裸小鼠建模,将卵巢癌Skov3细胞株注射于裸鼠背部一侧,制备裸小鼠皮下移植瘤。设空白对照组、生理盐水组、PLGA微球悬液组、PTX注射液组和PTX-PLGA微球悬液组。分别对成瘤后荷瘤鼠进行治疗、观察记录、绘制肿瘤生长曲线。对Skov3移植瘤裸小鼠瘤内直接注射药物并应用免疫组化法检测移植瘤微血管密度(MVD)、相关死亡促进因子(Bad)。结果   给药6周后,PTX-PLGA微球组瘤内注射抑瘤效果明显大于其他各组(P＜0.05),肿瘤体积明显减小,癌细胞增殖受到抑制。结论   PTX-PLGA微球瘤内直接注射对卵巢癌的治疗有明显体内抑瘤效果。     

荷S-180移植瘤小鼠血清干扰素γ含量的变化及免疫调节药物的干预作用

目的 研究荷S-180肉瘤小鼠血清干扰素γ(IFN-γ)含量的变化,并采用具有调节免疫功能的药物进行干预,探讨内源性IFN-γ在抗小鼠移植瘤方面的意义.方法 建立荷S-180实体瘤小鼠动物模型,分别用灵芝多糖(GLP)、环孢素A(CsA)灌胃给药,每天1次,连续9 d,用ELISA试剂盒检测小鼠血清中IFN-γ的含量,并分离肿瘤称重.结果 首次发现荷S-180实体瘤小鼠血清中IFN-γ含量在所观察的接种后20 d内随荷瘤时间的延长而升高.GLP(400、200、100 mg/kg)使荷瘤小鼠血清中的IFN-γ含量增加、肿瘤重量减轻,但增加IFN-γ含量以高剂量最为明显,抑瘤效应以中剂量最佳,两者之间相关关系无统计学意义.CsA(20、10、5 mg/kg)可降低荷瘤小鼠血清中IFN-γ的含量,但对肿瘤重量无明显影响,两者之间无相关关系.结论 灵芝多糖增加荷瘤小鼠血清中IFN-γ含量与抑瘤效应无明显相关,环孢素A降低荷瘤小鼠血清中IFN-γ的含量对肿瘤重量无明显影响,提示内源性IFN-γ在抗小鼠S-180移植瘤方面并不是主要的免疫调节因素.     

多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用

目的：探讨多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对荷Lewis肺癌小鼠的抑瘤 效应。 方法：将荷瘤小鼠随机分为对照组、10 Gy照射组、4次2.5 Gy照射组、4次质粒组、质粒 + 10 Gy组和4次(质粒+2.5 Gy）组。小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒后36 h,接受X射线照射,观察各组小鼠治疗后不同时间肿瘤生长速率, 18 d后计数各组小鼠肺转移 结节数, 并称量瘤重。 结果：治疗后12~18 d,4次（质粒+2.5 Gy）组肿瘤生长速率明显低于质粒+10 Gy组（P<0.001）。治疗后18 d,4次（质粒+2.5 Gy）组小鼠肺转移结节数和瘤重明显低于质粒+10 Gy组（分别为P<0.001和P<0.01）。 结论：多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗。     

转γ-干扰素基因防治青光眼术区滤过泡纤维化的实验研究

[目的]评价转γ-干扰素基因、人重组γ-干扰素制剂(IFN-γ)、丝裂霉素(MMC)和生理盐水对家兔青光眼手术滤过区的影响.[方法]选取8只新西兰纯种家兔,行巩膜咬切术后随机分为4组,分别于术后滤过区旁球结膜下注射人重组IFN-γ、生理盐水、重组质粒pIRES-EYFPIFN-γ和术中结膜瓣下放置浸润有0.25 mg/mL MMC的湿棉片.术后观察滤过泡大小和形态,滤过区行病理切片,HE染色及免疫组化分析.[结果]所有兔眼于术后3 d,均有滤过泡形成,于术后2～3周逐渐扁平.其中放置MMC组,滤过泡壁隆起较高,壁薄,色苍白,无血管长入;注射重组人IFN-γ组滤过泡隆起也较高,但周围可见血管,其余二组,滤过泡轻至中度隆起,弥散,注射生理盐水组充血较明显.病理组织切片经HE染色光镜下检查MMC组结膜上皮下结缔组织疏松排列;转pIRES-EYFPIFN-γ组,结膜上皮下结缔组织稀疏,可见隧道样空间;注射IFN-γ组,2眼结膜上皮下结缔组织稀疏,可见隧道样空间,另外2眼与注射生理盐水组相似,表现为结膜上皮下被厚实的纤维组织所覆盖.免疫组化反应,转pIRES-EYFP IFN-γ组结膜下及浅层巩膜细胞胞浆和胶原可见IFN-γ阳性反应;注射IFN-γ组亦可见结膜下及浅层巩膜IFN-γ弱阳性反应;生理盐水和MMC组,呈阴性反应.[结论]直接注射法转IFN-γ基因的家兔Tenon囊和浅层巩膜组织于术后3周的时间内表达IFN-γ.人重组IFN-γ对家兔青光眼术后滤过区纤维的增殖和胶原的产生具有一定程度的抑制作用.人重组IFN-γ对青光眼术后滤过泡的影响与MMC不同.     

扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、免疫微环境的影响

目的研究扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长、免疫微环境的影响。方法将50只清洁级C57BL/6小鼠建立肺癌荷瘤小鼠模型,50只小鼠造模成功48只,其中模型组9只,顺铂组9只,扶正抑瘤汤高、中、低剂量组均10只。扶正抑瘤汤高、中、低剂量组小鼠分别灌胃24 g/kg、12 g/kg、6 g/kg扶正抑瘤汤;顺铂组腹腔注射4 mg/kg顺铂;模型组灌胃等体积生理盐水。比较各组小鼠肿瘤生长抑制率,各组小鼠血清TGF-β、白细胞介素2(IL-2)、干扰素(IFN-γ)浓度,比较各组小鼠肿瘤组织中及程序性死亡受体1(PD-L1)、CD4CD25+Treg细胞表达情况,Bax、Bcl-2蛋白表达水平及Bax、Bcl-2 mRNA相对表达量。结果各组小鼠肿瘤生长抑制率、IL-2、IFN-γ浓度及肿瘤组织中Bax mRNA、Bax蛋白相对表达水平均高于模型组,差异有统计学意义(P 0.05);各组小鼠血清TGF-β浓度及PD-L1表达、CD4+CD25+Treg细胞占比、Bcl-2 mRNA、Bcl-2蛋白相对表达水平均低于模型组,差异有统计学意义(P 0.05);扶正抑瘤汤的作用呈剂量依赖性,且扶正抑瘤汤高剂量组优于顺铂组。结论扶正抑瘤汤对肺癌荷瘤小鼠肿瘤生长具有抑制作用,可改善肿瘤免疫微环境。     

重组EGFR-γFc融合DNA疫苗联合热疗抗肿瘤免疫的实验研究

目的构建EGFR-γFc融合DNA疫苗并观察其联合41℃热疗对小鼠移植肿瘤的抑制作用。方法以异种同源鸡EGFR膜外部分与IgG的γFc段的基因片段为基础构建真核表达质粒PVAX1／cEGFR-γFc,免疫荧光法检测融合蛋白在真核细胞中的表达,随后将Lewis肺癌移植瘤小鼠随机分为疫苗组、热疗组、合并组和对照组。疫苗组于每只小鼠双侧股四头肌注射100Ixg重组质粒,每5d重复1次,共3次;热疗组对荷瘤小鼠行局部41℃热疗,每5d重复1次,共3次;联合组小鼠按疫苗组小鼠的同样方法注射质粒后同时行局部热疗;对照组小鼠注射生理盐水。末次处理5d后ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞上清液中细胞因子IL-2和IFN-γ的水平,流式细胞仪测定脾细胞淋巴细胞亚群;观察小鼠荷瘤后的生存率;末次处理后14d部分成瘤动物处死,取出瘤体称重,计算抑瘤率。结果联合组小鼠脾淋巴细胞TH1型细胞因子IL-2和IFN-γ浓度较其他各组明显升高（P〈0．01）,CD8^＋T淋巴细胞数目增加（P〈0．01）,接瘤后14d联合组平均瘤重低于其他各组（P〈0．01）,抑瘤率达70％,接瘤后30d联合组动物生存率也高于其他各组。结论41℃热疗可能通过细胞免疫增强EGFR靶向DNA疫苗的抗肿瘤效果,热疗联合EGFR靶向DNA疫苗可能是一种有希望的抗肿瘤途径。     

188Re-Herceptin放免导向治疗鼻咽癌裸鼠模型的实验研究

目的应用，^188Re标记针对HER2／neu癌基因表达蛋白P185^HER2的人源化单抗Herceptin瘤内给药治疗HER2／neu过度表达的鼻咽癌裸鼠移植瘤，探讨^188Re—Herceptin作为肿瘤化疗和放免治疗双重治疗药物的可行性。方法^188Re标记Herceptin采用直接标记法。荷人鼻咽癌裸鼠37只，分为5组，分别经瘤内注射^188Re—Herceptin、^188Re-鼠IgG、^188Re、生理盐水和静脉注射,SSRe—Herceptin．2 d后每组各取3只作组织分布测定，其余连续观察4周，比较各组肿瘤体积及其生长抑制率，评估其治疗效应和反应。结果给药2d后，^188Re—Herceptin瘤内注射组中肿瘤组织放射性摄取为11．53％ID／g，是^188Re—Herceptin静脉注射组的4倍（2．79％ID／g），而血、肝、肾等正常组织摄取均〈1％ID／g，明显低于^R—Herceptin静脉注射组（〉1．5％ID／g）。而^188Re．nmlgG瘤内注射组和,SSRe瘤内注射组肿瘤组织和正常组织的放射性摄取相差不大，约为1％ID／g。放免治疗结果显示瘤内注射^188Re—Herceptin对人鼻咽癌裸鼠移植瘤具有较强抑制作用，4周后肿瘤生长抑制率高于静脉注射组，分别为58．7％和48．8％，在放射性活度为11．1MBq时瘤内给药抑瘤效果优于静脉给药。结论采用瘤内注射^188Re—Herceptin导向治疗HER2／neu过度表达的鼻咽癌可显著抑制人鼻咽癌裸鼠模型肿瘤的生长，为临床鼻咽癌的治疗提供一种较为有效的局部治疗方法。     

Therapeutic antitumor response to cervical cancer in mice immunized with U14 v accines transfected with costimulatory B7 gene

Objective To investigate the effect of U14 vaccine transfected with the B7 gene in inducin g antitumor immune response to murine cervical carcinoma in Chinese 615-strain mice.Methods A recombinant retroviral plasmid vector expressing mouse B7-1 gene (pLNSX-mB7) was transfected into 615-strain mouse cervical carcinoma cell line No. 14 (U1 4) by electroporation to set up a highly-expressed mB7-1 U14 cell clonal strai n (B7(+)U14). In vivo experiments: (1) B7(+)U14 vaccine was primed to protect t he 615-strain mice against U14 re-challenge. (2) B7(+)U14 vaccine was injecte d into tumor-bearing mice with different tumor sizes. Lifetimes and tumor s izes were recorded. In vitro cytotoxicity assay: Mice were immunized with B 7(+)U14 or U14 vaccine and 2 weeks later, spleen cells of those mice were cultur ed for 2 days. The cytotoxicity of these cells against U14 was detected by 5-d iphenyl tetrazolium bromide assay.Results We obtained several B7-1 high expression clonal U14 lines. In vivo experiment, we did not find tumor growing in 3 of the 6 mice primed by B7(+)U14 vaccine during their entire life after re-challenge with U14. The other 3 mice develo ped tumors and their average survival time was longer than that of the control g roup (P&lt;0.01). All 6 mice grew tumors in the control group. When the transplanted tumors became palpable, the mice were randomly divided into 3 group s to be injected with B7(+)U14 vaccine. It was effective for tumor-bearing mic e only when the tumor diameters were &lt;3 mm. When the diameters were ≥3 mm, it was not efficacious to inject B7(+)U14 vaccine (P&lt;0.05). In vitro cytotoxicity assay, cytotoxic T lymphocytes induced by B7(+)U14 vaccine h ad a high er cytotoxicity against U14 than that induced by U14 vaccine (F=310.8, P &lt;0.001).Conclusions Vaccines of cervical cancer cells transfected with the costimulatory molecule B7 gene can induce antitumor immune protection in host mice against U14 re-challe nge. This treatment may cure part of the tumor-bearing mice but be restricted by tumor size. The results suggest that transfecting the B7 gene into cervical cancer as a cell vaccine may be an efficient supplementary method to treat cervi cal cancer after operation.     

绵羊李斯特菌为载体的结核多阶段T细胞表位疫苗的构建及评价

  目的  构建以绵羊李斯特菌（Listerria ivanovii,LI）为载体的表达结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）特征性抗原蛋白的疫苗候选菌株,并评价其生物安全性和免疫效果。  方法  将MTB早期感染、潜伏感染和复发阶段的4种抗原基因的细胞表位串联形成融合抗原基因,即多阶段结核杆菌抗原基因,命名为msv。将msv插入含有LI同源序列的打靶质粒,利用同源重组技术构建基因组整合msv抗原基因的重组LI菌株。观察重组菌株的体外生长情况,通过Western blot验证靶抗原蛋白的表达情况,测定重组菌株对C57BL/6小鼠的半数致死量（50% lethal dose,LD₅₀）,以0.1×LD₅₀为免疫剂量,通过尾静脉接种小鼠,通过接种前及接种后1、2、3、5、7、14 d的血清谷丙转氨酶（ALT）水平、脏器载菌量和脏器病理切片评价疫苗候选株的安全性。为测定疫苗候选株的免疫效果,另取3组小鼠分别尾静脉免疫LI-msv、LI、NS,免疫后第9天制备脾悬液,流式细胞术检测分泌干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-2（IL-2）等细胞因子的CD4+ T细胞和CD8+ T细胞水平。  结果  成功构建能表达多阶段结核杆菌抗原的疫苗候选株LI-msv。LI-msv 对C57BL/6小鼠的LD₅₀为3.3×108 CFU/只。通过尾静脉接种小鼠后,LI-msv主要在小鼠肝脏和脾脏内短期繁殖,7 d后能被机体清除,对肝、脾的病理损伤时间短且可恢复;流式细胞术检测结果表明接种LI-msv的小鼠脾淋巴细胞分化出了特异的IFN-γ+ CD4+ T细胞和IFN-γ+ CD8+ T细胞,阳性细胞比率较相应载体对照组和生理盐水对照组高（P<0.005）;特异性TNF-α+ CD4+ T细胞比率高于相应载体对照组（P<0.01）和生理盐水对照组（P<0.005）,TNF-α+ CD8+ T细胞比率高于生理盐水对照组（P<0.005）。  结论  成功构建了一株以LI为载体的表达结核杆菌多阶段抗原的疫苗候选株。该菌株具有生物安全性,且能诱导一定的特异性细胞免疫应答,有望作为结核疫苗候选株进行深入研究。     

Anti-tumor effects of pNEgr-mIL-12 recombinant plasmid induced by X-irradiation and its mechanisms

Objective To study the effect of gene radiotherapy combining injection of recombinant plasmid pNEgr-mIL-12 with local X-irradiation on cancer growth and to elucidate the mechanisms of tumor inhibition. Methods Alkaline lysis was used to extract the plasmid and polyethylene glycol 8000 (PEG 8000) was applied for further purification of plasmids. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect the expression of IL-12 protein. C57BL/6J mice were subcutaneously inoculated with B16 melanoma cells and the plasmid was injected directly into the tumor. Gene-radiotherapy combining pNEgr-mIL-12 recombinant plasmid with X-irradiation was given three times to C57BL/6J mice bearing B16 melanoma. Changes in immunologic parameters of tumor-bearing mice were detected with relevant immunologic assays. Results Results showed a significant decrease in tumor growth rate (P<0.05-0.001) after 3 times of gene-radiotherapy with IL-12 and X-irradiation. Immunologic studies showed a significant increase in CTL and NK cytolytic activity (P<0.05-0.001) and an up-regulated secretion of IFN-γ and TNF-α (P<0.01-0.001). Moreover, the expression of mIL-12 in B16 melanoma cells of the treated tumor-bearing mice was found to be higher than that of control. Conclusion pNEgr-mIL-12 plasmid combined with X-irradiation can increase tumor control and the mechanism of increased tumor inhibition is related to the enhancement of anticancer immunity in tumor-bearing mice.     

重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌荷瘤裸鼠的治疗研究

目的 探讨重组质粒PGL3-DF3-DTA对乳腺癌移植模型的治疗作用.方法 裸鼠皮下接种MCF-7人乳腺癌细胞,建立人乳腺癌移植模型.用质粒PGL3-DF3-DTA,质粒PGL3-DF3和生理盐水分别给裸鼠移植瘤瘤内多点注射.观察肿瘤大小和组织形态学变化,并用流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡改变.结果 重组质粒PGL3-DF3-DTA组裸鼠乳腺癌生长受到明显抑制,抑制率为50.08%,肿瘤细胞的凋亡率增加.结论 重组质粒PGL3-DF3-DTA对裸鼠人乳腺癌移植瘤的生长具有明显抑制作用,为乳腺癌基因治疗提供了新的方法.     

前列腺癌冷冻消融对小鼠机体抗肿瘤免疫反应的影响

目的 探讨前列腺癌冷冻消融后对机体抗肿瘤免疫反应的影响.方法 复制前列腺癌皮下移植瘤.将动物模型随机分为:对照组(A组)、手术切除组(B组)、冷冻消融组(C组).分别于治疗前、治疗后7、14、21 d取外周血、引流淋巴结、脾脏.ELISA法检测外周血干扰素(IFN)γ、白细胞介素(IL)4浓度,以IFN-γ/IL-4计算Th1/Th2比值;分离引流淋巴结、脾脏淋巴细胞,ELISPOT试验检测CD4+Th肿瘤特异性IFN-γ的分泌情况,LDH释放试验检测CD8+CTL肿瘤杀伤活性.观察各组动物肿瘤转移情况.结果 治疗后7 d,A、B、C组外周血Th1/Th2比值分别为:4.97±0.31,10.07±0.62,13.71±0.57(P<0.05).引流淋巴结每10～6个CD4+Th肿瘤特异性IFN-γ~+细胞数分别为22.3±1.0、24.0±1.2、243.4±46.2(P<0.05),引流淋巴结CD8+CTL特异杀伤活性分别为:(14.6±1.1)%、(15.2±0.8)%、(62.6±2.3)%(P<0.05).但各观察时间点A、B、C组脾脏Th细胞IFN-γ分泌及CTL细胞杀伤活性均无明显变化.术后28 d A、B、C淋巴结转移率分别为100%、80%、40%,肺转移率均为100%.结论 冷冻消融治疗前列腺癌可诱导机体Th1抗肿瘤免疫优势,并诱导引流淋巴结T细胞肿瘤特异性免疫反应,但存在一定局限性,尚需更深入研究.     

NMDA受体和NOS参与骨癌痛小鼠吗啡耐受的形成

目的：制备骨癌痛模型，并在骨癌痛模型上模拟慢性吗啡耐受的产生，以探讨癌痛吗啡耐受的表现及机制。方法：选用40只成年雄性C57BL/6小鼠，其中20只接种Lewis肺癌细胞2×106个建立骨癌痛模型，于接种后的第15天将骨癌痛组再随机分为模型吗啡组与模型盐水组。另外20只正常小鼠完全随机分为正常吗啡组与正常盐水组。模型吗啡组和正常吗啡组小鼠皮下注射吗啡10 mg/kg，每天2次, 连续7 d, 建立慢性吗啡耐受模型，模型盐水组和正常盐水组按体质量给予等体积生理盐水。从给药的第1天开始，隔天上午给药后1 h采用机械触痛法测量小鼠的50%缩足反应阈值，以此机械触痛阈值作为疼痛指标。第7天处死小鼠分别作脊髓NMDA受体亚单位1型(NMDAR1)免疫组织化学检测和脊髓一氧化氮合酶（NOS）的定量测定。 结果：第1,3,5,7天给药后1 h行为学测试结果发现，模型盐水组和正常盐水组小鼠整个过程中50%缩足反应阈值没有明显变化。模型吗啡组第1，3，5天50%缩足反应阈值与模型盐水组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)；模型吗啡组第5天的50%缩足反应阈值与第1, 3天比较明显变小(P＜0.05)；第7天模型吗啡组与模型盐水组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。正常吗啡组第1，3，5天50%缩足反应阈值与正常盐水组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)；第7天正常吗啡组与正常盐水组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。模型吗啡组的NMDAR1染色灰度值与正常吗啡组、正常盐水组及模型盐水组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)；模型盐水组的NMDAR1染色灰度值与正常盐水组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。模型吗啡组、模型盐水组以及正常吗啡组的积分光密度(IOD)值分别与正常盐水组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)；模型吗啡组的IOD值与模型盐水组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。模型吗啡组、模型盐水组以及正常吗啡组脊髓NOS含量与正常盐水组相比，差异均有统计学意义(P＜0.05)，模型吗啡组脊髓NOS含量与模型盐水组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论： 脊髓NMDA受体和NOS可能在癌痛模型吗啡耐受中起重要作用。     

E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究

目的：探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究。 方法：取对数生长期的CNE-2Z细胞5×105 /0.2 mL,接种于4周龄左右裸鼠右前肢腋部皮下致瘤,第7天裸鼠皮下肿瘤长至直径0.6～0.8 cm时,随机分为6组(n=10): PBS组, Ad-β-gal组,放射组,Ad-β-gal+放射组,Ad-E1A组,Ad-E1A+放射组。Ad-β-gal组/Ad-E1A组在第2周开始给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,放射组在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。Ad-β-gal+放射组/Ad-E1A＋放射组在第2周开始,给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/ 50μL 的Ad-E1A/ Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,在第3周给予6MV-X照射,每天2 Gy,连续5 d。第1次治疗后,每隔4天用卡尺测量1次肿瘤的体积,记录其直径,裸鼠的生存时间。当肿瘤的直径超过2 cm时,处死裸鼠,分离肿瘤组织,采用免疫组织化学方法分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和CD34表达,TUNEL分析细胞凋亡。 结果：Ad-E1A+放射组较其他组能明显延缓移植瘤生长时间, Ad-E1A+放射组裸鼠的肿瘤平均体积比单独放射组小4.7倍,比单独用Ad-E1A组的小5.3倍。Ad-E1A+放射组的裸鼠生存率显著高于其他治疗组。Ad-E1A+放射组的VEGF蛋白表达和微血管密度较其他各组明显下降（P＜0.01)。TUNEL分析结果显示Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组及放射组的肿瘤组织内均可明显观察到凋亡细胞。并且Ad-E1A+放射组肿瘤细胞凋亡数目明显高于Ad-E1A组或者放射组。结论：E1A基因通过抑制肿瘤血管的形成和诱导肿瘤细胞的凋亡来提高人鼻咽癌细胞对放射的敏感性。     

瘤体注射IL-2重组腺病毒基因治疗小鼠胶质母细胞瘤及其免疫机制的初步探讨

目的：观察瘤体直接注射IL－2重组腺病毒对G422皮下荷瘤的治疗作用,对体内基因转染效率及治疗的免疫机制进行初步分析。方法：将LacZ,IL-2重组腺病毒直接注射到皮下接种的G422胶质母细胞瘤瘤体,X－gal染色检测基因转染的效率,观察肿瘤的大小和荷瘤小鼠的存活期,采用4h^51Cr释放法检测荷瘤小鼠脾细胞诱导的NK、LAK、CTL的杀伤活性,对治疗后的肿瘤进行常规病理分析。结果：采用瘤体注射腺病毒具有较高的体内基因转染效率,瘤体注射IL－2重组腺病毒对皮下建立的胶质母细胞瘤有一定的治疗作用,肿瘤的生长受抑制,荷瘤小鼠的存活期显延长,但没有长期存活小鼠。IL－2基因治疗组小鼠脾细胞的LAK、CTL杀伤活性显增强,肿瘤局部出现更多的坏死和炎性浸润细胞。结论：采用瘤体直接注射IL－2重组腺病毒对胶质母细胞瘤皮下荷瘤有治疗,其机制可能是增强了宿主的局部和全身抗肿瘤免疫反应。     

Construction of a recombinant plasmid harbouring the rhoptry protein 1 gene of Toxoplasma gondii and preliminary observations on DNA immunity

Objective To observe the immune responses elicited in BALB/c mice by a DNA vaccine. A ge ne encoding rhoptry protein 1 (ROP1) from Toxoplasma gondii (T. gondii) was cloned into vector pcDNA3.Methods Amplifyied gene fragments coding for ROP1 from the genomic DNA of T.gondii ZS2 were inserted into cloning vector, pUC18, and sub-cloned into pcDNA3. Mice wer e injected at a dosage of 100 μg recombinant plasmid DNA by intramuscular inje ction and boosted after 2 weeks. pcDNA3 and normal saline were used as control . 30, 50 and 70 days after the second immunization, NK cell activity, T lympho cyte proliferation and sub-clusters and serum IgG antibody were assayed.Results The specific gene fragment coding for ROP1 was amplified and a pcROP1 recombinan t was constructed. At 30 days after immunization, the spleens of the mice were obviously enlarged evidently. NKC activity and the proliferation of spleen T ly mphocytes seen on MTT assay were higher in pcROP1 group than in the controls. T he number of CD4(+) T cells exhibited no obvious increase compared with that of the control, but CD8(+) T cells were obviously increased (P&lt;0.05). At 90 d ays after vaccination, the titer of IgG antibody in the serum of vaccinated mice was positive (1∶100).Conclusion pcROP1 was constructed and it could elicit both cellular and humoral immune r esponses in immunized mice.