还原型谷胱甘肽对新生鼠高氧肺纤维化早期干预的研究

目的研究还原型谷胱甘肽(GSH)对新生鼠高氧肺纤维化的影响,并观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在高氧肺纤维化中的作用.方法将足月SD新生大鼠随机分为:Ⅰ组空气对照组,Ⅱ组高氧组,Ⅲ组高氧 GSH组.观察及检测高氧暴露3、7、14、28d时各组肺组织病理改变、TGF-β1免疫组织化学染色.结果Ⅱ组3、7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血、肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻,而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化;Ⅲ组与Ⅰ组肺组织病理改变类似,Ⅲ组肺组织的TGF-β1表达呈弱阳性,无明显纤维化反应,两组无显著差异.结论 TGF-β1在高氧性肺纤维化中可能起了重要作用,GSH早期干预高氧性肺纤维有一定作用,可以明显减轻肺纤维化的发生.     

转化生长因子-β_1在新生大鼠高浓度氧致肺损伤中的作用研究

目的 观察应用外源性抗转化生长因子-β1(TGF-β1)抗体作用下TGF -β1在新生鼠高浓度氧(高氧,>95%O2)致肺损伤的表达.方法 将足月SD新生大鼠随机分为3组:空气对照组(Ⅰ组),高氧(>95%O2)组(Ⅱ组),高氧(>95%O2)+抗TGF-β1抗体0.4mg/kg组(Ⅲ组).每组20只,观察及检测高氧暴露3、7、14和28d时各组动物肺组织病理改变、TGF-β1免疫组织化学染色.结果 Ⅱ组3和7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血、肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻,而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化;Ⅲ组3和7d时仍有轻度炎症反应,14和28d无明显成纤维细胞增生及胶原生成,未形成肺纤维化,Ⅲ组各时相点TGF-β1的表达明显减弱,与Ⅰ组比较差异无统计学意义.结论 新生鼠持续吸入高氧后可导致急、慢性肺损伤.高氧暴露可刺激肺部产生过量的TGF-β1,提示TGF-β1在肺纤维化过程中起重要作用;高氧暴露时给予外源性抗TGF-β1抗体对新生鼠高氧暴露有明显保护作用,可减轻高氧急性肺损伤,能有效阻断高氧肺纤维化损伤的发生、发展,从而减轻肺纤维化损伤.     

博莱霉素致小鼠肺纤维化中解整合素-金属蛋白酶17表达水平的研究

目的 观察博莱霉素致小鼠肺间质纤维化中解整合素-金属蛋白酶17（a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17）表达水平变化与转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）之间的相关性,以阐明肺纤维化的发病机制.方法 60只小白鼠随机分为6组,每组10只.正常对照组经气管内一次性注入0.9％氯化钠注射液（5 mg/kg）.模型组5组分别为注射博莱霉素3d、7d、14 d、21 d、28 d组,经气管内一次性注入博莱霉素（5 mg/kg）,分别在规定的时间点取肺组织,通过Masson胶原染色评价肺纤维化的程度,用免疫组织化学染色和蛋白质印迹（Western blotting）方法检测ADAM17和TGF-β1在肺组织的蛋白水平表达,RT-PCR检测ADAM17和TGF-β1mRNA的表达.结果 博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型成功,模型组病理呈不同程度的胶原沉积和成纤维细胞增生.小鼠纤维化程度自7d组开始均高于正常对照组（P＜0.01）.免疫组化结果示,TGF-β1、ADAM17在对照组呈弱表达,模型组表达量高于对照组（P＜0.01）,且14 d时表达量最高.Western blotting和RT-PCR结果与免疫组化结果一致.相关性分析结果示,TGF-β1、ADAM17在免疫组化、Western blotting和RT-PCR中的相关系数r分别为0.777、0.808、0.906（P＜0.01）,表明二者呈正相关.结论 ADAM17在博莱霉素致小鼠肺间质纤维化过程中表达水平上调,ADAM17可能通过上调TGF-β1发挥致纤维化的作用.     

γ-干扰素对新生大鼠高氧肺纤维化的影响

目的研究γ-干扰素(IFN-γ)对新生大鼠高氧肺损伤的影响,以观察转化生长因子transforming growth factor-β(TGF-β)在新生大鼠高氧肺纤维化中的作用.方法新生大鼠随机分为:Ⅰ组-高氧对照组,Ⅱ组-高氧 IFN-γ组,Ⅲ组-空气对照组.检测暴露7d、14d、21d及28d时各组的肺组织病理学变化,肺组织TGF-β免疫组织化学染色.结果 7d时高氧对照组表现为明显的急性炎症,肺泡间隔轻度增宽,TGF-β表达强阳性;28d时出现明显的纤维化改变;高氧 IFN-γ组与空气对照组的肺组织病理改变类似,TGF-β表达弱阳性,无明显纤维增生反应.结论 IFN-γ减轻高氧诱导的纤维增生及肺泡发育与结构异常,TGF-β在高氧诱导的肺纤维化损伤过程中可能起了重要作用.     

益气活血法对肺纤维化动物模型细胞因子表达的影响

目的：探讨益气活血颗粒剂对纤维化肺组织TGF-β1、TNF-α表达的影响。方法：20只Wistar雄性大鼠随机分为模型组、中药治疗组、激素组及正常对照组4组，采用BLEMA5建立大鼠肺间质纤维化模型，中药治疗组给予益气活血颗粒剂（250mg／kg）灌胃，激素组应用氢化考的松（25mg/kg）肌注。观察肺组织HE、VG染色病理改变，采用核酸原位杂交法检测TGF-β1、TNF-α表达量。结果：模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重，且其胶原纤维沉积较多，TGF-β1、TNF-α的表达增多；而中药治疗组肺泡炎和纤维化程度较轻，胶原沉积明显减少，TTGF-β1、TNF-α表达减少。激素组纤维化程度比模型组减轻．但比中药组重，TGF-β1、TNF-α表达减少不明显。结论：益气活血颗粒剂通过下调TGF-β1、TNF-α的表达而明显减轻了肺间质纤维化程度。     

雾化吸入布地奈德对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用

目的:观察雾化吸入布地奈德对大鼠肺纤维化的干预作用并探讨其作用机制.方法:45只Wistar雌性大鼠随机分为生理盐水对照组、肺纤维化模型组、布地奈德干预组,每组15只.利用博菜霉素建立肺纤维化模型,24h后给予布地奈德干预,并分别于7、14、28天处死动物,观察其肺组织病理变化、肺系数、肺组织胶原含量及支气管肺泡灌洗液(BALF)转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达.结果:与模型组比较,布地奈德组的肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻,肺组织胶原含量、BALF中TGF-β1表达水平均降低(P<0.05).结论:雾化吸入布地奈德能够抑制致肺纤维化因素导致的肺部正常组织结构的破坏及肺组织胶原的沉积,从而有效阻止肺纤维化的进展.     

化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化时Smad7和TGF-β表达的影响

目的：探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组，采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5mg/kg)建立肺间质纤维化模型，对照组注入生理盐水（0.25ml/只），从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃（13410mg/kg）；对照组、模型组给予生理盐水灌胃（2ml/只）；激素组给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射（25mg/kg），于给药后的第14、28天分别处死，称取肺重计算肺系数；取肺组织行苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化情况；免疫组化法测定肺组织中TGF-β、Smad7蛋白的表达情况。结果:进入结果分析的大鼠44只：①大鼠纤维化程度比较：模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重，且胶原纤维沉积较多；中药组可见炎性细胞较少，肺泡结构基本正常，肺泡炎与肺纤维化较轻；激素组肺泡炎及纤维化减轻不明显。②TGF-β、Smad7蛋白表达量比较：中药组TGF-β蛋白表达明显低于模型组和激素组；Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组。结论:化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度，可能通过促进Smad7蛋白的表达从而反馈抑制TGF-β蛋白的表达发挥作用。     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺组织肾素-血管紧张素系统和TGF-1β的动态变化及卡托普利的干预机制

目的 观察高氧致慢性肺疾病(CLD)新生大鼠肺组织血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)的动态变化及卡托普利的保护机制.方法 足月新生Wistar大鼠240只,随机分为4组,每组60只.模型组、盐水对照组及卡托普利治疗组将足月新生Wistar大鼠(连同母鼠)置于氧舱内持续吸入高浓度氧(FiO2:0.9)21 d造成高氧肺损伤模型,空气对照组吸入空气;卡托普利治疗组于生后7 d起经胃管灌服卡托普利30 mg·kg-1·d-1,盐水对照组每天经胃管灌服等量生理盐水.每组分别于实验开始后的第1,3,7,14,21 d随机各选取6只麻醉后处死.采用酶联免疫吸附法测定肺组织TGF-β1的含量,用日产7170全自动生化分析仪测定ACE活性,用放免法测定Ang II的含量.采用RT-PCR检测肺组织ACE、AngⅡ、TGF-β1 mRNA表达的动态变化并同时观察肺组织形态学变化.结果 4组肺组织ACE、AngⅡ和TGF-β1的含量及mRNA表达在实验后1,3.7 d差异无统计学意义(P>0.05);模型组、盐水对照组14 d明显升高,21 d达高峰,与空气对照组比较差异显著(P<0.05或0.01);卡托普利治疗组14和21 d与模型组、盐水对照组比较明显降低(P<0.05或0.01),但仍高于空气对照组(P<0.05).模型组、盐水对照组实验后1d肺组织形态学同空气对照组,14 d出现肺组织纤维化改变,21 d出现严重纤维化.卡托普利治疗组肺组织纤维化病变明显减轻.结论 高氧致CLD新生大鼠肺组织ACE、AngⅡ、TGF-β1含量及mRNA表达在高氧后14和21 d明显增高,同时肺组织出现纤维化改变,应用卡托普利干预后上述指标明显低于模型组及盐水对照组,肺纤维化病变明显减轻,表明卡托普利对高氧肺损伤具有一定的保护作用.     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

维甲酸对新生大鼠高氧性肺损伤转化生长因子-β1 表达的影响

目的:探讨高氧性肺损伤新生大鼠肺损伤过程中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达情况,并观察维甲酸(retinoic acid,RA)的干预效果,以期为临床防治高氧性肺损伤提供一条新的有效途径.方法:80只出生12h内的清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠作为研究对象.随机分成4组(每组20只):A组:空气对照组;B组:空气 RA组;C组:高氧组;D组:高氧 RA组.14天时观察大鼠的一般状况、体质量、肺湿重/干重值;光镜观察各组大鼠肺组织病理形态学;RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA水平;免疫组织化学染色方法检测TGF-β1蛋白表达.结果:14天时高氧组体质量明显减轻,肺组织肺湿重/干重比值、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平显著高于其他各组(P<0.05);高氧 RA组14天时病理改变减轻,肺湿重/干重值、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平较高氧组明显降低(P<0.05),与空气对照组及空气 RA组相比差异无显著性(P>0.05).结论:高氧性肺损伤新生大鼠TGF-β1表达增加,RA早期干预可以通过下调TGF-β1的表达对高氧性肺损伤具有改善作用.