差别PCR技术检测乳腺癌c-erbB-2癌基因扩增的研究

目的:探讨乳腺癌c-erbB-2癌基因扩增的临床意义.方法:应用差别PCR技术检测50例原发性乳腺癌c-erbB-2癌基因的扩增情况.结果:乳腺癌组织中c-erbB-2癌基因的扩增率为44.0%(22/50),33例有腋淋巴结转移者乳腺癌组织c-erbB-2阳性表达率(54.5%)高于17例无腋淋巴结转移者(23.5%),乳腺癌组织中c-erbB-2癌基因扩增与患者年龄、肿块大小、分化程度、病理类型、ER及PR无显著相关性.结论: c-erbB-2癌基因扩增对乳腺癌的治疗、预后判断具有重要的临床应用意义.     

肺癌K-ras基因突变的二步PCR检测及其临床应用

目的　探讨高敏感性Kras基因点突变检测方法在肺癌临床的应用价值。方法　应用二步(巢式)聚合酶链反应结合限制性片断多态性分析方法(PCRRFLP)检测临床肺癌标本Kras基因第12密码子点突变。结果　二步PCRRFLP法检测Kras点突变的敏感性较一步法提高约64倍。55例肺癌石蜡包埋标本中,Kras点突变检出率为47.3%;对另67例纤支镜标本进行基因检测,以Kras突变进行基因诊断的敏感性为70.9%,特异性为91.7%。结论　二步PCRRFLP法对临床肺癌标本Kras点突变检出率较高,对肺癌有一定的辅助诊断价值     

用PCR方法检测基因缺失或杂合性丢失的初步探讨

对ＰＣＲ方法用于检测基因的缺失或杂合性丢失进行了初步探讨。通过选择ＰＣＲ循环数、选择内对照及筛选标本等手段，采用ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测ＧＳＨ克隆７在鼻咽癌中的缺失状态，成功地检测到了１例标本中存在的缺失。这为ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测基因的缺失或杂合性丢失的应用提供了可借鉴的实验手段和经验。     

用PCR方法检测基因缺失或杂合性丢失的初步探讨

对ＰＣＲ方法用于检测基因的缺失或杂合性丢失进行了初步探讨，通过选择ＰＣＲ循环数，选择内对照筛选标本等手段，采用ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测ＧＳＨ克隆７在鼻咽癌中的缺失状态，成功地检测到了１例标本中的存在缺失，这为ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ技术检测基因缺失或杂合性丢失的应用提供了可借鉴的实验手段和经验。     

系列PCR方法检测淋巴细胞白血病克隆性基因重排的选择应用

以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ克隆性基因重排。结果显示：多重ＰＣＲ和１次ＰＣＲ的敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０￣（－５）～１０￣（－６）水平。ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排阳性率为６７．２％和６２．０％；半巢式ＰＣＲ检测ＩｇＨ重排阳性率为７０．７％。上述结果表明：多重ＰＣＲ可同时检测两对目的基因，适于初治病例检测，而对缓解病例的检测则需采用敏感度较高的半巢式ＰＣＲ方法。     

应用PCR方法检测头颈部肿瘤病人EB病毒的研究

多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）方法对一组头颈部肿瘤病人口咽部含氵敕液中Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ进行测定。结果表明：恶性肿瘤如鼻咽癌，恶性淋巴瘤，喉癌，鼻腔鼻窦癌，甲状腺癌等检出阳性率为７４．４７％；良性肿瘤如喉乳头状瘤，甲状腺瘤等检出阳性率为１３．５１％；对照组为鼻、咽、喉慢性炎症病人，仅１例结果阳性（７．１４％）。结果提示：ＥＢＶ可能参与了这些癌肿的发病。     

巢式PCR法检测弓形虫的应用研究

目的 调查山东省商品肉弓形虫污染和动物弓形虫感染情况，并进行SAG2分型研究，分析商业肉制品在弓形虫传播中的作用。方法自由市场采集商品内，用巢式PCR方法检测弓形虫DNA，阳性经纯化PCR产物，进行SAG2临床分型研究。结果共检测商品内89份，阳性22份，阳性率为24．72％。其中，猪肉标本56份，16份阳性，阳性率为28．57％，Ⅰ型13份，Ⅱ型1份，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染1份，未能定型1份；羊肉标本33份，6份阳性，阳性率为18.18％，Ⅰ型5份，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染1份。22份阳性标本中单纯Ⅰ型占81、82％，Ⅱ型与Ⅰ型混合感染占9．09％，Ⅲ型未能检测到。1份可疑病人血标本阳性，为Ⅰ型。结论肉类弓形虫污染率很高，以Ⅰ型为主，是人类感染的重要来源。家庭食品加工过程中生熟不分与人们对食品鲜美的追求造成误食包囊感染，可能是造成人类弓形虫感染率大幅升高的最为重要的原因之一。     

人脑肿瘤c-erb B基因扩增的研究

以 erb B 基因(0.5 kb)为探针,用斑点吸印转移和杂交的方法对21例中枢神经系统肿瘤进行了 erb B 基因扩增的研究。结果显示7例脑膜瘤标本均存在 erb B 基因的扩增,扩增倍数为16～64倍;14例脑胶质瘤(Ⅲ或Ⅳ级)中10例出现了 erb B 基因的扩增,扩增倍数为16～32倍。该结果提示 erb B 基因的扩增可能在人肿瘤的形成中起重要作用,且其扩增程度可能与肿瘤的恶性度和临床预后有关。     

胃癌高表达基因erk的PCR扩增,克隆和鉴定

对在胃癌高表达的EPH家族基因erk胞外的配体结合区基因扩增及克隆．方法：从胃癌患者手术切除标本中提取RNA，反转录为cDNA，以计算机辅助分析设计并合成引物进行RT－PCR，并将扩增片段克隆入pUC19质粒，用酶切及PCR方法筛选鉴定阳性克隆．结果：RT－PCR扩增片段与设计相符，且特异性好，无非特异产物出现，表明所设计引物符合要求．酶切及巢式PCR、PCR－RFLP方法证明克隆片段正确插入pUC19的HindIII和BamHI位点，并将重组克隆命名为pGE42．结论；克隆的完成为进一步研究该基因在胃癌的发生中的作用，寻找其胞外配体及进行表达产物的细胞定位等工作打下基础．     

用试管PCR法和玻片PCR法检测SRSV感染细胞中的病毒顺序

多聚酶链反应(PCR)作为一种快速灵敏的分子生物学实验手段正日益引起科研及实践工作者的重视。传统的PCR常需先提得核酸,再对核酸样品进行扩增。我们采用的试管PCR法和玻片PCR法可省去提取核酸的步骤,而直接从细胞开始,对小鼠SRS腹水瘤病毒基因进行扩增,灵敏度达到1×10~5个细胞。     

应用ARMS方法检测苯丙酮尿症致病基因的研究

应用ＡＲＭＳ方法对１６个中国ＰＫＵ家庭进行了常见ＰＡＨ致病基因的筛查。在３２个突变位点中，突变基因（点突变）检出率分别为：Ｅｘｏｎ７突变为５６．２５％、Ｅｘｏｎ６突变为１２．５％，Ｅｘｏｎ１２为６．２５％、Ｅｘｏｎ３为３．１３％和ｉｎｔｒｏｎ４切拼受端突变为９．３８％。由于该方法对突变的检出率已达到８７．５％、且简便、快速、不应用放射性同位素，故可作为产前诊断ＰＫＵ的一种手段。     

银染PCR-SSCP方法检测人9种恶性淋巴瘤细胞系p53抑癌基因的突变

用银染PCR-SSCP方法检测人9种恶性淋巴瘤细胞系P53基因第5、6、7外显子的突变。检出SU-DHL-1，SU-DHL-4，SU-DHL-6，SU-DHL-8，SU-DHL-10，8392等6种细胞系中有P53基因的点突变。表明在恶性淋巴瘤细胞系中p53基因的突变发生率较高，是其发生发展的重要原因之一。且非同位素银染PCR-SSCP方法用于检测p53基因点突变，具有灵敏性高，重复性好，无放射性，周期短等优点。     

EB病毒胸苷激酶基因的扩增

本文报道用多聚酶链反应方法扩增EB病毒胸苷激酶基因。本研究以Raji细胞和B95-8细胞二种不同细胞株的DNA为模板,引物是根据B95-8细胞的胸苷激酶基因序列设计的,均可得到特异的扩增产物,该产物用内切酶Ncol切割鉴定,酶切片段的长度与预期理论值完全一致。     

PCR扩增抗乙酰胆碱受体单克隆抗体重链可变区基因的反应条件

应用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增抗乙酰胆碱受体单抗重链可变区的基因，探讨了ＰＣＲ的反应条件和影响因素。     

差别PCR技术检测卵巢癌c-erbB-2癌基因扩增的研究

目的:探讨卵巢癌c-erbB-2癌基因扩增的临床意义.方法:应用差别PCR技术检测36例原发性卵巢癌c-erbB-2癌基因的扩增情况.结果:(1)卵巢癌组织中c-erbB-2癌基因的扩增率为58.3%(21/36);(2)肿块≥5cm的卵巢癌组织及中晚期卵巢癌患者c-erbB-2癌基因扩增率分别为67.9%、73.9%,明显高于肿块＜5cm的卵巢癌组织25.0%的扩增率和早期卵巢癌患者30.8%的扩增率,均有显著差异(P＜0.05);(3)卵巢癌组织中c-erbB-2癌基因扩增与患者年龄、病理类型、淋巴转移、雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)无相关性.结论:c-erbB-2癌基因扩增与卵巢癌的发生有一定关系,c-erbB-2癌基因扩增对卵巢癌的治疗、预后判断具有重要的临床应用意义.     

PCR检测技术中模板DNA的简易快速提取法

本文报道用胰酶消化分散组织细胞,再用蛋白酶K和非离子去垢剂从肺癌组织细胞中提取DNA。结果表明:本方法只需 100mg左右的组织即可提取 10μg左右的 DNA,并且简单快速,省去以往用匀浆器破碎细胞的繁琐操作,提取的DNA不需用酚和氯仿抽提就可直接用于PCR。     

PCR扩增IgH和TCR_β基因重排在检测淋巴细胞白血病微小残留病中的应用

利用ＩｇＨ和ＴＣＲ＿β克隆性基因重排原理，用多聚酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ．ＰＣＲ）技术检测小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓和外周血共１３例。结果：ＡＬＬ初治的２例患儿ＰＣＲ检测全部呈现阳性特异性单带。ＡＬＬ完全缓解（ＣＲ）的１１例患儿中阳性７例，阴性４例，其中２例骨髓移植（ＢＭＴ）患儿移植前ＰＣＲ阳性，移植后转为阴性。１例自体骨髓移植（ａｕｔｏ－ＢＭＴ）患儿于移植后２个月时ＰＣＲ检测又重新出现阳性，但临床无复发现象。４例对照者ＰＣＲ均为阴性。结果表明ＰＣＲ技术具有简便、快速、敏感、特异性强等优点，在检测微小残留（ＭＲＤ）中具有广阔前景。