牙周膜干细胞培养及鉴定方法的研究进展

牙周组织工程是以开发促进牙槽骨、牙周膜和牙骨质再生的治疗手段为目的,利用牙周组织发生的原理来形成或再生功能性牙周组织,牙周组织再生的关键是种子细胞,自2004年国外学者首次发现牙周组织发育完成后存在于牙周膜中的未分化间充质细胞具有自我更新和多向分化等成体干细胞的特点,能形成牙骨质-牙周膜样复合体,将其命名为牙周膜干细胞后,近年来国内外学者对于牙周膜干细胞的研究逐渐增多,并且取得了一定的成果,本文着重对牙周膜干细胞的基本概念;原代培养方法：组织块贴壁法、酶消化法和酶解组织块法及干细胞纯化的方法;牙周膜干细胞的鉴定方法：包括形态学观察、细胞免疫细胞化学鉴定、细胞增殖能力的检测、多向分化潜能检测及细胞表型分析等进行了介绍。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞影响的研究进展

釉基质蛋白位于胚胎发育时期的牙釉质中,是来自上皮根鞘的一组釉质特异性蛋白,与牙的釉质形成和矿化有关。影响牙周膜细胞的黏附、增殖及分化。本文就釉基质蛋白对牙周膜细胞的生物学作用及在牙周组织再生方面的研究进展作一综述。     

牙骨质及其组织工程的研究进展

近年来,牙周组织再生的研究取得了重要进展。理想的牙周组织再生,应同时包括牙骨质、牙周膜和牙槽骨的再生。作为牙周组织的重要组成部分,牙骨质的再生已成为目前的研究热点。本文就牙骨质的理化特性和临床意义、牙骨质特异性蛋白、成牙骨质细胞的来源、成牙骨质细胞的体外培养及牙骨质组织工程做一综述。回顾牙骨质的理化特性和临床意义可以帮助我们理解牙骨质再生的意义。探讨成牙骨质细胞的来源和体外培养技术可以帮助我们寻找最适宜的牙周组织工程种子细胞。对于牙骨质组织工程的探索研究可以帮助我们模拟实现牙周组织再生过程中的调控机制,也有助于牙周组织仿生材料的研发和改进。     

锌对人牙周膜细胞增殖分化的影响研究分析

锌具有广泛的生物学效应,是骨代谢的激活因子,调节成骨细胞的生长、分化、增殖。而牙周膜是牙周组织的重要组成部分,牙周膜细胞增殖、分化是牙周组织改建的前提和关键。因此,在体外探讨微量元素锌对牙周细胞生物特性的影响,有助于理解锌在正畸牙周组织重建中的作用。     

老年人牙周膜细胞生长增殖的比较研究

目的 :观察老年人牙周膜细胞生长增殖能力的变化情况。　方法 :采用牙周膜细胞原代培养 ,并用四唑盐(MTT)比色法检测老年人牙周膜细胞生长增殖能力的变化 ,并与青年人牙周膜细胞增殖情况比较。　结果 :①老年组牙周膜细胞生长极其缓慢 ,细胞呈现衰老状态 ,与青年组牙周膜细胞表现比明显不同。②老年组牙周膜细胞在 1、3、5、7、9天时测得的光密度值 (A570 )均明显低于青年组牙周膜细胞的A570 ,两组比较差异显著 (P <0 .0 0 1)。　结论 :由于衰老的影响 ,老年人牙周膜细胞生长增殖功能明显降低 ,与青年人牙周膜细胞区别较大 ,提示衰老造成的老年人牙周膜细胞生长增殖功能降低 ,可能是老年人牙周组织疾病发病率高、破坏程度重、修复再生功能降低的重要原因     

引导性牙周组织再生术与植骨术合用护理配合

20世纪 80年代以前牙周组织的再生非常有限 ,常规翻瓣术和植骨术后虽有一定程度的牙槽骨修复 ,有的骨下袋内可以有新骨充满 ,但组织学证明大多数病例的新生骨中并无牙周膜与相应的根面连接。原先病变的根面覆盖着长结合上皮 ,它不能有效抵御微生物或机械刺激 ,该处容易重新形成牙周袋。而引导性牙周组织再生术 (GTR)能使因牙周炎而破坏的牙周组织包括 (牙骨质、牙周膜和牙槽骨 )再生。使牙周膜细胞首先附着于牙根面实现牙周组织新生及新附着的形成。这种修复、再生合用新技术运用使牙周炎治疗效果达到更高境界。我科临床应用GTR与植骨术…     

牙周组织再生动物模型的研究进展

牙周炎是以造成牙周组织破坏为特点的口腔疾病,牙周膜是口腔牙周组织重要的组成部分,牙周组织的丧失是成年人失牙的主要原因,如何有效地终止病变并再生牙周组织在将来有可能会成为牙周炎新的治疗方法之一。牙周组织的再生研究中,动物模型起到了非常重要的作用,本文对牙周组织再生研究中使用的动物及其特点做一综述。     

Hippo信号通路调节牙周膜干细胞生物学行为的研究进展

牙周膜干细胞（PDLSCs）因其多功能性与高增殖性，已成为目前广受关注的牙周组织工程应用的种子细胞，有望在牙周组织改建和再生的临床应用方面发挥实际作用。Hippo信号通路是一条进化上高度保守的激酶链，大量研究证实其在调控器官发育、组织再生、细胞稳态中发挥重要作用。同时，越来越多的证据在分子水平及细胞层面上证实，Hippo信号通路影响PDLSCs的分化及增殖-凋亡平衡。笔者总结了目前报道的Hippo信号通路相关组分对PDLSCs增殖、凋亡、衰老及成骨分化等生物学行为的调控作用，并着重探讨关键效应因子YAP在其中的调控机制，为牙周再生的基础研究与临床应用提供新思路。     

引导组织再生术对牙周病的治疗研究

牙周病治疗的最终目的是恢复已经丧失的牙周组织以及被破坏的牙周结构和功能,包括牙槽骨、牙骨质和牙周膜在内的牙周组织的再生。引导组织再生术（GTR）是近年来兴起的诱导牙周组织再生疗法,给牙周病的治疗开辟了广阔的前景,该文就GTR对牙周病的疗效及影响疗效的因素作一综述。     

应力作用下基质金属蛋白酶在牙周组织改建中的作用

牙周组织包括牙龈、牙周膜和牙槽骨,并与牙骨质共同构成一个功能系统,主要由细胞和细胞外基质（Extracellular martrix,ECM）组成,二者的附着是细胞行使功能的基础。正畸牙移动是牙周膜受到应力的作用,促发牙周组织产生改建,进而产生牙齿的位移。所以,正畸牙移动是牙齿在应力作用下,牙周组织发生改建的结果,ECM的降解与合成是牙周组织改建的具体表现方式。有研究表明,基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）在牙周组织改建过程中,发挥了重要的作用。     

原代人牙周膜成纤维细胞的培养及培养方法的改进

目的：探讨如何提高人牙周膜成纤维细胞原代培养的成功率。方法：组织来源于11～15岁青少年因正畸而拔除的前磨牙，刮取牙根中1／3的牙周膜组织，组织贴壁培养法进行培养采用冠根分离控制取材中的污染，首次传代前进行细胞分散的方法来提高传代的成功率，并对培养细胞的形态及超微结构进行了观察。结果：经免疫组化染色证实所培养的细胞为牙周膜成纤维细胞，通过冠根分离法可有效的控制组织污染，首次传代前进行细胞分散可提高细胞传代成功率，从而使细胞培养成功率提高。结论：获得人牙周膜成纤维细胞，培养成功率在15％～20％。     

Effects of Shuanghuangbu on the total protein content and ultrastructure in cultured human periodontal ligament cells

Background Successful periodontal regeneration depends on the migration, proliferation and differentiation of periodontal ligament cells in periodontal defects. The total protein content and the ultrastructure demonstrate the metabolizability and activity of periodontal ligament cells. This study wasconducted to observe the effects of Shuanghuangbu, a mixture of medicinal herbs, on the total protein content and the ultrastructure of human periodontal ligament cells.Methods Periodontal ligament cells were grown to confluence and then cultured in Dulbecco‘ s modified eagle medium (DMEM) supplemented with Shuanghuangbu over the concentration range of 0 to 1000 μg/ml. The total protein content in cultured cells was determined by using Coommasie brilliant blue technique. Periodontal ligament cells were incubated in 0 and 100 μg/ml Shuanghuangbu decoction for 5 days, then observed through transmission electron microscope.Results The total protein content of human periodontal ligament cells increased in each experiment group added 10 -1000 μg/ml Shuanghuangbu respectively, and the effect of 100 μg/ml was excellent. Under the transmission electron microscope, there were more rough endoplasmic reticulumsand mitochodrias in the experiment group than those in the control group.Conclusion Shuanghuangbu stimulates the protein synthesis of human periodontal ligament cells and improves human periodontal ligament cells‘ metabolizability and activity.     

老年人牙周膜细胞Fas抗原和诱导型一氧化氮合酶表达的研究

目的：观察老年人牙周膜细胞Fas/apo-1(CD95)抗原和诱导型一氧化氮合酶（iNOS)的表达情况。方法：采用免疫组化方法，对2例培养的老年人牙周膜细胞和3例培养的青年人牙周膜细胞的Fas/apo-1(CD95)抗原和iNOS的表达进行比较研究。结果：老年组牙周膜细胞Fas/apo-1(CD95)抗原胞核及胞强阳性表达，且强于青年组；老年组牙周膜细胞胞核及胞质iNOS阳性表达，而青年组为阴性表达。结论：老年人牙周膜细胞对细胞程序性死亡的敏感性增强。     

转化生长因子-β1和神经生长因子对人牙周膜细胞增殖的生物学作用

目的：研究转化生长因子-β1（TGF-β1）与神经生长因子（NGF）以及两者联用时对人牙周膜细胞（PDLC）增殖的生物学作用,为牙周损伤后修复提供理论依据。方法：采用方差分析的方法对不同浓度的TGF-β1与NGF以及两者联用时的生物学作用进行分析。结果：TGF-β1、NGF单独作用后,PDLC较对照组增殖较。（P〈0．05）,而两者联合作用后的增殖作用较各自单独应用的作用更显著。结论：TGF-β1、NGF两者以最佳效应浓度联合应用具有协同作用。     

牙周病病因及治疗研究进展

菌斑微生物及其产物的侵袭是牙周病的始动因子。近年来的研究表明,口腔中约有30种细菌与牙周病的发生和发展有关,是牙周病的优势菌。其中福赛斯坦纳菌、伴放线菌嗜血菌、牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、中间普氏菌、齿垢密螺旋体等牙周可疑致病微生物的全基因组测序已经完成。在牙周病治疗方面,目前应用于牙周组织工程的种子细胞主要有牙周膜细胞、骨髓基质细胞、脂肪细胞和特殊基因转染细胞;富血小板血浆含有丰富的促进修复的生长因子,被广泛应用于牙周组织再生。研究表明,其能有效促进牙周组织再生、提高牙周再生的效果;多项研究证实,釉基质蛋白能促进牙周组织的再生,且其参与诱导形成的组织在结构和功能上接近正常牙周组织;全身调节治疗是牙周病治疗的另一个重要方面。有研究表明,小剂量多西环素和化学修饰性四环素的使用均能有效降低牙周炎症过程中的宿主反应、抑制胶原酶的活性、促进牙周组织的胶原合成与表达。而一些具有益肾清火性能的中药复方则有改善牙周炎症、促进机体免疫、促进骨髓基质细胞增殖和成骨分化的作用。由于牙周病的致病机制复杂,其确切发病机制的揭示以及真正意义牙周组织再生的获得,尚有待进一步的研究。     

Effect of increased and decreased bite force on morphology of periodontal tissues]

OBJECTIVE: The aim of this study was to observe the effect of bite force on morphology of periodontal tissues. METHODS: Animal models were induced by extracting the left maxillary molars; the left mandibular molars served as decreased bite force models; the right mandibular molars served as increased bite force models. The dynamic changes of widths of periodontal ligament and cementum were measured. RESULTS: In decreased bite force group, there were significant morphologic changes of periodontal tissues after 1 week. In increased bite force group, there was no significant change. Ligament widths were significantly different after 2, 3 weeks respectively in those two groups, compared with that in control group (P < 0.05). There were significant differences between proximal alveolar wall and distal alveolar wall in width (P < 0.05). CONCLUSION: The histological morphology is closely related to the mechanical condition. Physiological bite force is necessary for periodontal ligament to maintain its physiological structure.     

年龄因素对牙周膜干细胞增殖和分化能力的影响

目的 评估年龄因素对牙周膜干细胞(PDLSC)增殖、分化能力的影响.方法 选取来源于12位不同的患者因阻生需要拔除的第三磨牙12颗,根据患者年龄分为A组(年龄18～20岁)、B组(年龄45～50岁).分离培养获得PDLSC.MTT检测A、B组PDLSC增殖能力;进行成骨、成脂诱导,并用茜素红染色及油红O染色评价其分化能力;SA-βG染色分析A、B组细胞衰老情况;将A、B组PDLSC成骨诱导7d后进行ALP染色并同时采用Western blotting检测OCN、ALP的表达.结果 不同年龄阶段的供体中都能分离出PDLSC,然而其增殖和成骨分化能力随年龄增加而降低,成脂分化能力和SA-βG表达随年龄增加而增加.ALP和OCN成骨诱导7d后表达水平均升高,且A组高于B组.结论 随年龄增长能在牙周膜中获取PDLSC,随年龄增加其增殖与成骨分化能力下降,但成脂分化能力和SA-β表达则增加.     

NGF基因转染对牙周膜细胞成骨性的影响

目的 探讨神经生长因子(nerve growth factor,NGF)基因转染对牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC)成骨性的影响.方法 运用基因转染技术将NGF基因通过质粒pcDNA3.1-NGF转入PDLC中,利用免疫组化及免疫印记法鉴定转染细胞的表达并观察对其成骨性的影响.结果 免疫细胞化学证实,牙周膜细胞有NGF蛋白表达.转染NGF后的PDLC的OC含量较未转染NGF组明显增高(P＜0.01).结论 转染NGF后的牙周膜成纤维细胞成骨性明显增强,为使牙周膜细胞成为牙周组织再生的种子细胞奠定基础.     

周期性牵张力对人牙周膜细胞中成骨样细胞表型碱性磷酸酶和骨钙素mRNA表达的影响

目的：了解机械力介导的牙周膜细胞中成骨样细胞特性的改变,以利于深入研究正畸牙齿移动的机制。方法：应用地高辛标记寡核苷酸探针进行细胞原位杂交,检测在间歇性机械牵张力作用下人牙周膜细胞中的成骨样细胞表型蛋白碱性磷酸酶和骨钙素在mRNA转录水平的表达改变。结果：间歇性牵张力作用增强人牙周膜细胞碱性磷酸酶和骨钙素基因的表达。结论：间歇性牵张力作用诱导人牙周膜细胞向成骨样细胞的分化。