不同产地知母中皂苷类成分的测定

知母为百合科植物知母Anemarrhenaasphode-loidesBunge的根茎,始载于《神农本草经》,列为中品。具有滋阴降火、润燥、滑肠的功效,常用于外感热病、高热烦渴、肺热燥咳、骨蒸潮热、内热消渴、肠燥便秘等症的治疗。知母的化学成分主要为甾体皂苷、双苯吡酮类、木脂素类、多糖类等,活性成分主要是甾体皂苷[1]。血小板聚集和血栓形成是缺血性心脑损伤的重要原因,现代药理研究证明,知母皂苷E1、B-、B、A均能抑制血小板聚集,A的抑制活性最强[2~4]。此外,知母皂苷可明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤引起的行为症状、缩小脑梗死体积、降低脑缺血大鼠…     

基于HPLC-Q-TOF-MS技术分析红景天颗粒的化学成分及大鼠口服后的入血成分

目的:借助高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱联用技术(HPLC-Q-TOF-MS)分析红景天颗粒的主要化学成分以及大鼠口服红景天颗粒后的入血成分.方法:采用HPLC-Q-TOF-MS分析技术,选用反相ODS色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,采用正、负离子模式及IDA扫描模式采集质谱数据,采用Peak...     

四妙勇安汤水提物大鼠吸收入血成分研究

目的通过对四妙勇安汤水提物入血成分的研究,初步阐明该复方的药效物质基础。方法采用高效液相色谱-离子阱-飞行时间质谱(LCMS-IT-TOF)联用技术,在电喷雾离子源的正、负离子模式下,对四妙勇安汤水提物、大鼠灌胃给药后的血清和空白血清进行检测。以甲醇对血清样本进行前处理,采用Inertsil ODS-3色谱柱,以乙腈(A)-水(含0.1%甲酸)(B)为流动相进行梯度洗脱,根据化合物的多级质谱碎片,结合参考文献和对照品初步确定四妙勇安汤水提物入血成分。结果四妙勇安汤灌胃给药后在大鼠血清中发现14个入血成分,其中10个来自该复方的原型成分,其余4个可能为代谢产物。9个色谱峰被确认为哈巴苷、绿原酸、马钱苷、当药苷、甘草苷、金丝桃苷、安格洛苷C、异绿原酸C和哈巴俄苷。结论四妙勇安汤入血成分是各组方药味配伍后共同作用的结果,本研究可为四妙勇安汤的药效物质基础和进一步的体内代谢研究提供参考。     

知母皂苷元生产工艺研究

知母皂苷元的药理作用越来越显重要,除了能清热泻火、生津润燥、止渴除烦外[1,2],还能改善中早期的老年痴呆症及脑功能减退等症[3]。知母中的菝葜皂苷元还是合成一种抗癌药物的原料。知母皂苷元的主要成分有菝葜皂苷元、异菝葜皂苷元、吗尔考皂苷元、新吉托皂苷元[4]。以菝葜皂     

知母饮片炮制前后黄酮类和皂苷类成分变化研究

目的:测定知母饮片炮制前后3个黄酮类和2个皂苷类成分变化。方法:采用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV)测定3个黄酮类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量20μL,流速1.0 mL/min,柱温30℃;采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定2个皂苷类成分,色谱柱为岛津Intetsil ODS-3(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸,梯度洗脱,进样量10μL,流速1.0 mL/min,氮气流量2.5 mL/min,蒸发温度80℃。结果:知母饮片炮制后知母皂苷BⅡ、新芒果苷、芒果苷含量下降,知母皂苷AⅢ含量上升,异芒果苷含量相对稳定。结论:知母饮片炮制后部分知母皂苷BⅡ会转化成知母皂苷AⅢ,新芒果苷、芒果苷会转化成其他成分,异芒果苷结构相对稳定,不易转化成其他成分。     

知母皂苷涂膜剂的制备工艺研究

目的:优化知母皂苷涂膜剂的处方工艺。方法:采用L9(34)正交试验法,以聚乙烯醇、1,2-丙二醇、知母皂苷酶水解产物为考察因素,以成膜时间和外观性状为评价指标,对基质与药物的用量进行优化,筛选知母皂苷涂膜剂的最优处方工艺,并对制得的涂膜剂进行质量评价、含量测定和安全性评价。结果:筛选出知母皂苷涂膜剂的最佳处方为:聚乙烯醇1.5 g、丙二醇4 ml、知母皂苷酶水解产物10 mg,所制得的涂膜剂成膜时间短,成膜性好,质量稳定、符合规定,知母皂苷AⅢ含量为(0.27±0.10)mg/ml,且动物实验显示无毒、无皮肤刺激性。结论:该制备工艺简单,成膜性好,制得的知母皂苷涂膜剂质量可控,且安全无刺激。     

基于LC-MS/MS研究补肾化瘀生新方在大鼠体内的入血成分

目的:研究补肾化瘀生新方在大鼠体内的入血成分,为其药效物质基础及作用机理研究奠定基础.方法:采用液相色谱-串联质谱仪,应用Thermo Accucore C18色谱柱(100 mm x2.1 mm,2.6 μm),以甲醇(A)和0.1％甲酸水(B)为流动相,流速0.2 mL·min-1,梯度洗脱(0.00～5.00 m...     

六味地黄方在大鼠及家兔体内的吸收入血成分的研究

目的 对六味地黄方在大鼠及家兔体内的吸收入血成分进行研究.方法 采用HPLC-DAD法对六味地黄方给药前后的化学成分进行了比较研究,建立了给药前后大鼠及家兔药物血清的HPLC色谱分析方法;以对照品对照的方法,分析比较给药前后六味地黄方吸收入血成分.结果 口服六味地黄方从大鼠血清和家兔血清中均发现了多个入血成分,其中马钱素、莫诺苷、丹皮酚成分能够被动物体以原型形式吸收入血,可检测到原型药物成分,还发现了多个为新产生的代谢产物.结论 血中吸收入血成分及代谢产物将成为六味地黄方的体内直接作用物质,将有助于阐明六味地黄方的有效成分及作用机理.      

Inhibitory effects of saponins from Anemarrhena asphodeloides Bunge on the growth of vascular smooth muscle cells

Objective To investigate the effects of saponins from Anemarrhena asphodeloides Bunge （SAaB） （Botanical Name： Anemarrhena Asphodeloidis Rhizoma） on the growth of vascular smooth muscle cells （VSMCs）. Methods Cell proliferation was measured by a newly developed cell proliferation reagent, WST-1. Cell apoptosis was assayed by flow cytometry through detecting annexin V. Nitric oxide production was evaluated using confocal laser scanning microscopy with diaminofluorescein diacetate （DAF-2, DA）. Cell aldose reductase （AR） activity, as well as the effect of Epalrestat and interleukin-1β were also explored. Results WST assay showed that cell proliferation induced by serum was significantly inhibited by SAaB （P〈0.01）. Flow cytometry analysis revealed that SAaB could enhance apoptotic rate of VSMCs （P〈0.01）. Nitric oxide production was significantly enhanced after administration of SAaB and interleukin-Iβ Moreover, AR activity of VSMCs was also remarkably inhibited by both SAaB and Epalrestat （P〈 0.01）. Conclusion SAaB can inhibit proliferation and enhance apoptosis of VSMCs. It may protect vascular cells by inhibiting VSMC proliferation and augmenting apoptotic rate of VSMCs via NO-dependent pathway.     

知母皂苷B对体外培养的大鼠皮层神经元树突发育的影响

目的探讨知母皂苷B（Saponins from Anemarrhena asphodeloides Bge,SAaB）对体外培养大鼠乳鼠大脑皮层神经元树突发育的促进作用。方法选用出生0～24h的Sprague—Dawley（SD）大鼠乳鼠,取皮层神经元进行体外细胞培养,培养4d的神经元用于实验。应用倒置相差显微镜测量培养神经元树突分支总长度（TDBL）、一级树突数目（PDN）、最大分支级数（MBO）和神经元胞体面积。Western印迹法观察神经元突触素蛋白表达的改变。结果形态学观察结果显示SAaB（10、30、100μmol／L）可明显促进树突发育,表现为树突分支总长度增加、一级树突数目增多、最大分支级数增大及胞体面积增大。并呈明显浓度依赖。Western印迹结果显示SAaB（10、30、100μmol／L）也可明显增加突触素蛋白表达水平,并呈明显浓度依赖。结论SAaB对体外培养皮层神经元树突的发育有促进作用。     

HPLC-CAD同时测定知母根茎与须根中5种呋甾皂苷的含量

目的 建立高效液相色谱-电雾式检测器(HPLC-CAD)同时测定知母根茎与须根中5种呋甾皂苷含量的方法.方法 采用TechMate C18-ST-Ⅱ色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(22:78,V/V);流速1.0 ml/min;柱温30℃;CAD检测器参数:采集频率10 Hz;雾化温度55℃;filter:5 s.结果 知母中5种主要呋甾皂苷:知母皂苷N、知母皂苷L、知母皂苷BⅡ、25R-知母皂苷BⅡ和25S-officinalisnin-Ⅰ分别在一定范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.9992~0.9998,检测限分别为0.28、0.92、0.92、0.92和0.92 ng,定量限分别为0.92、2.77、2.77、2.77和2.76 ng,精密度、重复性、48 h稳定性的RSD均<3.0%,平均加样回收率分别为98.17%、101.37%、98.53%、97.63%和98.17%.结论 本研究建立的HPLC-CAD法重复性好,结果准确可靠,可作为中药知母多成分含量测定的方法.     

不同产地知母须根中3个𠮿酮类成分含量测定

目的 测定不同产地知母须根中新芒果苷、芒果苷和异芒果苷的含量。方法 采用高效液相二极管陈列检测法,Shim-pack色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5 μm);乙腈-0.4%冰醋酸水溶液梯度洗脱,流速1. 0 mL/min;柱温25 ℃;检测波长为258 nm。结果 所收集的知母须根样品中新芒果苷的含量为1.2％～1.9％,芒果苷的含量为1.0％～1.6％,异芒果苷的含量为0.4％～0.6％。结论 知母须根中（口山）酮成分含量较高,在知母须根的综合开发利用中可考虑此类成分。     

乳鼠心肌裂解液对S180小鼠移植瘤抑瘤作用的实验研究

目的探讨乳鼠心肌裂解液对S180小鼠移植瘤生长的影响。方法提取制备乳鼠心肌细胞裂解液（car-diac muscle cell lysate of neonaterat,CMCLnr）,建立S180小鼠移植瘤模型,以顺铂组为阳性对照组,生理盐水为阴性对照组,CMCLnr再分别分为30mg/kg、60mg/kg、90mg/kg三个不同的剂量组腹腔给药,然后观察不同实验组对S180小鼠移植瘤生长的影响。结果各组小鼠移植瘤接种成活率均为100%。CMCLnr各剂量组肿瘤出现时间均晚于阴性对照组（P〈0.05）,实验各组肿瘤瘤重均小于阴性对照组,肿瘤抑制率DDP、CMCLnr（30mg/kg、60mg/kg、90mg/kg）分别为81.23%、63.09%、65.44%、66.06%,与阴性对照组比较。差异有统计学意义（P〈0.001）,且无明显剂量依赖性;CMCLnr各组的小鼠体重增加均大于生理盐水组,而顺铂组明显抑制小鼠生长（P〈0.05）。结论乳鼠心肌裂解液对S180小鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用,且对小鼠无不良反应。     

中医寒凝血瘀证模型大鼠血清游离钙和细胞流变学变化*

[目的]研究具有中医寒凝血瘀证证候表现特点的大鼠模型细胞流变学变化以及血清游离钙的改变,通过客观化指标来深入阐释寒凝血瘀证的生物学基础。[方法]制作急性寒凝血瘀证大鼠模型,腹主动脉取血检测游离钙、血沉、红细胞聚集指数、红细胞变形指数、红细胞刚性指数及红细胞压积。[结果]与正常对照组比较:模型组血清游离钙、血沉、红细胞聚集指数、红细胞刚性指数及红细胞压积明显升高,红细胞变形指数下降,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。[结论]大鼠采用皮下注射盐酸肾上腺素结合冰水浸入法可以获得中医寒凝血瘀证的证候表现特征,其细胞流变学指标的相应改变准确反映出"寒凝血瘀证"的现代生物学基础。     

德庆县2009～2011年疑似预防接种异常反应监测数据分析

目的了解德庆县疑似预防接种异常反应报告情况,分析预防接种的安全性及工作质量。方法采用描述性流行病学方法对德庆县2009～2011年报告的疑似预防接种异常反应资料进行分析。结果2009－2011年德庆县报告疑似预防接种异常反应病例170例,AEFI报告发生率为20．99／10万剂次。反应分类构成为一般反应占72．94％（15．31／10万剂次）、异常反应占24．12％（5．06／10万剂次）、偶合反应占2．94％（0．62／10万剂次）。全县接种单位报告覆盖率为61．54％（8／13）,病例报告男女比例为1．13：1,年龄分布以1岁以下年龄组较多（47．06％）,主要报告月份为3～8月份,报告反应时间较多发生在1d内（67．06％）;AEFI涉及25种疫苗,第一类疫苗AEFI报告发生率以全细胞百白破疫苗（212．12／10万剂次）、无细胞百白破疫苗（43．11／10万剂次）、麻风疫苗（29．07／10万剂次）居前3位;第二类疫苗AEFI报告发生率以甲乙肝联合疫苗（225．56／10万剂次）、23价肺炎疫苗（164．38／10万剂次）、甲肝灭活疫苗（115．42／10万剂次）居前3位。一类疫苗的报告发生率17．57／10万剂次,二类疫苗为37．58／10万剂次,两者比较差异无统计学意义（χ^2=2．75,P=0．10）。一般反应中以发热（53．23％）、局部红肿硬结（30．65％）为主;异常反应中以过敏性皮疹（56．10％）为主;偶合反应以上呼吸道感染较多。结论德庆县预防接种的安全性和工作质量较好,规范实施预防接种,减少预防接种异常反应的发生及其负面影响。促进提高预防接种工作质量。     

LC-MS/MS法测定大鼠口服缩泉胶囊后胆汁中的代谢物

目的：研究大鼠灌胃缩泉胶囊后,益智黄酮（杨芽黄素、伊砂黄素、白杨素、山奈素和芹菜素-4＇,7-二甲氧醚）在胆汁中的物质形式。方法：雄性Sprague Dawley大鼠胆管插管手术完毕后,经灌胃给予缩泉胶囊（3.52g/kg）后收集0-4h胆汁。胆汁样品经甲醇沉淀处理后再利用液相色谱-质谱联用仪（LC-MS/MS）进行分析。结果：大鼠灌胃缩泉胶囊后,益智黄酮在大鼠胆汁中主要以代谢物的形式存在,主要是葡萄糖醛酸结合物为主,检测不到原形物质形式。胆汁中检测不到脱甲基反应形成的代谢中间产物,这些中间代谢产物迅速形成葡萄糖醛酸结合物。结论：大鼠灌胃缩泉胶囊后,经肠道吸收的益智黄酮可通过胆汁进行消除,葡萄糖醛酸结合物是胆汁中的主要物质形式。     

HPLC-MS/MS法测定超声提取刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶的含量

目的:建立一个高效液相-质谱联用(HPLC-MS/MS)测定刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶含量的方法。方法:建立HPLC-MS/MS方法,进行色谱和质谱方法的考察,得到最优的分析条件,即流动相为乙腈-0.05%的甲酸溶液(20∶80,V/V),流速为0.5 ml/min。采用电喷雾离子源(ESI)进行电离,多离子反应监测(MRM)模式进行信号采集,采用外标法进行定量;采用HPLC-MS/MS方法同时测定刺五加果实中刺五加苷B、E和异嗪皮啶的含量。结果:刺五加苷B、刺五加苷E和异嗪皮啶分别在0.7~30 000 ng/ml、0.4~10 000 ng/ml和0.3~16 000 ng/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r0.999 7),检出限(LOD)分别为0.17 ng/ml、0.12 ng/ml和0.09 ng/ml,定量限(LOQ)分别为0.7 ng/ml、0.4 ng/ml和0.3 ng/ml,不同浓度下的平均加标回收率为98.10%、98.19%和98.21%;在最优提取条件下刺五加果实中刺五加苷B的含量为(1.935 0±0.001 5)mg/g,刺五加苷E的含量为(0.273 0±0.003 5)mg/g,异嗪皮啶的含量为(0.013 0±0.001 2)mg/g。结论:HPLC-MS/MS法灵敏度高、选择性好、分析时间短,可对刺五加果实中刺五加苷B、刺五加苷E和异嗪皮啶进行准确的定量分析。     

应用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术建立非活动性HBsAg携带者血清蛋白质谱筛选模型

目的 比较非活动性HBsAg携带者和健康人的血清蛋白标记物并建立相关筛选模型.方法 用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)及CM10蛋白芯片对35例非活动性HBsAg携带者、35例健康人血清样本进行分析,将获得的血清蛋白质指纹图谱用计算机软件进行比较分析,建立非活动性HBsAg携带者的比较筛选模型.结果 非活动性HBsAg携带者组与健康人对照组共有28个差异有统计学意义的蛋白峰;建立诊断模型的灵敏度94%(33/35),特异度80%(28/35),准确率为87%(61/70).结论 建立的血清蛋白质指纹图谱模型能够区分非活动性HBsAg携带者与健康人,SELDI技术在诊断及特异性血液生物标志分子的筛选等方面具有较好的临床应用价值.