低渗状态下星形胶质细胞AQP8的表达变化

目的 探讨低渗透压作用下,星形胶质细胞水通道蛋白8(aquaporin8,AQP8)的表达变化规律.方法 原代培养大鼠星形胶质细胞,随机分为对照组(常规培养液)和低渗组(268、254、240 mmol/L),每组分别作用1、3、6、12、24 h,共5个时间点.通过MTT比色法检测细胞活力,免疫细胞化学、免疫荧光、Real time-PCR研究AQP8及其mRNA的表达变化.结果 对照组星形胶质细胞的细胞形态、细胞活性、AQP8及其mRNA的表达在各时间点均无明显变化(P>0.05).低渗组中,星形胶质细胞水肿,细胞活性下降;AQP8及其mRNA的表达水平随低渗程度的下调和低渗作用时间的延长而增强.低渗液(268、254、240 mmol/L)作用后,免疫细胞化学显示星形胶质细胞的AQP8表达从低渗作用1 h的(0.258 3±0.009 8, 0.280 0±0.010 9, 0.281 7±0.007 5) 到低渗作用24 h的(0.385 0±0.010 9, 0.406 7±0.007 0, 0.425 0±0.010 4) (P<0.05);Real time PCR显示:AQP8与beta-actin 的mRNA水平比从低渗作用1 h的(0.127 5±0.011 8,0.134 4±0.032 4, 0.167 5±0.007 8)上升到(3.278 0±0.121 2,5.410 4±0.104 1,8.351 0±0.288 0).结论 低渗作用下,AQP8介导的水分子运输可导致星形胶质细胞肿胀,继而引发细胞结构、功能的损伤; AQP8的表达上调可能是导致星形胶质细胞水肿形成和发展的重要分子机制之一.     

AQP4在新生大鼠实验性星形胶质细胞缺氧损伤模型中的表达变化及意义

目的 探讨水通道蛋白4（AQP4）在原代培养新生大鼠星形胶质细胞（AC）缺氧和缺氧后再复氧损伤模型中的表达改变及其意义。方法 原代培养成熟的AC随机分成常氧培养组（对照组）、缺氧组和复氧组。缺氧组AC在缺氧条件下分别培养3h、6h、12h和24h,复氧组AC缺氧培养12h后更换为常氧培养,分别培养3h、6h、12h和24h。各组样品采用Real Time PCR和免疫荧光染色分别测定AQP4 mRNA和蛋白表达水平。结果 随着缺氧时间延长,AQP4 mRNA和蛋白表达水平进行性降低,复氧时则先降低,后回升。结论 AQP4表达下降可能与脑水肿的发生有关,AQP4可能对脑内渗透平衡重建起重要作用。     

谷氨酸转运体在体外培养大鼠皮质星形胶质细胞机械性损伤中的表达变化

【目的】研究机械性损伤后星形胶质细胞内谷氨酸转运体的表达变化，并探讨其在细胞损伤过程中可能的作用机理。【方法】采用免疫组化方法对培养的细胞进行鉴定，流式细胞术和Western Blotting定量谷氨酸转运体蛋白的表达改变。【结果】流式细胞术结果表明，机械性划伤12h和24h后，谷氨酸转运体（EAATl）蛋白表达均较对照组显著增加（P〈0．05），而损伤12h和24h组组间无显著差异（P〉0．05）；Western blotting显示，对照组、机械性划伤12h和24h组谷氨酸转运体（EAATl）蛋白表达吸光度（A）相对值为：0．21、0．44和0．46。与对照组比较，损伤后12h和24h星形胶质细胞EAATl的蛋白表达均明显升高（P〈0．05），损伤两组间表达无显著性差异（P〉0．05）。【结论】机械性损伤可导致星形胶质细胞内EAATl的表达明显升高，提示其可能在脑损伤的发生发展以及修复过程中起到了一定的作用。     

星形胶质细胞对损伤反应的体外实验研究

目的：研究体外星形胶质细胞（Ast）反应性胶质化的发生、发展过程与规律。方法：体外分离培养Ast,利用划伤的方法,建立Ast对损伤反应的实验模型,通过形态学观察、RT－PCR、免疫细胞化学、原位杂交及图像分析等方法,研究体外Ast对损伤的反应及规律。结果：损伤体外培养的Ast后,观察到反应性胶质化的典型特征,表现为Ast胞体肥大、突变增粗、延长,GFAP免疫细胞化学染色增强;原位杂交、RT－PCR分析表明,GFAPmRNA表达显著提高。上述变化在伤后1d即可见到,5－7d达到高峰。结论：体外分离培养的Ast对损伤表现出活跃的反应,呈现出典型的反应性胶质化特征,其发生、发展过程与规律类似于在体情况下的Ast反应。     

水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达

目的 水通道蛋白作为细胞膜特异性水转运蛋白在脑内分布广泛,参与脑内水平衡调节,与脑肿瘤、脑创伤等多种疾病导致的脑水肿有关.本实验主要研究水通道蛋白1、4在培养大鼠星形胶质细胞、人多形性胶质母细胞瘤系BT325细胞及人脑胶质瘤组织中的表达情况.方法 应用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞.应用反转录PCR法检测GFAP、AQP1及AQP4在不同组织细胞中的表达.结果 实验中培养大鼠星形胶质细胞及BT325细胞GFAP免疫细胞化学染色阳性.体外培养大鼠星形胶质细胞、人胶质母细胞瘤组织及对照组标本均有GFAP表达,同时也有AQP1及AQP4表达.BT325细胞只有GFAP表达,无AQP1及AQP4表达.结论 AQP1、4在培养大鼠星形胶质细胞及胶质瘤组织中均有表达,可能对脑功能的维持及肿瘤性脑水肿的发生、消散有重要影响.     

星形胶质细胞在脊髓损伤修复中的作用

中枢神经系统损伤后的修复一直是科研人员和临床工作者关注的重点.虽然关于中枢神经系统损伤修复的研究已经很多,比如嗅鞘细胞、神经干细胞移植以及各种细胞因子等在损伤修复方面的积极作用[1-4],但目前在该领域的研究却没有实质性进展.星形胶质细胞(astrocyte,AST)是神经系统中数目众多的细胞之一,以往认为它仅是被动的辅助角色,只是起支持、提供营养及协助代谢等作用,而且胶质细胞过度增生形成的胶质瘢痕对哺乳动物神经系统损伤后轴突再生起障碍作用.     

星形胶质细胞气压损伤后钠-钾-氯共转运体及促分裂原活化蛋白激酶对AQP4表达的影响

目的：探讨大鼠星形胶质细胞气压损伤后,钠-钾-氯共转运体（ NKCC）、促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）对水通道蛋白-4（AQP4）表达变化的影响和相关机制。方法原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞。实验分为正常对照组、气压损伤组、布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂（ SB203580）处理组。布美他尼和p38-MAPK抑制剂均预处理星形胶质细胞30 min后再进行气压损伤。损伤后3 h观察细胞水肿情况,并对AQP4的表达情况进行Western blot检测。结果光学显微镜下观察到气压损伤后的星形胶质细胞较正常对照组细胞明显肿胀,布美他尼和p38-MAPK抑制剂处理组星形胶质细胞水肿较气压损伤组减轻。 Western blot检测发现布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂处理组的AQP4表达均较气压损伤组低（P＜0.05）。结论星形胶质细胞气压损伤后,AQP4表达上调受NKCC的影响,以及p38-MAPK信号途径的调节。通过抑制NKCC的活性和p38-MAPK信号途径的激活,可降低气压损伤引起的星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞水肿。     

大鼠大脑皮层星形胶质细胞体外培养方法改良

目的建立大鼠大脑皮层星形胶质细胞(As)的培养方法,以进一步对大脑皮层As进行体外实验研究。方法在M cCarthy方法基础上改用出生后5 d的SD大鼠的大脑皮层,制备单细胞悬液后,接种于培养瓶,培养箱中1 h后换瓶,3 d后换液,细胞融合成单层后传代,传3代后采用间接免疫荧光法监测As特异性标志胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。阳性细胞确认为As。结果体外培养的大脑皮层As经历了贴壁、去除成纤维细胞、纯化和传3代,GFAP阳性细胞达95%以上。结论大脑皮层As体外培养成功,并有较高的纯度,为进一步进行As的研究创造了条件。     

MAPKs信号通路干预对体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4表达的影响

目的研究体外培养大鼠星形胶质细胞划痕损伤后水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)表达变化,并观察丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路特异性抑制剂对此变化的影响。方法利用传代培养10d左右的大鼠星形胶质细胞制作划痕损伤模型,部分实验于划痕损伤前1h分别加入ERK抑制剂U0126,p38MAPK抑制剂SB203580及JNK抑制剂SP600125。观察细胞形态变化、GFAP免疫细胞化学染色变化,并用实时荧光定量PCR法检测AQP4mRNA表达变化。结果划痕损伤后12h,细胞形态由扁平形变为不规则形,部分细胞突起向划痕区伸出,划痕区出现GFAP免疫化学染色阳性细胞,AQP4mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而U0126,SB203580和SP600125预处理均能阻止此种变化(P<0.05)。结论划痕损伤引起培养星形胶质细胞AQP4mRNA表达下调,MAPKs抑制剂可对抗此作用,提示MAPKs信号通路参与星形胶质细胞损伤后AQP4表达变化的调节。     

星形胶质细胞钙调蛋白在损伤后胶质瘢痕形成中的作用

目的:探讨钙调蛋白对星形胶质细胞损伤后增生及胶质瘢痕形成的影响.方法:体外纯化培养星形胶质细胞,机械划痕法构建星形胶质细胞损伤模型,动态观察星形胶质细胞损伤前后钙离子浓度的变化,以及损伤后应用钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪(Trifluoperazine dihydrochloride,TFP)处理,星形胶质细胞增生的主要标志物GFAP表达的变化.采用激光共聚焦观察细胞内游离钙离子浓度动态变化,免疫组织化学染色方法检测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(Glia fibrillary acidic protein,GFAP)表达量的变化.结果:星形胶质细胞损伤后细胞内钙离子浓度迅速上升,2 min后明显下降至接近基础水平.星形胶质细胞损伤后钙调蛋白抑制剂能够抑制星形胶质细胞GFAP蛋白表达量的增加.结论:星形胶质细胞损伤后钙离子浓度明显变化,激活细胞内钙离子信号传导并参与星形胶质细胞损伤后的增生反应,而钙调蛋白抑制剂三氟拉嗪对星形胶质细胞损伤后的增生反应有显著的抑制作用.     

大鼠轻度脑外伤后水通道蛋白9在大脑皮质及海马的表达变化

目的研究轻度脑外伤（traumatic brain injury，TBI）后水通道蛋白9（AQP9）在脑组织中的表达变化规律，初步探讨AQP9对脑外伤的作用。方法采用Feeney自由落体法制作大鼠轻度脑外伤模型。用TTC法、免疫组织化学法、RT—PCR分别检测脑组织缺血程度、AQP9的表达及双侧大脑皮质和海马AQP9mRNA的变化。结果TTC染色结果显示．损伤早期脑缺血灶不明显，但随时间的推移，逐渐扩大，于72h达最大面积。AQP9及AQP9mRNA表达变化基本一致：TBI后1h，所测区AQP9 mRNA的含量均无明显变化，至3h，双侧大脑皮质及对侧海马AQP9 mRNA的含量明显增高，6h后降低；24h后，双侧大脑皮质及海马均再次明显增高，并于48-72h达峰值。结论TBI早期和继发性损伤期AQP9表达的上调可能分别与TBI应激和能量代谢调节有关。     

氧糖剥夺、复氧后损伤星形胶质细胞中MMP-9的表达变化与意义

目的通过观察金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在氧糖剥夺、复氧培养后损伤星形胶质细胞中基质的表达变化并抑制其活性,探讨其在氧糖剥夺、复氧后细胞损伤中的意义。方法将星形胶质细胞分为正常组、模型组和GM6001组。模型组细胞在无糖DMEM培养基,1%O2的培养条件下行3、5、7 h时长的氧糖剥夺后复氧至24 h。GM6001组细胞在5 h氧糖剥夺、复氧的过程中加入外源性基质金属蛋白酶抑制剂(GM6001,10μmol/ml),复氧至24 h。用RT-PCR测定不同时长氧糖剥夺后星形胶质细胞MMP-9 mRNA表达变化,ELISA法测定细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度变化;用光学显微镜观察各组的细胞形态变化,LDH漏出率、CCK-8法检测细胞的损伤情况及存活率。结果①RT-PCR及ELISA法检测示:与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞MMP-9 mRNA表达量和细胞培养上清液中MMP-9蛋白的浓度均有所增加(P<0.05),随着氧糖剥夺时间的延长,均呈现不断上升趋势;②与正常组相比,氧糖剥夺、复氧后,模型组细胞明显损伤,随着氧糖剥夺时间的延长,细胞损伤加重,光镜下细胞出现明显肿胀,并有部分细胞呈凝固性坏死,LDH漏出率不断增高(P<0.01)、存活率则逐渐下降(P<0.05,P<0.01),且培养上清MMP-9蛋白浓度与细胞LDH漏出率的增高程度呈正相关(r=0.693,P<0.05);与模型组相比,5 h氧糖剥夺、复氧后,GM6001组细胞形态学损伤表现明显减轻,LDH漏出率水平也有明显下降(P<0.01),细胞存活率则显著上升(P<0.05)。结论 MMP-9过表达可能是氧糖剥夺、复氧后引起细胞损伤的重要因素之一。     

AQP9在脑出血大鼠脑组织中的表达变化

目的 研究大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后水通道蛋白9(aquaporin 9,AQP9)在脑组织中的表达变化,初步探讨AQP9在脑出血脑组织病理变化中的作用.方法 采用定量胶原酶注入大鼠尾状核建立脑出血模型,运用HE染色、免疫组化、免疫荧光双标、RT-PCR等方法 榆测脑出血大鼠脑组织AQP9表达的变化.结果 HE染色显示,脑出血面积随着时间的延长而逐渐增大,24 h达到峰值,24 h后无明显变化.RT-PCR结果 显示,除ICH 1 h外,ICH早期,AQP9 mRNA含量较假手术组降低,于6 h降至最低;24 h及以后各时段明显增高,于48 h达到峰值,7 d仍明显高于对照.免疫组化和免疫荧光双标显示,AQP9在脑内表达部位随时段变化而变化,其中,ICH后48 h,AQP9强表达于脑室周围器官和渗透压感受器.结论 ICH早期AQP9表达降低可延迟细胞内水肿的形成,而ICH后期AQP9表达上调,可能与水电解质平衡调节和能量代谢调节有关.     

新疆东部地区子痫前期与AQP9的相关性分析

目的通过检测88例新疆东部子痫前期妇女胎盘中水通道蛋白9(Aquaporin9 AQP9),为进一步揭示子痫前期病因奠定基础。方法通过免疫组化,ELISA等方法对88例新疆东部不同病变程度的子痫前期妇女胎盘中AQP9进行定量分析,揭示AQP9的表达与病变的相关程度。结果 AQP9在88例妊娠妇女胎盘中有不同程度的表达,20例正常妊娠妇女的表达程度显著低于68例子痫前期的妇女,34例轻度子痫前期的妇女AQP9的表达程度显著低于34例重度子痫前期及子痫妇女(P<0.05)。结论 AQP9在新疆东部子痫前期妇女胎盘的表达与疾病严重程度具有正相关性,为子痫前期预测研究奠定基础。     

法舒地尔对大鼠缺血性脑水肿脑组织内AQP9表达的影响

目的探讨法舒地尔对大鼠缺血性脑水肿脑组织中AQP9基因表达和蛋白合成的影响。方法健康SD大鼠144只,随机分为:对照组、手术组、法舒地尔组,建立大脑中动脉闭塞(MCAQ)模型,分别在6 h、24 h、72 h和5 d 4个时间点将大鼠麻醉后断头取脑,采用干湿比重法测脑组织含水量,行HE染色,并用R T-PCR、Western Blot检测脑组织中AQP4基因表达和蛋白合成的变化。结果与对照组相比,手术组、法舒地尔组均从6 h开始出现脑水肿,72 h时达到高峰,且法舒地尔组脑水肿低于手术组;同样AQP9及其mRNA的表达在手术后6 h后开始升高,72 h后达到高峰,且手术组较对照组相和法舒地尔组明显增高(P<0.05)。结论 AQP9与脑水肿形成有关,法舒地尔可以降低脑组织内AQP9的基因表达和蛋白合成从而减轻脑水肿。     

水通道蛋白9表达与大鼠缺血性脑水肿形成的关系

目的:研究水通道蛋白9(Aquaporin9,AQP9)在大鼠缺血性脑组织中的表达及其与脑水肿形成之间的关系.方法:采用线拴法制作大鼠局灶性脑缺血模型,通过光镜、电镜技术观察脑水肿区的病理变化,干湿重法检测脑含水量,采用原位杂交、免疫组化方法观察AQP9及其mRNA在脑组织中的表达.结果:缺血后细胞及血管周围间隙明显扩大,部分细胞坏死,胶质细胞增生;大鼠穹隆下器官、脉络丛、大脑皮质、视上核、海马等部位AQP9及其mRNA的表达上调,48～72h达峰值;脑组织含水量亦在72h达高峰.结论:随缺血性脑水肿的出现,AQP9及其mRNA表达上调,提示AQP9可能在缺血性脑水肿的形成中发挥重要作用.     

臭氧对大鼠星形胶质细胞作用的体外研究

目的观察较短时间内臭氧(O3)对体外培养的大鼠星形胶质细胞(Ast)功能结构的影响,并探讨其作用机制。方法体外培养大鼠Ast并行免疫细胞化学鉴定;大鼠Ast传代接种入24孔培养板,分为3组（n=7）,纯氧组（O₂组）加入400μL纯氧作用20min后的完全培养基;O₃40组、O₃80组分别加入400μL的40μg/mL、80μg/mL臭氧作用20min后的完全培养基,分别于2、4h收集细胞悬液及破碎细胞后简易测定法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出率,台盼蓝染色计数死亡细胞百分比。结果与O₂组比较,O₃40组Ast LDH漏出率在2、4h均降低（P＜0.05）,O380组在两时点均明显升高（P＜0.01）,且O380组4h较2h升高明显（P＜0.05）;与O₂组比较,O₃80组Ast死亡细胞百分比在2、4h均升高（P＜0.01）,且4h较2h升高明显（P＜0.01）。结论较短时间（2、4h）内,80μg/mL浓度的臭氧表现出对体外培养大鼠星形胶质细胞的损伤作用,而40μg/mL浓度的臭氧未表现出此作用。     

大鼠颅脑损伤后Caspase-9的表达变化及其法医学意义

目的探讨大鼠颅脑损伤后Caspase-9随时间变化的规律及其法医学意义。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假损伤组以及损伤后1、6、12h及1、2、3、5、7、10d和14d共12组。采用免疫组织化学SP方法、ELISA和图像分析技术观测大鼠脑外伤后不同时间段平均光密度值、阳性面积比及血清中Caspase-9含量,并对所测数据进行统计学分析。结果 ELISA检测结果,正常对照组血清Caspase-9含量为(8.75±2.37)ng/mL,伤后12h组血清中Caspase-9含量明显高于对正常对照组,至伤后1d组血清中Caspase-9含量达到高峰,为(45.23±3.31)ng/mL,此后血清中Caspase-9含量逐渐下降,至伤后7d组血清含量降至正常范围。Caspase-9免疫组织化学染色结果,脑损伤后1～6h,损伤区周围及海马可见个别Caspase-9细胞,着色较浅,损伤后12h,出现较多的Caspase-9阳性产物,损伤至1d时阳性细胞进一步增多,达到高峰,染色明显加深,伤后2～5d有很明显的Caspase-9阳性细胞,染色较深,伤后7～14d,阳性细胞明显减少。同比之下,假损伤组阳性反应物的平均光密度值及阳性面积比均高于正常组,但差异无统计学意义(P>0.05),而在损伤1～12h之间,损伤组阳性反应物的平均光密度值及阳性面积比逐渐升高,在1d时达到高峰,分别为(0.424±0.017)OD和(19.31±1.96)%,且与正常对照组及假损伤组相比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),之后随着时间的延长,阳性反应物的平均光密度值及阳性面积比逐渐下降。结论大鼠脑外伤后Caspase-9的表达呈现出升高-高峰期-逐渐下降期的规律性变化,可能为法医学损伤时间推断和颅脑损伤鉴定提供一种新的指标。