同种异体骨髓单个核细胞移植对大鼠急性心肌梗死后心室重构的影响

目的:探讨大鼠同种异体骨髓单个核细胞(BM-MNCs)急性心肌梗死区内移植对左室重构的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为假手术组(8只)、对照组(12只)、移植组(12只).假手术组单纯开胸但不结扎冠状动脉;对照组和移植组用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,分别将制备的培养基和同种异体BM-MNCs悬液心外膜下植入对照组和移植组梗死心肌周围.移植术后4周,超声心动图及血流动力学检查评价左室形态及左室功能,并观察梗死区心肌内移植的BM-MNCs及其周边组织的形态学特点.结果:移植术后4周,与假手术组相比,对照组及移植组左室收缩末期内径(LVEDs)、左室舒张末期内径(LVEDd)和左室舒张末压(LVEDP)均升高(P＜0.01),左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩压(LVSP)、左室压最大上升速率( dp/dtmax)和左室压最大下降速率(-dp/dtmax)均降低(P＜0.01).移植组LVEDs、LVEDd和LVEDP低于对照组(P＜0.01),LVEF、LVFS、 dp/dtmax和-dp/dtmax高于对照组(P＜0.01).免疫组织化学检查证实移植组心肌梗死区内有BrdU标记阳性的BM-MNCs移植细胞存活.结论:同种异体BM-MNCs移植可以减轻左室重构,改善急性心肌梗死后的心脏功能.     

骨髓单个核细胞移植可影响急性心肌梗死后心室重构

目的 观察同种异体骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells, BM-MNCs)移植对大鼠急性心肌梗死后左心室重构的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠40只,随机均分为对照组和实验组.分别将制备的培养基和BM-MNCs悬液经心外膜下种植对照组和实验组梗死心肌周围.结果 移植术后4周,实验组左心室非梗死区心肌骨桥蛋白基因(OPN mRNA)、Ⅰ型胶原和AngⅡ含量均显著低于对照组(P均<0.05).Pearson直线相关分析表明,实验组和对照组心肌AngⅡ、Ⅰ型胶原与OPN mRNA三者之间两两均呈正相关(P均<0.05).结论 同种异体骨髓单个核细胞移植可能通过抑制大鼠心肌Ⅰ型胶原合成,下调心肌AngⅡ和OPN基因表达,减轻左心室重构.     

同种异体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨大鼠同种异体骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BM-MNCs)急性心肌梗死区内移植对大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠24只,用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型后,分别将制备的培养基(对照组)和BM-MNCs悬液(移植组)由心外膜下植入梗死心肌周围.移植术后4周,超声心动图评价左室形态及功能,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测心肌细胞中Bcl-2、Fas、FasL蛋白的表达水平,同时观察梗死区心肌内移植BM-MNCs及其周边区组织形态学特点.结果:移植术后4周,移植组左室收缩末期内径和左室舒张末期内径明显低于对照组(P＜0.01),左室射血分数、左室短轴缩短率明显高于对照组(P＜0.01).TUNEL结果显示:移植组心肌细胞凋亡指数(AI)明显低于对照组(P＜0.05).免疫组化结果显示:与对照组相比,移植组心肌细胞中Bcl-2蛋白平均光密度值显著升高(P＜0.05),Fas、FasL蛋白平均光密度值显著降低(P＜0.05),同时观察到移植组心肌梗死区内有BrdU标记阳性的BM-MNCs移植细胞存活.结论:同种异体BM-MNCs移植可以抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡的发生,改善急性心肌梗死后的心脏功能,其机制可能与其调节Bcl-2、Fas、FasL的表达有关.     

趋化因子和CD34+干细胞联合移植对梗死后大鼠左室重塑影响的实验研究

目的 探讨趋化因子SDF-1联合同种异体CD34+干细胞移植对心肌梗死后大鼠左室重塑的影响.方法 wistar雄性大鼠38只,随机分成3组:SDF-1联合干细胞移植组(13只);急性心肌梗死对照组(13只):假手术组(12只).移植组和对照组结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死模型.另选同种异体大鼠13只,粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后免疫磁珠法分离外周血CD34+干细胞,在梗死模型制作后7 d,经静脉联合趋化因子SDF-1注入到移植组大鼠体内,对照组和假手术组注入等量磷酸盐缓冲液(PBS).分别于心梗术前、干细胞移植术后1周和4周行心脏超声检查,术后4周检测心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和胶原含量.结果 心肌梗死后4周,与对照组比较,移植组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS)明显提高(P<0.01),左室收缩末直径(LVESD)、左室舒张末直径(LVEDD)明显减小(P<0.01);移植组心肌组织AngⅡ、胶原含量也有不同程度下降(P<0.05).结论 经静脉联合移植趋化因子SDF-1和外周血干细胞是安全可行的,它能有效地改善心功能,抑制心室重塑,为造血干细胞在心血管疾病中的应用提供理论依据.     

超顺磁性氧化铁标记的骨髓单个核细胞在急性心肌梗死环境中的分化研究

目的 初步探讨超顺磁性氧化铁纳米颗粒(SPIOs)标记的猪骨髓单个核细胞(BM-MNCs)在急性心梗环境中向心肌样细胞分化的能力.方法 分离培养猪BM-MNCs,SPIOs标记,制备猪急性心梗模型,1周后经冠状动脉植入SPIOs标记的BM-MNCs,4周后行MILI示踪定位,心肌组织切片,利用Prussian blue染色、免疫组化、透视电镜及病理图文分析系统对标记细胞的分化行为进行研究.结果 4周后实验组心肌梗死周边区MRI可检测到点片状模糊低信号区(T2WI),Prussian blue染色及透视电镜显示胞浆中舍有铁粒子,免疫组化提示标记细胞结蛋白(Desmin)、肌球蛋白重链(MHC)表达阳性,同时CD68表达阴性,病理图文定量分析显示实验组梗死周边区结蛋白、肌球蛋白重链表达较对照组有所增加,差别具有显著性(P＜0.05).结论 SPIOs标记的BM-MNCs在急性心梗环境中仍具备向心肌样细胞分化的能力.     

同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠心脏的迁移及分化

目的探讨同种异体骨髓间充质干细胞(MSC)在大鼠心脏定居存活情况、同种异体移植是否可行。正常心脏微环境与梗死心脏微环境对骨髓间充质干细胞(MSC)迁移、分化的影响。方法雌性Wistar大鼠35只,①正常心脏MSC移植组(10只);②急性心肌梗死对照组(AMI,10只);③心肌梗死MSC移植组(10只);④单个核细胞治疗组(5只)。结扎左冠状动脉前降支造成心肌梗死模型。分离纯化来自雄性Wistar大鼠的骨髓MSC,于冠脉结扎后1～3h植入到雌性正常大鼠和心肌梗死大鼠心脏组织,模拟同种异体细胞移植治疗。于细胞移植后10周取心脏检测各种指标。结果(1)经纯化的大鼠MSC在同种异体大鼠心脏可定居、生存,而未经纯化的单个核细胞移植在同种异体大鼠心脏未见存活;(2)在正常心脏微环境中,带蓝色荧光的供体MSC细胞核呈小岛屿状分布,与宿主心肌纤维排列无关;而在心肌梗死模型大鼠心脏微环境中,蓝色细胞核分布广泛,呈椭圆形,似心肌细胞核,其排列方向与宿主心肌纤维排列方向一致,免疫组化检测胞浆心肌特异蛋白染色阳性。结论纯化的MSC具有免疫耐受特性,无需加用免疫抑制剂,可进行同种异体移植;同种异体MSC在正常心脏微环境中不发生迁移、分化;而在急性梗死大鼠心脏中具有向缺血梗死区迁移并分化为心肌样细胞的特点。     

同种心肌细胞移植对大鼠急性心肌梗死面积的影响

[目的]探讨乳鼠心肌细胞移植到心肌梗死后大鼠心肌组织内生长发育情况及其对实验性大鼠急性心肌梗死面积的影响.[方法]30只雄性SD大鼠经左冠状动脉前降支永久性结扎建立前壁心肌梗死模型并随机分为对照组和实验组.大鼠心肌梗死手术后第4周进行细胞移植.[结果]光镜显示移植的乳鼠心肌细胞存活在梗死的心肌中、生存良好,实验组与对照组比较,能显著减少实验性大鼠急性心肌梗死面积(P＜0.05).[结论]乳鼠心肌细胞可以被移植并在大鼠梗死心肌中存活.乳鼠心肌细胞移植到大鼠心肌梗死区域可明显减轻心肌梗死面积.     

同种异体骨髓干细胞移植对急性心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡基因的影响

目的探讨同种异体骨髓单个核细胞（BM—MNCs）对急性心肌梗死后心肌细胞凋亡基因的影响。方法健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组（20只）和实验组（20只）。分别将培养基和BM—MNCs悬液经心外膜下种植对照组和实验组梗死心肌周围。结果术后4周,实验组左心室非梗死区心肌细胞凋亡指数、TNF-α含量和PDCD5mRNA均显著低于对照组（P均〈0．05）。Pearson直线回归分析表明,两组左心室非梗死区心肌组织中TNF—α含量、心肌细胞凋亡指数和PDCD5mRNA表达三者之间两两均呈正相关（P均〈0．05）。结论BM—MNCs移植可能通过抑制TNF—α表达而降低PDCD5基因促凋亡作用,从而降低心肌细胞凋亡指数,抑制急性心肌梗死后心肌细胞凋亡。     

三种途径移植自体BM-MNCs对猪急性心肌梗死后心功能影响的对比研究

目的对比研究心肌内、冠脉内及静脉内3种途径移植自体骨髓单个核细胞（BM-MNCs）对猪急性心肌梗死后心功能的影响。方法3种途径移植后4周观察小血管密度及心功能变化情况。结果（1）3种途径BM-MNCs移植后4周小血管密度均明显高于各自的对照组（P〈0.01）;心肌内移植BM-MNCs组与冠脉内移植BM-MNCs组相比小血管密度无统计学差异,但明显高于静脉内移植BM-MNCs组（P〈0.01）。（2）3种途径BM-MNCs移植后4周 LVEF及FS均明显高于各自对照组但组间比较无统计学差异;心肌内移植组和冠脉内移植组LVEDd均明显低于对照组,而静脉内移植组LVEDd虽低于对照组但无统计学差异（P〉0.05）。结论3种途径移植BM-MNCs均有助于促进缺血心肌血管新生,改善左心室收缩功能,其中心肌内直接注射和冠脉内注射效果相似,静脉注射较前两种途径移植效果差;心肌内与冠脉内移植BM-MNCs组有减轻心室重构的作用,但在静脉移植组该作用不明显。     

骨髓单个核细胞移植对急性心梗大鼠血流动力学的影响

目的:评价局部移植骨髓单个核细胞对急性心梗大鼠缺血心肌血管生成作用及血流动力学的影响.方法:将26只Lweis大鼠随机分为移植组(n=14)及对照组(n=12),结扎大鼠左冠状动脉,建立急性心肌梗死模型.将新分离的骨髓单个核细胞注射到大鼠的缺血心肌中(对照组大鼠注射等量无菌PBS),术后4周观察心肌血管数目,结合心脏血流动力学参数评价心功能的改善情况.结果:4周后移植组与对照组相比左心室舒张末期压力明显降低(P＜0.01),压力变化率最大值(dp/dt)明显升高(P＜0.01,P＜0.05).移植组心肌梗死区有明显血管增生,移植组和对照组心肌血管密度分别为(23.1±1.5)和(10.5±1.8)个/HPF,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:局部移植骨髓单个核细胞能明显促进缺血心肌新生血管生成,增加缺血区灌注,并可在一定程度上改善其血流动力学指标.     

Angiogenic Potency of Bone Marrow Stromal Cells Improved by ex Vivo Hypoxia Prestimulation

Summary: To study the angiogenic potency of hypoxia-prestimulated bone marrow stromal cells(BMSCs) when transplanted into acute myocardial infarction models of rats. BMSCs were cultured under hypoxia condition for 24 h. Their expression of VEGF was investigated. The rat acute myocardial infarction models were made by coronary artery ligation and divided into 3 groups at random.In normoxia group, twice-passaged BMSCs were labeled with Bromodeoxyuridine (BrdU) and then implanted into the infarction regions and ischemic border of the recipients in 4 weeks. The rats in hypoxia group were implanted with hypoxia-prestimulated BMSCs. In control group, the model rats received only DMEM medium injection. Six-weeks after AMI, the infarction regions were examined to identify the angiogenesis and the expression of the VEGF. Our results showed that viable cells labeled with BrdU could be identified in the host hearts. The infarction regions in normoxia and hypoxia groups had a greater capillary density and increased VEGF expression than the regions in control group. The capillary density and VEGF expression in hypoxia group were higher than in normoxia group. It is concluded that the enhanced expression of VEGF in BMSCs could be induced by ex vivo hypoxia stimulation. BMSCs implantation promoted the angiogenesis in myocardial infarction tissue via supplying exogenic VEGF. Angiogenic potency of bone marrow stromal cells was improved by ex vivo hypoxia prestimulation though the enhanced VEGF expression.     

磁探针标记骨髓干细胞移植治疗急性心肌梗死的MRI示踪研究

目的利用磁探针标记猪骨髓单个核细胞（BM-MNC）,探讨磁共振成像（MRI）示踪磁探针标记BM-MNC（MR-MNC）的可行性。方法制备猪急性心肌梗死模型,分离培养14头（实验组9头,对照组5头）小型家猪的自体BM-MNC,将MR-MNC（实验组）和BM-MNC（对照组）经冠脉途径植入模型猪梗死相关动脉,术后MRI在体示踪移植细胞并与心肌组织切片对照。结果BM-MNC的超顺磁性氧化铁标记率近100％,10头（实验组7头,对照组3头）获得MRI示踪结果,MRI示心肌梗死模型均成功。3头MR-MNC移植后T2加权像（T2·WI）序列心肌梗死周边见模糊的低信号区,增强后可见此区呈现较增强前清晰的低回声信号,其中2头分别于14、21d发现低回声区消失,另1头随诊至26d因重症感染死亡;2头离体T2·WI序列示梗死区周边一个呈点状分布的低信号区。对照组均未发现低信号区。组织学检查发现5头（MR-MNC10^6以上）普鲁士染色阳性蓝细胞分布于梗死心肌周边,与磁共振信号减低区基本一致。结论1．5TMR可在体示踪心肌梗死模型猪经冠脉途径植入的MR-MNC,但移植的MR-MNC数量不应少于10^6。     

犬自体骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后胶原纤维含量影响的实验研究

目的探讨犬急性心肌梗死后自体骨髓间充质干细胞(BMMSCs)心肌移植对胶原纤维含量的影响。方法结扎犬冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型,将用Brdu标记的BMMSCs细胞悬液注入心梗区不同部位,取心梗区标本,行Massion三色染色测定胶原纤维含量。结果犬BMMSCs培养生长状况良好,传代后经Brdu标记,标记率达80%;梗死心肌组织切片发现,胶原纤维含量明显减少,血管周围胶原纤维沉积减少。结论犬经心肌内注射途径植入的自体BMMSCs可以在梗死心肌组织内定植、存活,减少胶原形成,从而有利于延缓AMI后的心室重构。     

经冠脉移植自体骨髓单个核细胞对犬心肌梗死后心功能及血管生成的影响

【目的】观察急性心肌梗死犬经冠脉移植自体骨髓单个核细胞后对心功能及血管生成的影响。【方法】结扎冠状动脉前降支建立犬急性心肌梗死模型,CM—DiI标记体外分离得到的骨髓单个核细胞bonemarrowmononuclearcell,BM—MNCs）,分为移植组（n=10）和对照组（n=6）,于心肌梗死后2h分别经冠状动脉内移植骨髓单个核细胞和生理盐水,冠状动脉结扎后2h及6周时分别测定血流动力学指标（心排m量、左心室收缩压、左心室舒张末压）。移植后6周,观察CM—Dil标记的BM—MNCs在心肌内的分布,检测心肌组织不同部位的毛细血管密度。【结果】经冠脉自体骨髓单个核细胞移植后6周,梗死边缘区和梗死中心区均可见CM—DiI标记的细胞;血流动力学指标显示,移植组左室舒张末压比对照组显著降低[（5．1±3．07）mmHgVS（11．67±3．42）mmHg,P〈0．01,1mmHg=0．1333kPa],移植组心输出量比对照组显著增加[（3．1±0．89）L／minvs（2．39±0．43）L／rain,P〈0．05];BM—MNCs移植后6周,移植组有明显的血管新生,移植组梗死边缘区血管数量明显高于对照组[（19．32±2．47）vs（9．47±1．28）,P〈0．01],梗死区血管数量移植组与对照组无显著差异[（3．44±0．51）VS（3．07±03）,P〉0．05]。【结论】经冠脉移植自体骨髓单个核细胞后,可改善急性心肌梗死后心功能,促进梗死边缘区血管生成。     

Influence of Transplantation of Allogenic Bone Marrow Mononuclear Cells on the Left Ventricular Remodeling of Rat after Acute Myocardial Infarction

Ventricular remodeling after acute myocardial in-farction (AMI) not only significantly increases the complications and deaths during the acute period but also results in the progressive impairment of ventricular func-tion progress, finally leading to congestive heart failure. Therefore, restricting or reducing the ventricular remod-eling after AMI has become one of important topic in cardiovascular studies. In recent years, the study on stem cells transplantation has been making steady progr…     

脐血血管内皮祖细胞移植对心肌梗死血管形成的影响

目的 探讨犬脐血血管内皮祖细胞(EPCs) 移植对心肌梗死血管形成的影响.方法 取妊娠犬脐血,体外分离、培养、扩增EPCs,免疫组化鉴定.建立成年杂种犬梗死模型,经BrdU标记的EPCs灌注移植入梗死区域,1、4、8周后处死动物,取心肌标本HE染色确认梗死模型、免疫组化染色BrdU观察EPCs参与梗死心肌血管形成、vW因子染色观察梗死心肌血管并计数以观察EPCs移植组与对照组血管形成差异.结果 免疫组化检测结果表明培养的细胞为EPCs;HE染色示心肌梗死区有大量瘢痕组织、成纤维细胞及小血管形成;免疫组化检测显示梗死心肌区域标本内小血管上存在BrdU阳性细胞;EPCs移植组与对照组心肌梗死后第1、4、8周的心肌缺血区和梗死区的血管计数均无显著差异.结论 犬脐血EPCs梗死心肌移植可参与血管形成,但不能促进心肌的血管再生.