聚合酶链反应检测EB病毒DNA在鼻咽癌诊断中的应用

流行病学、血清学和分子生物学的资源证实,爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）感染与鼻咽癌（ＮＰＣ）有密切关系。血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ测定和聚合酶链（ＰＣＲ）检测组织中ＥＢＶ－ＤＮＡ已用于ＮＰＣ的临床诊断。本文评价上述方法在ＮＰＣ诊断中的实用价值。８５例病人双盲法测定血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ（Ｉ）,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ（Ⅱ）;鼻咽活检组织用ＰＣＲ法检测ＥＢＶ－ＤＮＡ－（Ⅲ）和组织     

PCR法检测EB病毒基因及其与鼻咽癌发病的关系

目的　研究患者颈部转移性淋巴结中是否存在ＥＢ病毒。方法　①采用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 技术检测５０ 例患者的颈部淋巴结穿刺液;②采用ＰＣＲ法检测１５ 例石蜡包埋鼻咽癌（ＮＰＣ） 组织;③对１２例ＥＢ病毒ＶＣＡＩｇＡ 抗体阳性患者血清进行ＥＢ 病毒基因检测。结果　①３０ 例ＮＰＣ 患者中,２７ 例ＥＢＶＤＮＡ 阳性（ 阳性率９０ ％ ） ;７ 例头颈部其他肿瘤患者中１ 例阳性（１４－３ ％ ） ;８ 例其他部位肿瘤患者中１ 例阳性（１２－５ ％ ） ;５ 例鼻咽部炎症患者ＥＢＶＤＮＡ 检测均为阴性。经χ２ 检验,ＮＰＣ 组与其他肿瘤及鼻咽部炎症组相比,阳性率差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ０－００５） 。②１５ 例石蜡包埋ＮＰＣ 组织,ＥＢＶ基因阳性者有１２ 例（ 阳性率８０ ％ ） ;１ 例鼻咽部慢性粘膜炎石蜡包埋组织末检测到ＥＢＶＤＮＡ。③３ 例临床诊断为ＮＰＣ 的血清中均检测到ＥＢＶＤＮＡ（２５ ％ ） 。结论　对于隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌中确认是否为鼻咽癌,ＥＢ 病毒基因检测是有价值的,ＰＣＲ 技术可以为ＮＰＣ 的诊断和鉴别诊断提供参考依据。     

EB病毒DNA在正常全鼻咽组织及鼻咽癌中的表现

作者应用原位核酸杂交技术，采用ＥＢ病毒ＢａｍＨＩ－Ｗ片段为探针，检测了湘南地区正常鼻咽粘膜、鼻咽低分化鳞癌和未分化癌，高分化和中分化鳞癌，颈淋巴结转移性低分化鳞癌，颈淋巴结其它部位转移癌及鼻咽临近区恶性肿瘤标本。ＥＢＶＤＮＡ阳性例数分别为０／１０个，２４／２６个，２／７个，６／６个，０／４个和４／２４个。同时，对上述病例进行血清ＥＢ病毒壳抗原免疫球蛋白Ａ抗体检测，低分化鳞癌和未分化癌阳性例数为２３／２６个，与ＥＢＶＤＮＡ检测结果一致，经统计学处理，两者具相关性。实验结果表明：（１）湘南地区鼻咽癌的发生中ＥＢＶ感染起非常重要作用，ＥＢ病毒与鼻咽低分化鳞癌及未分化癌关系密切。（２）血清ＥＢＶ壳抗原ＩｇＡ抗体检测可作为对鼻咽癌早期诊断的有效监测指标。（３）在颈部原发灶不明的转移癌中有ＥＢＶＤＮＡ片段的检出，对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值。     

重组EB病毒DNA酶的生物学特性及其应用的初步研究

经温度诱导含正向目的基因工程菌粗提液的ＤＮＡ酶活性比宿主菌本身的ＤＮＡ酶活性高７倍以上，且比等蛋白含量激发的Ｒａｊｉ细胞粗提液ＤＮＡ酶活性高２倍以上，阳性血清对重组ＥＢ病毒（ＥＢＶ）－ＤＮＡ酶的中和率高达８３．５％，用重组酶粗提液和Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ酶检测的１０６例鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清抗ＥＢＶ－ＤＮＡ酶抗（ＥＤＡｂ）水平，结果无显著性差异，检出鼻咽癌的效率亦无显著性差异，表明重组酶经进一步提纯     

重组EB病毒DNA酶的生物学特性及其应用的初步研究

经温度诱导含正向目的基因工程菌粗提液的ＤＮＡ酶活性比宿主菌本身的ＤＮＡ酶活性高７倍以上，且比等蛋白含量激发的Ｒａｊｉ细胞粗提液ＤＮＡ酶活性高２倍以上；阳性血清对重组ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ酶的中和率高达８３．５％；用重组酶粗提液和Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ酶检测的１０６例鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清抗ＥＢＶＤＮＡ酶抗体（ＥＤＡｂ）水平，结果无显著性差异，检出鼻咽癌的效率亦无显著性差异；表明重组酶经进一步提纯并标准化定量后可用于临床常规检测及大规模普查。     

EB病毒抗体检测在鼻咽癌早诊应用中的评价

作者在广东鼻咽癌高发区四会市、广州市的５４４２５名。年龄在３０－５９岁自然人群中，应用多项ＥＢ病毒（ＥＢＶ）血清学指标结合鼻咽光导纤维镜、病理组织学检查等手段，进行前瞻性观察、验证及评价这些鼻咽癌“高危人群”血清学指标的应用价值。我们认为：在鼻咽癌高发区人群筛查中，应用ＥＥＶ抗体检测，凡具下列指标之一者。为患鼻咽癌高危人群，应给予鼻咽光纤镜及病理检查，以期发现早期病人。①ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ≥１：８０或ＥＤＡｂ≥５０％。②ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ、ＩｇＡ／ＥＡ、ＥＤＡｂ３项中任何两项阳性。③ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ、ＩｇＡ／ＥＡ、ＥＤＡｂ３项中任何单项持续高滴度或滴度持续上升。     

PCR扩增EBV－DNA酶及NA－1基因片段在鼻咽癌诊断上的应用

对６４例鼻咽部活检组织标本进行ＥＢ病毒（ＥＢＶ）特异性基因片段［ＤＮＡ酶、核抗原－１（ＮＡ－１）］的ＰＣＲ扩增，该结果与血清抗ＥＢＶ－ＤＮＡ酶抗体（ＥＢＶ－ＤＮａｓｅａｎｔｉｂｏｄｙ，ＥＤＡｂ）及初次细胞病理学结果对照，上述３种检测方法检出的阳性质例分别为：ＤＮＡ酶基因４０例（ＮＡ－１基因４１例），ＥＤＡｂ３７例，初次病理３５例，ｘ２检验表明３种检测方法结果相符。对ＤＮＡ酶基因和ＮＡ－１基因扩增阳性而初次病理阴性（诊断为慢性炎症）的８例中的６例（另２例因故未检）进行第２次活检，有５例病理确诊为原位低分化鳞癌。另对４２例头颈部肿大淋巴结的活检组织进行了上述基因片段的扩增，其中病理诊断为转移性低分化鳞癌的１０例中有６例为基因片段扩增阳性，该６例中４例后来在鼻咽部发现原发灶（２例为粘膜下型）。     

376例EB病毒壳抗原抗体检测结果

３７６例ＥＢ病毒壳抗原抗体检测结果王化胶，夏英亭，李林，孙化鲲（临沂地区人民医院检验科，耳鼻喉科）关键词爱泼斯坦－巴尔病毒；抗体．病毒；鼻咽肿瘤ＥＢ病毒（ＥＢＶ）与鼻咽癌有关ｔ’·’］。侵入机体后在体内产生多种抗体。其中ＥＢＶ—ＶＣＡ抗体的测定对鼻咽...     

EBV-EAIgG抗体测定在鼻咽癌诊断和筛查中的应用

目的：探讨ＥＢ病毒早期抗原（ＥＡ）ＩｇＧ抗体测定在鼻咽癌诊断和筛查中的应用。方法：对４５４例鼻咽癌和３００例健康人的血清分别用免疫酶法测定抗ＥＡ抗原的ＩｇＡ／ＥＡ抗体,用ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ／ＥＡ抗体,以及用抗酶率法测定抗ＥＢＶＤＮＡ酶抗体。并用免疫酶法测定ＩｇＡ／ＶＣＡ和ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ／ＥＡ的方法对鼻咽癌高发区人群的９５３６例血清进行鼻咽癌筛查。结果：３种方法中ＥＬＩＳＡ法检测ＩｇＧ／ＥＡ诊断鼻咽癌的效率最高（９２５％）。以双项检测阳性（ＩｇＧ／ＥＡＡ值≥０１８和ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度≥１∶８０）为标准,鼻咽癌筛查的阳性预示值（鼻咽癌数／阳性血清数）为１６５％（１３／７９）,高于单项阳性标准,Ｐ＜００５。结论：ＥＬＩＳＡ检测血清ＩｇＧ／ＥＡ的方法适用于鼻咽癌的血清学诊断,与检测ＩｇＡ／ＶＣＡ的免疫酶法联合应用的双阳性标准适合于在鼻咽癌筛查中采用。为了提高筛查的敏感性,建议将双项阳性标准中的ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度定为≥１∶５。ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度从≥１∶８升高到≥１∶５。     

EBV—EA IgG抗体测定在鼻咽癌诊断和筛查中的应用

目的：探讨ＥＢ病毒早期抗原（ＥＡ）ＩｇＧ抗体测定在鼻咽癌诊断和筛查中的应用。方法：对４５４例鼻咽癌和３００例健康人的血清分别用免疫酶法测定抗ＥＡ抗原的ＩｇＡ／ＥＡ抗体,用ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ／ＥＡ抗体,以及用抗酶率法测定抗ＥＢＶ－ＤＮＡ酶抗体。并用免疫酶法测定ＩｇＡ／ＶＣＡ和ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ／ＥＡ的方法的对鼻咽癌高发区人群的９５３６例血清进行鼻咽癌筛查。结果：３例方法中ＥＬＩＳＡ法检测Ｉｇ     

鼻咽癌患者血清EB病毒DNA片段的检出及临床意义

目的：探讨鼻咽癌患者血清Epstein-Barr病毒(EBV)DNA片段检出率及其和EBV衣壳抗原IgA类抗体(VCA／IgA)的关系。方法：聚合酶链反应(PCB)加限制性内切酶酶切技术检测疱疹病毒的DNA，酶免疫组化技术检测EBV VCA／IgA抗体。结果：33例鼻咽癌患者中，抗体阳性率88％，DNA阳性率55％；对照组120例，仅1例检出EBV DNA片段。鼻咽癌患者中EBV DNA片段的检出率显著性高于对照组，但EBVDNA片段的检出率低于EBV VCA／IgA抗体的检出率。结论：进一步证实EBV与鼻咽癌有密切关系；EBV DNA片段及EBV VCA／IgA抗体检测，有利于鼻咽癌的辅助诊断。     

Epstein-Barr virus infection in nasopharyngeal lymphoid hyperplasia

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｄｅｔｅｃｔｗｈｅｔｈｅｒＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ）ｈａｒｂｏｒｓｉｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｌｙｍｐｈｏｉｄｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ（ＮＰＬＨ）ｗｈｉｃｈｉｓｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙｔｏｂｅｓｅｅｎｉｎＧｕａｎｇｚｈｏｕ,ａｈｉｇｈｉｎｃｉｄｅｎｃｅａｒｅａｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ）,ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＮＰＬＨａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＮＰＣＭｅｔｈｏｄｓ　Ｔｗｅｎｔｙ…     

鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的检测

目的探讨鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的分布及其与鼻咽癌的关系.方法采用多聚酶链反应检测24例鼻咽癌患者(实验组)及10例头颈部其它部位肿瘤(对照组-1)和10例慢性鼻咽炎患者(对照组-2)外周血白细胞及血清中EB病毒的DNA.同时采用免疫酶法检测以上各组患者血清中EB病毒VCA-IgA抗体的效价.结果发现实验组中10例患者外周血白细胞中EB病毒DNA为阳性,阳性率为41.67%(10/24).对照组-1阳性率为10%(1/10),对照组-2患者外周血白细胞中EB病毒DNA均为阴性.实验组与对照组-2比较阳性率差异有显著性(P＜0.05).在以上三组患者血清中EB病毒DNA均为阴性,三组间无差异.实验组VCA-IgA与对照组-1,对照组-2分别比较阳性率其差异均有显著性(P＜0.01).结论有些鼻咽癌患者外周血白细胞中可检测出EB病毒DNA.血清中未能检测出EB病毒DNA.鼻咽癌患者外周血白细胞EB病毒DNA的存在与血清VCA-IgA的效价之间有一定的关系.     

血浆EBV DNA检测对鼻咽癌的诊断作用

目的探讨血浆EBV DNA检测对鼻咽癌的诊断作用。方法将2006年12月至2007年3月在我科就诊、病理确诊的65例鼻咽癌作为治疗前组,经我院放疗科治疗后,分别于放疗结束后3、5、8个月来我科系统复查的病人作为治疗后组,将同期行健康体检的29例作为对照组,共3组。采用荧光定量PCR方法对3组的空腹血浆EBV DNA进行检测。结果3组间血浆EBV DNA阳性率比较有统计学意义(P<0.05);治疗后组的阳性病例全部有鼻咽癌复发,阴性病例没有复发;有、无淋巴结转移组间阳性率比较差异有统计学意义(P=0.00)。结论血浆EBV DNA是鼻咽癌诊断的重要分子标记,其阳性的病例有较高淋巴结侵袭发生率。     

Detection of Epstein-Barr virus DNA in plasma/serum: a useful serological indicator for diagnosis of nasopharyngeal carcinoma

Objective To compare the detection rates of Epstein-Barr virus (EBV) DNA in the serum/plasma between apparently healthy adults (AHAs) and nasopharyngeal carcinoma (NPC) patients in attempt to evaluate the efficiency of EBV DNA assay for serodiagnosis of NPC.Methods The plasma and serum were obtained from 58 AHAs and 66 untreated NPC patients. EBV DNA W-fragment was detected using nested ploymerase chain reaction (PCR). Immunoenzymatic assay for titration of IgA-VCA was also adopted. Results EBV DNA detection rate (84.85%) in the plasma/serum of 66 NPC patients was significantly higher than that (10.34%) in 58 AHAs. The sensitivity of plasma/serum EBV DNA assay (0.8485) was higher than that (0.8030) of titrating IgA-VCA (positive criterion≥1∶40) though the specificities of these two tests were the same (0.8966). The correct rate, predictive value of a positive test, and Odds ratio of dual positivity (0.8387, 0.9792 and 141.0, respectively) were higher than those of single positivity either to plasma/serum EBV assay (0.5242, 0.7333 and 1.1423, respectively) or to IgA-VCA≥1∶40 test (0.4839, 0.5385 and 1.0480, respectively). Conclusion The EBV DNA detection in the plasma/serum using nested PCR may be a useful indicator for serodiagnosis of NPC.     

EB病毒Rta/IgG、EBNA1/IgA、VCA/IgA 及EA/IgA 抗体与鼻咽癌分期的关系

目的探讨EB病毒Rta/IgG、EBNA1/IgA、VCA/IgA及EA/IgA抗体与鼻咽癌临床分期的关系。方法收集211例未经治疗的鼻咽癌患者的血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Rta/IgG、EBNA1/IgA抗体,用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA抗体,按92分期法进行分期,分别计算各T、N、M分期及临床分期的各抗体阳性率及抗体水平并进行统计学分析。结果鼻咽癌各T、N、M分期及临床分期组Rta/IgG抗体rA值均无统计学差异(P>0.05)。T1期的EBNA1/IgA抗体rA值明显低于其它T分期,N0期明显低于其它N分期,临床I期明显低于其它临床分期(P<0.05)。VCA/IgA、EA/IgA抗体滴度各N分期及临床分期间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EB病毒Rta/IgG抗体表达与鼻咽癌分期无关。EBNA1/IgA抗体在早期鼻咽癌表达水平相对较低。而VCA/IgA、EA/IgA抗体水平与颈部淋巴结转移程度相关,对于评估鼻咽癌临床分期有一定的参考价值。     

Detection of serum Epstein-Barr virus antibody level by ELISA in normal populations and nasopharyngeal carcinoma patients in Zhongshan City of China]

OBJECTIVE: To understand the distribution of Epstein-Barr virus (EBV) antibodies, namely EBNA 1/IgA, ZEBRA/IgA, EBNA 1/IgG in the populations of different ages or genders in Zhongshan City of Guangdong Province, China. METHOD: A total of 484 serum samples were obtained from the population of Zhongshan City including 16 patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) and were assayed with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for EBV antibodies. RESULTS: The serum antibody level of EBNA1/IgA, represented by its relative optical density value abbreviated as D(lambda), was 0.726 +/- 0.541 in male and 0.563 +/- 0.340 in female subjects, showing significant difference (P<0.001). The level of ZEBRA/IgG in the male subjects was significantly lower than that of the female subjects (0.709 +/- 0.480 vs 0.829 +/- 0.480, P<0.01). EBNA1/IgG levels differed little between the male and the female subjects, being 0.781 +/- 0.285 and 0.784 +/- 0.302 respectively (P<0.05). The positivity rate of ZEBRA/IgG was obviously related to the subjects' ages with a correlation factor of 0.766 (P<0.05), and NPC patients had significantly higher levels of the 3 antibodies than did the healthy subjects (P<0.01). CONCLUSIONS: The serum levels of these 3 antibodies fluctuate within a limited range in different age groups or between genders, significant increasing in NPC group and therefore may help the diagnosis of NPC. It can be imperative to set differently critical values of EBV antibody for different population groups to facilitate nasopharyngeal carcinoma (NPC) diagnosis and high-risk screening.     

ELISA法检测中国中山市正常人及鼻咽癌患者血清EB病毒抗体水平

目的观察EB病毒抗体 EBNA1/IgA、ZEBRA/IgG、EBNA1/IgG在不同年龄、不同性别的正常人群中的分布,并与鼻咽癌患者进行比较。方法用ELISA法在全自动酶联免疫分析系统上检测468例正常人和16例鼻咽癌患者的血清标本。结果正常人血清各抗体的水平[rD（λ）值]分别为:EBNA1/IgA男性0.726±0.541,女性0.563±0.340,男性高于女性（P<0.001）;ZEBRA/IgG男性0.709±0.480,女性0.829±0.480,女性高于男性（P<0.01）;EBNA1/IgG男性0.781±0.285,女性0.784±0.302,男女之间无显著性差异（P>0.05）。ZEBR/IgG的阳性率随年龄增高而升高,相关系数为0.766（P<0.05）。鼻咽癌患者上述3种抗体的血清水平分别为3.265±1.76、1.408±0.672、1.249±0.317,均明显高于正常人（P<0.01）。结论正常人群中EBNA1/IgA、ZEBRA/IgG、EBNA1/IgG3种抗体的血清水平存在年龄和性别上的差异,但波动在一定范围内;在鼻咽癌的临床诊断和高危人群筛查中有必要根据具体的人群界定不同的阳性临界值;鼻咽癌患者此3种抗体的血清水平均明显升高,对鼻咽癌的诊断有一定意义。     

血清急性期蛋白EB病毒IgA／VCA，IgA／EA抗体测定在鼻咽癌诊断中的应用

测定１９０例鼻咽癌（ＮＰＣ）患者血清中急性期蛋白（ＡＰＰＳ）包括：唾液酸（ＳＡ）．α＿１－抗胰蛋白酶（α＿１－ＡＴ），α＿１－酸性糖蛋白（ａα＿１－ＡＧＰ），触珠蛋白（ＨＰ），铁传递蛋白（ＴＦ）和前清蛋白（ＰＡ）及ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ抗体，并评价ＡＰＰＳ和ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ抗体对鼻咽癌的诊断价值。。将ＡＰＰＳ测定值经逐步判别分析统计学处理，求得判别函数，用以对ＮＰＣ进行判别诊断。结果发现：ＮＰＣ治疗前组ＡＮＰＳＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ与临床病理诊断的符合率分别为８１．８８％和５６．５７％，而治疗后未复发组两者的符合率分别为８０．９５％和３３．３３％。结果表明：对ＮＰＣ的诊断和随访ＡＰＰＳ优于ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ，ＩｇＡ／ＥＡ抗体。