NO-1886抑制糖尿病兔肝糖原分解和肝脏脂肪病变的实验研究

目的：探讨合成化合物N0—1886是否降低高糖高脂饲料诱发的糖尿病新西兰兔的血清葡萄糖浓度和肝脏病变。方法：体重2kg左右的雄性新西兰兔60只，随机选取20只饲以基础饲料为A组(正常对照组)；20只饲以高糖高脂饲料为B纽(糖尿病对照组)；20只饲以高糖高脂饲料加1．0％N0—1886为C组(糖尿病治疗组)。分别在0，4，8，12，16，20，24，28周时从禁食过夜的兔子静脉抽取血样测定葡萄糖、甘油三酯水平。第32周末，处死动物，取肝脏一小块，10％福尔马林液固定，常规石蜡包埋切片，分别作H．E和肝糖原染色，光学显微镜下观察。结果：糖尿病对照组1个月后即出现高血糖、高甘油三酯，并随着喂养时间延长而逐渐升高。正常对照组血糖、甘油三酯未见明显升高，两组对比差异具有显著性意义(P＜0．05)，与糖尿病对照组比较，糖尿病治疗组血糖、甘油三酯有所降低。从肝脏病理切片观察所见，糖尿病对照组肝脏脂肪变性明显，具大量脂肪空泡，并有局灶溶解性坏死，肝糖原极少或消失。而糖尿病治疗组肝脏未见明显脂肪空泡变性，组织结构基本正常，肝糖原丰富。结论：N0—1886不仅可改善脂质代谢紊乱，而义可降低血清葡萄糖，减少肝糖原分解和减轻肝脏脂肪病变。可开发为治疗糖尿病糖代谢紊乱和脂质紊乱的药物。     

ibrolipim 对糖尿病小型猪肝脏PKBβ/Akt2表达的影响

目的 采用高脂高糖高胆固醇饮食喂养的方法建立广西巴马小型猪糖尿病动物模型.研究合成化合物ibrolipim(NO-1886)对肝脏PKBβ/Akt2表达变化的影响,探讨ibrolipim改善胰岛素抵抗、治疗糖尿病的可能机制.方法 15头雄性广西巴马小型猪按体重随机分为3组:正常对照组(n=5)饲以正常饲料;高脂高糖高胆固醇组(n=5)饲以高脂高糖高胆固醇饲料;加药组(n=5),HFSCD饲料中加入1.0%NO-1886.每月末测定血糖、甘油三酯、胰岛素和口服葡萄糖耐量实验.第5个月末取部分肝脏组织用western blotting和免疫组织化学方法检测Akt2蛋白的表达.结果 CD组血糖、甘油三酯、胰岛素水平正常,葡萄糖耐量实验(OGTT)血糖清除和胰岛索分泌有效、及时;与CD组相比较,HFSCD组血糖和甘油三酯胰岛素水平明显升高,糖耐量减低;HFSCD NO-1886组与HFSCD组相比,血糖、甘油三酯和胰岛素水平明显降低,OGTT葡萄糖清除和胰岛素分泌近似CD组.CD组肝脏Akt2蛋白表达鼍较高;HFSCD组Akt2表达量减少(P<0.05);HFSCD 1%NO-1886组Akt2蛋白表达较HFSCD明显增高(P<0.05)但低于CD组.结论 饮食诱导的糖尿病小型猪肝脏组织Akt2表达降低;NO-1886能够上调肝脏Akt2蛋白的表达.改善胰岛素抵抗.     

NO-1886对高糖高脂喂养小型猪肾脏蛋白激酶C表达的影响

目的 探讨合成化合物脂蛋白酯酶活化剂NO-1886对高糖高脂喂养小型猪肾脏蛋白激酶C表达的影响.方法 广西巴马小型猪共15只,按体重随机分为3组,5只/组:正常对照组,喂正常猪饲料;高糖高脂组,喂高糖高脂饲料;加药组,喂加入1.0%NO-1886的高糖高脂饲料.动物分栏喂养,每日投食3次,日粮为体重的4%,自由饮水.实验期为5个月.实验前和实验过程中每月末分别抽取血样,葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;GPO-PAP酶法测定血浆三酰甘油;放射免疫法测血浆胰岛素.第5个月从左肾下极的相同部位取部分组织(包括皮质和髓质),HE染色以观察细胞显微结构,同时免疫组化染色;免疫组织化学方法和Western blot方法分别检测肾脏蛋白激酶C表达情况.结果 使用NO-1886组的葡萄糖、胰岛素和三酰甘油水平显著下降;肾脏细胞显微结构结构基本正常;免疫组织化学方法和Western blot方法检测的结果同时说明NO-1886可以降低高糖高脂饮食所致巴马小型猪肾脏组织中蛋白激酶C的表达.结论 NO-1886可以通过降低糖尿病肾病中的高血糖和高血脂,下调巴马小型猪肾脏组织中蛋白激酶C的表达.     

NO-1886抑制糖尿病猪心肌血管内皮生长因子表达

目的探讨脂蛋白脂酶活化剂NO_1886对糖尿病小型猪心肌组织血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。方法15只广西巴马小型猪按体重随机均分3组:正常对照组(CD)饲以正常饲料;高脂高糖高胆固醇组(HFSCD)饲以高脂高糖高胆固醇饲料;加药组(HFSCD NO_1886),HFSCD饲料中加入1·0%NO_1886。每月末测定血糖、血脂和胰岛素水平。第5个月末取部分心尖组织,HE染色,免疫组化方法检测VEGF的蛋白表达。结果与CD组比较,HFSCD组血糖、高密度脂蛋白胆固醇(HDL_c)、甘油三酯和胰岛素水平异常升高;而HFSCD NO_1886组与HFSCD组相比,血浆HDL_c显著升高,血糖、甘油三酯和胰岛素明显下降。三组心肌组织VEGF表达的平均积分光密度值分别为:CD0·2798±0·0794;HFSCD0·4394±0·0399;HFSCD NO_18860·3333±0·0773(P=0·004)。结论NO_1886可降低HFSCD诱导的糖尿病小型猪血糖、甘油三酯和胰岛素,升高HDL_c水平,改善糖代谢和脂代谢紊乱,并对心肌组织VEGF的蛋白表达具有下调作用。     

NO-1886对高脂/高糖/高胆固醇饲养的小型猪组织中CRP和IL-6蛋白表达的影响

目的探讨脂蛋白酯酶活化剂NO-1886对高糖／高脂／高胆固醇饲养的小型猪组织中CRP及IL-6蛋白表达的影响。方法15只雄性巴马小型猪,按体重随机分为3组：正常组：喂基础猪饲料;三高组：喂高脂／高蔗糖／高胆固醇饲料（含10％猪油、37％蔗糖和2％胆固醇）;加药组：在高脂／高蔗糖／高胆固醇饲料里加1．0％NO．1886。5个月后处死动物,用油红0染色检测脂质在小型猪肝脏组织的蓄积情况,Westernblot技术检测炎症因子CRP和IL-6在肝脏和脂肪等组织中的表达。结果正常组和加药组肝脏结构正常,未见明显脂滴;而三高组肝脏组织内充满了大量大小不等的红染脂滴。与正常组比较,高脂／高糖／高胆固醇饮食能诱导巴马小型猪肝脏和脂肪等组织中ClIP和IL-6的蛋白表达增加,而在高脂／高糖／高胆固醇饲料中添加1．0％NO-1886后,NO-1886能降低肝脏和脂肪等组织中CRP和IL-6的蛋白表达。结论NO-1886能明显抑制脂质在肝脏组织中的蓄积,降低高脂／高糖／高胆固醇饲养的小型猪组织中CRP及IL-6的蛋白表达。     

高糖高脂饮食对广西巴马小型猪肾脏病理结构的影响

目的:建立饮食诱导的广西巴马小型猪糖尿病模型,研究其肾脏的病理学改变。方法:将雄性广西巴马小型猪10只按体重随机分为两组,5只饲以基础饲料作为正常对照组,5只饲以高糖高脂高胆固醇饲料作为高糖高脂组,建模5个月后处死动物,取出左肾,计算左肾重/体重比值,常规制片,HE、PAS染色,观察肾脏组织病理学变化。结果:高糖高脂组部分肾小球肿胀,基底膜增厚,系膜区增宽,基质增加,少数肾小球纤维化,囊腔闭塞;小叶间动脉管壁增厚,平滑肌细胞增生,管腔狭窄。而对照组肾脏病理改变不明显。结论:用高糖高脂饮食喂养广西巴马小型猪5个月,可引起肾脏发生典型的早期病理改变,说明饮食诱导法可建立较理想的早期糖尿病肾病模型。     

高糖高脂高胆固醇致兔糖、脂代谢紊乱和胰、肝、肾组织结构的变化

目的探讨高糖高脂高胆固醇饲料对新西兰兔血糖、甘油三酯、总胆固醇水平和胰、肝、肾组织结构的影响.方法将雄性新西兰兔20只随机分为2组,10只饲以基础饲料作为正常对照组（C组）;10只饲以高糖高脂高胆固醇饲料作为实验组（HD组）,共观察16周,每4周从禁食过夜的兔耳缘静脉抽取血样,测定血清中葡萄糖、甘油三酯和总胆固醇水平.16周时全部处死动物,取胰腺、肝脏和肾脏,用10%中性甲醛液固定,常规石蜡包埋切片,作HE染色、VG染色,并用免疫组织化学方法检测胰岛β细胞.结果与对照组相比,实验组出现空腹血清总胆固醇、甘油三酯、葡萄糖相继升高（P＜0.05）.以不同喂养时间作方差分析,整体上差异具有统计学意义.喂养16周后,实验组胰、肝、肾病理检查及胰腺免疫组化结果显示：胰岛数量减少,萎缩,胰岛内细胞数目亦减少,胞核浓染、缩小,胞浆内空泡变性明显,红染加深;肝脏脂肪样变性,纤维化;肾小球肥大,硬化,而正常对照组组织结构基本正常.结论高糖高脂高胆固醇饲料对新西兰兔具有脂肪毒性和葡萄糖毒性,可致血糖、甘油三酯、总胆固醇水平升高,并可引起胰岛β细胞和肝脏、肾脏组织结构损伤.     

非酒精性脂肪肝病小鼠模型的建立及评价

目的 运用饲料及药物进行3种不同的建模方式,造非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠模型,比较3种模型的特点,为NAFLD药物筛选提供实验基础.方法 昆明鼠35只随机分成正常对照组(8只)、高脂饲料组(9只)、高糖高脂饲料组(9只)、高糖高脂饲料加氢化可的松组(9只).实验4周后,观察各组小鼠体质量、活动情况、肝指数、血清生化指标、肝脏病理学等变化情况.结果 相比正常对照组,高脂饲料组体质量增高最显著,高糖高脂饲料组次之,高糖高脂饲料加氢化可的松组体质量低于正常对照组(P<0.05);3种模型肝指数均高于正常组(P<0.05);血糖、血三酰甘油水平增高,肝脏三酰甘油显著高于正常对照组(P<0.05).3组模型小鼠肝脏病理切片染色均出现肝脏脂肪变性,其中高糖高脂饲料加氢化可的松组肝脏脂肪变性最严重,为最优建模方法.结论 不同处理方式都可制备NAFLD模型,但肝脏损伤程度不同.     

贵州小型猪2型糖尿病动物模型的建立

目的　建立贵州小型猪 2型糖尿病模型 ,并观察其胰腺结构变化。方法　将贵州小型猪1 0头随机分为 2组 ,5只饲以基础饲料作为正常组 (A组 ) ,5只饲以高脂高糖饲料作为实验组 (B组 )。共观察 6个月。在 0 ,2 ,3,4,5 ,6月末采取动物禁食过夜后空腹血 ,测定血浆中血糖和血清中胰岛素。于第 6个月末 ,全部处死动物 ,取动物胰腺。取一部分胰腺用 1 0 %甲醛溶液固定 ,常规石蜡包埋切片 ,H .E染色 ,光学显微镜下观察 ;另一部分胰腺用 2 .5 %戊二醛固定 ,常规电镜样品制备 ,透射电镜下观察并照相。结果　实验组 2个月后即出现高血糖 ,并随时间延长而逐渐升高 ,对照组血糖未见升高 ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。实验组血清胰岛素稍有升高 ,3个月后逐渐降低 ,6个月后明显降低 ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。实验组胰腺组织表现为胰岛萎缩 ,胰岛边缘皱缩 ,胰岛数目减少 ,胰岛内细胞数量亦减少 ,多数细胞呈梭形 ,细胞核呈杆状 ,胰岛周围少量淋巴细胞浸润 ,出现空泡变性。透射电镜下观察到实验组胰岛 β细胞肿胀 ,部分结构溶解、细胞呈空化 ,细胞颗粒溶解或脱落 ,胰岛周围细胞内可见较大的脂滴。α细胞结构有局灶溶解呈空泡状结构 ,腺泡细胞内粗面内质网模糊 ,部分扩张严重。结论　高脂高糖饲料可诱发     

脂联素在LPS预处理减轻高糖高脂膳食诱导NASH中的表达

目的 研究脂多糖(lipopalysaccharide,LPS)预处理对高糖商脂膳食诱导的非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steato-hepatitis,NASH)的影响及血浆脂联素(adiponectin,APN)表达的变化.方法 24只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、LPS预处理组和肝损伤组.肝损伤组饲以高糖高脂饲料;LPS预处理组饲料同肝损伤组,隔日皮下注射LPS 0.5 mg/kg;正常对照组饲以普通饲料;所有大鼠自由进食与饮水.于实验第9周末处死动物.制备肝组织切片,计数浸润肝组织的淋巴细胞;测定血浆内毒素(endotoxin,ET)水平和丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活性、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、APN含量.结果 肝损伤组血浆ET水平与正常对照组相比显著升高;LPS预处理组血浆ALT水平、肝组织淋巴细胞计数与肝损伤组比较均显著降低;血浆TNF-α水平LPS预处理组与肝损伤组比较明显降低,而血浆APN则相反,经统计学分析差异均有统计学意义(P<0.05).肝组织切片HE染色结果显示,LPS预处理组与肝损伤组相比,肝细胞内脂肪空泡小、数量少,脂肪变性明显减轻.结论 LPS预处理可以减轻高糖高脂膳食诱导的NASH,其机制可能与高水平的脂联素抑制TNF-α的产生,从而降低TNF-α介导的肝细胞损害有关.     

高糖高脂联合低剂量链脲佐菌素对版纳微型猪肝脏损伤和蛋白激酶B表达的影响

目的 观察高糖高脂联合低剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对版纳微型猪糖、脂代谢紊乱、肝组织病理改变及其蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)磷酸化的影响,并探讨其机制。方法 高糖高脂联合低剂量STZ诱导云南版纳微型猪2型糖尿病模型,每月末测定血糖、血脂、胰岛素,HE、PAS和苏丹Ⅳ染色观察肝脏显微结构。12个月末处死动物,real time-PCR和Western blotting 检测肝组织 PKB mRNA和总蛋白表达及PKB丝氨酸473(PKB-Ser⁴⁷³)的磷酸化水平。结果 喂养12月后,与正常对照组比较,模型组显示高血糖、血脂障碍及胰岛素缺乏(P<0.05)。肝脏脂肪病变,肝糖原合成显著减少;PKB mRNA及蛋白表达增高(P<0.05),但PKB磷酸化降低(P<0.05)。结论 高糖高脂联合STZ可诱导版纳微型猪发生胰岛素抵抗、糖尿病,促进肝脏脂质蓄积,抑制糖原合成,可能与信号分子PKB抑制有关。     

不同血糖状态下的妊娠小鼠脂代谢特点与肝脏病理学特征

目的通过高脂高糖诱导妊娠糖尿病（GDM）小鼠模型,探讨不同血糖状态下的妊娠小鼠脂代谢特点及其肝脏的病理学特征。方法将C57BL/6J雌鼠随机分为普通饮食组和高脂高糖饮食组,确定受孕后,普通饮食组继续给予普通饲料喂养,高脂高糖饮食组给予高脂高糖饲料喂养。检测孕期体重情况、空腹血糖、空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数,同时检测甘油三酯、胆固醇和游离脂肪酸,并且进行肝脏组织病理学观察。结果高脂高糖饮食喂养孕鼠组空腹血糖水平明显升高且高血糖水平较稳定,体重增加明显,妊娠晚期胰岛素水平及胰岛素抵抗指数增加,动物模型稳定。高脂高糖饮食孕鼠组小鼠血甘油三酯、总胆固醇和游离脂肪酸较高脂高糖饮食未孕组小鼠、普通饮食未孕组小鼠及普通饮食孕鼠组小鼠明显增高。肝脏组织病理显示,高脂高糖饮食孕鼠组肝板排列不整齐,肝细胞胞浆内可见大小不等的脂肪空泡。结论运用高脂高糖饮食诱导C57BL/6J小鼠能够模拟人类GDM发病特点在不同饲养方式和不同学堂状态下的妊娠小鼠脂质代谢紊乱不一致,GDM小鼠其血脂代谢紊乱程度严重,并且可以引起明显的肝脏病理学变化。     

NO-1886对高糖高脂饲料喂养新西兰兔糖代谢的影响

合成药NO-1886是脂蛋白脂肪酶(LPL)的激动剂，能降低血浆甘油三酯(TG)并升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)水平。我们曾发现NO-1886还具有降低血糖的作用。本研究主要观察NO-1886对糖尿病兔胰岛素抵抗及β-细胞功能方面的影响。用高糖高脂饲料诱导，使新西兰兔血浆葡萄糖升高，发生胰岛素抵抗。在高糖高脂饲料中添加1％NO-1886进行治疗。结果：发现NO-1886可抑制血清葡萄糖升高，经糖耐量和胰岛素敏感性试验检测，NO-1886可保护胰岛素的急性相分泌，增强胰岛素对葡萄糖的清除能力。研究结果提示NO-1886具有改善胰岛素抵抗、降低血糖的作用。     

高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗及肝胰岛素受体底物1、2表达的影响

目的 探讨高脂饮食对西藏小型猪胰岛素抵抗（IR）及肝胰岛素受体底物（IRS）1、2表达的影响。方法 将10只西藏小型猪随机分为正常对照组（Ctr）5只饲喂普通饲料、IR模型（IR model）组5只饲喂高脂饲料,连续造模12周。造模12周后,称重并测量体长,计算体质量指数（BMI）,空腹取前腔静脉血测定总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、空腹血糖（FBG）和胰岛素（insulin）,计算胰岛素抵抗指数（homeostasis model assessment-estimated insulin resistance,HOMA-IR）;同时进行糖耐量试验,并计算糖耐量曲线下面积（AUC）;取肝组织检测IRS-1和IRS-2基因和蛋白表达,并行油红O、PAS和HE染色,分别观察肝脂质沉积、糖原及组织病理变化。结果 与正常对照组比,IR模型组体重、BMI指数、TC、LDL-C、HDL-C、FFA、FBG、insulin和HOMA-IR指数均显著升高（P<0.05,P<0.01）;糖耐量试验显示血糖和胰岛素水平曲线下降延缓,而AUC_血糖和AUC_胰岛素均明显升高（P<0.05,P<0.01）;肝组织中出现脂质沉积、糖原增加和局部肝细胞浊肿、部分胞核消失或被挤向一端,偶见淋巴细胞浸润;同时肝组织中IRS-1和IRS-2 mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 高脂饮食可引起西藏小型猪胰岛素抵抗,肝组织IRS-1和IRS-2表达降低是高脂饮食影响西藏小型猪胰岛素敏感性的分子机制之一。     

2型糖尿病伴非酒精性脂肪肝相关因素分析

目的探讨2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪肝(NAFL)的临床特征及相关因素。方法 224例T2DM患者根据是否合并NAFL分为T2DM合并NAFL组(136例)和T2DM未合并NAFL组(88例),检测2组患者空腹血糖、胰岛素和血脂,计算体质量指数和胰岛素抵抗指数并进行比较。结果 T2DM合并NAFL组患者的甘油三酯、胆固醇、空腹血糖、餐后2 h血糖、空腹血游离脂肪酸、糖化血红蛋白、天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、低密度脂蛋白-C、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数均较T2DM未合并NAFL组显著升高(P<0.01或P<0.05),而高密度脂蛋白-C较T2DM未合并NAFL组明显降低(P<0.05)。结论 T2DM合并NAFL与肥胖、脂代谢紊乱、胰岛素抵抗密切相关。     

高脂饲料诱导的糖尿病大鼠血清和肝组织极长链脂肪酸的水平变化

目的探讨高脂饲料诱导的糖尿病大鼠血清和肝组织极长链游离脂肪酸水平的变化。方法选择SD雄性大鼠30只,将其随机分为对照组(15只)和高脂组(15只)。高脂组大鼠喂养髙脂饲料,对照组大鼠喂养标准饲料。检测胰岛素抵抗和血生化指标,当出现明显的胰岛素抵抗后,高脂组大鼠注射小剂量的链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病。然后检测血清和肝脏脂肪酸的变化。结果血糖钳夹技术、口服葡萄糖耐量试验(OGTT)及胰岛素敏感指数(ISI)均证实高脂组大鼠存在胰岛素抵抗。注射STZ后成功诱导出2型糖尿病大鼠。两组大鼠血清和肝脏饱和二十二碳酸(C22:0)、二十二碳六烯酸(C22:6)、饱和二十六碳酸(C26:0)水平间差别有统计学意义(P<0.01);且两组大鼠肝脏饱和二十四碳酸(C24:0)水平间差别亦有统计学意义(P<0.01)。结论高脂喂养的糖尿病大鼠血清和肝组织极长链脂肪酸谱发生变化。     

五指山小型猪糖耐量试验及血脂分析

目的 确定五指山小型猪的正常糖耐量水平,并检测血脂,筛查糖、脂代谢异常小型猪.方法 选择未去势的五指山小型猪,禁食不禁水12h后按1.2 ml/kg体重的剂量静脉注射50％葡萄糖注射液,并分别在注糖前、注糖后10、30、60、90和120 min采血测定血糖值.同时采取空腹血清送实验室检测血糖（Glu）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等生化指标.结果 静脉注糖后血糖水平出现显著性波动,注糖后10 min内血糖水平达到峰值,随后逐渐下降,直至注糖后90 min恢复到给糖前水平.有7头小型猪的糖耐量部分血糖值超过95％置信度上线值,有12头小型猪部分相关的血清生化指标值超过95％置信度上线值.相关性分析发现Glu与TG、TC、HDL-C、LDL-C这4个指标都存在显著的相关性,多因素分析表明TG、HDL-C与Glu显著相关.结论 筛选出糖代谢或脂代谢异常,以及糖耐量减低的小型猪.