中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性，对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－Ｓ）基因组５端非翻译区（５′ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％，８８．７％，８７．１％，本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染，ＨＧＶ高度保     

中国株HGV部分基因的分子克隆与核苷酸序列分析

采用ＲＴ－ＰＣＲ对广东地区３３例肝炎病人血清进行ＨＧＶＲＮＡ检测，结果２例（６．１％）阳性。对其中１株输血后ＨＧＶ（ＣＨ－３）基因组５＇端非翻译区（５＇ＵＴＲ）进行分子克隆与测序，并分别与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的２株ＨＧＶ（ＰＮＦ２１６１，Ｒ１０２９１）和Ｌｅａｒｙ等报道的ＧＢＶ－Ｃ相比较，其核苷酸序列的同源性分别为８９．２％、８８．７％、８７．１％。本研究首次证实我国华南地区存在ＨＧＶ感染。ＨＧＶ高度保守区５＇ＵＴＲ的分子克隆与核苷酸序列的测定对开展ＨＧＶ感染的基因诊断具有重要意义。     

陕西株庚型肝炎病毒（GBV—C／HGV）RNA NS3区cDNA（4248nt— …

目的 了解陕西株庚型肝炎病毒（ＨＧＶ,ＲＮＡ／ＧＢＶ－Ｃ）的核苷酸序列特点。方法从陕西省西安市两位非甲、乙、丙、丁、戊型肝炎患者的血清中,应用反转录及套式ＰＣＲ技术,从血清中提取ＲＮＡ,经特异性的反转录及套式ＰＣＲ技术,从血清中提取ＲＮＡ,经特异性的反转录引物Ｐ４反转录成ＣＤＮＡ,以此为模板分别用Ｐ３,Ｐ４及Ｐ１,Ｐ２两对引物进行ＰＰＣＲ扩增,扩增到２１８ｂｐ的ＨＧＶ ＲＮＡ ＮＳ３区部分基因,将     

套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。     

HGV感染及复制与HCC家庭聚集性关系研究

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法，研究ＨＧＶ感染及复制与ＨＣＣ家庭聚集关系。结果发现，高发家庭成员和低发家庭成员中的ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率分别为３６．４％和１４．５％，经统计学分析有非常显著性差异。同时还发现肝癌家庭成员中ＨＧＶ ＲＮＡ也呈家庭聚集现象。     

西安地区献血员HGV与HBV及HCV混合感染

研究西安地区献血员中庚型肝炎病毒与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）混合感染情况。方法采用ＥＬＩＳＡ方法检测献血员３４２例血清中的ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ,用逆转录聚合酶反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶ－ＲＮＡ。结果发现在西安地区ＨＢｓＡｇ与抗－ＨＣＶ均为阴性的献血员中ＨＧＶ－ＲＮＡ,阳性率为３．５０％（７     

HBV,HCV,HGV重叠感染的回顾性研究

目的 了解１０年前我国ＨＢｓＡｇ阳性献血员ＨＢＶ,ＨＣＶ,ＨＧＶ重叠感染状况。方法 采用逆转录套式ＰＣＲ技术检测血清中ＨＢＶＲＮＡ、ＨＧＶＲＮＡ、免疫ＰＣＲ技术检测ＨＢＶＤＮＡ。结果 发现在ＨＢｓＡｇ阳性献血员中,ＨＢＶＤＮＡ阳性率９０％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率２０％,ＨＧＶＲＮＡ阳性率６％,三重感是性率３％。结论ＨＢｓＡｇ阳性献血员吸较高比例的双重感染,且以ＨＣＶ感染为主。     

广东地区GBV-C/HGV5''''NCR区序列变异的研究

目的 了解广东地区ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ５＇ＮＣＲ区的序列变异情况。方法 以ＧＢＶ－Ｃ和ＨＧＶ的５＇ＮＣＲ区安全同源的序列设计合成引物用于套式ＲＴ－ＰＣＲ。从广东地区的１０例ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染者血中扩增了１０个充列,分别克隆对ｐＵＣ１９、ｐＴ－Ａｄｖ载体。以３５Ｓ标记的双脱氧链末端终止法对这１０个序列分别进行正反两个方向的序列测定。结果 １０株充列相互间同源性最大为１００％,最小为８４．４％。与Ｇ     

应用RT—PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５’端非编码（５’ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶ ＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测定－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），和ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶ ＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶ ＲＮＡ，更早地确诊丙型肝     

荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

血透患者血清庚型肝炎病毒RNA及抗体检测

目的:了解血透患者庚型肝炎病毒(HGV)感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法:收集57份血透患者血清标本,根据HGV RNA保守片段5′非编码区序列,设计了两对引物,采用逆转录巢式PCR扩增HGV RNA,以及EIA法检测HGV IgG抗体。同时还检测了HBV DNA及HCV IgG抗体。结果:57份标本中,4份HGV RNA阳性(7.0％),2份HGV IgG抗体阳性(3.5％)。HGV RNA与HGV IgG抗体呈“分离”现象。4份HGV RNA阳性标本中2份为HBV DNA阳性,2份为HCV IgG抗体阳性;其中1份标本HBV DNA和HCV IgG抗体均为阳性。结论:血透患者HGV感染率高于健康献血员和正常人群,HGV可与HBV和HCV重叠感染。     

庚型肝炎病毒感染与肝损伤的相关性

目的 探讨ＨＧＶ感染与肝损伤的关系。方法 检测４４２例各类肝病患者的甲￣戊和庚型肝炎病毒血清学标志,其中１５４例为ＨＧＶ和ＨＢＶ感染者,对单独ＨＧＶ感染、ＨＧＶ和ＨＢＶ重叠感主单独 者的临床资料进行对比分析。结果 ２１单独ＨＧＶ感染者中有９例（４２．８６％）肝功能轻度异常。单独ＨＧＶ感染与ＨＧＶ和ＨＢＶ重叠感染比较,肝功能异常程度无显著性差异;而重叠感民单独ＨＢＶ感染比较,肝功能异常率和重型肝炎发     

成人散发性病毒性肝炎病原学分型与HGV重叠感染

目的 了解成人急性散发性病毒性肝炎的病原学分型及庚型肝炎病毒感染状况。方法 利用ＥＬＩＳＡ和逆转录聚合酶链反应对病人血清进行检测。结果 成人急性肝炎中以乙型肝炎所占比例最大,占３７．１６％;其次甲型肝炎占１８．９２％,另有１８．２４％为非甲～庚型肝炎。结论 庚型肝炎病毒存在明显的重叠感染,与乙型和丙型肝炎病毒重叠感染率较高。     

庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

目的;研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ,转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞,３７℃振荡培养４ｈ使发生转座,于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞,将转染上清再次感染ｓｆ细胞,以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法分析,检测重组蛋白。结果：序     

用逆转录套式PCR方法对西安地区HGV感染情况的调查

目的：为了了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况，得到一较好的ＨＧＶ检测方法。     

庚型肝炎病毒E2蛋白在转基因小鼠细胞内的定位及致病性研究

目的 :在已建成庚型肝炎病毒 (HGV)转基因小鼠模型的基础上 ,研究 HGV包膜蛋白 E2在转基因小鼠体内的表达及定位 ,并探讨 HGV在转基因小鼠体内是否引起病理学改变。 方法 :取小鼠的器官组织用免疫组织化学方法 ,以 HGV E2蛋白的单克隆抗体对 HGV包膜蛋白 E2的表达进行分析和定位。通过血清 AL T检测及常规病理学技术观察转基因小鼠不同器官的病理学变化。 结果 :免疫组织化学结果表明 ,HGV E2主要表达于转基因小鼠肝细胞膜 ,少量表达于胞质内 ;肾脏、心脏、肺及脾脏均未呈现 E2蛋白的阳性反应。组织病理学检查显示转基因小鼠的肝细胞出现水样变性、脂肪变性及淋巴细胞浸润等轻度炎性反应 ,这些变化不随年龄增长而加重 ;其他组织的病理学检查无异常。转基因小鼠血清转氨酶 AL T与对照小鼠无明显差异。 结论 :HGV包膜蛋白 E2的表达具有相对的嗜肝性 ,主要分布在转基因小鼠的肝细胞膜 ,并可引起轻度肝细胞损伤。     

HGV与HBV及HCV在瑶族人群中的感染研究

目的 了解广东瑶族人群庚型肝炎病毒(HGV)感染状况,探讨HGV感染与输血相关肝炎病毒HBV、HCV感染关系.方法 采用ELISA法分别检测血清中抗-HGV IgG、HBsAg和抗-HCV.结果 1 056例血清中检出抗-HGV IgG阳性95例,阳性感染率为9.00％,男性阳性检出率为9.40％,女性阳性检出率为8.63％,男女性别之间差异无统计学意义(x=0.189,P＞0.05).抗-HGV IgG阳性检出率随年龄增大而增高,但各年龄组之间差异无统计学意义(x2=0.437,P＞0.05).抗-HGV IgG+HBsAg、抗-HGV IgG+抗-HCV、抗-HGV IgG+HBsAg+抗-HCV的重叠感染率分别为23.16％、4.55％和4.55％,差异有统计学意义(x2=21.815,P＜0.05).结论 广东瑶族人群存在较高的HGV感染率,HBsAg及抗-HCV均存在HGV重叠感染.     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究

目的：利用Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ ＨＴ杆状病毒系统在Ｓｆ９昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＮＳ３蛋白,并对表达产物的免疫原性进行研究。方法：将ＨＧＶ ＮＳ３基因片段定向克隆至转座载体ｐＥａｓｔＢｓｃ ＨＴａ,转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞,３７℃振荡培养４ｈ使发生转座,用抗生素平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染Ｓｆ９昆虫细胞,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液,将上清液再次感染Ｓｆ９细