体外培养豚鼠膀胱ICCs细胞表达NSE及nNOS

目的 探讨体外培养豚鼠膀胱组织Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICCs)神经元特异性烯醇酶(neurone specific enolase,NSE)及神经源性一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)的表达.方法 胶原酶消化法进行豚鼠膀胱组织ICCs细胞的原代培养,对照组为原代培养的膀胱平滑肌细胞,免疫荧光法进行c-kit及平滑肌肌动蛋白(SMA)染色,RT-PCR和Western blot法进行细胞培养后1、3 d和5 d的NSE及nNOS转录水平及蛋白水平的检测.结果 豚鼠膀胱ICCs细胞c-kit染色阳性,SMA染色阴性.豚鼠膀胱ICCs细胞NSE及nNOS转录及蛋白水平较高,膀胱平滑肌细胞不表达NSE及nNOS.结论 豚鼠膀胱ICCs培养细胞表达神经细胞特异性物质,提示豚鼠膀胱ICCs细胞参与膀胱功能调控.     

原发性癫(疒间)全身强直-阵挛发作患者脑电图与血清神经元特异性烯醇酶的检测

目的：探讨原发性癫痫全身强直一阵挛发作患者单次痫性发作后不同时段的脑电图阳性检出率及其与大脑神经元的损伤之间的关系。方法：对60例原发性癫痫全身强直一阵挛发作息者分别于间歇期、单次痫性发作第1、2、3、5、10天分别进行脑电图检查及血清神经元特异性烯醇酶（NSE）检测，并检测50名正常人的血清NSE含量作为对照。结果t60例患者痫性发作间歇期、发作第1、2、3、5、10天的脑电图阳性率分别为46．7％、51．7％、55．0％、76．7％、68．3％、48．3％。第3、5天脑电图阳性率与间歇期比较差异有统计学意义（P〈0．05），以第3天最高。与间歇期比较，血清NSE含量以发作第2天最高，第3天开始下降，第5天降至正常水平。结论：单次癫痫全身强直一阵挛发作对大脑神经元有损伤，痫性发作后第3、5天脑电图异常率较间歇期增高，可能是由于受损脑神经细胞在修复过程中兴奋性增强、膜电位不稳定，导致异常放电发生率增高。     

神经元特异性烯醇酶与癫痫

神经元特异性烯醇酶(ｎｅｕｒｏｎ－ｓｐｅｉｆｉｃｅｎｏｌａｅ,ＮＳＥ)是神经元损伤的敏感性标志物,具有较高的特异性。在神经系统疾病,如中枢神经系统肿瘤、脑梗死、脑缺血、感染性疾病、多发性神经病、心肌梗死后昏迷、低氧血症、蛛网膜下腔出血、脑外伤和癫痫中显著增高[１~５]。人们逐步把ＮＳＥ看作是神经损伤的一项指标。近年来,随着对ＮＳＥ研究的深入,发现     

Human adipose-derived mesenchymal stem cells: a better cell source for nervous system regeneration

Background In order to suggest an ideal source of adult stem cells for the treatment of nervous system diseases,MSCs from human adipose tissue and bone marrow were isolated and studied to explore the differences with regard to cell morphology,surface markers,neuronal differentiation capacity,especially the synapse structure formation and the secretion of neurotrophic factors.Methods The neuronal differentiation capacity of human mesenchymal stem cells from adipose tissue （hADSCs） and bone marrow （hBMSCs） was determined based on nissl body and synapse structure formation,and neural factor secretion function.hADSCs and hBMSCs were isolated and differentiated into neuron-like cells with rat brain-conditioned medium,a potentially rich source of neuronal differentiation promoting signals.Specific neuronal proteins and neural factors were detected by immunohistochemistry and enzyme-linked immunosorbent assay analysis,respectively.Results Flow cytometric analysis showed that both cell types had similar phenotypes.Cell growth curves showed that hADSCs proliferated more quickly than hBMSCs.Both kinds of cells were capable of osteogenic and adipogenic differentiation.The morphology of hADSCs and hBMSCs changed during neuronal differentiation and displayed neuronlike cell appearance after 14 days＇ differentiation.Both hADSCs and hBMSCs were able to differentiate into neuron-like cells based on their production of neuron specific proteins including β-tubulin-Ⅲ,neuron-specific enolase （NSE）,nissl bodies,and their ability to secrete brain derived neurotrophic factor （BDNF） and nerve growth factor （NGF）.Assessment of synaptop hysin and growth-associated protein-43 （GAP-43） suggested synapse structure formation in differentiated hADSCs and hBMSCs.Conclusions Our results demonstrate that hADSCs have neuronal differentiation potential similar to hBMSC,but with a higher proliferation capacity than hBMSC.Adipose tissue is abundant,easily available and would be a potential ideal source of adult stem cells for neural-related clinical research and application.     

血清神经元特异性烯醇酶和胃泌素用于肺癌的临床价值

检测３０例正常对照、２５例良性肺疾病、５５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）和１５例小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）患者血清神经元特异性烯醇酶（ＮＳＥ）和胃泌素及其在治疗前后的动态变化，结果显示，血清ＮＳＥ和胃泌素在４组间差异有极显著性（Ｐ＜０００１），ＮＳＥ均值分别为８２２、１０８４、１４６４和３２００μｇ／Ｌ，胃泌素均值分别为５９４７、８２００、２２１５３和３５６８６ｎｇ／Ｌ。以２０３μｇ／Ｌ（ＮＳＥ）和８１４ｎｇ／Ｌ（胃泌素）为正常参考值上限，ＮＳＥ阳性率分别是８０％（ＳＣＬＣ）和１４５４％（ＮＳＣＬＣ），胃泌素分别是８０％（ＳＣＬＣ）和６３６３％（ＮＳＣＬＣ）。肺癌治疗后血清ＮＳＥ和胃泌素在ＳＣＬＣ组均显著下降（Ｐ＜０００１），而ＮＳＣＬＣ组仅有胃泌素降低（Ｐ＜０００１）。因此，ＮＳＥ主要用于ＳＣＬＣ的诊断、组织学分型及疗效监测，而胃泌素可以用于各型肺癌，两者联合可以提高临床应用价值。     

沉默神经元特异性烯醇酶基因对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究神经元特异性烯醇酶(NSE)对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用免疫细胞化学检测人小细胞肺癌(SCLC)细胞株NCI-H446和非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549中NSE蛋白的表达,再用RNA干扰技术抑制细胞中NSE基因的表达,最后用流式细胞术、Western blotting及分光光度法检测NSE基因下调后细胞周期分布、Ki67蛋白表达、凋亡细胞百分率及Caspase-3活性。结果 A549和NCI-H446细胞均表达NSE蛋白,特异性siRNA转染显著抑制了细胞中NSE基因的表达,抑制率达90%以上,NSE下调后细胞中S期细胞百分率、Ki67蛋白表达量显著降低,而凋亡细胞百分率和Caspase-3活性显著增加。结论 NSE基因的表达促进了伴有NE分化的肺癌细胞的增殖和抑制细胞凋亡,这可能是NE分化的肺癌细胞具有更为恶性表型的原因之一。     

短暂性脑缺血发作患者血浆NSE水平的动态观察

短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack，TIA)是指历时短暂并经常反复发作的脑局部供血障碍，导致供血区局限性神经功能缺失症状。每次发作持续数分钟至1小时，不超过24小时即完全恢复，但常有反复发作。TIA被公认为缺血性脑卒中最重要的危险因素，未经治疗或治疗无效的病例，约1／3发展为脑梗死。因此，了解和研究该类患者的     

流行性乙型脑炎患者脑脊液中神经元特异性烯醇酶含量的变化

目的 研究流行性乙型脑炎（乙脑）患者脑脊液中神经元特异性烯醇酶（NSE）的含量变化及临床意义。方法 RIA法检测了58例乙脑患儿脑脊液NSE的含量变化。并对其中26例进行了随访观察。结果 脑脊液中NSE含量在发热期即有显著增高,至极期达到高峰,其增高程度与病情严重程度相平行并与疾病预后密切相关。结论 脑脊液NSE含量测定对乙脑患儿脑损伤程度及临床预后的判断有重要的参考价值。     

中枢神经系统白血病血清神经元特异性烯醇酶测定的临床意义

目的 探讨血清神经元特异性烯醇酶与中枢神经系统白血病之间的关系。方法 对确诊的30例急性白血病患者及匹配的正常人的血清神经元特异性烯醇酶进行测定。结果 中枢神经系统白血病组血清神经元特异性烯醇酶含量21．92 7．5μg/L均明显高于白血病组、对照组，差异有显著性。结论 血清神经元特异性烯醇酶可作为反映中枢神经系统白血病病情的生化指标。     

脂肪组织源基质细胞（ADSCs）——细胞学工程的新选择

越来越多的证据证明干细胞包括胚胎干细胞、骨骼肌卫星细胞、骨髓间充质干细胞等可用于组织的再生和修复。但以上细胞的临床应用存在很多问题如来源困难、免疫排斥、伦理学等等。脂肪来源的基质细胞以其取材方便、更容易获取、低免疫原性等特点成为今年来研究的热点。本文对ADSCs的特点进行了较为全面的回顾。     

人脂肪基质细胞向胰岛素分泌细胞的分化诱导

目的:体外分离培养人脂肪来源基质细胞（hADSCs）,并定向诱导hADSCs向胰岛样细胞分化,探讨hADSCs分化为胰岛素分泌细胞的潜能。方法:从脂肪抽吸物中分离hADSCs,利用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、上皮细胞生长因子(EGF)、尼克酰胺和exendin-4等因子诱导hADSCs向胰岛样细胞分化。采用RT-PCR检测诱导前后胰岛素、胰十二指肠同源性盒因子(Pdx-1)、葡萄糖转运因子2(Glut-2)和胰高血糖素(glucagon)基因的表达;双硫腙染色鉴定胰岛样细胞团;免疫荧光染色检测诱导后细胞胰岛素和Pdx-1的表达;ELISA检测诱导后细胞在低糖和高糖环境中胰岛素的分泌量。结果:诱导7 d左右细胞由长梭形逐渐变成多边形,并且细胞开始呈岛状聚集,21 d左右形成胰岛样细胞团。双硫腙染色阳性;RT-PCR显示,诱导后细胞表达胰岛素、Pdx-1、Glut-2和glucagon基因;免疫细胞化学显示,诱导后细胞表达胰岛素和Pdx-1;葡萄糖刺激实验显示胰岛素的释放,并且随着葡萄糖浓度增加胰岛素的释放量也增加。结论:体外hADSCs具有分化为胰岛素分泌细胞的潜能,为将来应用于临床移植治疗糖尿病奠定了基础。     

缺氧预处理的脂肪间充质干细胞对小鼠硬皮病模型的治疗作用

目的 观察脂肪间充质干细胞（adipose tissue-derived stromal cells, ADSCs）及缺氧预处理的ADSCs（hypoxia-pretreated ADSCs, hpADSCs）对硬皮病小鼠皮损组织的治疗作用。方法 分离提取小鼠的脂肪间充质干细胞,体外培养至第3代后,部分细胞进行缺氧预处理。使用博来霉素（bleomycin, BLM）对小鼠进行造模,根据处理方式分为PBS处理的空白对照组、BLM模型组、ADSCs治疗组、hpADSCs治疗组。各组皮损样本石蜡切片分别进行H-E染色、Masson染色,检测真皮厚度、羟脯氨酸评估胶原水平,检测H2O2评估氧化应激水平,使用Western印迹法和免疫组化评估α-SMA及TGF-β的表达水平。结果 与空白对照组相比,BLM模型组真皮厚度和组织内H2O2水平明显增加（P<0.05）,α-SMA和TGF-β表达水平也有一定程度的上调。虽然ADSCs治疗能够一定程度上降低真皮厚度,但是差异无统计学意义（P>0.05）,而hpADSCs治疗能够显著降低小鼠真皮厚度（P<0.05）。ADSCs与hpADSCs治疗均能够明显降低组织内H2O2水平（P<0.05）。相比ADSCs治疗,hpADSCs治疗能够更好地降低真皮内TGF-β和α-SMA的表达水平。结论 ADSCs能够降低硬皮病小鼠的胶原沉积并下调氧化应激水平,hpADSCs有更好的治疗效果。     

脂肪来源干细胞体外成骨诱导和成脂诱导分化

目的 探讨脂肪组织来源的多能干细胞(adipose tissue-derived stromal ceHs,ADSCs)的多向分化潜能.方法 取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等步骤分离培养ADSCs,经过原代培养和传代培养.分别加入成骨诱导剂和成脂诱导培养.经过倒置显微镜观察诱导后细胞形态变化,并通过Gomori改良钙钴法、yon Kossa染色和油红O染色对其成骨细胞和脂肪细胞表型进行鉴定,进一步比较细胞的转化率.结果 ADSCs呈成纤维细胞样贴壁生长,其经成骨、成脂诱导培养2周后形态、体积发生明显改变.Gomori改良钙钴法染色显示其细胞质内富含碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)颗粒,诱导后15 d和19 d,ALP阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%,von Kossa染色表明聚集的细胞团中央能形成钙化结节;倒置显微镜,成脂诱导3、7、14 d后脂肪细胞转化率分别为(22.3±12.5)%、(49.6±7.1)%和(89.4±9.3)%.油红O染色可见细胞质内出现橙红色脂滴,14 d油红O染色阳性率高达(92.5±9.1)%.结论 ADSCs经体外诱导培养后可向成骨细胞和脂肪细胞分化,并具有明显的成骨和成脂表型,表明ADSCs具有多向分化潜能.     

利用微载体悬浮培养人脂肪基质干细胞

目的: 观察微载体悬浮培养系统(RCCS)对成人脂肪基质干细胞Adipose tissue-derived stromal cells(ADSCs) 的培养效果,为大量、快速扩增组织工程种子细胞提供实验依据.方法: RCCS系统采用微载体Cytodex 3为贴壁依赖性细胞ADSCs提供贴壁条件,浓度为5 g/L.静止培养在12孔培养板中.两系统细胞接种密度均为1×108cells/L.分别观察细胞增殖情况,并对用RCCS培养的细胞进行细胞表型、分化能力进行检测.结果: 微载体悬浮培养9 d后达到最大活细胞密度(1.60×109cells/L),静止培养第7日就达到最大活细胞密度(3.38×108cells/L).在微载体悬浮培养条件下,ADSCs生长更为旺盛,细胞产量更高,优于静止培养.11 d后,ADSCs依然保持其干细胞特性.结论: 利用生物反映器以及微载体技术有利于ADSCs的大规模扩增,是扩增组织工程种子细胞的有效方法.     

Effect of Cytokines Secreted by Human Adipose Stromal Cells on Endothelial Cells

Recently, several observations have pointed to the presence of a population named adipose-derived adult stem cells (ADAS) or adipose stromal cells (ASCs) in human adipose tissue. Subsequent studies revealed that ASCs were multipotent, differentiating along the cardiac myocyte, endothelial, neuronal, and other cells lineages[1, 2], and could secrete cytokines such as HGF and VEGF[3]. Since adipose tissue is an abundant, accessible, and re- plenishable source of adult stem cells that can b…     

兔脂肪间充质干细胞诱导成膀胱移行上皮细胞的研究

目的 探讨体外诱导兔脂肪间充质干细胞(rabbit adipose tissue-derived stromal cells,rASCs)向膀胱移行上皮细胞分化的可行性.方法 实验分混合共培养组、条件培养液组和空白对照组.混合共培养组是将兔脂肪间充质干细胞rASCs(GFP标记)与兔膀胱移行上皮细胞按1∶1比例混合培养；条件培养液组是将兔膀胱移行上皮细胞上清液与rASCs一起培养;空白对照组是rASCs与普通培养基常规培养.2周后,用免疫荧光法检测诱导分化的脂肪间充质干细胞中膀胱移行上皮细胞特异性蛋白尿斑素Ib、尿斑素Ⅱ、尿斑素Ⅲ和上皮细胞角蛋白CK18的表达.结果 2周后,免疫荧光检测显示,在混合共培养组中,诱导分化的脂肪间充质干细胞表达膀胱移行上皮细胞特异性蛋白尿斑素Ib和上皮细胞角蛋白18、尿斑素Ⅱ、尿斑素Ⅲ没有检测到.而在条件培养液组和空白对照组,上述膀胱移行上皮细胞特异性标记都没有检测到.结论 rASCs与兔膀胱移行上皮细胞混合培养可以诱导rASCs向膀胱移行上皮细胞分化.     

大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的:体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经元样细胞的分化。方法： 用DMEM培养液冲洗骨髓,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白（NF-200）、微管相关蛋白（MAP-2）、神经元特异核蛋白（NeuN）、巢蛋白(Nestin) 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果： BMSCs经诱导后,胞体增大,并伸出细长突起,与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF-200,MAP-2,NeuN和Nestin表达阳性,(3±0.8)%的细胞GAD表达阳性,(5±0.3)%的细胞ChAT表达阳性,而GFAP 表达阴性。结论： BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞,部分细胞可表达GAD与ChAT。     

脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨人脂肪组织来源的神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血细胞凋亡及Caspase-3蛋白表达的影响.方法 线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)2 h再灌注模型.60只健康雄性SD大鼠随机分为4组:正常组(6只),假手术组(6只),缺血对照组(24只)和移植治疗组(24只).后两组又分为缺血2 h再灌7、14、21和28 d组(各6只).体外培养脂肪基质细胞,诱导分化为神经干细胞.造模成功后24h,移植治疗组经尾静脉移植人脂肪组织来源的神经干细胞悬液(细胞浓度为2×106/mL),缺血对照组经尾静脉注射生理盐水,假手术组不做任何处理.TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测Caspase-3表达.结果 与缺血对照组比较,移植治疗组各时间点(7、14、21和28 d)的细胞凋亡数均明显减少(均P<0.01),Caspase-3蛋白表达均明显减少(均P<0.01).结论 脂肪组织来源的神经干细胞可能通过下调Caspase-3蛋白表达,减少局灶性脑缺血细胞凋亡,对脑缺血再灌注损伤后的神经细胞起保护作用.     

培养状态下兔骨髓基质细胞生长特性

目的：观察兔骨髓基质细胞（ＭＳＣ）的体外生长特性，为用于骨／软骨组织工程的功能细胞提供实验基础。方法：于胫骨近端提取骨髓，分离ＭＳＣ，原代培养，形成ＣＦＵ－Ｆ，以１×１０＾４个细胞／ｃｍ＾２传代培养５代，绘制细胞生长曲线，计算倍增时间，测定分裂指数和贴壁率。结果：第１￣５代转代细胞生长曲线基本相同，第３代细胞倍增时间为２４ｈ，分裂指数最高达１９％，１２ｈ内９５％细胞贴壁。结论：在本实验培养条件下，