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相似文献
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1.
目的 探讨人脐血造血细胞在严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠体内植入、分化及造血调控。方法 采用流式细胞技术及克隆形成细胞体外培养方法观察了移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响及移植物抗宿主反应。结果  1静脉输注 1~ 5× 10 7个脐血单个核细胞 (MNC) /只鼠可使受鼠体内表达嵌合体 ,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠 :可以重建造血功能并在小鼠骨髓微环境中分化表达 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关 ;可引起受鼠移植物抗宿主反应 ,并与输入细胞剂量有关。结论 脐血造血干细胞不仅可以在受鼠骨髓微环境中存活 ,还可进一步分化为各系特异细胞 ,重建造血。  相似文献   

2.
目的:探讨不同供者来源脐血混合移植的可行性和植入特性。方法:分别将两份人HLA半相合混合脐血或单份脐血输入经亚致量照射后的严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠,观察两组脐血在SCID小鼠体内的植入状况及多系造血重建特性。结果:混合脐血和单份脐血移植均可在受鼠体内植入,形成供-受混合嵌合体,并能重建多系造血,存活率和植入率无统计学意义(P>0.05)。用多聚酶链反应-序列特异性寡核苷酸(PCR-SSO)探针检测人HLA-DQB1基因发现,HLA半相合混合脐血移植可有1份或2份脐血植入,其中造血祖细胞含量和体外克隆形成能力高者,更易于植入,造血重建特性与单一脐血移植比较无统计学意义。结论:HLA半相合人混合脐血可同时在SCID小鼠体内植入,形成来自供-受三者的多嵌合状态,并能重建造血及免疫功能。  相似文献   

3.
目的探讨人脐血CD34+造血干细胞(HSC)在NOD/SCID小鼠模型体内体液免疫功能重建的作用。方法从新鲜脐血中分离出单个核细胞(MNC),利用免疫磁珠分选法筛选CD34+造血干细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠体内,移植后4、6、8、10周分批处死存活的小鼠,取其脾脏和外周血,分别进行细胞表型分析、体液免疫分析,监测小鼠体液免疫功能重建情况。结果照射2周后,阴性对照组小鼠全部死亡,6周后移植组小鼠存活率为37.5%,空白对照组小鼠存活率为100%。移植4、6、8、10周移植组外周血人CD45+细胞表达(%)分别为4.87±1.23、9.22±2.07、12.34±2.38、8.14±2.36,CD19+B淋巴细胞表达(%)分别为1.07±0.50、2.17±0.95、3.34±0.90、1.67±0.90。移植后10周,在移植组小鼠脾脏可见CD19+B淋巴细胞分布。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过人脐血CD34+细胞植入可建立起人鼠嵌合免疫模型。缺少相应细胞因子刺激,CD34+细胞分化能力随时间减弱。  相似文献   

4.
目的探讨人脐血CD34+造血干细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(no obese diabetic/severecombined Immunodeficiency,NOD/SCID)小鼠模型上造血重建的作用。方法利用密度梯度离心法,从新鲜脐血中分离出单个核细胞,利用免疫磁珠分选法筛选CD34+造血干细胞,经尾静脉输注入经亚致死剂量照射后的NOD/SCID小鼠体内,移植后3、7、10、14 d分别用断尾法取小鼠外周血,血常规计数外周血动态变化情况;移植后4、6、8、10周,取其外周血,运用PCR法检测外周血中人特异性Alu基因的表达情况。结果免疫磁珠分选得到的CD34+细胞浓度达91.2%,照射后小鼠骨髓腔内有核细胞和巨细胞数量明显减少或消失,达到清髓目的。移植后第3天移植组小鼠外周血各系细胞均明显低于正常组(P<0.01),移植后第7天,移植组小鼠外周血象开始恢复,明显高于阴性对照组[白细胞:(3.90±0.53)×109/L vs(1.30±0.18)×109/L,血红蛋:(139.8±5.0)g/L vs(79.8±11.0)g/L,白血小板:(253.0±17.5)×109/L vs(52.0±6.9)×109/L,(P<0.01)],移植后第10天,移植组小鼠外周血象恢复到辐照前水平,与正常组无差别。移植4周后,PCR方法在小鼠外周血中可检测到人特异Alu基因序列,未移植组小鼠照射后2周内全部死亡。结论经照射后的NOD/SCID小鼠通过人脐血CD34+细胞植入可建立起人鼠嵌合模型。NOD/SCID小鼠经照射后,不破坏骨髓造血微环境及造血基质,可用于异基因细胞移植模型。人脐血CD34+细胞移植入NOD/SCID小鼠,其造血系统能有效重建。  相似文献   

5.
含脐血MSCs体系扩增后的脐血重建NOD/SCID小鼠造血的研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
[目的]探讨含人脐血(umbilical cord blood,UCB)来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)联合造血生长因子(hematopoietic growth factors,HGFs)体系扩增后的脐血造血细胞在NOD/SCID小鼠体内植入及重建小鼠造血的能力.[方法]①用含女性胎儿脐血MSCs(UCBMSCs)及HGFs组合的无血清扩增体系体外扩增男性新生儿UCB CD34 细胞.②收获扩增第6天的UCB细胞,经尾静脉移植给亚致死量照射后的雌性NOD/SCID小鼠.③动态观察移植后小鼠生存情况及外周血象的恢复.④移植后8周,流式细胞仪检测存活小鼠骨髓中人CD45 、CD45 CD33 、CD45 CD41 、CD45 CD3 和CD45 CD19 细胞含量;PCR法检测移植小鼠外周血中人Y染色体表达.[结果]①非扩增组小鼠存活率为60%,扩增组存活率为90%.②动态观察发现:扩增组白细胞和血红蛋白于移植后第20天恢复,PLT于移植后第40天恢复,明显短于非扩增组.③移植后8周,两组小鼠外周血中人Y染色体检测均为阳性,扩增组和非扩增组小鼠骨髓中人CD45 细胞的含量分别为18.5%±8.3%和16.5%±5.7%,差异无统计学意义(P>0.05).④移植后8周,扩增组小鼠体内CD45 CD33 和CD45 CD41a 细胞的百分率均高于非扩增组,但CD45 CD3 、CD45 CD19 细胞百分比均低于非扩增组.[结论]①含人UCBMSCs体系扩增后的UCB细胞具有NOD/SCID小鼠体内植入并重建小鼠造血的能力,但不具有提高小鼠体内植入率的作用.②扩增后的UCB移植可显著促进移植后小鼠造血恢复,提高小鼠存活率.③扩增后的UCB移植主要促进小鼠髓系及巨核系的植入,但对淋巴系的植入有抑制作用.  相似文献   

6.
目的:由于脐血比骨髓含有更原始、更强的增殖、分化能力,能重建长期造血的干/祖细胞,这些细胞可在体外大量扩增,使脐血移植有望取代骨髓移植;方法:利用脐血中包含某些细胞,如CD8^ T细胞能在小鼠体内产生细胞因子或者CD34^ 细胞具有内在性增殖潜能或NOD/SCID基质是一种特别的环境来支持外源干细胞移植;结果:脐造血细胞作为基因治疗的理想靶细胞;结论:随着国际上对脐血免疫细胞的生物学特性与功能研究不断深入,进一步确证CBSCT的有效性及巨大应用价值。  相似文献   

7.
目的 探讨体外扩增后人脐血细胞在小鼠体内的短期造血重建能力。方法 采用脾结节形成法和祖细胞培养等技术,观察受体小鼠外周血、脾脏和骨髓的短期造血恢复情况。结果 照射小鼠脐血移植后其生存时间延长,外周血象恢复加速。脾脏有多系细胞组成的造血结节(CFU-S-13d),移植后d30骨髓中培养出粒单系(CFU-GM)和红系祖细胞(CFU-E),且CFU-S、CFU-GM和CFU-E计数较新鲜脐血细胞组无明显差异。从30d活存的小鼠外周血液中检出了人核型血细胞。结论 经扩增的人脐血造血细胞同新鲜细胞一样能够在致死性照射小鼠体内短期造血重建。  相似文献   

8.
微卫星DNA序列在人-鼠脐血移植模型中的应用   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的 评价微卫星 DNA序列在人 -鼠脐血异种移植中的应用价值。方法 采用 PCR扩增短串联重复序列 (PCR- STR)技术及克隆形成细胞体外培养方法 ,观察移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响。结果  1静脉输注 1~ 5× 10 7个 MNC/只鼠可使受鼠体内表达供者 DNA,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠可以重建小鼠造血功能 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关。结论STR- PCR分析可以从分子水平对移植物植入状态进行微量和准确的鉴定 ,该方法为人 -鼠脐血移植模型的鉴定提供了简便、快捷的手段  相似文献   

9.
目的 探讨人脐带间充质干细胞对脐血CD34~+细胞在NOD/SCID小鼠体内造血重建的影响.方法 将3.5×10~5个脐血CD34~+细胞单独(单移植组)或与5.0×10~6个人脐带间充质干细胞共同(共移植组)输入经~(137)Cs 3.0Gy照射后的NOD/SCID小鼠体内,观察移植后6周内小鼠外周血象的变化情况.于移植后第6周处死小鼠,采用流式细胞术检测小鼠骨髓、脾脏及外周血人源细胞(hCD45~+)含量,并分别检测小鼠骨髓中人源淋巴系(CD3/CD19)、粒系(CD33)、单核系(CD14)、血小板(CD61)、红系(CD235a)等各系血细胞比例,比较间充质干细胞共移植对CD34~+细胞植入率的影响.结果 移植后3周,两组小鼠外周血象开始有不同程度恢复;移植后6周,共移植组外周血白细胞和血小板计数均已达高峰,明显高于单移植组(P<0.05),两组小鼠的红细胞计数差异无统计学意义(P>0.05).移植后6周,共移植组骨髓及外周血中人源细胞hCD45~+CD34~+比例分别为(42.66±2.57)%和(4.74±1.02)%,明显高于单移植组的(25.27±1.67)%和(1.19±0.54)%(P=0.006).移植后6周,共移植组小鼠骨髓内的CD19~+、CD33~+、CD14~+、CD61~+和CD235a~+细胞比例均明显高于单移植组(P<0.05),CD3~+T淋巴细胞比例明显低于单移植组(P=0.003);CD19~+B淋巴细胞得到优势扩增,明显高于其他各系血细胞比例(P<0.05).结论 脐带间充质干细胞与脐血CD34~+细胞共移植可促进造血干细胞的植入,缩短CD34~+细胞移植后造血恢复时间.  相似文献   

10.
脐血移植重建同种异基因小鼠免疫造血系统的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨脐血移植重建同种异基因纯系小鼠免疫造血系统的可行性,建立一种新的研究脐血移植的方法.方法孕20d的C57BL/6小鼠(H-2b)经剖腹产取出胎盘和胎鼠,分离出脐血单个核细胞(MNC),1×106个MNC经尾静脉注入致死量照射的BALB/c小鼠.1月后,用抗H-2Db单克隆抗体检测嵌合体的存在.用混合淋巴细胞培养和皮肤移植检测特异性的免疫耐受.结果未移植的对照组3周内全部死亡.移植组75%存活并形成稳定的不全嵌合体.体外混合淋巴细胞培养和体内皮肤移植发现受鼠对供者的组织和细胞产生了特异的免疫耐受.结论小鼠脐血有足够的造血干细胞,能重建同种异基因小鼠的免疫造血系统而不引起明显移植物抗宿主病(GVHD),这一模型可用于研究临床脐血移植中遇到的问题.  相似文献   

11.
目的探讨总有核细胞和CD34’细胞数量在脐血移植中选择合适脐血的预示作用。方法分析不同总有核细胞数(TNc)和CD34+细胞数输入量、供受者人类白细胞抗原(HLA)不相合数间脐血移植效果的差异,评价TNC和CD34+细胞数的作用。结果89例白血病患者植入75例。植入率为84.3%。中性粒细胞(ANC)≥0.5x10’几、血小板≥20x106/L、血小板≥50x109/L的时间分别为17d、34d和46d。TNC输入量与移植植入率呈正相关,与生存率无关。CD34+细胞输入量与移植植入率和生存率有正相关性。供受者HLA配型不相合位点数差异对移植后的植入率和生存率无影响。结论脐血是一种替代骨髓造血干细胞应用于白血病患者移植的较好来源。TNC和CD34+细胞数输入量对移植效果存在正性影响作用,是脐血移植中选择合适脐血的重要参考指标。  相似文献   

12.
用人脐血造血细胞体外扩增后对受骨髓致死量照射的BALB/C小鼠进行移植。结果,移植组平均存活率为90%,对照组仅为10%。存活鼠骨髓和脾脏内可检测到CD45阳性的人源性造血细胞,体外祖细胞集落培养有人源性髓系和红系集落形成。结论,脐血造血细胞可帮助恢复急性重症放射损伤骨髓的造血重建。  相似文献   

13.
目的 探讨体外扩增造血祖儿定向诱导功能血红细胞生成的条件及扩增细胞重建长期造血能力的维持。方法 应用免疫磁珠法(MACS)分离纯化脐带血CD34^+造血干或祖细胞,在体外液体培养体系中经不同细胞因子的组合进行扩增和定向诱导,并将扩增细胞移植经亚致死剂量照射的SCID小鼠。结果 FL、干细胞因子血小板生成素(TPO)等细胞因子的不同组合可分别扩增细胞总数、粒系及巨核系造血祖细胞、CD34^+CD38  相似文献   

14.
目的探讨不同细胞因子促进脐血CD34 细胞扩增的效应,为下一步的临床应用奠定基础。方法采用EasySep免疫磁珠阳性选择系统分离脐血中CD34 细胞,在无血清、无基质细胞培养体系中添加不同细胞因子培养2周,分组:A组,SCF FL TPOB组,SCF FL TPO IL-3C组,SCF FL TPO G-CSF。结果CD34 细胞数目于培养后7d达到峰值,3组间差异无显著性;B组扩增至14d时细胞总数达(384.40±17.48)倍,显著高于另外2组。扩增7d后的脐血细胞经体外培养可形成造血集落。结论体外扩增脐血CD34 细胞理想的细胞因子组合为SCF TPO FL,以7d为宜。  相似文献   

15.
人造血干细胞在山羊体内的移植和扩增及分化研究   总被引:7,自引:1,他引:6  
Huang S  Zeng F  Gong Z  Lu J  Huang W  Hu W  Yan J  Fang Y 《中华医学杂志》2002,82(2):86-89
目的 建立人 /山羊异种造血干细胞 (hematopoieticstemcell,HSC)移植模型 ,在活体水平研究人HSC移植后的扩增和分化。方法 分离人脐血HSC ,然后将其 (1× 10 5)经母羊子宫注射入胎龄为 5 5~ 6 5d的胎山羊体内 ,出生后在不同阶段应用FACS、PCR和PCR southern杂交技术 ,分析人HSC在山羊体内的扩增和分化情况。结果 在 5 0头受试胎羊中 ,39头足月分娩 ,其中 35头山羊呈现人血细胞嵌合 ,人造血细胞在山羊血液中的比率平均达到 1%~ 3% ,并稳定地保持到 10个月以上 ,山羊体内的人造血细胞表达CD34、CD14、CD2 0和血型糖蛋白A(GPA) ,但CD3、CD4、CD7、CD8和CD5 6未见表达或表达很低。结论 人HSC在山羊体内能有效地扩增至 10 0 0~ 10 0 0 0倍 ,并呈现出有限的分化。人 /山羊HSC异种模型为在活体探讨HSC移植、扩增和分化提供了科学资料  相似文献   

16.
目的:研究来源于小鼠脾脏的基质细胞在体外扩增脐血CD34^ 细胞中的作用;方法:取γ射线照射后小鼠脾集落形成期的脾细胞经人重组单核细胞集落刺激因子(rhM-CSF)的激发培养,获得贴壁脾基质细胞,经丝裂霉素处理后作为滋养细胞,与多种造血细胞生长因子共同应用,体外扩增经免疫磁珠阳性选择法纯化的人脐血CD34^ 细胞,用体外集落形成及流式细胞仪分析扩增细胞的集落形成能力和表型。结果:1)rhM-CSF能有效地刺激小鼠脾基质细胞的生长;2)所获的小鼠脾基质细胞具有支持脐血CD34^ 细胞的集落形成能力,与多种造血细胞生长因子共同应用后,能有效地扩增CD34^ 细胞,扩增2周后的细胞数达100倍,且仍具有多向分化能力。结论:rhM-CSF能刺激小鼠脾集落形成期基质细胞的增殖,该类基质细胞具有有效支持人脐血CD34^ 细胞的体外扩增作用。  相似文献   

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