热休克蛋白70的研究

本系统地介绍了热休克蛋白的理论基础、相关研究和进展，为进行有关研究提供线索。     

内质网分子伴侣GRP78在人肺癌组织中的高表达及其临床意义

ＧＲＰ78 ,即糖调节蛋白 78,也叫免疫球蛋白重链结合蛋白 (ＢｉＰ) ,广泛存在于内质网内 ,在低糖、缺氧等应激条件下合成量明显提高[1] ,并能协助蛋白质的折叠、装配和运输 ,还与许多疾病有关 ,因此被称为内质网分子伴侣[2 ] 。但目前关于ＧＲＰ78的研究主要集中在动物和标准细胞株的体外实验 ,特别是它在人类肺癌中的表达 ,临床研究很少。本研究通过探讨ＧＲＰ78在 5 4例肺癌患者中的表达来说明其在人类肺癌中的作用。一、对象与方法1 材料 :收集 2 0 0 0年 1月至 2 0 0 0年 12月在大连医科大学第一、第二临床学院及中国医科大学第一、第二…     

肺癌患者C-反应蛋白浓度变化的临床意义

目的：探讨肺癌患者血清C反应蛋白（CRP）浓度的变化及其临床意义。方法：采用快速免疫消浊比浊法测定58例肺癌患者血清CRP水平,并与正常对照组进行比较。结果：肺癌患者血清CRP水平明显增高（P〈0．01）,并与疾病的临床分期有关（P〈0．05）,与病理类型无明显关系。结论：血清CRP水平有助于肺癌患者的诊断与病情的判断。     

GRP94表达在大细胞肺癌NCI-H460细胞对顺铂耐药中的作用

[目的]检测在诱导剂A23187与抑制剂BAPTA - AM作用下,大细胞肺癌细胞NCI - H460中GRP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对顺铂耐药发生中的作用.[方法]将NCI - H460细胞分为诱导剂A23187组、抑制剂BAPTA - AM组和对照组,RT - PCR、Western blot方法检测...     

α晶状体蛋白与白内障的研究进展

晶状体是人体内蛋白含量最高的组织结构。白内障被认为是一种构象性疾病,当α晶状体蛋白受到氧化损伤,晶状体蛋白错误折叠增多,加剧蛋白质变性、聚集和光散射,这可能是白内障发生的关键环节。α晶状体蛋白分子伴侣活性保护因子的发现,将对白内障发病机制和临床治疗研究开辟新领域。本文综述了近年来对α晶状体蛋白结构功能,表达部位及分子伴侣活性影响因素的研究。     

热休克蛋白在缺血预适应中的作用

缺血预适应(Ischemic Precondi-Tioning，IPC)是指予心脏一次或反复短暂缺血后，心脏对随后发生的长时间缺血有较好的耐受能力，产生缩小梗塞范围．减轻心肌细胞损伤程度，减少再灌注心率失常发生及改善心肌收缩功能，保护心肌内血管神经组织等多种心脏的保护作用。随着研究的进一步深入，人们发现IPC有早期保护作用和延期保护作用(Delaged Protection，DP)]。     

HSP90在原发性肾病综合征发生和治疗中的意义

【目的】热休克蛋白90（HSP90）是糖皮质激素受体（GR）的伴侣蛋白，本研究探讨HSP90在原发性肾病综合征（INS）发生和糖皮质激素（GC）在治疗中的作用本质。【方法】以INS患者和GC敏感、抵抗的细胞株为研究对象。分析其HSP90、GR表达水平及HSP90的亚细胞分布；并采用HSP90特异性阻断剂研究HSP90对GC反应性的影响。【结果】与对照组比较，INS患者HSP90mRNA表达水平明显增高；而且INS患者中GC抵抗组HSP90 mRNA表达显著高于GC敏感组（P〈0．05）。深入研究发现对照组的HSP90主要分布在细胞浆中，核内仅有微量分布；INS患者的HSP90表达有所增加，并且GC抵抗组与敏感组比较，HSP90明显趋向细胞核内分布（P〈0．001）。用HSP90特异性阻断剂后发现激素敏感细胞株的GC反应性也显著下降（P〈0．01）。【结论】研究表明HSP90的异常表达及亚细胞分布变化可能是导致GC抵抗的重要机制，其一方面可能影响内源性GC对神经-内分泌-免疫网络的功能调节，进而影响机体免疫内环境的稳定，从而参与INS等免疫损伤性疾病的发病；另一方面则可能干预患者对外源性GC的治疗反应，影响临床疗效。     

重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的策略

重组蛋白技术在许多领域已成为一种必要的工具,但有时表达的目的蛋白却未进行正确的折叠而被蛋白酶降解或聚集形成包涵体.因此,人们在表达不同的目的蛋白时采用了多种方法以期获得具有生物学功能的蛋白质,包括共表达分子伴侣、融合表达、定位表达、改善诱导条件、添加促折叠试剂和选择宿主细胞等.本综述整理了近年来优化蛋白表达的成功经验,从以上方面讨论了如何提高目的蛋白表达的可溶性和促进目的蛋白的正确折叠.     

分子伴侣的多重功能

分子伴侣是一类能帮助其他蛋白质进行正确折叠、组装、转运、介导错误折叠的蛋白质进行降解的蛋白质。它们还参与染色体的复制、抗原的加工与提呈，并作用于一些信息转导分子以调节生长和发育。分子伴侣发挥功能依赖于ATP的结合与水解。热休克应答是生物界从细菌到植物和动物普遍存在的，它是保护细胞免受像热休克、酒精、能量代谢抑制剂、重金属、抗原加工与提呈、凋亡等有害环境损伤的一个基本的防御机制。这些蛋白质的相对水平是非常重要的，过多或过少的Hsp70或Hsp90可以导致生长异常、发育畸形甚至细胞死亡。     

热休克蛋白与胃黏膜保护的研究

热休克蛋白是生物进化过程中一类高度保守的蛋白质,具有提高细胞对应激的耐受性,维护细胞自身稳定和保护细胞免受损伤等重要生物学功能。近年来,随着人们在分子细胞水平对胃黏膜保护作用的深入研究,热休克蛋白在胃黏膜屏障中的保护作用日益受到人们的重视。文章就热休克蛋白的生物学功能及其与胃黏膜保护的研究现状进行综述。     

GRP94表达在肺癌细胞对VP-16化疗耐药中的作用

[目的]检测在Ca2+拮抗剂A23187诱导下,人肺腺癌细胞SPCA1中GRiP94的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对VP-16耐药中的作用.[方法]采用RT-PCR、免疫荧光细胞化学方法检测不同浓度A23187处理组细胞的GRP94核酸及蛋白表达,用MTT法测定细胞在VP-16作用下的生存率.[结果]A23187可...     

miRNA-107在肺癌组织中的表达及临床意义*

目的：探讨miRNA-107（miR-107）在肺癌组织中的表达及临床意义。方法：收集52例肺癌患者组织标本,RT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-107的表达水平,并分析其与临床病理特征之间的关系。绘制ROC曲线,评价miR-107表达水平对肺癌的诊断价值。结果：miR-107在肺癌组织中的表达明显低于癌旁组织（P<0.01）。miR-107表达量下调42例,表达量上调10例,其表达仅与性别和TNM分期有关（P<0.05）,而与年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤大小、是否淋巴结转移及生存时间无关（P>0.05）。根据miR-107表达水平绘制ROC曲线,曲线下面积（Az）为0.736（95% CI：0.639-0.833）,临界值取4.4649时,miR-107诊断肺癌的灵敏度和特异性均为71.2%。结论：miR-107在肺癌组织中表达量下调,且可为肺癌诊断和治疗的提供参考依据。     

人GRP94基因慢病毒载体构建及稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌HeLa细胞株筛选及鉴定

目的:构建人葡萄糖调节蛋白 94(GRP94)基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRP94蛋白的人宫颈癌细胞株,筛选GRP94结合蛋白,为探讨GRP94对宫颈癌的调控作用提供细胞模型。方法:采用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增GRP94基因片段,连接到慢病毒载体pLVX-IRES-Hyg中,获得重组载体。瞬时转染293T细胞,采用Western blotting 法检测GRP94蛋白表达量。pLVX-FLAG-GRP94重组质粒通过与包装质粒共转染293T细胞,获得重组慢病毒。以慢病毒感染HeLa细胞,筛选并鉴定稳定表达GRP94蛋白的细胞株。用稳定表达FLAG-GRP94的HeLa细胞株,银染后利用质谱筛选结合蛋白,并经免疫共沉淀验证。结果:重组慢病毒载体经双酶切和基因测序比对鉴定正确。HeLa细胞经慢病毒感染,药物筛选后获得的稳定表达株中GRP94蛋白表达量高于野生型HeLa细胞(P<0.01)。成功钓取出一种与肿瘤发生发展密切相关的SND1蛋白。结论:成功构建了GRP94基因慢病毒载体pLVX-FLAG-GRP94,并筛选出稳定表达GRP94蛋白的HeLa细胞株,为进一步明确肿瘤的发生、发展机制奠定了基础。     

Pim-1蛋白激酶在肺癌组织中的表达及临床相关性的研究

目的 探讨Pim-1在肺癌中的表达和临床意义.方法 免疫组织化学方法检测38例肺癌组织标本和12例正常肺组织标本中的Pim-1蛋白激酶的表达情况,结果分为阴性、弱阳性、阳性和强阳性.对肺癌组与正常对照组间的Pim-1表达情况完成差别性检验,并通过差别性检验以及Logisitc回归分析探讨与肺癌患者Pim-1表达相关的临床因素.结果 Pim-1在肺癌标本的阳性率为55.26%(21/38),正常肺组织的阳性率是17.00%(2/12),Pim-1在肺癌组织的表达高于正常肺组织(P<0.05).Pim-1蛋白水平表达随肺癌的TNM分期增高而增强,随肿瘤直径的增高而增强,有明显的正相关性.结论 Pim-1的高表达与肺癌具有密切关系,Pim-1表达水平与肺癌的TNM分期和肿瘤大小呈正相关,由此提示:Pim-1表达可能与肿瘤病程进展有关,有可能作成为肺癌的靶向治疗的新靶点.     

EMMPRIN在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的 研究肿瘤转移基因EMMPRIN在非小细胞肺癌癌组织和癌旁组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测80例非小细胞肺癌癌组织和40例癌旁正常组织中EMMPRIN的表达.结果 EMMPRIN在肺癌细胞中表达阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0.05）,在NSCLC中,EMMPRIN表达随着肿瘤病理分级和TNM分期增加而有增高趋势.EMMPRIN的表达与有淋巴结转移呈正相关（P〈0.05）.结论 EMMPRIN参与了NSCLC的发生发展过程,EMMPRIN的表达可作为判断NSCLC病理分级及转移和预后的指标,为临床诊断和治疗提供依据.     

非小细胞肺癌中肺耐药蛋白mRNA的表达及临床意义

目的:探讨肺耐药蛋白(LRP)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法:应用RT-PCR半定量法检测60例NSCLC患者癌组织及癌旁组织中LRP mRNA的表达。用t检验、方差分析,Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验进行统计分析。结果:NSCLC患者的癌组织中LRP mRNA表达量显著高于癌旁组织(P=0.000),LRP mRNA表达量在肺腺癌中高于鳞癌(P=0.02),中高分化组高于低分化组(P=0.033),但LRP mRNA的表达量与其他临床病理相关因素及生存期无相关性。结论:LRP在NSCLC的原发性多药耐药(MDR)中可能起重要作用,检测LRP对于预测NSCLC患者化疗效果、协助临床选择化疗方案可能具有一定的意义。     

肺癌组织中RON基因的表达及其临床意义

目的研究RON基因在人肺癌组织及正常肺组织中的表达水平及其临床意义。方法用免疫组化SP法检测80例肺癌患者的库存标本和20例同期手术切除的正常肺组织中RON的表达,RON基因表达与临床病理、预后之间的关系。结果RON基因在肺癌中表达的阳性率为53.75%(43/80),明显高于对照组正常肺组织的表达(0%)(P=0.000)。不同性别、年龄的患者和病理类型的肺癌组织中,RON基因的表达差异无显著性(P>0.05);RON基因表达的阳性率随TNM分期的升高而升高(I期29.03%、II期65.52%、III期75.00%)(P=0.002)。Kaplan-Meier生存分析显示RON阳性表达者的1、3及5年生存率(67.44%、20.93%和9.30%)明显低于阴性者(81.08%、45.94%和24.30%)(P=0.029)。结论RON基因可能在肺癌的发生、发展过程中起着重要作用,提示其可作为肺癌一种新的预后判断指标和治疗靶点。     

GRP78 upregulation-induced increase in cisplatin sensitivity of SPCA1 lung cancer cells

Background  Glucose regulated protein 78 (GRP78), an endoplasmic reticulum (ER) chaperone, plays a critical role in chemotherapy resistance in a variety of cancers. In this study, we investigated the up-regulation of GRP78 induced by A23187 and its association with the chemotherapeutical sensibility to cisplatin in human lung cancer cell line SPCA1.

Methods  SPCA1 cells were pretreated with A23187 at different concentrations. The expression of GRP78 at the mRNA level was analyzed by RT-PCR; the expression of GRP78 at the protein level was determined by Western blotting and immunofluorescence assay. Cell survival was determined by MTT assay. Cell apoptosis was analyzed by flow cytometry.

Results  The expression of GRP78 at both the mRNA and protein levels was obviously induced by A23187 in SPCA1 cells, with an elevation of GRP78 by 2.1-fold at the mRNA level and by 3.8-fold at the protein level compared to the control. There was a dose-dependent response. Survival curve analysis demonstrated that A23187 induction caused a significant reduction of survival for the cells subjected to cisplatin treatment (P <0.05). After treatment by cisplatin, the percentage of apoptotic cells in the A23187 pretreated group increased about three fold compared with the control group ((27.53±4.32)% vs. (9.25±3.64)%, P <0.05).

Conclusions  A23187 treatment was fairly effective for the induction of GRP78 in SPCA1 cells at both the mRNA and protein levels. To a certain extent, GRP78 up-regulation by A23187 was associated with the enhancement of drug sensitivity to cisplatin in human lung cancer cell line SPCA1.

     

FasL蛋白在人类非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的　探讨Fas配体 (FasL)在人类非小细胞肺癌 (NSCLC)中的表达及临床意义。方法　应用免疫组织化学方法检测FasL蛋白在 32例手术切除的NSCLC中的表达情况。结果　FasL在本组 32例NSCLC中的阳性表达百分数为 3.0 %～ 98.7% ,平均(6 2 .0± 32 .0 ) % ,其中在肺腺癌中的平均阳性表达百分数为 (80 .5± 2 1 .2 ) % ,在肺鳞癌中为 (5 2 .3± 32 .8) % ,FasL蛋白在两种不同病理类型的肺癌中阳性表达水平差异显著 (P <0 .0 5 )。但在不同分化程度和不同外科病理分期 (PathologicalTNMstage ,pTNM)的NSCLC中FasL蛋白表达差异不显著 (P >0 .0 5 )。结论　FasL在NSCLC中的表达提示NSCLC具有反杀伤免疫细胞的能力 ,并可能是肺腺癌较易发生早期转移的重要原因