运动对大鼠骨骼肌PI3K磷酸化与表达的影响

目的探讨运动干预对大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)mRNA表达、蛋白总量(t-PI3K)及磷酸化PI3K(p-PI3K)的影响。方法SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分别进行1h/d和1.5h/d的游泳运动7周,最后一次运动结束恢复24h和48h取材,分为1h/d运动24h取材组、1h/d运动48h取材组、1.5h/d运动24h取材组、1.5h/d运动48h取材组。测定血液葡萄糖和胰岛素浓度;Westernblot法检测骨骼肌t-PI3K蛋白表达、p-PI3K磷酸化水平;RT-PCR法分析PI3KmRNA表达。结果与对照组比较,运动组胰岛素浓度降低;各运动组p-PI3K升高;1h/d运动24h取材组和1.5h/d运动24h与48h取材组t-PI3K增高;PI3KmRNA表达变化发生在1h和1.5h运动24h取材组。结论运动干预提高大鼠骨骼肌对胰岛素的敏感性,改善PI3K磷酸化、蛋白和基因表达。     

运动对大鼠骨骼肌P13K磷酸化与表达的影响

目的探讨运动干预对大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）mRNA表达、蛋白总量（t-PI3K）及磷酸化PI3K（p-PI3K）的影响。方法SD大鼠随机分为对照组和运动组。运动组分别进行1h／d和1．5h／d的游泳运动7周，最后一次运动结束恢复24h和48h取材，分为1h／d运动24h取材组、1h／d运动48h取材组、1．5h／d运动24h取材组、1．5h／d运动48h取材组。测定血液葡萄糖和胰岛素浓度；Western blot法检测骨骼肌t-PI3K蛋白表达、P-PI3K磷酸化水平；RT-PCR法分析PI3K mRNA表达。结果与对照组比较，运动组胰岛素浓度降低；各运动组P．PI3K升高；1h／d运动24h取材组和1．5h／d运动24h与48h取材组t-PI3K增高；PI3K mRNA表达变化发生在1h和1．5h运动24h取材组。结论运动干预提高大鼠骨骼肌对胰岛素的敏感性，改善PI3K磷酸化、蛋白和基因表达。     

p38信号通路对大鼠脑创伤后MMP-9的表达及脑水肿形成的影响

目的观察并探讨阻断p38通路激活对大鼠脑创伤后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化及脑水肿形成的影响及意义。方法健康成年雄性SD大鼠130只,随机分为正常组10只,对照组40只:假手术处理;脑创伤组40只:制作改进式Feeney’s脑创伤模型;p38抑制组40只:脑创伤前15 min股静脉注射p38抑制剂(SB203580,400μg/kg)。分别在脑创伤后2 h、2 d时断头取脑,采用RT-PCR法和Western blotting法检测脑组织P38磷酸化水平及MMP-9 mRNA及蛋白表达水平,Evans Blue法测定血脑屏障通透性变化;干湿比重法测定脑组织含水量。结果(1)与对照组相比,脑创伤组磷酸化p38的水平在伤后2 h明显上升;MMP-9 mRNA和蛋白在脑创伤后2 h未见明显差异(P>0.05),但2 d时表达均显著增高(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组伤后2 h时p38磷酸化水平明显降低(P<0.01),MMP-9 mRNA和蛋白在创伤后2 d时的高表达也均有明显下降(P<0.05);(2)与对照组比较,脑创伤组血脑屏障通透性在创伤后2 h明显增加(P<0.05),2 d时出现继续升高(P<0.01);脑含水量在创伤后2 h无明显变化(P>0.05),在2 d时显著增加(P<0.01)。与脑创伤组相比,p38抑制组血脑屏障通透性及脑含水量在创伤后均有明显降低(P<0.05)。结论阻断p38通路激活可下调大鼠脑创伤后MMP-9高表达,减轻血脑屏障破坏及创伤性脑水肿,提示p38信号通路可通过调节MMP-9的表达变化在创伤性脑水肿中发挥重要作用。     

硫化氢对氧应激下大鼠肝星状细胞p38MAPK信号的影响

目的探讨硫化氢(H2S)对氧应激下大鼠肝星状细胞(HSC-T6)p38 MAPK信号的影响。方法对大鼠HSC-T6进行细胞培养,应用铁超载方法制备肝纤维化的氧应激模型,给予不同剂量的外源性H2S供体硫氢化钠(NaHS)和KATP通道抑制剂格列本脲(GLBN),作用于HSC-T6。在24、48h后分别提取培养后的HSC细胞,用RT-PCR方法测定p38 mRNA,Western-blot方法测定p38蛋白质以及磷酸化p38(p-p38)蛋白质表达水平。结果在应用Fe-NTA作用的大鼠HSC体外培养氧应激模型下,给予FeNTA24h和48h时后,模型组p38 mRNA和蛋白表达水平与空白组比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。给予NaHS处理后,100、200和400μmol.L-1NaHS组的p38 mRNA和蛋白水平和模型组比较,表达逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05),并且组间差异均有统计学意义(P<0.05)。加入格列本脲后,p38mRNA和蛋白质表达水平均有所上升,但低于模型组。结论硫化氢通过抑制p38 MAPK而影响氧应激下大鼠HSC-T6。     

条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38表达变化

目的 探讨大鼠恐惧记忆形成过程中海马CA1/CA3区丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)表达及活性变化.方法 电击组及对照组大鼠各9只,分别给予或不给足底电击,1h和24h 后检测大鼠的僵住反应,然后处死动物,分别提取海马CA1和CA3区蛋白,western blot检测p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK表达情况.结果 电击组的大鼠在lh和24h的僵住反应的时间分别为(49.1±18.6)s,(75.7±19.6)s,明显高于对照组[分别为(14.0±4.5)s,(32.1±22.7)s],差异有统计学意义(n=9,P ＜0.05);在24h电击组大鼠海马CA1区p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK (Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为9.4±2.6和7.8±2.1,与对照组(1.0±0.1和1.0±0.2)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05);24h电击组大鼠海马CA3区p38 MAPK及磷酸化p38 NAPK(Thr180/Tyr182)表达平均灰度值比值分别为6.2±3.3和2.6±0.6,与对照组(2.1±0.5和1.4±0.5)比较表达显著增加(n=9,P＜0.05).结论 条件性恐惧记忆形成中大鼠海马CA1/CA3区p38 MAPK蛋白表达升高,活性增强.p38 MAPK可能参与了条件恐惧长时记忆的形成.     

运动对2型糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路PI3K/PKB磷酸化与表达的影响

目的 探讨运动对2型糖尿病大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)与蛋白激酶B(PKB)磷酸化和蛋白表达及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)和mRNA表达的影响.方法 30只SD雄性大鼠随机分为对照组、糖尿病组与糖尿病运动组.糖尿病组与糖尿病运动组大鼠经高脂饲料喂养8周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,30mg/kg),注射后3周确认2型糖尿病建模成功,糖尿病运动组大鼠进行4周游泳训练.糖尿病组与糖尿病运动组大鼠建模过程始终喂养高脂饲料;对照组大鼠喂养普通饲料.糖尿病运动组大鼠4周游泳训练结束,于最后一次运动后恢复48 h,取材各组大鼠腓肠肌.采用Western blot法分析PI3K与PKB的磷酸化水平和蛋白表达,检测GLUT4蛋白表达:RT-PCR检测GLUT4 mRNA表达.结果 与糖尿病组比较,运动改善2型糖尿病大鼠腓肠肌PKB磷酸化水平与蛋白表达(P<0.05);增加了糖尿病大鼠腓肠肌GLUT4蛋白与mRNA表达(P<0.01,P<0.05).结论 运动可能通过改善2型糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素信号通路蛋白激酶磷酸化和蛋白表达,增加对葡萄糖的吸收与利用.     

球形脂联素对高糖诱导的NRK-52E细胞单核趋化蛋白-1的表达影响及其可能机制

目的:探讨球形脂联素(gAd)对高糖环境下大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)单核趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA和蛋白表达的影响以及其与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的关系。方法:将体外培养NRK-52E细胞分为6组:正常糖对照组NG(含5.6mmol/L葡萄糖)、高糖组HG(含25mmol/L葡萄糖)、gAd处理组(分别用gAd2,5,10mg/L+25mmol/L葡萄糖)、p38MAPK抑制剂组(25mmol/L葡萄糖+10μmol/LSB203580)。30min后采用Western印迹方法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)和总p38MAPK(t-p38MAPK)的表达;24hRT-PCR法、Western印迹方法分别检测MCP-1mRNA和蛋白的表达。结果:高糖环境下,NRK-52E细胞p-p38MAPK、MCP-1mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),加入gAd及SB203580后,NRK-52E细胞p-p38MAPK、MCP-1mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05),且呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论:gAd呈现剂量依赖性抑制高糖诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞MCP-1高表达,且这种肾脏保护作用是通过p38MAPK途径介导的。     

丝裂原活化蛋白激酶p38在急性胰腺炎患者外周血单个核细胞中的变化和意义

目的探讨急性胰腺炎患者外周血单个核细胞(PBMC)内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)信号水平的变化及其与疾病严重程度的关系。方法收集轻型胰腺炎(MAP组)29例、重症胰腺炎(SAP组)23例和对照组21例,实时荧光聚合酶链反应检测患者PBMC p38 MAPK基因表达水平,Western blot检测PBMC p38 MAPK和磷酸化p38 MAPK(P-p38 MAPK)蛋白的水平。结果 SAP组p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平高于对照组和MAP组(P<0.05);MAP组p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SAP组P-p38 MAPK总蛋白水平高于对照组和MAP组(P<0.01,P<0.05),MAP组P-p38 MAPK总蛋白水平高于对照组(P<0.05)。结论急性胰腺炎患者PBMC内p38 MAPK mRNA表达水平和总蛋白水平变化较小;p38 MAPK磷酸化水平显著升高,而且与病情程度密切相关。     

哮喘大鼠p38mRNA及磷酸化蛋白水平的动态变化

目的研究哮喘大鼠p38mRNA及磷酸化蛋白（P—p38）水平的动态变化。方法取SPF级雄性SD大鼠50只,随机分为正常对照组及哮喘组（分为哮喘0．5、1、3、12h组,每组10只。培养各组大鼠外周血单个核细胞（PBMCs）。分别应用RT—PCR、Western Bloting技术检测各组大鼠PBMCs p38mRNA及P—p38的相对表达水平。结果哮喘0．5、1、3h组PBMCs p38mRNA及P—p38蛋白表达水平均较正常对照组均显著升高（均P〈0．01）,哮喘12h组与正常对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。正常对照组及哮喘0．5、3、12h组p38 mRNA及P—p38蛋白表达水平均较哮喘1h组显著降低（均P〈0．01）。结论P—p38可能在哮喘气道炎症和重塑中发挥重要作用。深入研究p38在哮喘发病机制中的具体调控作用,可能对支气管哮喘的临床防治有重要意义。     

脑缺血再灌注后神经细胞bcl-2和p53 mRNA的表达

①目的　探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞bcl 2和p5 3mRNA表达的变化规律。②方法采用原位杂交技术分别观察缺血 1.5h再灌注后 2h ,6h ,12h ,1d ,2d ,3d ,7d和 14d神经细胞bcl 2 ,p5 3mRNA的表达。③结果　脑缺血再灌注 2h在缺血周围区bcl 2mRNA开始表达 ,1d达高峰 ,之后逐渐减弱 ,14d达接近假手术组水平 ;p5 3mRNA于再灌注 6h出现 ,1～ 2d达高峰 ,7d达假手术组水平。④结论　大鼠局灶性脑缺血再灌注后bcl 2和p5 3mRNA的表达与缺血性损伤有一定关系 ,bcl 2和p5 3mRNA参与了神经细胞凋亡的调节。     

补糖对急性运动大鼠心肌单磷酸腺苷活化蛋白激酶激活的影响

目的 通过测量大鼠急性运动后心肌单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）活性和糖原含量的变化,探讨补糖对运动心肌AMPK激活的影响。方法 大鼠进行急性耐力运动,并在运动前后不同时间补充不同剂量的补充葡萄糖,采用Western blot测定大鼠心肌AMPK活性的动态变化,采用蒽酮法测定心肌糖原含量。结果 运动诱发大鼠心肌AMPK活性显著增高并在急性运动后1 h保持在较高水平,然而运动补糖大鼠心肌AMPK活性却无显著增高。运动或小剂量补糖都无法引起大鼠糖原含量的显著变化,只有大剂量补糖能使糖原含量在运动后24 h显著增高。结论 （1）急性运动可使大鼠心肌AMPK活性升高,补糖能显著抑制急性运动中和运动后AMPK的激活。（2）运动后大剂量补糖能有效提高运动后24 h心肌糖原含量。     

严重烫伤大鼠早期心肌p38MAPK,TNF-α和超微结构变化及川芎嗪对其的影响

目的　研究川芎嗪下调 p3 8MAKP表达与活化对严重烫伤大鼠早期心肌产生保护作用。 方法　清洁级成年雄性Wistar大鼠 10 8只 ,随机分为假烫组 (A) ,烫伤对照组 (B)和烫伤 +川芎嗪组 (C) ,A组 8只 ;B、C两组各 48只 ,又分为 1、3、6、12、2 4、48h六个时相点 ,观察和检测心肌组织 p3 8MAKP的表达情况、TNF -α的含量 ,血清CK -MB含量和心肌细胞的超微结构变化。结果　烫伤对照组和烫伤 +川芎嗪组伤后 1小时心肌细胞内p3 8MAPK大量活化及核转位 ,3小时达高峰 ,6小时明显减弱 ,心肌组织TNF -α在伤后 6小时开始增加 ,12小时达高峰 ,48小时仍较高 ,而反映心肌细胞损伤指标CK -MB和超微结构异常变化基本上也是从伤后 6小时开始 ,12小时达峰值 ,烫伤 +川芎嗪组上述指标要比烫伤对照组明显下降和减轻。结论　心肌p3 8MAPK和TNF -α的含量、血清CK -MB含量和心肌细胞的超微结构异常变化 ,在时间上呈现数小时的时间差 ,从而得出 p3 8MAPK的活化在烧伤早期诱发心肌损伤过程中起到非常重要的作用 ,川芎嗪对严重烧伤早期心肌的保护作用可能是通过下调 p3 8MAKP表达、活化来实现的。     

脑缺血再灌注后生长相关蛋白和突触素表达及其意义

（１）目的 研究脑缺血再灌注后生长相关蛋白－４３（ＧＡＰ－４３）和突触素ｐ３８表达的变化规律,探讨中枢神经损伤后修复的可塑性。（２）方法 成年健康雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠３６只,随机分为实验组和对照组。采用线栓法建立大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型,应用免疫组织化学方法观察脑缺血再灌注后ＧＡＰ－４３和突触素ｐ３８的表达。（３）结果 脑缺血再灌注６ｈ后,ＧＡＰ－４３表达逐渐增高,第７天达高峰,以后逐渐降低,     

谷氨酰胺对脓毒症幼年大鼠心肌ERK2mRNA以及p38MAPK表达的影响

目的观察脓毒症心肌细胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated kinase-2，ERK2）和丝分裂原蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，p38MAPK）是否参与这一病理过程，以及谷氨酰胺（Glutamine，Gln）对其表达的影响，探讨Gin对脓毒症大鼠心肌的保护途径。方法选健康18日龄Wistar大鼠88只．按腹腔注射药物不同生理盐水作对照组（0h），内毒素（LPS）、Gln组，各组于加LPS后2、4、6、24及72h分别取8只，断头无菌分离心脏，似多聚甲醛固定12-16h，制成石蜡切片，用原位杂交方法测定ERK2 mRNA表达，用免疫组化方法测定p38MAPK表达。结果LPS组各时点ERK：mRNA以及p38MAPK表达均较对照组增强．最高点分别在6h和6-24h，差异有显著性，P〈0．01；Gln组各时点ERK2 mRNA以及p38MAPK表达趋势与LPS组一致，但明显低于LPS组，P〈0．01。结论ERK2 mRNA以及p38MAPK表达在脓毒症时均明显增强：谷氨酰胺可以使其表达下调。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注脑内p47phox表达变化的研究

目的通过观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后p47phox基因在脑内表达动态变化,探讨p47phox在局灶性脑缺血再灌注后对脑缺血损害的作用及机制,可能为p47phox基因作为脑卒中的候选基因提供理论依据。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑缺血再灌注组和假手术组再灌后第1、3、6、12和24h和正常对照组p47phox基因在脑内的表达。结果正常对照组和假手术组大鼠脑皮质内有少量p47phox mRNA表达,组内各时间点比较无统计学意义(P>0.05);脑缺血再灌注组,缺血再灌注1h后p47phox mRNA表达增加,至3h达高峰(与假手术组和正常对照组相比差异显著,P<0.01)。结论p47phox可能参与了脑缺血再灌注后损伤,并在其中发挥了重要作用。     

急性心肌梗死大鼠心肌组织p38的表达及其意义

目的探讨大鼠急性心肌梗死后不同时间点心肌组织中p38mRAN、p38蛋白的表达水平及意义。方法健康成年雄性SD大鼠36只,将其随机分为对照组、假手术组和心肌梗死模型组,模型组大鼠开胸结扎冠状动脉前降支以建立心肌梗死模型,成功结扎冠状动脉前降支后1、3、6、12h无痛处死大鼠并获取大鼠心肌组织;对照组大鼠不做任何处理;假手术组大鼠开胸冠状动脉穿线但不结扎冠状动脉;术后均无痛处死并获取心肌组织;分别采用RT-PCR、Western blot测定大鼠心肌组织p38mRNA及蛋白的表达水平。结果对照组与假手术组之间p38mRNA及蛋白表达的差异均无统计学意义(P>0.05);AMI组大鼠各亚组心肌组织中p38mRNA及蛋白表达均高于假手术组(P<0.05);AMI组中不同时间点亚组大鼠心肌组织中p38mRNA及蛋白的表达差异均有统计学意义(P<0.05),其表达量随结扎冠状动脉前降支时间的延长而增加,并于6h表达量达到高峰,随后下降,至12h其表达水平与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 p38可能在心肌梗死后的病理过程中发挥作用。     

白杨素通过下调P38-MAPK磷酸化减轻脓毒症大鼠的心肌损伤

目的 探讨白杨素通过下调P38-有丝分裂原激活的蛋白激酶（MAPK）磷酸化减轻脓毒症大鼠心肌损伤的机制。方法 清洁级SD大鼠100只,随机分成：对照组、模型组、地塞米松组（0.27 mg?kg-1）、白杨素低剂量组（20 mg?kg-1）、白杨素高剂量组（40 mg?kg-1）,每组20只。模型组、地塞米松组、白杨素低、高剂量组建立脓毒症模型;建模成功后,地塞米松组、白杨素低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组及模型组给予等体积的生理盐水,连续给药4周。试验结束后,测定大鼠心功能指标,苏木精-伊红（HE）染色观察大鼠心肌组织病理学变化,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白免疫印迹（western blot）法测定大鼠心肌P38、磷酸化MAPK（p-MAPK）mRNA和蛋白水平。结果 与对照组比较,模型组大鼠左心室舒张末期内径（LVEDD）、左心室收缩末期内径（LVESD）水平、P38、p-MAPK mRNA和蛋白水平升高,短轴缩短分数（FS）、射血分数（EF）水平降低（P<0.05）;与模型组比较,地塞米松组、白杨素低剂量组、白杨素高剂量组LVEDD、LVESD水平、P38、p-MAPK mRNA和蛋白水平降低,FS、EF水平升高（P<0.05）;与地塞米松组比较,白杨素低剂量组LVEDD、LVESD水平、P38、p-MAPK mRNA和蛋白水平升高,FS、EF水平降低（P<0.05）;白杨素高剂量组LVEDD、LVESD、FS、EF水平、P38、p-MAPK mRNA和蛋白水平与地塞米松组比较无明显差异（P>0.05）。结论 白杨素能够减轻脓毒症大鼠的心肌损伤,减轻心肌细胞炎症反应;其机制可能与白杨素可显著抑制脓毒症大鼠心肌细胞P38-MAPK磷酸化有关。