白藜芦醇对脂多糖引起小胶质细胞激活的影响

目的:探讨白藜芦醇(Resv)抑制脂多糖(LPS)引起的小胶质细胞激活的作用及机制。方法:将小胶质细胞分为对照组、100ng/ml的LPS刺激组、25μM的Resv+LPS组、沉默信息调节因子1(SIRT1)-siRNA+Resv+LPS组和SC-siRNA+Resv+LPS组,24h后,采用酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养上清液中促炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,相差显微镜观测细胞形态。结果:LPS暴露可显著激活小胶质细胞,增加促炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌和iNOS表达,细胞形态从静息状态的多角形变为激活状态的圆形,白藜芦醇可显著抑制LPS对小胶质细胞产生的上述激活作用,而SIRT1-siRNA显著逆转了白藜芦醇产生的抑制小胶质细胞激活的作用。结论:白藜芦醇可通过SIRT1减轻LPS引起小胶质细胞激活。     

LPS刺激对大鼠视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)刺激对CD80、CD86、CD40在大鼠视网膜小胶质细胞上表达的影响,探讨视网膜小胶质细胞在视网膜和视神经病变中与T细胞活化的关系.方法 分离培养大鼠视网膜小胶质细胞并进行OX42染色鉴定,当细胞培养达80%融合状态时分为正常培养组和LPS刺激组.采用RT-PCR法检测两组细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达,硝酸还原法和ELISA法检测两组细胞一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量.结果 RT-PCR检测显示,LPS刺激组的视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达较正常培养组显著增加,两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).正常培养组的视网膜小胶质细胞有少量NO和TNF-α分泌,LPS刺激组的小胶质细胞培养上清液中NO和TNF-α的分泌量较正常组显著增加[(18.10±1.57)μmol/L vs (1.55±0.15)μmol/L,(51.07±4.30)pg/mL vs (2.37±0.31)pg/mL],两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).结论 培养的大鼠视网膜小胶质细胞有共刺激分子表达,LPS刺激后表达上调,提示视网膜小胶质细胞可能与T细胞活化有关.     

LPS刺激对大鼠视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)刺激对CD80、CD86、CD40在大鼠视网膜小胶质细胞上表达的影响,探讨视网膜小胶质细胞在视网膜和视神经病变中与T细胞活化的关系.方法 分离培养大鼠视网膜小胶质细胞并进行OX42染色鉴定,当细胞培养达80%融合状态时分为正常培养组和LPS刺激组.采用RT-PCR法检测两组细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达,硝酸还原法和ELISA法检测两组细胞一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量.结果 RT-PCR检测显示,LPS刺激组的视网膜小胶质细胞CD80、CD86和CD40 mRNA的表达较正常培养组显著增加,两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).正常培养组的视网膜小胶质细胞有少量NO和TNF-α分泌,LPS刺激组的小胶质细胞培养上清液中NO和TNF-α的分泌量较正常组显著增加[(18.10±1.57)μmol/L vs (1.55±0.15)μmol/L,(51.07±4.30)pg/mL vs (2.37±0.31)pg/mL],两组比较差异有统计学意义(均P<0.01).结论 培养的大鼠视网膜小胶质细胞有共刺激分子表达,LPS刺激后表达上调,提示视网膜小胶质细胞可能与T细胞活化有关.     

白花丹醌对CIA大鼠滑膜细胞增殖及TNF-α、IL-1β和MMP-3表达的影响

目的 研究白花丹醌对脂多糖(LPS)诱导的体外培养CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(CIA-FLS)的增殖及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达的影响.方法 采用Ⅱ型胶原蛋白+弗氏完全佐剂建立大鼠关节炎模型(CIA);原代培养CIA-FLS,MTT法检测药物对CIA-FLS增殖的影响;随机设立CIA对照组、 LPS对照组、甲氨蝶呤组、白花丹醌1.0 μmol/L组、白花丹醌1.5 μmol/L组、白花丹醌2.0 μmol/L组;各药物与细胞共同孵育48 h后,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-a、 IL-1β和MMP-3的含量;Western blot检测细胞内MMP-3的蛋白含量.结果 MTT显示,白花丹醌能不同程度抑制 CIA-FLS的增殖,呈浓度和时间依赖性;与LPS对照组比较,甲氨蝶呤或白花丹醌均能明显下调细胞培养上清液中TNF-α、 IL-1β和MMP-3的含量(P<0. 001),明显降低细胞中 MMP-3的蛋白含量(P<0.001).结论 白花丹醌能抑制 CIA-FLS的增殖,并能通过下调TNF-α、IL-1β和MMP-3的表达而抑制LPS诱导CIA-FLS的炎症反应.     

β淀粉样蛋白和仪α1-抗糜蛋白酶对星形胶质细胞激活的作用

目的 研究星形胶质细胞在β淀粉样蛋白1-42(Aβ_(1-42)越)和α1-抗糜蛋白酶(ACT)作用下的基因表达变化,探索AD脑组织中胶质细胞炎症反应的特征. 方法 人原代星形胶质细胞培养至第二代后,分别加入脂多糖(LPS)、Aβ_(1-42)(50 μmol/L)或Aβ_(1-42)/ACT(50:5μmol/L)复合物,24 h后提取总RNA.用基因芯片方法检测胶质细胞的基因表达谱,并分析差异表达基因在功能和信号传导通路方面的关系. 结果 Aβ_(1-42)越和Aβ_(1-42)/ACT对胶质细胞基因表达的影响较LPS广泛,以上调作用为主;且各组间基因表达的变化明显不同.Gene Ontology分析显示Aβ_(1-42)艟使炎症应激反应、免疫调节相关基因表达增加;而Aβ_(1-42)/ACT对线粒体损害和细胞凋亡、氧化应激反应、上皮分化和脉管发生等相关基因都有显著影响.以Aβ_(1-42)、Aβ_(1-42)/ACT实验组中表达上调的白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)等关键基因进行相关信号传导通路分析显示下游转录因子和基因可进一步诱导炎症因子生成、细胞凋亡并影响AB的产生. 结论 基因芯片研究证实Aβ_(1-42)越可诱导胶质细胞的炎症反应,与ACT结合后产生不同的作用,提示Aβ_(1-42)、ACT都是参与AD病理过程的重要物质.Aβ_(1-42)诱导胶质细胞产生的IL-6、TNFα及其信号传导通路在介导AD的发病中发挥重要作用.     

白介素-10抑制促炎症因子生成保护多巴胺能神经元

目的探讨白介素-10(IL-10)对炎症介导的多巴胺能神经元损伤的影响。方法于中脑原代神经元-胶质培养体系中,应用脂多糖建立多巴胺能神经元损伤的炎症机制模型,IL-10(10~100 ng/mL)与脂多糖(1~100 ng/mL)同时处理该培养体系。免疫细胞化学法检测酪氨酸羟化酶阳性神经元的数目,液闪测定法测定多巴胺摄取力,并检测促炎症因子,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)(ELISA法)、一氧化氮(NO)(G riess反应)和超氧化物(细胞色素C还原法)的变化。结果IL-10(10~100 ng/mL)对脂多糖(1~100 ng/mL)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤具显著的保护作用,且呈剂量依赖性;IL-10也显著降低促炎症因子TNFα-、IL-1β、NO和超氧化物的生成。结论IL-10抑制促炎症因子生成,保护多巴胺能神经元。     

丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制研究

目的 探讨丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制。方法 将小胶质BV-2 细胞分为对照组、丙泊酚组、脂多糖（LPS）组、LPS+ 丙泊酚组,对照组细胞加入PBS 液,丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L,LPS 组细胞加入LPS 1μg/ml,LPS+ 丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L+LPS 1μg/ml。采用MTT 比色实验测定细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用逆转录- 聚合酶链反应测定细胞p38MAPK 和TLR4mRNA 的表达,采用Western blot 检测细胞p38MAPK 和TLR4 蛋白表达量。结果 LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性低于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性高于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平低于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚 组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量低于LPS 组（P <0.05）;丙泊酚组和对照组小胶质细胞各指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 丙泊酚能抑制小胶质细胞过度活化和炎症反应,其机制可能与丙泊酚可下调TLR4-p38MAPK 信号通路有关。     

青蒿素对脂多糖活化的小胶质细胞炎症介质释放的影响

目的 探讨青蒿素(artemisinin,ART)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞炎症介质释放的影响，研究青蒿素对帕金森病等慢性神经退行性疾病神经细胞炎症反应的抑制作用及其机制。 方法 采用CCK8法检测ART对BV2小胶质细胞的作用浓度。使用一定浓度的ART来处理经过LPS诱导的小胶质细胞。定量PCR技术和ELISA检测ART对促炎因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响。采用Western blotting检测核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白(P65)、人核因子κB抑制蛋白α(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKBα)的表达水平，以及ART对诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因表达的影响。 结果 当ART的剂量为0.1~10 μmol/L时，BV2细胞的活性无明显变化，因此选择浓度为1 μmol/L的ART用于进一步的实验。定量PCR结果表明，ART预处理组中促炎因子IL-1β、TNF-α mRNA的表达显著降低。Western blotting结果显示，ART预处理组NF-κB、IKBα的蛋白表达水平显著升高，炎症诱导酶iNOS、COX-2的表达水平显著降低。 结论 ART可调节LPS活化的BV2小胶质细胞中炎性因子及炎症诱导酶的表达，发挥抗炎作用，这一作用可能是通过调控NF-κB信号通路来实现的。      

NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS (500 μg/mL)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组.ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达.结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P＜0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P＜0.05).结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达.     

LPS介导三种啮齿动物原代胶质细胞炎症氧化反应的研究

目的 以Sprague-Dawley大鼠 (SD Rats) 、C57BL/6小鼠和昆明小鼠 (Kunming mice) 为研究对象, 探索研究脂多糖 (Lipopolysaccharide, LPS) 诱导3种鼠的原代混合胶质细胞释放炎症因子的对比.从而进一步探讨、发现研究三种鼠的应用价值、寻找更理想的炎症模型.方法 以一氧化氮合酶 (i NOS) 、环氧化酶 (COX-2) 、白介素-1beta (IL-1β) 和Nitric Oxide (NO) 作为代表激活的炎症氧化应激反应表征.获得C57BL/6小鼠、昆明种小鼠和SD大鼠23 d龄乳鼠后, 进行断头取脑和胶质细胞培养.传代至第3代接种于24孔板使用, 经LPS介导24 h后分别用Griess法检测NO浓度变化, Western b Lot检测COX-2、IL-1β、i NOS的蛋白表达.结果 用含N2的无血清培养基处理后的SD大鼠混合胶质细胞形态发生改变.比较三种鼠混合胶质细胞的正常对照组和LPS组, LPS组的NO释放量显著升高 (P<0.01) ;并且3种鼠混合胶质细胞的LPS组的i NOS/COX-2/IL-1β的表达也明显升高.结论 LPS可以诱导C57BL/6小鼠、昆明鼠以及SD大鼠混合胶质细胞NO的释放以及IL-1β、i NOS、COX-2蛋白的表达, 从而诱发炎症反应;LPS可以诱导3种鼠的原代混合胶质细胞形成炎症氧化模型.并且, SD大鼠反应较为灵敏.     

改良三甲散含药脑脊液对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症模型相关因子及蛋白表达的影响

目的探讨改良三甲散含药脑脊液对脂多糖(LPS)所诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响。方法将BV2细胞分为空白对照组,模型组,10.0%、5.0%、2.5%改良三甲散组,石杉碱甲组。细胞培养贴壁后,改良三甲散各组及石杉碱甲组分别加入10.0%、5.0%、2.5%、10.0%含药脑脊液,37℃孵育2 h后除空白对照组均加入LPS(终浓度为1 mg/L),继续孵育24 h后收集培养上清,提取蛋白样品。应用硝酸还原酶法检测各组细胞培养上清中一氧化氮(NO)的含量;ELISA法检测各组细胞培养上清中诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;Western blot法检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达。结果模型组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显升高,p-JNK表达上调;10%、5%改良三甲散组培养上清中NO、i NOS、IL-1β、TNF-α的含量明显下降,p-JNK表达下调。结论改良三甲散含药脑脊液对LPS所致的BV2小胶质细胞的炎性反应具有调节作用,其作用机制可能与调控p-JNK的表达、减少炎性介质的产生有关。     

Characterization of a small molecule inhibitor of tumor necrosis factor-alpha production

Background Numerous studies have shown that reducing the level of tumor necrosis factor-alpha （TNFα） through the use of anti-TNF antibodies or soluble TNF receptor is a safe and efficacious treatment to inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis. Therefore, novel approaches to achieve this outcome are desired. The aim of this study was to investigate the characterization of a small molecule inhibitor, Y316, which blocks TNF mRNA upregulation and TNF production by lipopolysaccharides （LPS） stimulated monocytes. Methods Peripheral blood mononuclear cells （PBMC） from healthy volunteers were plated in 24-well plates and stimulated with LPS （1 pg/ml）, phorbol-12-myristate-13-acetate （PMA） （100 ng/ml）, zymosan （10 IJg/ml） and Tsst （100 ng/ml）. Supernatants were collected after 4-hour culture at 37℃, and quantitative determination of TNFα, interleukin-113 （IL-1β）, IL-6, IL-8, IL-10 and IL-2 production in the supernatants was performed by colorimetric enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Total RNA of PBMC was isolated and cytokine mRNA quantitation was performed by using a RNA level measuring kit （R ＆ D Systems）. PBMC were pretreated with Y316 （10 μmol/L, 1 μmol/L, 0.1 μmol/L, 0.01 μmol/L and 0.001 μmOl/L） or dimethyl sulfoxide at 37℃ for 10 minutes, and then stimulated with LPS or PMA, protein concentrations of p44.42, IKBa, P38 and Jun NH2-terminat kinase were determined by Western blotting. Cyclic adenosine-3＇,5＇-monophosphate （cAMP） of PBMC was measured by enzyme immunoassay kit （Amersham Pharmacia Biotech）. Results Y316 blocked TNF production and inhibited the upregulation of TNF mRNA levels in response to LPS, and also prevented the production of IL-1 and IL-6. In contrast, Y316 augmented the production of IL-10 in LPS-stimulated monocytes. Y316 failed to prevent the production of IL-2 and TNF in antigen-stimulated T cells, suggesting that its effects may be cell-type specific. Y316 prevented the phosphorylation and activation of the MAPK, ERK, and therefore appeared to mediate its effects on TNF by acting at an early point in the signaling cascade induced in response to LPS. There was no effect of Y316 on cAMP levels either alone or in the presence of LPS. Conclusions Y316 appears to be a small molecule inhibiting TNF production, which may act via a novel mechanism. Identification of the target of Y316 may lead to the development of alternative strategies for achieving selective cytokine inhibition.     

COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖诱导下巨噬细胞炎症因子表达的影响

研究COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖(LPS)诱导下RAW 264.7细胞炎症模型的抗炎作用。采用LPS (1μg/mL)刺激生长良好的RAW 264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型,在不同浓度的ZLJ-6( 3,10,30 μmol/L)作用下,用Griess法检测细胞培养液中NO的含量,用ELISA法检测TNF-α、IL-6含量,并用Western blotting检测各组细胞中环加氧酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮激酶(iNOS) 的表达。ZLJ-6能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放以及TNF-α、IL-6等炎症因子的生成,同时抑制COX-2和iNOS的表达。结果表明,ZLJ-6具有抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应的作用,其抗炎机制可能通过抑制COX-2、iNOS的表达以及炎症介质NO以及TNF-α、IL-6的产生。     

Caffeic acid ester fraction from Erigeron breviscapus inhibits microglial activation and provides neuroprotection

Objective:To investigate the effects of caffeic acid ester fraction(Caf)from Erigeron breviscapus, mainly composed of dicaffeoylquinic acids(diCQAs),on microglial activation in vitro and focal cerebral ischemia in vivo.Methods:The production of nitric oxide(NO),tumor necrosis factorα(TNF-α),and interleukin-1β(IL-1β)induced by lipopolysaccharide(LPS)treatment in rat primary cultured microglia were measured by Griess reaction or enzyme-linked immunosorbent assay.Cell viability of cortical neurons was measured using AlamarBlue reagent.The behavioral tests and the infarct area of brain were used to evaluate the damage to central nervous system in rat middle cerebral artery occlusion(MCAO)model of cerebral ischemia.Real time polymerase chain reaction was used to determine the expression of inducible nitric oxide synthase(iNOS), TNF-αand IL-1βmRNA in ischemic cerebral tissues.Results:Caf inhibited the production of NO,TNF-αand IL-1βinduced by LPS treatment in primary microglia in a dose-dependent manner.Exposure of cortical neurons to conditioned medium from Caf-treated microglia increased neuronal cell viability(P<0.01)compared with conditioned medium from LPS-treated alone.In MCAO rat model of cerebral ischemia,Caf could significantly improve neurobehavioural performance and reduce percentage infarct volume compared with the vehicle group (P<0.05).Caf could also significantly inhibit the up-regulation of iNOS,TNF-α,and IL-1βgene expressions in ischemic cerebral tissues.Conclusion:Caf could suppress microglial activation,which may be one mechanism of its neuroprotective effect against ischemia.     

米诺环素抑制促炎因子生成保护多巴胺能神经元

目的 探讨米诺环素对炎症介导的中脑多巴胺能神经元损伤的影响.方法 应用脂多糖处理中脑原代神经元/胶质细胞培养体系建立SD大鼠多巴胺能神经元损伤的炎症机制模型,于脂多糖处理该培养体系前或后加入米诺环素,免疫细胞化学法检测酪氨酸羟化酶阳性神经元的数目,液闪测定法测定多巴胺摄取力,并检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(ELISA法)、白介素-1β(IL-1β)(ELISA法)、一氧化氮(NO)(Griess法)和超氧阴离子(细胞色素C还原法)等促炎因子的变化.结果 米诺环素(2～10 μmol/L)前处理对脂多糖(J～ 100 ng/mL)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤具有显著的保护作用.呈剂量依赖性;米诺环素( 10μmol/L)后处理对脂多糖(10 ng/mL)诱导的中脑多巴胺能神经元损伤也具有显著的保护作用;米诺环素显著降低促炎因子TNF-α、IL-1β、NO和超氧阴离子的生成.结论 米诺环素在脂多糖处理的中脑神经元/胶质细胞培养体系中可能通过抑制促炎因子生成保护多巴胺能神经元.     

脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯通过抑制iNOS 减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激

目的探讨脱氢穿心莲内酯琥珀酸半酯（DAS）通过抑制iNOS减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化应激。方法30只雄
性BALB/C小鼠平均分为对照组（Control组）、治疗组（LPS+DAS组）和模型组（LPS组）。使用ELISA对肺泡灌洗液（BALF）中
IL-1β、IL-6和TNF-α水平进行测定。测量BALF中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。对肺组织进行湿/干比（wet
to dry ratio, W/D）测定。HE染色用于肺组织病理变化观察和肺组织损伤评分测量。RT-PCR被用于iNOS mRNA的测定。使
用Western blot测定iNOS和β-肌动蛋白（β-actin）蛋白的表达。结果LPS干预后小鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平
明显上升而SOD水平显著下降,W/D比值和肺组织损伤评分明显升高,iNOS mRNA和蛋白的表达明显增加。LPS+DAS组小
鼠BALF中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平、W/D比值、肺组织损伤评分、iNOS mRNA和蛋白的表达较LPS组小鼠明显下降;同
时BALF中SOD水平较LPS组小鼠明显增加。结论DAS可能是通过抑制iNOS表达减轻LPS诱导的急性肺损伤导致的氧化
应激。
     

三种成体干细胞对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症状态的影响

目的比较人羊膜上皮细胞（（human amniotic epithelial cell, H-AEC））、羊膜间充质细胞（human amniotic mesenchymal
cell, HA-MSC）和脐带间充质细胞（Umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSC）分泌的细胞因子对脂多糖刺激巨噬细胞
系RAW264.7炎症状态的影响。方法将LPS刺激的RAW264.7细胞炎症模型作为对照组,比较H-AEC、HA-MSC、UC-MSC和
RAW264.7共培养或条件培养基培养RAW264.7对RAW264.7炎症状态的影响。比较各组RAW264.7细胞的迁移能力;检测各
组细胞分泌一氧化氮（NO）的水平;用实时定量多聚酶链反应（RT-PCR）检测各组细胞经典激活的巨噬细胞（classically
activated macrophage, M1 macrophage）相关的促炎基因如白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死基因а（TNFа）、一氧化氮合成酶-2
（NOS-2）以及M2 macrophage相关的抑炎基因如精氨酸酶（Arg-1）、甘露糖受体基因CD206、B类清道夫受体CD36）表达情况。
结果（1）H-AEC、HA-MSC、UC-MSC 处理后RAW264.7 的迁移率分别为14.7%±4.5%、9.6%±0.7%、13.0%±0.9%,与对照组
（31.1%±11.0%）相比,3 种细胞的条件培养基处理后RAW264.7 的迁移率均降低,差异具有显著性（P<0.05）;（2）H-AEC、
HA-MSC、UC-MSC共培养后RAW264.7 细胞分泌NO的水平分别为24.26±0.72、44.52±2.51、42.25±0.76 μmol/L,与对照组
（45.65±1.78 μmol/L）相比,H-AEC组细胞分泌的NO有显著性下降（P<0.05）;（3）促炎基因与抑炎基因的表达改变：（A）H-AEC
处理组促炎基因IL-1β、TNFа、NOS-2、INFβ的表达下调,与对照组相比有显著差别;HA-MSC、UC-MSC处理组促炎基因INFβ表
达下调显著,其余基因均上调表达;抑炎相关基因如Arg-1、CD206、CD36均上调;（B）3组细胞干预后抑炎症相关基因Arg-1、
CD206、CD36表达均上调,与对照组有显著差异。结论人羊膜上皮细胞、羊膜间充质细胞和脐带间充质细胞可以促进巨噬细
胞向M2型分化,但其效果和机制存在不同。
     

透明质酸对白细胞介素-1β诱导软骨细胞iNOS活性和表达的影响

目的:研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrIL-β)诱导体外骨关节炎软骨细胞iNOS活性和表达的影响,并探讨其作用机制.方法:体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸(10,20,40 mg/L)1 h后,以10 μ g/L IL-1β刺激,培养24 h后,通过RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达;以Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度,并通过iNOS催化L-精氨酸和分子氧反应生成NO推算iNOS的活力.结果:透明质酸可有效抑制IL-1β诱导骨关节炎软骨细胞iNOS的活性和NO的产量;RT-PCR检测显示透明质酸能抑制iNOS的mRNA表达,且呈现剂量依赖的趋势.结论:透明质酸能通过降低iNOS的活性和其蛋白表达,来抑制骨关节炎软骨细胞上清液中NO的含量.     

氧化苦参碱抑制脂多糖所致小胶质细胞炎性因子 分泌的实验研究

目的:观察氧化苦参碱对脂多糖所致小胶质细胞白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:予终浓度分别为1、10、20μg/mL的氧化苦参碱培养BV-2细胞30 min,再加终浓度为1μg/mL的脂多糖培养BV-2细胞30 min、1 h、3 h和6 h,应用ELISA法测定各时间点细胞培养上清液IL-1β、TNF-α和IL-6浓度。结果:在30 min、1 h、3 h和6h四个时间点,终浓度为1μg/mL的氧化苦参碱不能显著降低细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6浓度(P>0.05),终浓度为10、20μg/mL的氧化苦参碱剂量依赖性地降低细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6浓度(P<0.05)。结论:氧化苦参碱可抑制脂多糖所致小胶质细胞炎性因子分泌。     

MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制

目的：观察髓样分化因子88（MyD88）抑制肽（MIP）对脂多糖（LPS）激活BV2小胶质细胞极化的影响,阐明其作用机制。方法：将对数生长期的BV2小胶质细胞分为对照组（不进行处理）、LPS组（给予1 mg·L^-1 LPS处理）和不同剂量MIP+LPS组（分别给予25、50和100μmol·L^-1 MIP预处理1 h后,再加入1 mg·L^-1 LPS）。采用MTT法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组BV2小胶质细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素10（IL-10）和白细胞介素18（IL-18）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组BV小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（Arg-1）蛋白表达水平。结果：LPS组BV2小胶质细胞体积变大,突起增多,呈阿米巴状;不同剂量MIP+LPS组小胶质BV2细胞活化率较LPS组明显减少（P<0.05或P<0.01）。MTT法检测,与对照组比较,LPS组细胞存活率明显降低（P<0.01）;与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞存活率明显提高（P<0.05或P<0.01）。RT-qPCR法和Western blotting法检测,与LPS组比较,不同剂量MIP+LPS组BV2小胶质细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达水平及iNOS蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）,而IL-4和IL-10 mRNA表达水平及Arg-1蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,且呈剂量依赖性。结论：MIP能够抑制活化的BV2小胶质细胞向M1型极化,促进其向M2型转化,抑制炎症的过度激活。