成肌调节因子MyoD与myogenin在肌肉损伤修复过程的动态变化

目的探讨成肌调节因子MyoD与myogenin在肌肉损伤修复过程中的动态表达。方法用盐酸布比卡因局部注射制作肌肉损伤模型,在损伤后不同时间点取腓肠肌行冰冻切片,HE染色显示损伤肌肉的病理变化,用SABC法检测MyoD与myogenin的表达。结果MyoD在肌肉损伤后18 h开始表达,48 h达高峰;myogenin在肌肉损伤后24 h开始表达,72 h达高峰。结论MyoD与myogenin在肌肉损伤后的再生修复过程中起作用,可作为鉴定肌肉前体细胞和反映肌肉再生的指标。     

成肌调节因子MyoD和myogenin在不同月龄DMD模型鼠mdx小鼠的表达

目的探讨成肌调节因子MyoD和myogenin在不同月龄DMD模型鼠mdx鼠的表达情况。方法取不同月龄DMD模型鼠mdx鼠以及相应的同龄正常C57鼠的腓肠肌,冰冻切片后用HE染色显示肌肉病理,SABC-DAB染色检测成肌调节因子MyoD和myogenin的表达。结果不同月龄mdx鼠肌肉坏死和再生程度不同,MyoD和myogenin在1月龄mdx鼠表达最强,在13月龄mdx鼠仍有表达,在正常同龄C57鼠不表达。结论MyoD与Myogenin在肌肉损伤后的再生修复过程中起作用,可作为鉴定肌肉前体细胞和反映肌肉再生的指标。     

早期肌肉特异性mRNA在骨髓干细胞的表达

目的:研究早期肌肉特异性mRNA在骨髓干细胞中的特异性表达.方法:利用RT-PCR研究不同时期C57鼠和不同代龄SD大鼠骨髓干细胞早期肌肉特异性mRNA(包括MyoD,Myf5,myogenin,MRF4和desmin)的表达.结果:Myf5及desmin在新鲜分离、培养了2 d和7 d的悬浮与贴壁的C57小鼠骨髓干细胞中均有表达,没有检测到MyoD,myogenin和MRF4在此时期小鼠骨髓干细胞的表达.MyoD与desmin在原代至第6代SD大鼠骨髓间质干细胞中均有表达,没有检测到myogenin和MRF4在各代细胞中的表达.结论:骨髓干细胞能表达一定水平的早期肌肉特异性mRNA.     

成肌性标志物在人骨髓间充质干细胞分化为肌细胞过程中的表达

目的 研究成肌性标志物在人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)分化为肌细胞过程中的表达情况.方法 体外培养hBM-MSCs,采用免疫荧光法和RT-PCR检测hBM-MSCs中成肌性标志物MyoD、myogenin及desmin的表达.将1×107个hBM-MSCs经尾静脉注入免疫抑制的mdx小鼠体内,于移植后2～24周处死,采用免疫荧光法和RT-PCR检测小鼠骨骼肌内MyoD、myogenin、desmin和人特异性抗肌萎缩蛋白(Dys)的表达. 结果每100个hBM-MSCs中MyoD、myogenin和desmin阳性细胞数分别为23.5±5.3、30.7±6.2和28.4±5.7,第5代hBM-MSCs中可检测到MyoD、myogenin和desmin mRNA表达.hBM-MSCs移植后2周,mdx小鼠骨骼肌内可检测到少量MyoD和myogenin阳性细胞,4周后可检测到少量desmin阳性细胞.hBM-MSCs移植后2～4周,骨骼肌中开始出现MyoD和myogenin mRNA表达,12～16周较强;移植后8周开始出现desmin mRNA表达,16周后表达渐增强.hBM-MSCs移植后4周,mdx小鼠骨骼肌肌膜可见少量人特异性Dys阳性细胞,8周后开始出现Dys mRNA表达,随着移植后时间延长,Dys表达逐渐增强. 结论 hBM-MSCs具有向骨骼肌细胞分化的潜力,能在受体内分化为骨骼肌细胞.在hBM-MSCs分化为肌细胞的过程中,MyoD和myogenin表达上调可能发挥了重要作用.     

Effects of Electricacupuncture on the Expression of MyoD in Mice with Muscle Injury by Cardiotoxin

目的 探讨电针对肌肉损伤小鼠MyoD表达的影响,为针灸在临床上治疗各类肌肉损伤引起的肌肉再生不足提供实验依据.方法 将蛇毒细胞毒素( CTX,Cardiotoxin)胫骨前肌注射造成的肌肉损伤小鼠随机分为模型组和CTX电针组.电针治疗7d后取胫骨前肌制作冰冻切片,HE染色观察损伤肌肉的形态学变化、免疫组化染色检测MyoD的表达.结果 HE染色显示2组均可见部分肌纤维形态破坏,肌细胞间质中炎症细胞浸润,而电针组炎症细胞浸润较模型组明显增多.免疫组化显示模型组可见MyoD表达,电针组MyoD阳性细胞面积百分比较模型组明显增高(P＜0.01).结论 电针能够促进肌肉损伤后其他细胞向成肌细胞的转化,对肌肉再生有增强作用.     

人骨髓间充质干细胞向骨骼肌定向分化的研究

目的 研究人骨髓间充质干细胞在裸鼠损伤腿部向骨骼肌定向分化。方法 在裸鼠腿部注入无水酒精造成肌肉损伤，取培养人骨髓间充质干细胞用荧光染料Dil标记后注入损伤处，术后6d及12d取损伤部肌肉进行形态观察和免疫荧光标记。结果 在术后6d可见Dil标记细胞向骨骼肌分化，Myoglobin阳性表达。术后12d后可见新生骨骼肌出现典型横纹，细胞核MyoD1阳性表达。结论 在裸鼠损伤肌肉的微环境中，人骨髓间充质干细胞可向骨骼肌定向分化，并伴有Myoglobin及MyoD1阳性表达。     

MyoD基因诱导骨髓间充质干细胞分化为成肌细胞的实验研究

目的：探讨MyoD基因诱导骨髓间充质干细胞（MSCs)分化为成肌细胞的可能性。方法：利用脂质体转染方法，将真核表达的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-MyoD转入MSCs中，G418筛选，用RT－PCR检测MyoD的表达，扩增产物纯化测序鉴定；荧光显微镜和激光共聚焦观察报告基因产物；免疫组化检测MyoD,myogenin,myosin,myoglobin desmin的表达，电镜观察转染前后细胞超微结构的变化。结果：RT－PCR可检测出转染后细胞表达MyoD,扩增产物纯化测序与Gene Bank比较完全一致，荧光显微镜和激光共聚焦观察均可见绿色荧光，免疫组化检测MyoD,myogenin,myosin,myoglobin,desimin表达均为阳性，转染后的MSCs观察表现为较为成熟细胞的形态学特点，且胞浆中有丝状物结构，结论：MyoD基因可成功诱导体外培养的骨髓MSCs分化为成肌细胞，为进一步研究MSCs和成肌细胞促进创伤修复提供了实验基础。     

大鼠脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的改变及转移生长因子β1的表达

目的 探讨大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障（BBB)通透性的改变以及转移生长因子β1(TCF—β1)在脑组织中的表达。方法 采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型，通过测定脑组织中伊文氏蓝(EB)含量及免疫组化法来观察TGF—β1的表达。结果 缺血2h再灌注3h，BBB通透性开始增加，24h达高峰，72h后明显减弱。同时，TGF—β1在缺血再灌注3h开始表达，24h达高峰，持续至72h，72h后逐渐减弱。结论 脑缺血后BBB的破坏与TGF—β1的表达密切相关，提示TGF—β1参与了BBB内皮细胞破坏的修复过程。     

乙醇对肌肉卫星细胞myogenin表达的影响

目的:探讨慢性酒精中毒过程中乙醇对肌肉卫星细胞myogenin表达的影响及其在酒精性肌肉损伤中的作用。方法:(1)体外实验:取Sprage-Dowley大鼠,原代培养大鼠肌肉卫星细胞,设实验组(乙醇作用组)与对照组(正常培养液对照组),培养细胞至80%融合时,更换为分化培养液,对实验组与对照组卫星细胞形成的肌管计数,并观察卫星细胞myogenin的表达。(2)动物实验:予小鼠乙醇饮食(1个月)制造乙醇中毒动物模型,在损伤后肢肌肉后第2、7天取组织切片观察损伤部位肌肉卫星细胞增殖及新肌束形成情况。结果:实验组肌管计数及卫星细胞myogenin的表达均低于对照组(P<0.05),但乙醇饮食小鼠损伤肌肉标本中卫星细胞及新肌束数量与正常饮食小鼠差异无统计学意义(P>0.05)。结论:乙醇可以通过降低肌肉卫星细胞的myogenin表达抑制其肌性分化,减少卫星细胞形成肌管的数量。     

TNF—a蛋白和mRNA在大鼠药物性胃粘膜损伤表达的研究

目的：用小剂量阿司匹林灌服大鼠建立药物性胃粘膜损伤模型，探讨TNF-a蛋白和mRNA在胃粘膜细胞的表达及在胃粘膜损伤中的作用。方法：免疫组化和反转录聚合酶链反应技术检测TNF-a的表达。结果：实验组TNF-a在用药后15min开始表达，3h达高峰，持续到6h，12h开始下降，24h有少量表达。实验组用药后与用药前比较TNF-a表达水平有明显差异。预处理组和对照组两组分别与实验组比较，TNF-a均明显呈低水平表达。预处理组和对照组之间TNF-a表达水平无明显差异。结论：TNF-a的表达在小剂量阿司匹林引起的胃粘膜损伤的发病机制中有重要意义。     

MyoD家族蛋白在大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩中的作用

目的：探讨MyoD家族蛋白在去神经肌萎缩发生机制中的作用。方法：应用臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩的大鼠模型,采用Western-印迹法检测MyoD,肌细胞生成素蛋白表达的变化,通过逆转录聚合酶链式反应技术（RT－PCR）和Northern－印迹法研究MyoD和肌细胞生成素基因表达改变。结果：骨骼肌萎缩时,肌细胞生成素蛋白质的表达在去神经支配后24h内先迅速上调,然后逐步下降;而MyoD蛋白表达则在去神经支配后即开始逐渐下调。 肌细胞生成素和MyoD基因在去神经支配后表达下明显下降。而氨哮素等药物可以分别上调肌细胞生成素和／或MyoD的蛋白表达。结论：臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩时肌细胞中MyoD家族蛋白质和肌细胞生成素表达的下调抑制了成肌细胞的分化融合修复作用,加剧了骨骼肌的萎缩。氨哮素等药物通过分别上调肌细胞生成素和／或MyoD的蛋质表达从而起到延缓骨骼肌萎缩的作用。     

MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的实验研究

目的：探讨MyoD基因诱导大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞的可能性。方法：将MyoD基因重组腺病毒载体转染大鼠心脏成纤维细胞，观察转染后大鼠心脏成纤维细胞形态的变化；用RT-PCR和Western blot方法检测MyoD和肌细胞生成素的表达；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白的表达。结果：MyoD基因转染后的大鼠心脏成纤维细胞形态和排列方式发生明显变化；RT-PCR可检测出转染后细胞表达MyoD；Western blot结果表明转染后细胞表达MyoD和肌细胞生成素；免疫组化检测骨骼肌肌球蛋白和结蛋白表达均为阳性。结论：MyoD基因可诱导体外培养的大鼠心脏成纤维细胞分化为成肌细胞，为进一步研究MyoD对心肌损伤的修复作用奠定了基础。     

肌形成蛋白在人体失神经骨骼肌表达的形态学

目的　研究肌形成蛋白在人体失神经骨骼肌中的表达规律。　方法　成人骨骼肌 1 8例 ,正常骨骼肌 3例 ,失神经时间 1 2个月内骨骼肌 9例 ,1 3～ 2 4个月 6例。免疫组织化学染色方法 (ABC法 )研究肌形成蛋白在骨骼肌内的表达。　结果　正常骨骼肌未见肌形成蛋白表达 ,失神经人体骨骼肌内肌形成蛋白蛋白表达在肌纤维细胞核与肌卫星细胞细胞核 ;失神经 1年内可见到肌形成蛋白阳性染色细胞核 ,之后阳性肌细胞核明显减少 ,具有统计学意义 (P<0 .0 5 )。　结论　人体骨骼肌失神经 1年后再生反应明显降低 ,提示人体骨骼肌失神经后应该尽早修复。     

Experimental study on MyoD gene induced differentiation of bone marrow mesen-chymal stem cells into myoblasts in vitro

Objective: To explore the possibility of the transfection of MyoD gene induced bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs) to differentiate into myoblasts in vitro. Methods: The eukaryotic expression plasmid vector pIRES2-EGFP-MyoD was transfected into MSCs with lipotransfection method, and the positive cells were selected by G418; The expression of MyoD was detected in the transfected MSCs with RT-PCR and the amplified, purified product was identified by sequencing; The reporter gene enhanced green fluorescence protein ( EFGP) was observed in the transfected cells under a fluorescent and a laser confocal microscopes; Immunohistochemical methods was used to examine the expressions of MyoD, myogenin, myosin, myoglobin and desmin in the differentiated cells. The ultrastructure changes of the cells before and after transfection were observed with electron microscopy. Results: The expression of MyoD was detected in the transfected MSCs with RT-PCR and the amplified, purified product was as same in sequence a     

盆底肌损伤后修复过程中囊泡转运相关基因的表达

探讨在阴道分娩导致盆底肌损伤的过程中与骨骼肌再生修复及囊泡转运相关的基因表达,初步阐明ADP核糖基化因子GTP酶活化蛋白3（ARFGAP3）等效应分子在盆底肌损伤后再生修复中的潜在作用。     

烫伤早期TNFα与IL-1增强骨骼肌蛋白质分解代谢作用机制的研究

目的 观察严重烫伤小鼠早期TNFα与IL-1对骨骼肌蛋白质分解代谢的影响及其机制。方法 建立包括背部及一侧后肢18%～20% Ⅲ度体表烫伤小鼠模型。以比目鱼肌体外温育酷氨酸净释放量反映骨骼肌蛋白质分解速率,观察72h内伤肢、未伤肢骨骼肌蛋白质分解速率、以及血浆、伤肢、未伤肢TNFα与IL-1含量及溶酶体组织蛋白酶类活性的动态变化。结果 伤后小鼠血浆、伤肢、未伤肢TNFα与IL-1水平均显著增高,48h达到峰值,伤肢增高更为明显,72h已见回落。未伤肢蛋白质分解速率48h高于正常,但72h已降至正常水平,伤肢则在72h明显高于正常与未伤肢,骨骼肌溶酶体组织蛋白酶活性与分解速率呈明显正相关。hrTNFα与hrIL-1分别对正常小鼠在体和离体比目鱼肌均可导致蛋白质分解速率与溶酶体组织蛋白酶活性增高。结论 烫伤早期TNFα、IL-1增强溶酶体内组织蛋白酶的活性导致骨骼肌蛋白质分解代谢的过度增强,从而造成机体负氮平衡是直接的,可能不受激素影响。