兔抗猪Ⅱ型胶原抗血清的制备与检测

目的：采用纯化的猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔制备Ⅱ型胶原抗体,并经改良的ELISA法检测确定Ⅱ型胶原抗体效价。方法：提取猪Ⅱ型胶原,经层析纯化,将纯化无菌Ⅱ型胶原与不完全佛氏佐剂等量混合,注射于兔脚掌、背部和皮下。并每隔20天追加抗原刺激,共3次,每隔一定时间收集血浆,以ELISA法检测抗Ⅱ型胶原抗体。结果：提纯猪Ⅱ型胶原纯度与Sigma标准品一致。Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔,抗体含量具二个高峰期,分别在首次致敏后第21天和第40天,免疫第40天抗血清的效价达1：2430。结论：采用纯化猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔短期内可产生高效价抗体。     

类风湿关节炎患者抗人、猪两种属Ⅱ型胶原抗体检测的意义

目的 :检测类风湿关节炎 (RA)患者血清中人及猪Ⅱ型胶原抗体水平 ,探讨其在RA发病中的意义。方法 :用自提取的人、猪Ⅱ型胶原包板 ,采用改良的酶联免疫吸附法 (ELISA)测定 1 0 5例RA患者血清抗人、猪Ⅱ型胶原抗体IgG及IgA ,并与正常人 ( 1 4 0例 )及疾病对照组 ( 80例 )比较分析。同时检测患者的类风湿因子(RF)、血沉 (ESR)及C反应蛋白 (CRP)。结果 :RA患者血清中抗人Ⅱ型胶原抗体IgG、IgA阳性率分别为2 5 .3%、2 7.5 % ,抗猪Ⅱ型胶原抗体IgG、IgA阳性率分别为 2 6.9%、2 5 .6% ,显著高于正常人及疾病对照组 (P<0 .0 5 )。两种属Ⅱ型胶原抗体IgG及IgA常同时存在于同一患者中。两种属Ⅱ型胶原抗体与RF、ESR及CRP异常无相关性。结论 :RA患者血清中人及猪Ⅱ型胶原抗体水平升高 ,可能在RA的发病中起着一定的作用 ;但RA患者Ⅱ型胶原抗体阳性与疾病活动指标无明显相关 ,不能作为监测RA活动的指标。     

类风湿关节炎患抗人、猪两种属Ⅱ型胶原抗体检测的意义

目的：检测类风湿关节炎（RA）患者血清中人有猪Ⅱ型胶原抗体水平，探讨其在RA发病中的意义。方法：用自提取的人、猪Ⅱ型胶原包板，采用改良的酶联免疫吸附法（ELISA）测定105例RA患者血清抗人，猪Ⅱ型胶原抗体IgG及IgA，并与正常人（140例）及疾病对照组（80例）比较分析。同时检测患者的类风湿因子（RF）、血沉（ESR）及C反应蛋白（CRP）。结果：RA患者血清中抗人Ⅱ型胶原抗体IgG、IgA阳性率分别为25．3％、27．5％，抗猪Ⅱ型胶原抗体IgG、IgA阳性率分别为26．9％、25．6％，显著高于正常人及疾病对照组（P＜0．05）。两种属Ⅱ型胶原抗体IgG及IgA常同时存在于同一患者中，两种属Ⅱ型胶原抗体与RF、ESR及CRP异常无相关性。结论：RA患者血清中人及猪Ⅱ型胶原抗体水平升高，可能在RA的发病中起着一定的作用，但RA患者Ⅱ型胶原抗体阳性与疾病活动指标无明显相关，不能作为监测RA活动的指标。     

Ⅱ型胶原蛋白诱导的类风湿性关节炎的动物模型

Ⅱ型胶原蛋白（CII）只存在机体透明软骨，眼玻璃体、视网膜和角膜[1]。类风湿性关节炎病人（RA）可检测到针对Cll的体液和细胞免疫反应。在大鼠［’l、／J’鼠l’］和灵长类【‘］动物上用Cll配合不完全福氏佐剂可引发胶原蛋白性关节炎，该类风湿性关节炎模型（CI）反映了临床上RA形成的兔疫学机制，与目前常用的佐剂性关节炎模型相比，有其独特的优点，国际上已广泛应用于关节炎基础理论和抗关节炎药物研究。作者摸索了Cll简便高效的提取方法，模型的制备条件，利用国内有限条件，首次成功地建立了大鼠的胶原蛋白性关节炎模型，并进…     

Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化和鉴定

1　材料和方法1.1　材料　胃蛋白酶及 型胶原蛋白 (C )标准品购自美国Sigma公司 . Mr14 .4～ 97.4× 10 3低分子标准蛋白购自上海丽珠东风生化技术有限公司 .CS- 90 0 0薄层扫描仪购自日本岛津公司 .1:Protein marker;2 :C (Sigma) 2 g·L- 1 ;3 :C (Sigma) 1g·L- 1 ;4:C 1g· L- 1 ;5 :C 0 .5 g·L- 1 ;6:C 0 .2 5 g·L- 1 ;7:0 .12 5 g· L - 1 .图 1　 SDS- PAGE分析经 DEAE- 5 2纤维素柱层析纯化的 C 1.2　方法　新鲜牛软骨剥去骨膜 ,在液氮冷冻下磨成粉 ,称质量 ,用 10倍体积的 4 mol· L- 1 盐酸胍 - 0 .0 5 mmol· L…     

抗瓜氨酸化Ⅱ型胶原抗体的检测及其与类风湿关节炎的相关性研究

目的探讨瓜氨酸化Ⅱ型胶原及其抗体在类风湿关节炎（RA）发病和诊断中的意义。方法用肽基精氨酸脱亚胺酶（PAD）催化牛Ⅱ型胶原（bCⅡ）中的精氨酸转变为瓜氨酸,用ELISA和免疫印迹的方法检测RA患者（175例）、系统性红斑狼疮（SLE）患者（112例）、骨关节炎（OA）患者（37例）和健康对照组（160例）的血清对瓜氨酸化牛Ⅱ型胶原（Cit-bCⅡ）的抗体水平,并研究其与RA患者抗环瓜氨酸（CCP）抗体、反应蛋白（CRP）、血红细胞沉降率（ESR）、类风湿因子（RF）C及双手X线分期、病程、年龄的关系。结果RA患者抗Cit—bCⅡ抗体的阳性率为50．3％（88／175）,与其抗bCⅡ抗体的阳性率33．7％（59／175）相比,有显著提高。RA患者抗Cit—bCⅡ抗体阳性率明显高于SLE患者的17．9％（20／112）、OA患者的18．9％（7／37）和健康对照组的2．5％（4／160）（均P〈0．05）。而SLE患者、OA患者抗Cit—bCⅡ和抗bCⅡ抗体的阳性率比较,差异无统计学意义。RA患者抗Cit-bCⅡ抗体与抗CCP抗体相关,与CRP、ESR、RF、双手X线分期、病程和年龄均无明显相关性。结论瓜氨酸化CⅡ及其抗体可能在RA发病和病理过程中起重要作用。     

兔抗猪Ⅱ型交原抗血清的制备与检测

目的 采用纯化的猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔制备Ⅱ型胶原抗体，并经改良的ＥＬＩＳＡ法检测确定Ⅱ型胶原抗体效价。方法 提取猪Ⅱ型胶原，经导析纯化，将纯化无菌Ⅱ型胶原与不完全佛氏佐剂等量混合，注射于兔脚掌、背部和皮下。并每隔２０天追加抗原刺激，共３次，每隔一定时间收集血浆，以ＥＬＩＳＡ法检测抗Ⅱ型胶原抗体。结果 提纯猪Ⅱ型胶原纯度与Ｓｉｇｍａ标准品一致。Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔，抗体抗量具有二个高峰期，     

鸡软骨Ⅱ型胶原蛋白的提纯与鉴定

目的探讨可溶性Ⅱ型胶原蛋白（CⅡ）的提纯方法。方法以雏鸡胸软骨为原材料,酸性条件下经胃蛋白酶消化,离心后,应用DEAE-Sephadex A-50进行离子交换层析,透析,盐析,得到纯化的CⅡ。结果自提的CⅡ样品与CⅡ标准品采用SDS-PAGE电泳显示条带一致。结论本法提纯CⅡ具有材料丰富,操作简便,重复性好等优点。     

2型糖尿病患者抗心磷脂抗体的检测

本文主要探讨2型糖尿病患者血清抗心磷脂抗体(ACA)的水平及其临床意义。1 材料与方法1.1 试剂与仪器 96孔聚苯乙稀板(简称微孔板pharmacia),CLARK TORCH试剂(美国),酶标仪Elx800(Bio-Tek)。