兔抗猪Ⅱ型胶原抗血清的制备与检测

目的：采用纯化的猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔制备Ⅱ型胶原抗体,并经改良的ELISA法检测确定Ⅱ型胶原抗体效价。方法：提取猪Ⅱ型胶原,经层析纯化,将纯化无菌Ⅱ型胶原与不完全佛氏佐剂等量混合,注射于兔脚掌、背部和皮下。并每隔20天追加抗原刺激,共3次,每隔一定时间收集血浆,以ELISA法检测抗Ⅱ型胶原抗体。结果：提纯猪Ⅱ型胶原纯度与Sigma标准品一致。Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔,抗体含量具二个高峰期,分别在首次致敏后第21天和第40天,免疫第40天抗血清的效价达1：2430。结论：采用纯化猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔短期内可产生高效价抗体。     

兔抗猪Ⅱ型交原抗血清的制备与检测

目的 采用纯化的猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔制备Ⅱ型胶原抗体，并经改良的ＥＬＩＳＡ法检测确定Ⅱ型胶原抗体效价。方法 提取猪Ⅱ型胶原，经导析纯化，将纯化无菌Ⅱ型胶原与不完全佛氏佐剂等量混合，注射于兔脚掌、背部和皮下。并每隔２０天追加抗原刺激，共３次，每隔一定时间收集血浆，以ＥＬＩＳＡ法检测抗Ⅱ型胶原抗体。结果 提纯猪Ⅱ型胶原纯度与Ｓｉｇｍａ标准品一致。Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔，抗体抗量具有二个高峰期，     

人C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-1高特异性抗体的制备

目的 制备人补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白1（hCTRP1）的特异性抗体.方法 合成了hCTRP1的C端抗原肽并免疫新西兰大白兔,利用亲合纯化色谱柱对抗体进行了纯化.结果 间接ELISA测定表明,抗血清效价达1∶64 000,Western印迹及ELISA验证表明纯化抗体具有很高的特异性.结论 人工合成的hCTRP1抗原肽免疫新西兰大白兔,制备了高效价的抗血清,并纯化制备了hCTRP1特性抗体.     

增强型绿色荧光蛋白兔多克隆抗体的制备

目的:制备增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的兔多克隆抗体.方法:用谷胱甘肽-增强型绿色荧光蛋白(GST-EGFP)融合抗原加福氏完全佐剂背部皮内注射首次免疫新西兰大白兔,第28天用GST-EGFP融合抗原加福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第35天时再次免疫.第49天心脏采血30 mL,4℃静置过夜,收集血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗血清中EGFP多克隆抗体的效价;免疫印迹法检测EGFP多克隆抗体的特异性;利用荧光免疫细胞化学检测该抗体和观察转染EGFP贴壁生长的大鼠脑皮层混合培养细胞中EGFP的表达.结果:ELISA检测EGFP多克隆抗体滴度最高为1:9 549;免疫印迹检测结果显示该抗体特异性高;荧光免疫细胞化学检测显示存混合培养细胞中EGFP呈阳性表达.结论:直接使用GST-EGFP融合蛋白免疫新西兰大白兔,可在较短时间内制备大量EGFP多克隆抗体.     

人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体β基因(PILRβ)的克隆、表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的:表达和纯化人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体蛋白PILRβ,制备并鉴定其多克隆抗体.方法:应用RT-PCR从人的外周血细胞总RNA中反转录并扩增出PILRβ基因,将其克隆到表达载体pET-32a,在大肠杆菌中IPTG诱导表达,经Ni2 -NTA亲和层析柱纯化,纯化后的蛋白多次注射免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清,ELISA法检测抗体效价,Western印迹检测抗体特异性.结果:获得了较高纯度的PILRβ蛋白(Mr约为42 000)及其抗体,多抗效价达到1:10 000,且特异性较好.结论:成功克隆了PILRβ基因并表达纯化了其蛋白,获得了效价较高、特异性较强的多克隆抗体,为进一步研究PILRβ蛋白的功能和潜在的药物开发打下了基础.     

猪囊尾蚴cC1蛋白的原核表达及其特异性鸡卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备并鉴定特异性抗猪囊尾蚴鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),为猪囊尾蚴病的免疫学诊断提供新的途径.方法 原核表达猪囊尾蚴抗原cC1蛋白,纯化后经皮下和肌肉多点注射免疫25周产蛋海兰母鸡,200 μg/只,首次免疫28 d后加强免疫3次,每次间隔10 d.ELISA法检测IgY抗体效价,Akita法和EGGstractT...     

抗钩虫特异性卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础.方法 制备十二指肠钩虫成虫粗抗原,经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次,每只鸡每次的免疫剂量为200 μg,初次免疫后28 d进行加强免疫,加强免疫间隔时间为10 d.水稀释法提取卵黄中的IgY,盐析、透析法纯化IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析.ELISA法动态检测抗体效价,观察抗体效价变化.结果 免疫后55 d的每个鸡蛋能提取40~55 mg IgY,经SDS-PAGE和Western blot分析,纯化的IgY有2条主带,分子量分别是35 ku和60 ku,即IgY的轻链和重链.初次免疫后10 d左右出现抗体,至免疫后50~55 d为高峰,效价达到1 ∶ 10 000以上.IgY与人血清抗体均可识别30 ku处钩虫抗原.结论 十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体,为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础.     

抗泡球蚴重组Em18抗原多克隆抗体的纯化与鉴定

目的：制备抗泡球蚴18（Em18）抗原多克隆抗体,纯化并鉴定.方法：表达并纯化rEm18-GST蛋白.用纯化后的蛋白作为免疫原,免疫新西兰白兔获得抗rEm18-GST的多克隆抗体IgG,采用ELISA法检测抗体效价,进一步纯化抗体,获得抗Em18特异性多克隆抗体IgG,用Western blot及ELISA法检测并进行初步鉴定.结果：免疫制备获得兔抗rEm18-GST抗体,随着免疫次数的增加,抗体滴度不断升高,于第10周达到最高.ELISA检测抗体效价为1∶51 200.Western blot及ELISA法鉴定表明Em18-GST抗体去除了与GST的交叉反应.结论：获得了去除与GST交叉反应的抗Em18多克隆抗体,为进行噬菌体肽库筛选奠定基础.     

粉尘螨变应原Derf1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

目的:原核表达、纯化粉尘螨主要变应原Der f1重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:大量诱导表达含pET-28a(+)-Der f1质粒的BL21菌株,SDS-PAGE电泳并割胶纯化目的蛋白,以此为抗原免疫新西兰大白兔,收集血清进行效价检测并用Western blot检测其特异性。结果:割胶回收可有效纯化Der f1重组蛋白,抗Der f1抗体效价为1∶32 000。结论:成功制备Der f1多克隆抗体,以期为尘螨过敏性疾病的诊断和免疫治疗提供参考。     

小鼠在柯萨奇病毒A组16型活病毒免疫原性评价中的应用

目的 评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型(CA16)活病毒感染中免疫原性的应用,为减毒活疫苗研究提供实验数据.方法 以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB/c小鼠,采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7d后的血样;通过微量细胞病变中和法检测中和抗体效价,细胞因子ELISA检测试剂盒检测6种细胞因子含量.结果 初次免疫后28 d,肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率分别为83.33％、40.00％和0.00％,抗体几何平均效价(GMT)分别为1∶169、1∶32和0;加强免疫后,肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率均达100％,抗体GMT分别为1∶813、1∶609和1∶32,肌肉和腹腔途径免疫的小鼠血清抗体GMT平均增长4.8倍和19.0倍;加强免疫7d的抗体阳转率达100％;明显高于初次免疫28 d和21 d;BALB/c小鼠与ICR小鼠相比,前者的中和抗体效价和抗体阳转率明显高于后者,而小鼠年龄对中和抗体效价和抗体阳转率的影响不显著(P＞0.05);免疫剂量对中和抗体效价和抗体阳转率的影响显著(P＜.05),高剂量病毒免疫小鼠后中和抗体效价和抗体阳转率明显比低剂量高(P＜0.05);细胞因子检测结果显示加强免疫7d后的白细胞介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量与初次免疫7d的相比显著增加.结论 BALB/c和ICR小鼠可做为CA16活病毒免疫原性评价的动物模型,以4～6周龄的BALB/c小鼠最为敏感.