骨髓间充质干细胞移植对正己烷中毒大鼠脊髓神经组织的修复作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对正己烷中毒大鼠脊髓神经组织的修复作用。方法 将健康成年雄性SD大鼠随机分成5组,每组20只。分别为：对照组（control）、干细胞对照组（BMSCs）、染毒组（HD）、自身修复组（HD+NS）和干细胞干预染毒组（HD+BMSCs）。对照组腹腔注射生理盐水,10周后处死动物。BMSCs组腹腔注射生理盐水5周后,行尾静脉干细胞移植术,5周后处死动物。HD组按400 mg/kg剂量,对大鼠腹腔注射2,5-己二酮（2,5-hexanedione,HD）,每周1次,持续注射5周后,处死动物。HD+NS组对大鼠腹腔注射HD 5周后,经尾静脉注射生理盐水1 mL, 5周后处死动物。HD+BMSCs组对大鼠腹腔注射HD 5周后,经尾静脉行干细胞移植,5周后处死动物。实验5周后观察大鼠的一般状态并进行步态评分。透射电镜观察处死后大鼠脊髓神经组织超微结构。MAP-2和SMI312双标记免疫荧光染色和LFB染色观察大鼠脊髓神经组织轴突和髓鞘变化。结果HD+NS组大鼠一般状态差、精神萎靡、无法站立、呈瘫痪状,步态评分为（4±0.38）分,属严重异常。HD+BMS...     

听神经病

目的 :介绍一种特殊的感音神经性听力疾患—听神经病 ,探讨其临床特征及听力学特点。方法 :报道 5例听神经病患者 ,2例为成人 ;3例为儿童。记录患者的临床资料 ,并对患者进行纯音测听、脑干电反应测听、耳声发射、耳蜗电图及语言辨别率等听力学检查。结果 :5例均主诉听力下降 ,听力学检查纯音听阈为轻、中度感音神经性聋 ,与纯音测听不相符的语言辨别率明显下降 ,不能引出脑干诱发电位 (ABR) ,耳蜗电图基本正常 ,畸变产物耳声发射 (DPOAE)基本正常。提示外毛细胞功能正常 ,病变可能在听神经。结论 :听神经病是一种主诉听力下降 ,纯音听阈为轻、中度感音神经性聋 ,不能引出脑干诱发电位 (ABR) ,畸变产物耳声发射正常的听力疾患 ,临床上应与其他感音神经性聋区别     

生黄液对大鼠骨髓间质干细胞分化为神经细胞的定向诱导作用

目的探讨生黄醇提取液对成年大鼠骨髓间质干细胞 (MSCS)的体外增殖和特异性诱导、分化为神经细胞的能力。方法采用生黄醇提取液、2 — 硫基乙醇 ( 2 — ME)、二甲基亚枫 +成纤维细胞生长因子 (DMSO+FGF)、1 640培养液 +1 5 %FeS(对照 ) 4组体外定向诱导MSCS 向神经元细胞分化 ,用倒置显微镜和免疫组化技术检测神经元细胞所表达的特异性标志。结果 3种不同诱导液均能定向诱导MSCS 分化为神经元细胞 ,其中 ,生黄液组的NSE(神经元特异性烯醇化酶 )和GFAP(胶质纤维酸性蛋白 )的阳性细胞数明显高于 2 —ME和DMSO +FGF组 (P <0 .0 5 ) ,1 640培养液 +1 5 %FeS组没有诱导作用。结论MSCS 能在体外扩增、传代、能被定向诱导分化为神经元细胞。     

骨髓基质干细胞移植对脑缺血大鼠神经组织及功能的影响

目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对脑缺血大鼠神经组织及功能的影响。方法选用24只SD大鼠制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分为移植组、注射组、对照组,每组8只。局部给予移植组动物BMSCs,由尾静脉给予注射组动物BMSCs,对照组动物尾静脉注射等量生理盐水。采用5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记新生细胞。MCAO术后第7、14天,每组各处死4只动物,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经功能(处死前),取脑组织进行双标免疫组织化学染色,观察神经元样细胞和胶质细胞的生成情况。结果 MCAO术后第7、14天,移植组和注射组动物BrdU+NES双标阳性细胞均多于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。移植组动物术后第7、14天及注射组动物术后第7天BrdU+GFAP双标阳性细胞均少于对照组(均P<0.05)。术后第14天,移植组和注射组大鼠mNSS评分均低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论局部移植或静脉给予MCAO后大鼠BMSCs,可减少胶质瘢痕的形成,增加神经元样细胞的生成,改善神经功能。     

神经损伤修复的新思路——干细胞移植

随着人口数量增加,交通日益发达,颅脑和脊髓外伤、脑血管疾病、神经系统先天性疾病和患神经退变疾病的人数急剧上升.而由于中枢神经组织在结构上的脆弱性和功能上的复杂性,使得其损伤往往意味着是巨大的、不可逆的破坏,严重影响患者的生命安全与生活质量,神经损伤后修复与再生成为高度关注的医学主题[1].     

骨髓间充质干细胞移植增强大鼠子宫切口再生修复

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植在大鼠子宫创伤后再生修复中的作用.方法：建立大鼠瘢痕子宫模型.取Ad-GFP标记的大鼠MSCs,于子宫切口内注射进行原位移植,2周后取瘢痕处子宫肌组织,行HE常规染色,血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子-β1（TGF-β1）免疫组织化学染色,α-SMA荧光标记,检测MSCs在切口局部的定向分化情况,并定量检测切口局部肌层的生物力学.结果：瘢痕子宫模型成功建立.MSCs移植后子宫切口的破裂阈值增强（P＜0.05）,切口局部VEGF表达上调,TGF-β1表达下调（均P＜0.01）,α-SMA荧光标记提示MSCs在子宫肌层局部出现平滑肌定向分化.结论：MSCs移植增强了子宫切口的再生愈合,提高了切口局部的机械张力,有望减少再次妊娠时子宫破裂的风险.     

听神经病的研究进展

听神经病（Auditory neuropathy,AN）是1996年Starr首次提出,定义为第Ⅷ脑神经的听支（自耳蜗至进入脑干之前的耳蜗神经）受损而引起的一种临床表现特殊的感音神经性聋。其听力学特征包括：听性脑干反应（ABR）自Ⅰ波起缺失或严重异常,诱发性耳声发射（EOAE）正常,言语分辨率不成比例的明显差于纯音听阈,听力图多以低频听阈升高为主,镫骨肌声反射消失或阈值升高及EOAE对侧抑制消失等。这一组具有听力学特征的症侯群,与一般感音神经性聋的诊断和治疗完全不同。近年来已逐渐被人们所认识和关注,     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑梗死的治疗作用

目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对缺血性脑损伤的保护和修复作用,探讨不同时间点移植BMSCs对大鼠脑梗死治疗效果的差异. 方法 建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,在MCAO术后3、6、12、24、72 h这5个时间点经尾静脉移植BMSCs到脑梗死大鼠,并与PBS移植组和空白对照组进行脑梗死体积和神经损伤严重程度评分(NSS)比较. 结果 MCAO术后28 d,TTC染色显示:与PBS移植组和空白对照组比较,BMSCs移植组的脑梗死体积明显减小(P＜0.05);随着细胞移植时间推后,梗死体积逐渐增大,BMSCs 3、6、12、24、72 h移植组脑梗死体积分别为(40±27)、(80±25) 、(123±21)、(161±19)和(202±27) mm3.BMSCs移植组大鼠NSS明显低于PBS移植组和空白对照组(P＜0.05),并且BMSCs移植越早,NSS越低. 结论 在MCAO术后3～72 h移植BMSCs对大鼠脑梗死都有治疗效果,并且移植越早,治疗效果越好.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑梗死的治疗作用

目的观察大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对缺血性脑损伤的保护和修复作用,探讨不同时间点移植BMSCs对大鼠脑梗死治疗效果的差异。方法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,在MCAO术后3、6、12、24、72 h这5个时间点经尾静脉移植BMSCs到脑梗死大鼠,并与PBS移植组和空白对照组进行脑梗死体积和神经损伤严重程度评分(NSS)比较。结果MCAO术后28 d,TTC染色显示:与PBS移植组和空白对照组比较,BMSCs移植组的脑梗死体积明显减小(P<0.05);随着细胞移植时间推后,梗死体积逐渐增大,BMSCs 3、6、12、24、72 h移植组脑梗死体积分别为(40±27)、(80±25)、(123±21)、(161±19)和(202±27)mm3。BMSCs移植组大鼠NSS明显低于PBS移植组和空白对照组(P<0.05),并且BMSCs移植越早,NSS越低。结论在MCAO术后3~72 h移植BMSCs对大鼠脑梗死都有治疗效果,并且移植越早,治疗效果越好。     

骨髓干细胞治疗大鼠急性肝损伤效果的实验研究

目的 探讨大鼠骨髓干细胞移植治疗急性肝损伤的疗效.方法 取50只正常雄性大鼠,采用2-乙酰氨基芴和四氯化碳溶液灌胃,制成急性肝损伤模型,取其骨髓,以淋巴细胞分离液分离出于细胞,再用荧光染料(PKH26)进行标记.将50只急性肝损伤大鼠分为实验组和对照组,每组25只.实验组大鼠麻醉后,取腹部正中切口,经门静脉注入自体骨髓干细胞悬液0.4 mL(4×106个).移植术前及术后3d、7d、14 d、4周观察血清转氨酶(ALT、AST)、总胆红素(TB)、凝血酶原时间(PT)和白蛋白(ALB)水平变化;骨髓干细胞移植后4周,取各组肝脏组织,制成冰冻切片,用异硫氰荧光素标记的抗体进行免疫组织化学染色,检测其PKH26标记阳性细胞.结果 术后3、7d,各项肝功能指标无显著性差异(P＞0.05);术后14 d ALT、AST及ALB有所改善(P＜0.05),其余指标无明显改善;4周各项肝功能指标均有改善(P＜0.05).大鼠肝脏切片中可见散在的PKH26染色阳性的红色荧光,PKH26染色阳性细胞数为(57.2±6.18)个,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经门静脉注入的骨髓干细胞能定植于肝脏,是治疗急性肝损伤的一种安全有效的方法,可显著改善急性肝损伤大鼠肝功能.     

Functional recovery after rhesus monkey spinal cord injury by transplantation of bone marrow mesenchymal-stem cell-derived neurons

Background The treatment of spinal cord injury is still a challenge. This study aimed at evaluating the therapeutical effectiveness of neurons derived form mesenchymal stem cells (MSCs) for spinal cord injury.Methods In this study, rhesus MSCs were isolated and induced by cryptotanshinone in vitro and then a process of RT-PCR was used to detect the expression of glutamic acid decarboxylase (GAD) gene. The induced MSCs were tagged with Hoechst 33342 and injected into the injury site of rhesus spinal cord made by the modified Allen method. Following that, behavior analysis was made after 1 week, 1 month, 2 months and 3 months. After 3 months, true blue chloride retrograde tracing study was also used to evaluate the re-establishment of axons pathway and the hematoxylin-eosin (HE) staining and immunohistochemistry were performed after the animals had been killed.Results In this study, the expression of mRNA of GAD gene could be found in the induced MSCs but not in primitive MSCs and immunohistochemistry could also confirm that rhesus MSCs could be induced and differentiated into neurons. Behavior analysis showed that the experimental animals restored the function of spinal cord up to grade 2-3 of Tarlov classification. Retrograde tracing study showed that true blue chollide could be found in the rostral thoracic spinal cords, red nucleus and sensory-motor cortex.Conclusions These results suggest that the transplantation is safe and effective.     

Experimental Study on Treatment of Glioma by Embyonic Neural Stem Cell Transplnation in Rats

The neural stem cells in Wistar rats were cultured in vitro,purified,and transplanted into C6 glioma model in order to observe their biological characters and provide a basic foundation for treatment of neurological diseases by neural stem cell transplantation.The cells at hippocampal area from gestation 15-day rats were cultured in vitro,and frozen and preserved in liquid nitrogen.C6 tumor-bearing models(n=25) and neural stem cells transplantation models(n=35) were established.When the tumor grew to 3 to 4 weeks,5 rats in each group were randomly selected for MRI examination.At different intervals,the rats were perfused and sampled for HE staining,GFAP and BrdU immunohistochemical staining.The results showed that after resuscitation of neural stem cells at 1-4 passages,the cell viability was 40%-63% with the difference being not significant.The cells could proliferate,passage,and most cells transplanted into glioma model survived.The mean survival time in neural stem cell transplantation group and control was 4.28 and 3.88 weeks respectively,and the average tumor size in the former was smaller than in the latter.It was concluded that embryonic neural stem cells in rats could proliferate and differentiate,and after resuscitation the biological characteristic and viability of the cells were not influenced.Neural stem cells had inhibitory effects on the growth of glioma cells and could prolong the survival of rat model.     

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病大鼠的实验研究

目的：观察同种异体骨髓间充质干细胞（BMSC）移植对糖尿病大鼠的作用。方法：通过贴壁法分离培养同种异体SD大鼠的BMSC,应用重组腺病毒-绿色荧光蛋白（Ad-GFP）病毒感染传2代的BMSC,并经筛选获得稳定表达GFP的BMSC用于移植。将链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠（血糖≥16．7mmol/L）随机分为实验对照组[（22．27±2．23）mmol／L,n=6）和移植组[（2218±194）mmol／L,n=9）]。移植组大鼠尾静脉注射BMSC悬液04ml,细胞数lxlO^6xlO^7／ml;在实验对照组及造模前随机抽取的5只正常对照组大鼠尾静脉注射生理盐水。移植2周后采血测各组血糖、糖化血红蛋白（HbAc）、胰岛素,并处死大鼠剖取胰腺,制作石蜡切片进行胰岛素免疫组化及冰冻切片荧光倒置显微镜直接观察GFP表达。结果：实验2周,实验对照组糖尿病大鼠血糖[（27．96±1．87）mmol／L,n=6）]、HbAlc（22．51±2．99,n=6）明显高于正常对照组[（7．97±1.00）mmol／L;（9．15±0．82,n=5）],胰岛素[（11．57±3．25）mU／L,n=6）]明显低于正常对照组[（33．68±6．21）mUL,n=5）]（P〈0．001）。移植组血糖[（23．63±6．42）mmol／L,n=9）]、HbA1c（18．26±3．96,n=9）低于实验对照组（尸〈O．05）,胰岛素[（13．89±7．89）mU／L,n=9）1高于实验对照组（尸〉0．05）。免疫组化结果显示,实验对照组胰岛及胰岛中心细胞数明显减少。胰岛素反应基本阴性。仅见个别胰岛细胞内出现少量微弱淡黄色的细颗粒。移植组大鼠胰岛中心部细胞增多,大部分胰岛素反应阳性或强阳性呈黄色或褐色颗粒。胰腺外分泌组织可见表达EGFP的细胞,胰岛中未发现其表达。结论：糖尿病大鼠经同种异体BMSC移植后,血糖、HbA,c均下降,胰岛素水平升高,可能通过内源性胰岛细胞增生发挥治疗作用。     

新生大鼠骨髓基质细胞的成骨特性研究

目的 验证新生大鼠骨髓基质细胞的成骨特性及扩增能力,从而为今后的临床工作提供一定的基本理论基础。方法 分离新生7天Wistar大鼠股骨及胫骨,冲洗骨髓腔并培养,用成骨细胞诱导液培养诱导9～12天,分别用HE染色及骨碱性磷酸酶(BALP)染色,通过对阳性BALP活性分析确定BMSC的成骨特性。结果 经过9～12天诱导后骨髓基质细胞的形态为成骨细胞样BALP活性明显增强。结论 新生大鼠骨髓基质细胞体外扩增能力强,向成骨细胞分化能力肯定。     

自体骨髓干细胞移植联合血塞通注射液治疗糖尿病周围神经病变?

目的：观察自体骨髓干细胞移植联合血塞通注射液治疗糖尿病周围神经病变的疗效。方法将42例糖尿病周围神经病变的患者随机分为2组,治疗组21例(28例患肢),对照组21例(28例患肢)。治疗组与对照组均进行自体骨髓干细胞移植手术,术后治疗组在常规治疗的基础上,予血塞通注射液静脉静注,对照组仅予常规术后治疗。观察2组术后2周、6个月的临床疗效,麻木评分,各阶段神经传导情况。结果术后2周、术后6个月治疗组临床疗效均优于对照组(P<0.05)。2组麻木评分术后2周、术后6个月较本组术前均有所减低,差异有统计学意义( P <0.05),术后2周、术后6个月治疗组与对照组比较,患肢麻木评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2组胫神经传导速度术后2周、术后6个月较本组术前均有所提高,差异有统计学意义(P<0.05),术后2周、术后6个月治疗组提高值均较对照组提高值增加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。2组腓总神经传导速度术后2周、术后6个月较本组术前均有所提高,差异有统计学意义(P<0.05),术后2周、术后6个月治疗组提高值均较对照组提高值增加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。2组腓肠神经传导速度术后2周、术后6个月较本组术前均有所提高,差异有统计学意义(P<0.05),术后2周、术后6个月治疗组提高值均较对照组提高值增加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论自体骨髓干细胞移植联合血塞通注射液治疗糖尿病周围神经病变具有较好的疗效。     

听神经脱髓鞘病变中的听力学和病理改变

目的建立变态反应性脱髓鞘模型,观察其听力学改变和耳蜗及听神经的病理变化。方法选取Wistar大鼠100只,随机分为模型组、对照组和正常组,分别皮下注射牛坐骨神经髓鞘碱蛋白、完全弗氏佐剂和生理盐水;对所有实验动物在免疫前、免疫结束后1、2、3、4、5、6周进行听性脑干诱发电位、耳声发射检查。各绀随机抽取2只动物,2．5％戊二醛活体灌注后处死,电镜下观察听神经末梢突触间隙的变化。结果髓鞘碱蛋白免疫后的动物共37耳／20只成为模型动物,听神经近中枢段在给药后1周均出现脱髓鞘病变,给药后第3周达到高峰,随后自行缓解,在第6周基本恢复;神经末梢和毛细胞突触间隙结构上无明显变化;模型动物听性脑干诱发电位阈值在实验第1周时增高,然后逐渐恢复;Ⅲ波潜伏期在实验第1周时延长,实验期间无明显恢复;畸变产物耳声发射给药1周后于0．5、1．0、2．0kHz降低,瞬态耳声发射给药1周后所有频率均降低。结论免疫性脱髓鞘模型有听神经近中枢端脱髓鞘改变和毛细胞损伤,其听力学改变和听神经病不同。     

过表达microRNA-224骨髓间充质干细胞对大鼠坐骨神经损伤的作用及其机制研究

目的 探讨过表达microRNA-224(miR-224)骨髓间充质干细胞(BMMSC)对大鼠坐骨神经损伤的治疗效果及其机制.方法 将Sprague Dawley大鼠分为5组:假手术组、模型组、BMMSC组(坐骨神经损伤+BMMSC)、LV-BMMSC组(坐骨神经损伤+LV-BMMSC)和miR-224-BMMSC组(...     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的实验研究

目的:研究细胞凋亡在急性脊髓损伤中的作用.方法:以大鼠脊髓压迫性损伤的动物模型,应用透射电镜,HE染色,原位缺口末端标记(TUNFEL)观察急性脊髓损伤后神经细胞的死亡形式.结果:急性脊髓损伤后2 h电镜清晰观察到神经细胞凋亡的形态变化,HE染色和TUNEL显示急性脊髓损伤后6 h和8 h凋亡阳性细胞达高峰.结论:细胞凋亡为急性脊髓损伤后神经细胞的主要死亡形式,也是加重脊髓损伤的一个因素.