新型异黄酮及甾体类化合物体外抗癌细胞增殖活性的初步筛选

目的研究改构后的异黄酮及甾体类化合物是否具较好的体外抗细胞增殖的活性.方法采用MTT法,以5,7,4'-三羟基异黄酮(Genistein,GEN)作为对照,研究28个改构后的异黄酮和甾体化合物对Hela细胞、MCF-7细胞的抗增殖作用,并在此基础上,分析其构效关系.结果通过对28种化合物采用MTT的方法对其体外活性进行初筛,初步认为异黄酮类化合物F11、ZF3、ZF4、ZF7以及甾体类化合物ZE2均对Hela细胞、MCF-7细胞增殖有显著的抑制作用,效果均优于Genistein.结论异黄酮和甾体类化合物经过结构改造和修饰,其大部分对Hela细胞、MCF-7细胞的增殖有显著的抑制作用,有进一步研究的潜在价值.     

三羟异黄酮与化疗药物联合作用对人乳腺癌细胞株MDA-MB-453增殖的影响

目的观察三羟异黄酮(genistein,GEN)与紫杉醇(paclitaxel,PTX)或阿霉素(doxorubicin,DOX)联合作用对体外培养的HER2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB -453增殖的作用,探讨三羟异黄酮和化疗药物的联合抗癌效应.方法 GEN和化疗药物PTX、DOX单独或联合处理体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-453,MTT法测定细胞增殖抑制率并用联合用药公式分析合并效应,流式细胞仪分析细胞周期,形态学观察和Annexin-V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡.结果 GEN、PTX、DOX单独作用于乳腺癌MDA-MB-453细胞,均可抑制细胞增殖,引起细胞周期阻滞,并诱导细胞凋亡.10、20 μmol/L的GEN与DOX联合作用时,q值在0.85～1.15之间,二者的联合效应为相加效应;40 μmol/L的GEN与DOX联合作用时,q＞1.15,二者的联合效应为协同效应;而各剂量的GEN与PTX联合作用时,q＜0.85,二者的联合效应为拮抗作用.GEN(40 μmol/L)可增强DOX诱导MDA-MB-453细胞凋亡的作用,而削弱PTX诱导MDA-MB-453细胞凋亡的作用.结论 GEN能增加或协同DOX对MDA-MB-453细胞的抑制增殖作用,而拮抗PTX的抑制增殖作用.     

微量元素硒联合环磷酰胺抗小鼠白血病的实验研究

目的 研究微量元素硒联合环磷酰胺对P388小鼠白血病的抗癌效果,探讨微量元素硒在治疗白血病过程中的作用及其分子机制.方法 采用含硒化合物联合环磷酰胺治疗P388小鼠白血病模型,通过观察荷瘤小鼠的生存期判断其抑癌效果.采用原位杂交和免疫细胞化学技术检测淋巴细胞中的bcl-2基因的表达,利用流式细胞术检测细胞凋亡、增殖指数及细胞周期.通过检测动物体内抗氧化水平指标超氧化物歧化酶、丙二醛和谷胱甘肽,判定硒化合物的保护作用.结果 含硒化合物尤其是有机含硒化合物联合环磷酰胺能够使荷瘤小鼠的生存期延长,bcl-2基因表达下调,细胞凋亡指数增高,机体抗氧化水平升高,与对照组比较有统计学差异(P＜0.05).结论 微量元素硒联合抗肿瘤化疗药物后对肿瘤治疗具有协同作用,能显著抑制癌细胞的增殖,下调bcl-2基因的表达,诱导癌细胞的凋亡,延长荷瘤小鼠的生存期.     

乳酸菌对环磷酰胺化疗毒性保护作用的实验研究

目的 研究乳酸菌对HT-29细胞Balb/c-nu异种移植荷瘤鼠环磷酰胺中毒模型是否具有保护作用.方法 建立人结肠癌细胞裸鼠异种移植瘤模型.腹腔注射高剂量环磷酰胺并且胃内灌注乳酸菌,检测给药后裸鼠体重、血液白细胞、血清乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮等的值,比较各组的差别.结果 与单纯环磷酰胺组比较,环磷酰胺同时给予乳酸菌组裸鼠体重高;血液白细胞计数高;血清乳酸脱氢酶、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、肌酐、尿素氮低,具有显著差别,P＜0.05～0.001,且与乳酸菌的剂量成正相关.结论 乳酸菌对HT-29细胞Balb/c-nu异种移植荷瘤鼠环磷酰胺毒性具有多种保护作用,降低了化疗的肝肾毒性和骨髓抑制毒性.     

YH-16对宫颈癌细胞及其裸鼠移植瘤抑制作用研究

目的探讨YH-16（重组内皮抑素）对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤鼠生长抑制作用。方法用MTT法检测细胞生长;用透射电镜观察细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;将Hela细胞移植至裸鼠皮下,观察不同浓度YH-16（0、0.4、0.75和1.5mg/kg）对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响;TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡;免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度（MVD）。结果YH-16抑制Hela细胞增殖（P〈0.01）;能诱导Hela细胞凋亡。YH-16能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0.05）;YH-1615mg/kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其他治疗组明显降低（P〈0.05）。结论YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用。     

芒柄花黄素对人胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠模型的抑制作用及机制研究

目的 研究芒柄花黄素对人胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠模型的抑制作用及作用机制.方法 建立人胃癌MKN-45细胞荷瘤裸鼠癌症模型,经环磷酰胺(20 mg/kg)和芒柄花黄素(10、20、40mg/kg)干预14 d,观察荷瘤重量变化及应用TUNEL染色评估荷瘤组织中细胞凋亡数量,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测荷瘤内源性p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及细胞周期蛋白(CyclinD)表达.结果 与模型对照组比较,芒柄花黄素明显抑制胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠肿瘤的生长(P＜0.01),并且肿瘤组织中细胞凋亡计数增加(P＜0.01).同时,芒柄花黄素干预组肿瘤组织中的p38MAPK蛋白表达增加,CyclinD蛋白水平减少(P＜0.01).结论 芒柄花黄素具有明显抑制胃癌细胞MKN-45增殖作用,其机制与激活细胞内MAPK信号转导通路而诱导细胞凋亡有关.     

4种异黄酮改构化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖活性的比较

目的观察4种异黄酮改构化合物（F8、F11、ZF3和ZF7）对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法采用胶原酶消化十二次筛网过滤法原代培养人子宫内膜腺上皮细胞。MTT法检测并比较4种化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。结果成功培养原代人离体子宫内膜腺上皮细胞并稳定传代。4种异黄酮化合物作用于人子宫内膜腺上皮细胞24h后，低剂量（25μmol／L）F8显著促进细胞增殖（P〈0．05），中高剂量（50、100μmol／L）F11显著抑制细胞增殖（P〈0．05）；作用48h后，中剂量（50μmol／L）F11和ZF3显著抑制细胞增殖（P〈0．05），高剂量（100μmol／L）化合物均显著抑制细胞增殖（P〈0．05）；作用72h后，除低剂量（25μmol／L）F8、ZF3和ZF7未明显抑制细胞增殖外（P〉0．05），各化合物在不同剂量下均抑制细胞增殖效应（P〈0．05）；该生物学效应具有时间和剂量依赖性。结论4种异黄酮化合物在一定剂量下作用一段时间后可抑制人离体子宫内膜腺上皮增殖。F11抑制细胞增殖活性最强。     

RV-HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗宫颈癌的实验研究

目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)自杀基因系统对人宫颈癌细胞系Hela体外及体内的杀伤作用及其产生的旁观者效应.方法采用脂质体转染法将GINaTK载体转入包装细胞PA317.取病毒上清液感染人宫颈癌细胞Hela,得到带有HSV-TK基因的Hela/TK细胞,并将其分别用于体外和体内实验.体外实验中,Hela/TK细胞对丙氧鸟苷(GCV)的敏感性和旁观者效应采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定.动物试验中分别在BALB/C小鼠的右腋窝皮下按不同比例注射Hela/TK细胞和Hela细胞,然后给予GCV治疗.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肿瘤组织中HSV-TK基因的表达情况.结果转染HSV-TK基因的Hela/TK细胞表现出比亲本Hela细胞更强的杀伤肿瘤效应.体外实验结果显示,当Hela/TK细胞数占混合细胞10%时,低浓度(10μg·ml-1)的GCV就可将50%左右的肿瘤细胞杀死.体内实验结果显示,GCV可明显抑制Hela/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成.经GCV治疗后,Hela/TK组和混合细胞组肿瘤体积分别较对照组肿瘤体积缩小52.8%和69.4%(均P＜0.001).小鼠的平均生存期也显著延长(P＜0.001).结论逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入人宫颈癌细胞Hela并获稳定表达,HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内外对宫颈癌细胞均有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应.     

调控miR-181d-5p表达对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的 探究miR-181d-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭影响及对细胞硫酰化限速酶（sulfation rate-limiting enzyme,PAPSS2）/蛋白聚糖（proteoglycans,VCAN）信号通路的影响。 方法 细胞学实验：人宫颈癌细胞Hela细胞分为对照组、NC组和miR-181d-5p组,MTT、流式细胞技术及Transwell实验分别检测各组细胞增殖、凋亡和侵袭能力,Western blot检测各组PAPSS2和VCAN蛋白表达水平。裸鼠荷瘤实验：20只SPF级裸鼠随机分为对照组（n=10）和miR-181d-5p组（n=10）,分别接种野生型细胞和转染miR-181d-5p细胞,模型建立后每3 d测量1次小鼠肿瘤体积,连续测量21 d,于实验终点测量肿瘤质量和体积。 结果 细胞学实验表明：与对照组和NC组比较,miR-181d-5p组细胞增殖能力显著降低、细胞凋亡比例显著增加、细胞侵袭能力显著降低、PAPSS2,VCAN表达水平显著下调（P＜0.05）,NC组与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。裸鼠荷瘤实验表明：miR-181d-5p组小鼠肿瘤生长受到显著抑制,肿瘤质量显著低于对照组（P＜0.05）。 结论 miR-181d-5p可以抑制人宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,其机制可能与PAPSS2/VCAN信号通路活性的抑制相关。     

PTEN影响宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:通过转染PTEN基因表达载体,提高宫颈癌Hela细胞中PTEN的表达水平,观察能否影响Hela细胞对顺铂的敏感性,并探讨其分子学机制.方法:将培养的宫颈癌Hela细胞分为空白对照(未转染质粒的Hela细胞)、质粒对照(转染空质粒的Hela细胞)和PTEN转染(转染PTEN表达载体的Hela细胞)3组.分别用RT-PCR和Western检测各组Hela细胞中PTEN的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测各组Hela细胞对顺铂的化学敏感性;RT-PCR检测各组Hela细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的表达水平.结果:PTEN转染组Hela细胞中PTEN的表达水平比另2组细胞显著增高(P＜0.01);经顺铂处理后,PTEN转染组Hela细胞生长抑制率比其它2组显著增高(P＜0.01),PTEN转染组Hela细胞中PI3K被显著抑制(P＜0.01).结论:PTEN能增强宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,它可能通过下调Hela细胞中PI3K而导致Hela细胞对顺铂耐药性下降.     

正常人CIK细胞对卵巢癌SKOV3ip细胞抗肿瘤的活性

目的　观察正常人CIK(cytokine inducedkiller)细胞对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的体外细胞毒活性以及对卵巢癌腹水瘤模型的体内抗肿瘤作用。方法　取正常人的外周血单个核细胞 (PBMC) ,加入细胞因子γ IFN、IL 2、抗 -CD3单抗和IL - 1,体外诱导成CIK细胞 ,用MTT法测定CIK细胞体外对人卵巢癌细胞株SKOV3ip的细胞毒活性 ,并与CD3AK作对比。在Babl/c裸小鼠腹腔内接种卵巢癌SKOV3ip细胞 ,观察CIK细胞对荷瘤鼠的抑瘤作用。结果　体外实验证明 ,CIK细胞对SKOV3ip有明显的细胞毒活性 ,对比CD3AK其抑瘤率为 89.7%与 6 7.1% (P <0 .0 5 )。裸鼠卵巢癌腹水瘤模型体内实验表明 ,CIK细胞能够显著抑制癌性腹水生长 ,其抑制率可达 10 0 %。结论　CIK细胞是一种新型、高效的免疫活性细胞 ,具有较强的体内外抗卵巢癌细胞活性 ,具有明显的抑制癌性腹水生长的作用 ,有可能用于临床上卵巢癌腹水的过继性免疫治疗     

烷氧染料木黄酮衍生物的合成及其抗癌活性研究

目的研究烷氧染料木黄酮衍生物的体外抗癌活性。方法在催化剂的作用下,染料木黄酮与卤代烃发生取代反应,生成了一系列染料木黄酮衍生物,并通过MTT法检测其对人急性粒细胞性白血病（HL-60）细胞、人结肠癌（HT-29）细胞和人胃癌（SGC-7901）细胞的增殖抑制作用。结果合成了4个烷氧取代染料木黄酮衍生物,其中化合物3a（4′,5,7-三甲基染料木黄酮）对HL-60、HT-29和SGC-7901细胞增殖的抑制作用均强于5-氟尿嘧啶（5-Fu）。结论染料木黄酮衍生物3a具有潜在的抗癌活性。     

抑制热休克蛋白70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂化疗的敏感性

目的 探讨抑制宫颈癌Hela229细胞内热休克蛋白(HSP)70表达对顺铂(DDP)化疗敏感性的影响.方法 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)及集落克隆法测定各因素对Hela229细胞的抑制作用;溴化丙啶(PI)单染法及DAPI检测细胞的凋亡率;JC-1染色法测定线粒体膜电位(△Ψm)的变化;Western blotting测定相关蛋白的表达;建立裸鼠动物模型测定各因素体内的抑瘤作用.结果 宫颈癌细胞较正常宫颈细胞高表达HSP70;当HSP70抑制剂与顺铂合用,细胞的存活率较单用顺铂显著下降(P<0.01);PI与DAPI染色实验表明HSP70抑制剂能增加顺铂诱导的细胞凋亡率;JC-1染色结果显示,HSP70抑制剂处理后顺铂组细胞线粒体膜电位发生了明显的降低.Western blotting实验结果显示HSP70蛋白表达抑制剂与顺铂合用较单用顺铂显著增加促凋亡蛋Bax/caspase-3表达及caspase-3活化;明显降低抑制凋亡相关蛋白Bcl-2表达.裸鼠移植肿瘤模型结果表明HSP70抑制剂与顺铂合用能增强顺铂对模型小鼠肿瘤的抑制作用(P<0.01).结论 抑制HSP70表达可增强宫颈癌细胞对顺铂的敏感性,机制可能是通过抑制HSP70,进而调节凋亡相关蛋白的表达,促进宫颈癌细胞凋亡.HSP70有望成为宫颈癌基因治疗的一个新靶点.     

雷帕霉素联合多柔比星对人乳腺癌细胞体内外作用的影响

目的研究雷帕霉素联合多柔比星对人乳腺癌细胞体内外作用的影响,并探讨其作用机制,为临床合理用药治疗乳腺癌提供依据。方法体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制百分率;Transwell分析检测药物对细胞迁移侵袭的影响;体内实验建立人乳腺癌裸鼠抑制瘤模型,分组处理,绘制肿瘤生长曲线,记录瘤重和裸鼠体重,计算抑瘤率。结果雷帕霉素和多柔比星联合应用对人乳腺癌MDA-MB-231细胞有明显杀伤作用,抑制百分率为65.54±2.47;能显著降低乳腺癌细胞的侵袭能力。体内实验抑瘤率为85.3%。结论雷帕霉素和多柔比星联合应用对人乳腺癌MM231细胞有明显的抗肿瘤效应,对于乳腺癌具有潜在的临床应用价值。     

皂角刺抗肿瘤的初步研究

目的观察皂角刺水煎液的体内外抗肿瘤作用。方法体内实验:建立小鼠背部皮下移植性实体肿瘤H22荷瘤动物模型,灌胃给药后测定肿瘤体积、质量及免疫器官指数;体外实验:用MTT法测定皂角刺对小鼠lewis肺癌细胞的影响。结果体内实验:在本实验剂量下(0.3mL/g),与模型对照组比较,皂角刺组肿瘤生长减缓,抑瘤率为38.37%,胸腺指数、脾脏指数均增高;体外实验:实验所用浓度的皂角刺水煎液呈剂量依赖性抑制小鼠lewis肺癌细胞生长。结论皂角刺有一定抗肿瘤作用,其机制可能与细胞毒和提高机体免疫作用有关。     

局部注射消痔灵治疗胃癌

为临床局部应用消痔灵注射液治疗胃癌提供实验依据。方法应用体外试验（ＭＴＴ法）和体内试验（裸鼠人胃癌ＳＧＣ－７９０１模型）观察消痔灵注射液的抗癌作用。结果消痔灵注射液对人胃癌细胞的体外杀伤率为６０．５％（Ｐ〈０．０１）,瘤体内注射消痔灵对人胃癌的抑瘤率为４３．５％（Ｐ〈０．０５）,消痔灵注射液不仅使肿瘤瘤血管栓塞,缺血坏死,而且可进入肿瘤细胞起直接杀伤作用。结论消痔灵注射液局部应对人胃癌有较强的抗作     

小鼠CD_3AK细胞抗肿瘤作用初步观察

目的：通过小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外对靶细胞的杀伤活性及其体内抗肿瘤作用的观察，了解ＣＤ３ＡＫ细胞的体内外抗肿瘤效应。方法：采用ＭＴＴ法检测小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞体外抗肿瘤细胞毒活性，并通过实体瘤的大小、瘤组织病理切片形态观察等分析小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞的体内抗肿瘤作用。结果：小鼠ＣＤ３ＡＫ细胞不仅体外具有较强的细胞毒作用，且能在小鼠体内抑制Ｓ１８０肿瘤细胞的生长和扩散，并诱导Ｓ１８０细胞坏死，与生理盐水对照组比较有显著差异。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有较强的体内外抗肿瘤作用     

螺旋藻多糖对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响

目的：探讨螺旋藻多糖（PSP）对体外培养的Hela细胞生长的影响。方法：采用MTT法测定 PSP的抗肿瘤活性，并观察其对Hela细胞形态学的影响。结果：随PSP浓度的升高，Hela细胞存活率逐渐降低，抑制率逐渐增加；光镜下观察显示，PSP作用24-48h后，细胞出现明显的形态学改变。结论：PSP能抑制Hela细胞增殖。     

植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞体外抗肿瘤作用的MTT比色法分析

目的　检测植物血凝素及淋巴因子激活的杀伤细胞（ＰＨＡ－ＬＡＫ）的体外广谱抗肿瘤作用。方法 用ＭＴＴ比色法测定 ＰＨＡ－ＬＡＫ对体外培养的Ｋ５６２、ＭＧｃ８０－３、１４３ＴＫ－、ＨｅＬａ、ＬｏＶｏ等５种肿瘤细胞的杀伤活性。结果ＰＨＡ－ＬＡＫ对５种不 同组织器官来源的肿瘤细胞均有明显杀伤活性,在效靶比为７．５：１．０时,ＰＨＡ－ＬＡＫ对１４３ＴＫ－细胞的杀伤率可高达 ５７．３％,杀伤效应随效靶比增加而升高;但在效靶比为１５：１时,杀伤效应不随效靶比增加而增高数。结论　（１）来自健康献血 员的ＰＨＡ－ＬＡＫ对肿瘤细胞具非特异性杀伤活性,能较好解决传统过继免疫治疗中免疫效应细胞的数量和活性问题; （２）在一定的条件下,ＭＴＴ法用于检测免疫效应细胞的杀瘤作用时才具灵敏、可靠的优点。