异丙酚预处理离体乳鼠脑皮质细胞对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨不同浓度异丙酚预处理离体乳鼠脑皮质细胞对脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法：取出生24 h以内的新生SD乳鼠的脑皮质细胞,体外培养至第7天,随机分为5组：A组（正常对照组）,B组（损伤组）,C1组（1 mg/L异丙酚预处理组）,C2组（3 mg/L异丙酚预处理组）和C3组（5 mg/L异丙酚预处理组）。C1、C2C3组第7天予以对应浓度的药物预处理,24 h后B、C1、C2、C3组予200μmol/L谷氨酸损伤0.5 h,所有组更换正常培养液继续培养24 h;观察神经细胞存活率（MTT法）、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、细胞凋亡率、HE染色后细胞形态变化。结果：异丙酚预处理各组MTT量不同程度高于损伤组,LDH漏出量和凋亡细胞百分比低于损伤组;HE染色后各预处理组细胞形态受损较损伤组轻,以C2组效果最佳。结论：异丙酚提前24 h预处理离体幼鼠脑皮质细胞对脑缺血-再灌注损伤有保护作用,其中以3 mg/L异丙酚保护效果最佳。     

依达拉奉对海马神经元缺血缺氧损伤后线粒体膜电位的影响

目的 探讨缺血缺氧损伤后依达拉奉对海马神经元线粒体膜电位的影响.方法 原代培养海马神经元细胞,建立缺血缺氧损伤模型,分为正常细胞组、缺血缺氧组、依达拉奉干预组(分别给予1、10、100、300 μmol/L依达拉奉干预)和阳性参照药维生素C干预组,将各组海马神经元细胞用线粒体膜电位敏感性染料Rhodamine-123 进行染色后,激光共聚焦显微镜分别检测线粒体膜电位.结果 与缺血缺氧损伤组比,加入100 μmol/L和300 μmol/L依达拉奉可以显著提高损伤海马神经元的线粒体膜电位,达到正常神经元线粒体膜电位的82%和87%.100 μmol/L和300 μmol/L依达拉奉组之间对线粒体膜电位的的稳定作用没有统计学差异(P>0.05).结论 缺血缺氧损伤后海马神经元线粒体膜电位下降,依达拉奉能够促进线粒体膜电位的恢复,起到神经保护作用.     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马细胞凋亡及hsp-70表达的影响

目的：观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后海马组织神经细胞凋亡及hsp-70表达的影响。方法：将45只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,各15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型。脑缺血再灌注前12h,预处理组给予依达拉奉3mg/kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注海马组织hsp-70表达及凋亡细胞。结果：与假手术组比较比较,依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、hsp-70阳性细胞明显增加,差异有显著性（P〈0．01）。与对照组比较,依达拉奉预处理组术后24hTUNEL阳性细胞明显减少（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hhsp-70阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论：凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程,依达拉奉可能通过上调hsp-70蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护和神经损伤起保护作用。     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及bcl-2、Bax表达的影响。方法将45只健康雄性sD大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,各15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血再灌注前12h,预处理组给予依达拉奉3mg／kg,对照组给予等量生理盐水分别腹腔注射。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注后海马组织bcl-2、Bax表达及凋亡细胞。结果依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、bcl-2、Bax阳性细胞明显增加,与假手术组比较差异有显著性（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hTUNEL、Bax阳性细胞数明显少于对照组（P〈0．01）。依达拉奉预处理组术后24hbcl-2阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程,依达拉奉可能通过上调bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护和神经损伤起保护作用。     

Protective Effects of Different Concentrations of Edaravone Pretreatment against Glutamate Neurotoxicity to Brain Slices of Neonatal Rat

目的:观察不同浓度的依达拉奉(Eda)预处理对大鼠大脑皮层脑片谷氨酸(Glu)损伤的保护作用.方法:体外离体培养新生大鼠皮层脑片,将脑片随机分成对照组、Glu组、50 μmol/L Eda( Eda 50)组、100 μnol/LEda( Eda100)组;对照组脑片用正常培养基培养,Glu组脑片给予含有1mmol/L Glu培养基作用30 min,Eda两组脑片在Glu损伤前给予不同浓度Eda预处理24h,接着给予含有1mmol/L Glu培养基作用30 min,Glu损伤后24h用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色定量分析脑片活性并计算组织损伤百分率,测定脑片乳酸脱氢酶(LDH)释放量及释放率.结果:与对照组相比,Glu组和不同浓度Eda组脑片LDH释放率增高,TIC染色OD490值下降;与Glu组比较,不同浓度Eda组脑片LDH释放率降低,TTC染色的OD490值增高,Eda100组脑片LDH释放率低于Eda50组,TTC染色0D490值高于Eda50组.结论:依达拉奉预处理对Glu损伤后大鼠大脑皮层脑片有剂量依赖性的神经保护作用.     

依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探讨依达拉奉对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经功能损伤、细胞凋亡及P-JAK2,P-STAT3蛋白表达的影响.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、生理盐水治疗组、依达拉奉治疗组,采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,治疗组于脑缺血开始时及再灌注后12 h分别腹腔注射依达拉奉3 mg/kg或等量生理盐水,于24 h后进行大鼠神经行为学评分;应用免疫组织化学及Western b1otting检测P-JAK2,P-STAT3蛋白表达水平的变化;利用原位缺口末端标记法(TUNEL法)研究神经细胞凋亡的变化.结果 与假手术组及生理盐水治疗组相比,依达拉奉治疗组大鼠神经行为学评分明显减少(P＜0.01);P-JAK2,P-STAT3免疫阳性细胞及蛋白表达明显减少(P＜0.01);凋亡细胞也减少(P＜0.01).结论 依达拉奉尚能通过抑制与炎性细胞因子及氧化应激有密切关系的JAK2/STAT3信号转导通路显著减轻脑缺血再灌注损伤后神经损伤.     

依达拉奉对大鼠小胶质细胞缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 观察依达拉奉对离体培养大鼠小胶质细胞缺血再灌损伤后炎症因子表达的影响,以及Janus激酶2/信号传导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路是否参与依达拉奉的神经保护。 方法 离体培养Sprague-Dawley乳鼠小胶质细胞,将细胞接种于细胞培养板随机分为3组(n_i=20):正常对照组(C组)常规培养;谷氨酸组(Glu组)给予含有1 mmol/L的Glu的培养基孵育30 min建立小胶质细胞缺血再灌损伤模型;依达拉奉组(Eda组)于细胞建立损伤模型后换成含有100 μmol/L的Eda培养基孵育24 h;Glu损伤后24 h通过CCK-8测细胞存活率,Real-Time PCR检测JAK2、STAT3的mRNA水平;用ELASA法测定TNF-α和IL-2的变化;用流式细胞仪测细胞凋亡率。 结果 与C组比较,Glu组细胞存活率降低,JAK2和STAT3的mRNA表达增加,细胞上清液的TNF-α和IL-2浓度增加,细胞凋亡率增加(P＜0.05);与Glu组比较,Eda组细胞存活率增加,JAK2和STAT3的mRNA表达减少,细胞上清液中TNF-α和IL-2浓度降低,细胞凋亡率下降(P＜0.05)。 结论 依达拉奉减少了大鼠小胶质细胞缺血再灌注损伤后TNF-α和IL-2表达,JAK2/STAT3信号通路部分参与了炎症因子的表达。      

白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究白藜芦醇对β淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用,从而探索其对中枢神经保护作用的可能机制.方法 采用不同浓度的白藜芦醇预处理星形胶质细胞12 h.继之用25 μmol/L浓度的β淀粉样蛋白进行损伤,然后检测细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)以及采用DHE探针测定荧光强度间接反映胞内活性氧(ROS)含量,以评价白藜芦醇对细胞氧化损伤的保护作用.结果 受β淀粉样损伤的细胞存活率明显下降(P<0.05),而用10、100 μmol/L白藜芦醇预处理则能提高该细胞的存活率(P<0.05),但1μmol/L白藜芦醇预处理的细胞存活率并无明显变化;荧光检测显示,蛋白损伤使得荧光强度增高(P<0.05),1μmol/L白藜芦醇处理组荧光强度大于阳性对照组,其余各组荧光强度均小于阳性对照组(P<0.05);蛋白损伤可导致细胞LDH漏出量增加(P<0.05),1 μmol/L白藜芦醇使得LDH漏出增加(P<0.05),而10、100μmol/L白藜芦醇处理组,细胞LDH漏出量明显减少(P<0.05).结论 星形胶质细胞受到β淀粉样蛋白损伤后,白藜芦醇能减少LDH的漏出及有效降低胞内ROS水平,从而显示对星形胶质细胞具有保护作用.     

依达拉奉对原代海马神经元缺氧复氧损伤的保护作用

目的:研究依达拉奉对原代培养海马神经元缺氧复氧损伤的保护机制.方法:建立离体海马神经元缺氧复氧的细胞损伤模型,实验分组为正常对照组、缺氧复氧组、依达拉奉干预组,其中依达拉奉干预浓度分为1、10、100和300 μmol/L.观察海马细胞四甲基偶氮唑盐(MTT)代谢率、丙二醛(MDA)含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的变化,流式细胞仪观察细胞凋亡.结果:与缺氧复氧组相比,依达拉奉100μmol/L组和300 μmol/L组的MTT代谢率显著增高(P＜0.01),MDA含量降低(P＜0.05),NOS活性降低(P＜0.05),细胞凋亡率降低(P＜0.01).结论:依达拉奉能够有效地抑制脂质过氧化作用,降低MDA及NOS活性,减少细胞凋亡率,对缺氧损伤的神经元具有显著的神经保护作用.     

不同浓度依达拉奉预处理对新生大鼠脑片谷氨酸损伤的保护作用

目的:观察不同浓度的依达拉奉(Eda)预处理对大鼠大脑皮层脑片谷氨酸(Glu)损伤的保护作用。方法:体外离体培养新生大鼠皮层脑片,将脑片随机分成对照组、Glu组、50μmol/L Eda(Eda 50)组、100μmol/LEda(Eda100)组;对照组脑片用正常培养基培养,Glu组脑片给予含有1 mmol/L Glu培养基作用30 min,Eda两组脑片在Glu损伤前给予不同浓度Eda预处理24 h,接着给予含有1 mmol/L Glu培养基作用30 min,Glu损伤后24 h用2,3,5-三苯基四氮唑(TTC)染色定量分析脑片活性并计算组织损伤百分率,测定脑片乳酸脱氢酶(LDH)释放量及释放率。结果:与对照组相比,Glu组和不同浓度Eda组脑片LDH释放率增高,TTC染色OD490值下降;与Glu组比较,不同浓度Eda组脑片LDH释放率降低,TTC染色的OD490值增高,Eda100组脑片LDH释放率低于Eda50组,TTC染色OD490值高于Eda50组。结论:依达拉奉预处理对Glu损伤后大鼠大脑皮层脑片有剂量依赖性的神经保护作用。