细胞自噬对吉非替尼抑制肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨细胞自噬对吉非替尼（Gefitinib）抑制非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖的影响。方法 采用Western blotting和LC3抗体检测自噬标志物LC3Ⅱ的含量,判断Gefitinib是否诱导NSCLC Calu6和H460细胞自噬。采用增强绿色荧光蛋白（EGFP）-LC3b质粒转染NSCLC细胞系Calu6和H460,再用40 μmol/L Gefitinib处理细胞48 h,观察绿色荧光蛋白（GFP）的分布情况。分别采用细胞自噬诱导剂依维莫司（Everolimus）、Gefitinib和Gefitinib联合Everolimus处理H460细胞,药物处理10 d后用结晶紫染色,显微镜下统计克隆数,计算不同药物刺激后细胞克隆形成数和药物对H460细胞的抑制率。结果 Western blotting检测显示,Gefitinib 40 μmol/L处理细胞48 h后,明显增加LC3Ⅱ的积累,绿色荧光呈散点状分布。经Everolimus、Gefitinib和Gefitinib联合Everolimus处理后,H460细胞克隆形成数差异有统计学意义（P<0.05）,其中Gefitinib联合Everolimus处理对H460细胞的抑制率最强,两者之间有协同作用。结论 Gefitinib能够诱导NSCLC细胞自噬,并且增加细胞自噬能增强Gefitinib对肺癌细胞增殖的抑制率。     

阿法替尼联合Mithramycin A对人肝癌 HepG2细胞增殖､凋亡及基因表达的影响

目的:观察阿法替尼(afatinib)联合Mithramycin A(MIT)对人肝癌 HepG2 细胞增殖?凋亡的作用以及相关因子表达的影响?方法:将afatinib与MIT单独或联合作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT法测定药物对细胞生长的抑制率,并运用倒置显微镜观察药物作用后细胞形态学变化;以流式细胞技术测定药物对细胞周期和凋亡的影响;以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR) 定量测定细胞内表皮生长因子受体(EGFR)?Sp1?Sp3以及增殖?凋亡相关因子 Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2?Caspase3?Caspase9和p53的表达变化?结果:afatinib与MIT均能有效抑制肝癌HepG2 细胞的生长,并且呈现时间依赖性,两药联合作用能明显增加抑制率(P均 < 0.05);联合用药48 h后,可诱导HepG2细胞产生G0/G1期阻滞并诱发凋亡,抑制作用及凋亡率均较单药组增高(P均 < 0.05);另外,给药72 h后,单药组均出现不同程度的Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2 mRNA 表达量下降,并伴有Caspase3基因上调?单用afatinib组同时出现Caspase9和p53的表达上调,MIT组检测到EGFR?Sp1和Sp3的同步减少,联合用药组以上改变较单药组明显(P均 < 0.05)?结论:afatinib联合MIT能有效抑制肝癌 HepG2 细胞增殖?促进凋亡,这可能与药物作用后Cyclin-D1?Cyclin-E2?Bcl-2下调以及Caspase3?Caspase9和p53的表达上调相关?此项研究可能为以EGFR为中心的肝癌联合治疗提供新方向?     

敲低膜联蛋白A7对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的：：观察靶向敲低人乳腺癌MCF-7细胞膜联蛋白A7(AXNA7)的表达对MCF-7细胞凋亡的影响。方法：实验分为3组,以靶向ANXA7的siRNA转染MCF-7细胞为siRNA干扰组,另设阴性对照组、空白对照组,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染后MCF-7细胞ANXA7的表达情况,应用流式细胞术检测ANXA7低表达对MCF-7细胞凋亡的影响。结果：转染后,siRNA干扰组细胞ANXA7的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);敲低ANXA7后,MCF-7细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。结论：ANXA7低表达可促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡。     

吉非替尼的合成

吉非替尼(商品名：易瑞沙,Iresa^TM)由阿斯利康公司研制,主要用于非小细胞肺癌治疗,是表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂的新型抗肿瘤产品。其化学名为4-(3-氯-4-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉基丙氧基)喹唑啉。     

苦藏花素协同吉非替尼抑制非小细胞肺癌细胞增殖的作用研究

目的 观察苦藏花素协同吉非替尼对人肺癌A549细胞增殖的抑制作用。方法 采用Cell Counting Kit-8（CCK8）检测单独用药（苦藏花素、吉非替尼）和联合用药（苦藏花素+吉非替尼）组不同浓度药物处理24,48,72h对A549细胞增殖的抑制作用;使用两药相互作用系数（Coefficient of Drug in Interaction, CDI）来评价吉非替尼和苦藏花素的相互作用性质。结果 苦藏花素和吉非替尼对A549细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,在一定范围内与药物浓度呈正相关,且存在时间依赖性;其中,160ug/ml剂量的苦藏花素和低剂量吉非替尼(10ug/ml)协同抑制作用,可以达到高剂量吉非替尼(20ug/ml)单独用药的抑制作用。160ug/ml的苦藏花素和一定浓度范围内的吉非替尼CDI值小于1。结论 苦藏花素联用半量吉非替尼可以达到全量使用吉非替尼的抑制效果,提示苦藏花素联用吉非替尼可以协同抑制肺癌细胞A549的增殖。     

吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的:评价采用吉非替尼治疗化疗失败的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及不良反应。方法:42例化疗失败的局部晚期或转移性NSCLC患者予吉非替尼250mg每日1次口服直至病情进展或出现不可耐受的不良反应,评价近期疗效、生存期、生活质量及毒副反应。结果:CR1例、PR11例、SD18例、PD12例,有效率为28.57、临床受益率为71.43、中位无疾病进展时间为4个月、中位生存期为10个月、1年生存率为45.23;生活质量明显改善者占61.90;药物不良反应多为Ⅰ～Ⅱ度皮疹及腹泻。结论:吉非替尼应用于化疗失败的局部晚期或转移性NSCLC的二线或三线治疗疗效确切,不良反应轻微,而且可以明显改善患者的生活质量。     

吉非替尼与核糖核酸联合治疗非小细胞肺癌7例报告

文献报告指出，非小细胞肺癌（NSCLC）占所有肺癌的75％．80％，且诊断时多数已为晚期，生存率和预后都很差，化疗是主要的治疗手段。但有部分患者化疗无效或不能耐受化疗，有待于临床开辟新的治疗途径。我们采用吉非替尼联合核糖核酸治疗晚期非小细胞肺癌，观察其有效性及其不良反应，结果报告如下。     

吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的:临床研究显示吉非替尼(gefitinib),用于治疗既往接受过化学治疗的局部晚期或转移性非小细胞肺癌(NSCLC)疗效显著,毒副反应轻。本研究观察吉非替尼治疗既住接受过化学治疗的晚期NSCLC的临床疗效和毒副反应。方法:吉非替尼250mg(1片),1日1次,口服,空腹或与食物同服。结果:全组50例,均可评价疗效,总有效率为22.0%(11/50),其中完全缓解(CR)2.0%(1/50),部分缓解(PR)20.0%(10/50),无变化(NC)50.0%(25/50),疾病控制率(CR+PR+NC)72.2%,中位无进展生存期14月。无治疗相关死亡,主要毒副反应为皮疹、腹泻。结论:吉非替尼治疗既往接受过化学治疗的晚期NSCLC疾病控制率较高、不良反应患者可耐受,是治疗晚期NSCLC有效安全的药物。     

吉非替尼初治有效的非小细胞肺癌进展后吉非替尼再治疗的疗效评估

1文献来源 Oh I J, Ban H J, Kim KS,et al. Retreatment of Gefitinib in patients with non-small-cell lung cancerwho previously controlled arm, open-label, phase Ⅱ 2012, 77（1）： 121-127. to Gefitinib： A single- study[J]. Lung Cancer. 2 证据水平     

吉非替尼治疗非小细胞肺癌的研究进展

吉非替尼是一种新型的分子靶向抗癌药物，它选择性抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶而发挥作用。大规模临床研究显示，吉非替尼对于晚期非小细胞肺癌具有明显的抗肿瘤活性，并能较快改善患者的临床症状，提高晚期生活质量。与传统化疗药物相比，吉非替尼具有瞄准特定的分子靶点、不良反应小和特异性强等优点。2003年5月，美国FDA通过快速审批程序，批准吉非替尼应用于临床。目前它主要用于终末期非小细胞肺癌的二线和三线治疗。     

大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的研究

目的研究大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法用不同浓度的大蒜素作用于体外培养的HepG2细胞,采用MTT法检测大蒜素对HepG2细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察HepG2细胞的形态学变化,流式细胞术检测大蒜素对HepG2细胞周期和凋亡率的影响。结果大蒜素可抑制人肝癌HepG2细胞增殖,且具有明显剂量和时间依赖性,24h、48h和72h大蒜素抑制HepG2细胞的IC50分别为(48.26±1.66)μg/mL、(31.89±1.51)μg/mL和(23.79±1.32)μg/mL。32μg/mL大蒜素作用HepG2细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征。流式细胞术检测表明大蒜素作用HepG2细胞后,可将细胞阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用,可能与诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。     

真核表达质粒pIRES2-eGFP-Annexin A2的构建及其在293T细胞中的表达

目的:构建含有人Annexin A2基因的真核表达质粒plRES2-eGFP-Annexin A2,并在真核细胞293T中表达.方法:将质粒pCMV5.Annexin A2上Annexin A2基因酶切后与真核表达质粒plRES2-eGFP连接,酶切鉴定及测序正确后,脂质体介导法转染293T细胞,荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测其基因和蛋白的表达.结果:构建的质粒plRES2eGFP-Annexin A2转染293T细胞后,目的基因mRNA和蛋白表达均明显增高.结论:成功构建pIRES2-eGFP-Annexin A2质粒并表达蛋白,为研究Annexin A2的生物学功能奠定了基础.     

维拉帕米对肝癌细胞株HepG2细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨钙离子通道阻滞剂维拉帕米(VR)对人肝痛细胞株HepG2细胞增殖、DNA合成及细胞迁移的影响.方法 在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的VR(0、1、5、10、1 5、20 μg/mL),采用甲基四唑蓝(MTT)法测定VR对HepG2细胞增殖的影响;5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'...     

古抑菌素A对人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨去乙酰化转移酶抑制剂古抑菌素A(TSA)对人肝癌细胞株HepG2增殖及凋亡的影响.方法 体外培养人肝癌细胞株HepG2,以不同浓度的TSA(5、50、250、500、1 000、2 000 nmol/L)处理24 h后在倒置显微镜和透射电镜下观察HepG2形态的变化,用CCK-8法检测细胞增殖活性.用TUNEL法检测对照组(加等量DMSO)和500 nmol/L TSA组的细胞凋亡率,用免疫细胞化学法检测两组增殖凋亡调控相关基因caspase-3、bax和bcl-2的蛋白表达.结果 倒置显微镜下,经TSA处理的细胞增殖速度显著减慢;透射电镜下,HepG2出现凋亡早期改变.CCK-8法测定结果显示,对照组和不同浓度TSA(5、50、250、500、1 000、2 000 nmol/L)组HepG2的增殖活性分别为(0.637±0.032)、(0.552±0.016)、(0.499±0.031)、(0.393±0.007)、(0.321±0.026)、(0.277±0.010)和(0.275±0.015),组间比较差异有统计学意义(P＜0.01);且不同浓度的TSA对HepG2的增殖抑制作用有明显的剂量依赖关系.500 nmol/L TSA组细胞凋亡率显著高于对照组,且其凋亡相关蛋白caspase-3和bax的表达较对照组显著增强,差异有统计学意义(P＜0.05);而两组bcl-2的蛋白表达间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TSA可通过增加caspase-3、bax的蛋白表达,诱导细胞凋亡而对人肝癌细胞株HepG2具有增殖抑制作用.     

载基因磁性脂质微泡的制备及对人HepG2细胞的生长抑制作用研究*

目的 探讨自制载基因磁性脂质微泡的制备方法及该微泡在联合磁感应热疗和基因治疗下对人HepG2细胞的生长抑制作用。方法 采用机械振荡法制备载基因磁性脂质微泡。对磁性脂质微泡进行表征分析及检测Fe3O4磁性脂质微泡的升温情况。利用pEGFP-C1观察磁性脂质微泡介导外源基因转染的效率。MTT法,流式细胞仪评价载基因磁性脂质微泡对人HepG2细胞生长情况的影响。结果 载基因磁性脂质微泡粒径小,性质稳定,具有良好的磁响应性能,可将外源WtP53基因转染至HepG2细胞系并高效表达,在磁场作用下具有升温恒温能力,在联合磁感应热疗和基因治疗下对人HepG2细胞有生长抑制作用。结论 载基因磁性脂质微泡为肿瘤的联合治疗开辟新的思路。     

WWP2干扰对Huh7肝癌细胞的增殖、凋亡及细胞周期的影响研究

目的 探讨WWP2对Huh7肝癌细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响研究。方法 通过实时定量PCR （qPCR）、RNA干扰、流式细胞仪分析细胞周期及凋亡,了解WWP2在Huh7肝癌细胞周期的中作用。结果 在肝癌组织中,WWP2 mRNA水平显著性表达;敲除细胞中的WWP2会抑制细胞增殖、使细胞停滞在G₁期,并诱导细胞凋亡。结论 WWP2有可能通过调控细胞凋亡而促进肝癌细胞生长。     

川芎多糖对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

目的探讨川芎多糖抑制人肝癌细胞株HepG2增殖,诱导细胞凋亡的作用机制。方法体外培养人肝癌细胞株HepG2,加入不同浓度的川芎多糖,经MTT法检测HepG2细胞的活性,观察药物作用后的细胞形态,并采用流式细胞术检测HepG2细胞周期。结果 HepG2细胞的存活率随给药浓度的增大而降低,抑制作用呈现出明显的剂量依赖性(P0.05);和空白组比较,药物作用48h后给药组G1期细胞百分含量明显升高(P0.01),S期细胞百分含量明显减少(P0.01)。结论川芎多糖对人肝癌HepG2细胞有明显的体外活性抑制作用,可能是通过将肿瘤细胞阻滞在G1期,从而诱导它的凋亡。     

疏肝化痰祛瘀方对乳腺癌细胞增殖能力调节的机制研究

目的 观察疏肝化痰祛瘀方含药血清对人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的调节。方法 应用疏肝化痰祛瘀方中药汤剂给予大鼠灌胃,取大鼠腹主动脉血制备含药血清。将人乳腺癌细胞MCF-7在体外进行传代培养,分3组进行干预其生长,分别为空白组、对照组(加入表阿霉素)、实验组(加入疏肝化痰祛瘀方含药血清)。3组分别培养24、48及72h,检测细胞增殖及凋亡情况,对比各组不同作用时间细胞增殖抑制率及凋亡率。结果 疏肝化痰祛瘀方对MCF-7细胞体外增殖具有一定的抑制作用,随着作用时间的延长,抑制作用逐渐增强(P<0.05),与表阿霉素组作用相似;疏肝化痰祛瘀方可诱导MCF-7细胞凋亡,与作用时间呈正相关(P<0.05)。结论 疏肝化痰祛瘀方含药血清具有抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖与诱导其凋亡的作用,与作用时间呈正相关,提示该方剂发挥临床治疗乳腺癌的疗效机制所在。     

田基黄不同提取部位对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用

目的 探讨田基黄不同提取部位对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用.方法 田基黄以不同极性的有机溶剂进行较系统的分级萃取得到不同的提取部位.体外培养人肝癌细胞HepG2细胞株,用倒王相差显微镜观察细胞在田基黄不同提取部位的作用后在形态学变化,用MTT法检测在不同的作用时间下,不同提取部位对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用,计算细胞存活率.结果 一定浓度的石油醚提取部位,二氯甲烷提取部位,乙酸乙酯提取部位,正丁醇提取部位均会抑制肝癌细胞H叩G2的生长,且呈剂量依赖性.结论 四种田基黄提取部位能有效的抑制人肝癌细胞HepG2的生长.     

上调miRNA-101表达对人肝癌HepG2细胞系增殖的影响

目的通过上调人肝癌HepG2细胞株中miRNA-101表达,探讨miRNA-101抑制靶基因EZH2对肝癌细胞增殖的影响。方法人工合成miRNA-101模拟体并转染至HepG2肝癌细胞株中,利用MTT法检测细胞增殖抑制、流式细胞仪检测细胞周期、实时荧光定量PCR检测EZH2 mRNA表达。结果 miRNA-101模拟体转染组HepG2细胞增殖活性明显低于阴性对照组及空白对照组(P<0.05),miRNA-101模拟体组G0/G1期细胞明显增多,为(74.71±4.6)%,S期细胞减少,为(14.57±1.1)%(P均<0.05);miRNA-101模拟体组EZH2 mRNA较阴性对照组和空白对照组表达下降(P<0.05)。结论上调miRNA-101可抑制EZH2基因表达,对人肝癌细胞增殖活性具有负调控作用。