积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用

目的 探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。方法 采用光镜、电镜、∧3H－TdR、∧3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合成和胶原蛋白的合成。结果 积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构,布且能抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。结论 积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作用,其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。     

积雪草甙对体外培养的成纤维细胞的作用

【目的】探讨积雪草甙治疗增生性瘢痕的作用机制。【方法】采用光镜、电镜、3H-TdR、3H脯氨酸掺入及MTT比色等方法检测成纤维细胞核DNA合成和胶原蛋白的合成。【结果】积雪草甙不仅能影响成纤维细胞的超微结构,而且能抑制成纤维细胞增殖及胶原蛋白的合成。【结论】积雪草在预防和治疗增生性瘢痕中有重要作用,其机制可能与抑制成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成有关。     

积雪草苷对人成纤维细胞增殖及其分泌胶原蛋白的影响

[目的]探讨积雪草苷对人成纤维细胞增殖及其分泌胶原蛋白的影响。[方法]体外培养人成纤维细胞,分别采用XTT法及氯胺T法观察不同剂量的积雪草苷对人成纤维细胞的增殖情况及其分泌羟脯氨酸的含量。[结果]与空白对照组相比,实验组中成纤维细胞数量明显增加,上清液中羟脯氨酸含量升高(P0.05)。[结论]在有效浓度下,积雪草苷能促进体外培养人成纤维细胞增殖及对胶原蛋白合成有明显的影响。     

积雪草甙对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与Smad7蛋白的影响

目的研究积雪草甙对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及对Smad7蛋白的影响.方法用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞.应用流式细胞术、免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot技术结合光密度扫描分析,观察积雪草甙对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期、凋亡和Smad7在细胞中的定位及其mRNA和蛋白含量的改变.结果积雪草甙可抑制瘢痕的成纤维细胞从S期进入M期,增加瘢痕成纤维细胞中Smad7 mRNA和蛋白的含量.结论积雪草甙抑制瘢痕的作用可能部分通过增加抑制性Smad7蛋白.     

氧化型染发剂主要成分对皮肤细胞DNA、脂质和蛋白质合成能力的影响

目的 :探讨氧化型染发剂主要成分对皮肤角朊细胞DNA和脂质合成能力及对真皮成纤维细胞蛋白质合成能力的影响。方法 :用氧化型染发剂的 2种主要成分双氧水 (H2 O2 )和对苯二胺 (PPD)及两者的混合物对大鼠角朊细胞和真皮成纤维细胞进行染毒 ,然后进行放射性核素标记产物的掺入 ,在BeckmanLS 5 0 0 0TD液体闪烁仪上测定cpm值。结果 :经12h染毒后 ,受试样品对大鼠皮肤细胞的DNA、脂质和蛋白质合成均有不同程度的抑制作用 ,随着染毒剂量的升高 ,细胞毒性逐渐增强 ,染毒剂量与cpm值之间呈剂量反应关系。结论 :氧化型染发剂对皮肤细胞DNA、脂质和蛋白质合成能力有抑制作用 ,可能会破坏皮肤的结构和功能     

三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长影响研究

目的 探讨积雪草甙、苦参碱、川芎嗪等中药有效成分对皮肤瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法 体外培养瘢痕疙瘩成纤雏细胞，分别加入不同浓度的积雪草甙、苦参碱、川芎嗪。通过倒置显微镜观察、MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶检测等方法分别观测三种中药有效成分对瘢痕成纤维细胞生长的影响。结果 与空白对照组相比，实验组中加入积雪草甙0.5mg/ml、苦参碱1．0mg/ml、川芎嗪1．9mg/ml后成纤维细胞数量均明显减少；OD值降低（P〈0．05）；当积雪草甙浓度高于5mg/ml时乳酸脱氢酶含量超出正常范围。结论 有效浓度下，三种中药有效成分均能抑制皮肤瘢痕成纤维细胞生长，其作用强度积雪草甙〉苦参碱〉川芎嗪。     

血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板衍生生长因子-BB对培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞胶原蛋白合成的影响.方法:采用培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞,应用3H-脯氨酸掺入方法,观察血小板衍生生长因子-BB对3种细胞胶原蛋白合成的影响.结果:血小板衍生生长因子-BB可促进处于静止状态的成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成,并呈现出明显的浓度依赖关系,成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成分别在30 ng/ml和40 ng/ml时达到高峰,血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.在30 ng/ml的血小板衍生生长因子-BB作用下,成纤维细胞和平滑肌细胞分别在36 h和48 h时胶原蛋白合成达到高峰.结论:血小板衍生生长因子-BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞和成纤维细胞的胶原蛋白的合成,对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素对分离培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖及胶原蛋白合成的影响.方法 采用大鼠的腹主动脉血管平滑肌细胞分离培养,应用3H-TdR和3H-脯氨酸掺人方法检测胰岛素对大鼠VSMCs干预后,VSMCs内DNA合成以及胶原蛋白合成.结果 胰岛素可促进处于静止状态的大鼠VSMCs DNA及胶原蛋白的合成,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 nmol/L的浓度时DNA及胶原蛋白的合成达到高峰,DNA及胶原蛋白分别处于36 h和48 h时合成最为显著.结论 胰岛素可明显促进培养的VSMCs增殖及胶原蛋白的合成.     

趋化因子CXCL12可能参与白细胞介素17A对小鼠肺成纤维细胞的活化

目的: 研究IL-17A促进小鼠肺成纤维细胞活化及趋化因子CXCL12在其中的作用。方法: 以雄性BALB/c小鼠为研究对象,小鼠腹腔注射重组小鼠IL-17A后取小鼠肺组织。采用实时逆转录PCR和蛋白质印迹法检测小鼠肺组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白表达,采用免疫组织化学法和实时逆转录PCR法测定肺组织中趋化因子CXCL12的表达。分离培养正常小鼠原代肺成纤维细胞,采用免疫荧光染色法和光学显微镜观察鉴定原代肺成纤维细胞。将分离的肺成纤维细胞与不同浓度的重组小鼠IL-17A共培养后收集细胞及上清液,采用实时逆转录PCR法测定细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12的mRNA水平,采用ELISA法测定培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12蛋白水平。结果: 与对照组比较,重组小鼠IL-17A处理后小鼠肺组织中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA和蛋白水平均升高（均P < 0.01）。与不同浓度的重组小鼠IL-17A共培养后,小鼠肺成纤维细胞表达α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白和CXCL12的mRNA明显增加（均P < 0.01）,其培养基上清液中Ⅰ型胶原蛋白、CXCL12的浓度也明显升高（均P < 0.01）,且呈剂量依赖性。结论: IL-17A能促进肺成纤维细胞的活化并转化为肌成纤维细胞,分泌Ⅰ型胶原蛋白明显增加,促进细胞外基质的沉积,从而导致肺纤维化的发生和发展,而活化的成纤维细胞分泌的趋化因子CXCL12可能参与了这个过程。     

麦冬对甲基磺酸甲酯诱发的小鼠精子非程序DNA合成的抑制作用

目的:观察中草药麦冬对雄性小鼠生殖细胞遗传物质损伤的防护作用.方法:采用雄性小鼠生殖细胞非程序DNA合成实验.结果:麦冬各剂量组诱导的非程序DNA合成与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05);6.8～13.6 g*kg-1剂量,麦冬对甲基磺酸甲酯所诱导的非程序DNA合成有明显抑制作用(P<0.01),并且随着麦冬浓度的增加,其抑制作用逐渐增强,超过一定剂量,其抑制作用不再增强.结论:麦冬对小鼠生殖细胞遗传物质具有保护作用.     

积雪草苷对增生性瘢痕中转化生长因子-βmRNA及基质金属蛋白酶类表达的影响

目的探讨积雪草苷对人增生性瘢痕中转化生长因子β（TGF-β）mRNA和基质金属蛋白酶及其组织抑制剂（MMPS／TIMPS）表达的影响。方法临床上收集烧伤后5～8个月经积雪草苷治疗和非积雪草苷治疗的增生性瘢痕标本各9例。采用原位杂交和免疫组织化学方法，分别检测增生性瘢痕中TGF-β1 mRNA、TGF-β2 mRNA、TGF-β3 mRNA及MMP1、MMP2、TIMP1、TIMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平，并利用图象分析方法进行结果分析。结果TGF-β mRNA在增生性瘢痕中主要表达于成纤维细胞胞质，经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TGF-β1 mRNA表达明显减少，胞质淡染，统计学上与非积雪草苷治疗组TGF-β1 mRNA表达有显著性差异（P〈0．01）；而TGF-β1，mRNA在积雪草苷治疗的增生性瘢痕中表达增多，明显高于非积雪草苷治疗组的TGF-β1 mRNA表达（P〈0．05）。MMPS／TIMPS在增生性瘢痕中也表达于成纤维细胞胞质，经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中TIMP1。表达明显减少，与非积雪草苷治疗组TIMP1表达有显著性差异（P〈0．01）；而MMP1、MM2,及TIMP2在上述两组中表达无显著性差异（P〉0．05）。Ⅰ、Ⅲ型胶原在增生性瘢痕中表达．经积雪草苷治疗的增生性瘢痕中Ⅰ型胶原排列整齐，含量较少，与非积雪草苷治疗组有显著差异（P〈0．05）；而Ⅲ型胶原在两组增生性瘢痕中表达无显著性差异（P〉0．05）。结论积雪草苷通过降低TGF-β1 mRNA表达和增加TGF-β3 mRNA的表达，引起TIMP1表达明显减少，从而MMP1／TIMP1相对比例增加，达到促进Ⅰ型胶原降解，减轻瘢痕增生的作用。     

Studies on the inhibitory effect of tetrandrine on silica-induced fibrogenesis in vitro

Two cell culture systems composed of rat peritoneal macrophages and 2BS fibroblasts were used to study the inhibitory action of tetrandrine on collagen and glycosaminoglycan synthesis. The activation of silica-treated macrophage supernatants stimulated collagen synthesis by 2BS fibroblast cells. Tetrandrine had an inhibitory effect on the biosynthesis of collagen and glycosaminoglycans. The increase in the content of hydroxyproline, representing collagen, was verified by comparing it with that of DNA.     

抗转化生长因子β_1(anti-TGF-β_1)对瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的　探讨抗转化生长因子β1(anti-TGF - β1)对瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响及意义。方法　用电镜观察anti-TGF - β1作用后瘢痕成纤维细胞的形态学变化 ,以及用MTT法和3 H -脯氨酸掺入等方法检测anti-TGF - β1对体外培养的瘢痕成纤维细胞的增殖及胶原蛋白合成的影响。结果　anti -TGF - β1能明显影响成纤维细胞的超微结构 (细胞核、线粒体、粗面内质网等 )。anti -TGF - β1能抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成 (P <0 .0 1) ,在一定范围内 (10 μg/ml)呈剂量 -效应关系。抑制作用在 10 μg/ml时最大 ,抑制率达 72 %。结论　anti-TGF - β1能中和TGF - β1,促进成纤维细胞增殖和胶原合成的作用 ;提示anti-TGF - β1的应用可能为临床瘢痕的治疗提供新的途径。     

正常人皮肤成纤维细胞不同培养条件下的生物学特性

目的 观察成纤维细胞在不同培养条件下生长,增殖,代谢及蛋白质合成等情况,探讨成纤维细胞的最佳培养模型。方法 将正常皮肤中的成纤维细胞（NsFb）分离出来并进行原代及继代培养,之后建立不同的成纤维细胞培养系统,分别利用绘制细胞生长曲线,^3H-胸腺嘧啶（^3H-TdR）掺入及^3H-脯氨酸掺入等方法观察细胞的增殖,DNA代谢及胶原合成等情况,研究细胞在不同条件下的生物学特性。结果 成纤维细胞在单层及纤维蛋白胶中培养时细胞的增殖,代谢及蛋白质合成等生物学功能均明显强于两种胶原凝胶中培养时的情况。结论 以纤维蛋白胶为支架的三维培养系统能更好地模拟生理条件下创面愈合时成纤维细胞的生物学特性。     

血小板源伤口愈合因子促糖尿病大鼠难愈伤口愈合的机理探讨

本实验以糖尿病大鼠海绵死腔伤为难愈伤口模型结合离体细胞培养,研究血小板源伤口愈合因子（ＰＤＷＨＦ）改善难愈伤口愈合的作用并探讨其可能机理。结果表明,局部应用ＰＤＷＨＦ后,伤口组织总ＤＮＡ〈羟脯氨酸含量增高,组织学表现为肉芽组织 成纤维细胞显著增生,胶原纤维沉积增加,离体实验发现ＰＤＷＨＦ可促进成纤维细胞的分化和增殖,提示,ＰＤＷＨＦ可通过促进伤口肉芽组织中的细胞合成代谢及增殖,增加胶原的合成与沉积     

风湿性心脏病人心瓣膜成纤维细胞的体外培养及其胶原合成

目的：观察风湿性心脏病人瓣膜成纤维细胞的胶原合成，为研究风湿性心脏病瓣膜纤维化的发病机制建立基础。方法：采用消化组织块培养法建立人二尖瓣和主脉瓣成纤维细胞体外培养方法，对５例风湿性心脏病人和５例尸检中除外心血管疾病和胶原系统疾病的二尖瓣和主动脉瓣成纤维细胞进行了体外培养，并用３Ｈ－脯氨酸测定瓣膜成纤维细胞的胶原合成。结果：二尖瓣和主动脉瓣的瓣膜成纤维细胞其形态、生长方式及胶原合成差异均不明显，风湿性心脏病瓣膜成纤维细胞的胶原合成明显高于对照组。结论：体外培养的风湿性心脏病人瓣膜成纤维细胞胶原合成明显增加     

The role of calcineurin in the lung fibroblasts proliferation and collagen synthesis induced by basic fibroblast growth factor

Objective To investigate the role of calcineurin (CaN) in the lung fibroblast proliferation and collagen synthesis induced by basic fibroblast growth factor (bFGF).Methods We used Western blot and immunohistochemical methods for investigating the content and distribution of calcineurin in the lung tissue. Calcineurin activity in different tissues was measured using 32P-labelled substrate. In the primary culture of lung fibroblasts, 3H-thymidine (3H-TdR) and 3H-proline incorporation methods were used to study the effect of cyclosporin A (CsA), an inhibitor of calcineurin, on the lung fibroblast DMA and collagen synthesis stimulated by bFGF.Results We found that calcineurin was expressed in lung tissue and has phosphatase activity (7.1±2.0 pmol Pi/mg pr/min). CsA (10~(-8)-10~(-6) mol/L) inhibited lung fibroblast 3H-TdR incorporation induced by bFGF in a dose-dependent manner, with the inhibitory rates by 20% , 46% and 66% (P< 0.01). CsA (10~(-7) -10~(-6) mol/L) inhibited 3H-proline incorporation in lung     

血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖及细胞外基质的影响

目的：研究血府逐瘀汤对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及细胞外基质合成的影响,探讨其抑制心肌纤维化可能的作用机制。方法：采用胰酶消化法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞（cardiac fibroblast,CF）,建立AngⅡ诱导的心肌纤维化模型。实验分组为：空白对照组,AngⅡ组,5%、10%、15%血府逐瘀汤组和缬沙坦组。空白对照组以对照组鼠血清温育,其余各组先以AngⅡ10-6mol/L刺激24h后,再分别以对照组鼠血清,5%、10%、15%血府逐瘀汤含药血清,缬沙坦含药血清温育24h。采用四氮唑蓝比色法检测CF增殖,羟脯氨酸法检测胶原含量,放射免疫法检测细胞培养上清中透明质酸（hy-aluronic acid,HA）和Ⅲ型前胶原（procollagenⅢ,PCⅢ）水平,酶联免疫吸附测定法检测上清中纤维连接蛋白（fibronectin,FN）表达。结果：与空白对照组比较,AngⅡ10-6mol/L作用CF24h显著上调CF增殖指数和DNA合成（P〈0.01）,增加胶原含量（P〈0.01）,增加上清液中FN、HA和PCⅢ含量（P〈0.01）。与AngⅡ10-6mol/L相比,血府逐瘀汤含药血清下调CF增殖指数和DNA合成,降低胶原含量（P〈0.05）,减少上清液中FN、HA和PCⅢ含量（P〈0.01）。结论：AngⅡ能够促进CF增殖及细胞外基质合成,具有促进心肌纤维化作用;血府逐瘀汤能改善心肌纤维化,机制可能与抑制AngⅡ诱导CF增殖,抑制细胞外基质胶原蛋白、HA、PCⅢ及FN合成有关。