熟地强筋合剂对大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响

目的:观察熟地强筋合剂在骨髓基质细胞向成骨分化过程中的作用。方法:采用体外培养大鼠骨髓基质细胞,分别观察各含药血清组碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原染色情况;取各组不同时间点培养液测定碱性磷酸酶比活性及骨钙素含量。结果:碱性磷酸酶染色强弱顺序为D组>C组>B组,Ⅰ型胶原染色强弱顺序为D组>C组>B组>A组,碱性磷酸酶比活性各加药组与对照组比较明显提高(P<0.05);各加药组与对照组比较BGP含量均明显提高。结论:熟地强筋合剂能促进大鼠骨髓基质细胞增殖,诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化。     

阿托伐他汀对骨髓基质细胞增殖及向成骨细胞分化的影响

目的比较不同浓度的阿托伐他汀对小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化、矿化成骨的影响。方法分别将10^-8、10^-7、10^-6mol／L的阿托伐他汀和空白药物加入传代培养的小鼠骨髓基质细胞，通过细胞形态学观察、细胞增殖率检测、碱性磷酸酶（ALP）检测和钙结节染色，比较药物在成骨细胞分化过程中对细胞增殖和分化的影响。结果阿托伐他汀可以剂量依赖性方式抑制骨髓基质细胞的增殖，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组较明显（均P〈0．05）。阿托伐他汀可以提高骨髓基质细胞ALP活性，培养10～22d，10^-7mol／L组和10^-6mol／L组ALP活性高于对照组和10^-8mol／L组（均P〈0．05）。矿化成骨染色显示在培养26d后，10^-6mol／L组染色明显深于其它各组。结论阿托伐他汀可促进骨髓基质细胞来源的成骨细胞的分化，抑制了细胞增殖，促进骨结节钙化。     

间断流体力学对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响

目的 观察间断流体力学刺激对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响。方法 多孔钙磷陶瓷载体中种植骨髓基质来源的成骨细胞,采用间断旋转细胞培养方法产生流体力学刺激。体外共同培养4、7和14d。利用定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术和生物化学方法检测成骨细胞显型蛋白（碱性磷酸酶,I型胶原,骨钙素,骨桥素,骨连接素,骨涎蛋白）的表达情况。静止细胞培养作为对照。结果 旋转细胞培养条件下,碱性磷酸酶活性和I型胶原mRNA表达水平明显增加,7d达到高峰。其他显型蛋白mRNA在4d时开始表达,7d达到高峰,14d开始下调。静止细胞培养条件下,碱性磷酸酶活性和I型胶原mRNA表达逐渐增加,14d达到最高。其他显型蛋白mRNA在7d时开始表达,14d达到最高。结论 间断旋转细胞培养方法产生流体力学刺激促进体外培养的骨髓基质来源的成骨细胞分化和功能发挥。     

条件培养液对兔骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响

目的 :观察条件培养液对兔骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响。　方法 :分离兔骨髓 ,培养骨髓基质细胞 ,传代细胞分别用标准培养液和加入 β 甘油磷酸钠 ,地塞米松和抗坏血酸制成的条件培养液培养 ,观察不同培养液下骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素含量。　结果 :在条件培养液下 ,骨髓基质细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素含量明显高于标准培养液下的含量。　结论 :条件培养液有助于骨髓基质细胞向成骨细胞的分化和增殖     

人骨髓基质细胞向神经细胞分化的方法学研究

目的改进采用人骨髓体外培养人骨髓基质细胞（hBMSCs），进行体外传代扩增，并探索体外诱导分化为神经元样细胞的方法。方法抽取人骨髓血，淋巴细胞分离液分离，DMEM／15％人血清培养传代。至第3～5代时加入巯基乙醇（BME），观察hBMSCs分化为神经元样细胞的形态学变化。结果该方法hBMSCs在体外可以实现数目扩增，在特定诱导剂的作用下向神经元样细胞分化。结论采用少量骨髓样本，既可培养获得充足的细胞量。可以满足定向诱导和细胞移植的需要。     

诱导兔骨髓基质细胞向神经干细胞分化的初步实验研究

目的：观察兔骨髓基质细胞体外培养的生长行为及增殖、分化情况，探讨由骨髓分离培养神经干细胞的可行性和有效性。方法：无菌条件下行骨穿术，密度梯度离心分离获取骨髓基质细胞，利用多种增殖、分化诱导因子和神经干细胞培养液进行培养、分化诱导，用免疫细胞化学方法进行鉴定。结朵：骨髓基质细胞在体外培养中能形成NESTIN抗原阳性的细胞克隆团，进一步分化，部分细胞胞体增大并出芽，逐渐发育成为较成熟的长突起细胞，长突起相互连接、交织成网并建立纤维联系。结论：骨髓基质细胞具有较强的自我更新能力和多向分化潜能，易于取材、体外培养和增殖，在一定诱导条件下可以生成神经干细胞。     

骨髓基质干细胞诱导分化为成骨细胞影响因子的研究进展

骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）,又称骨髓间充质干细胞,是存在于骨髓中非造血干细胞的另一种干细胞。自1968年Friendenstein利用BMSCs的粘附性特点,对其进行分离、培养,及多向分化潜能研究以来,BMSCs成为现代生物学和医学领域研究的热点。现普遍认为BMSCs是中胚层发育的早期细胞,具有多向分化潜能,     

雌二醇对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响

目的　研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其骨形态发生蛋白受体 (BMPR)ⅠA及核结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法　用 1,2 5 (OH) 2 D3和地塞米松(DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用RT PCR和Northernblot技术 ,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA表达的影响 ,以α 磷酸奈酚为底物测定细胞碱性磷酸酶的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果　E2能明显抑制骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA的表达 ,且呈剂量依赖性 ,并被Northernblot结果所证实。ALP活性随E2浓度增加而降低 ,细胞Ⅰ型胶原的合成量随E2浓度增加而减少。结论　E2能明显抑制体外培养的骨髓基质细胞分化过程中BMPR ⅠA及Cbfα1mRNA的表达 ,降低成骨细胞生成。     

大鼠骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化

目的:体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向神经元样细胞的分化。方法： 用DMEM培养液冲洗骨髓,收集骨髓细胞接种在培养瓶中体外扩增、纯化。用诱导剂诱导BMSCs分化为神经元样细胞。用免疫组化ABC法鉴定神经丝蛋白（NF-200）、微管相关蛋白（MAP-2）、神经元特异核蛋白（NeuN）、巢蛋白(Nestin) 、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、GAD和ChAT的表达。结果： BMSCs经诱导后,胞体增大,并伸出细长突起,与神经元形态相似。免疫组化显示大部分细胞NF-200,MAP-2,NeuN和Nestin表达阳性,(3±0.8)%的细胞GAD表达阳性,(5±0.3)%的细胞ChAT表达阳性,而GFAP 表达阴性。结论： BMSCs可被诱导分化为神经元样细胞,部分细胞可表达GAD与ChAT。     

骨髓基质细胞的体外培养和分化诱导

目的 :建立一种简单可靠的骨髓基质细胞 (BMSc)向成骨细胞转化的体外培养方法 ,探讨骨髓基质细胞向成骨细胞转化的机理。 方法:将兔 BMSc悬液进行体外培养 ,进行形态学观察和组织学检测。 结果:传代培养细胞的碱性磷酸酶 (AL P)阳性率达 80 %以上 ,表现为成骨细胞形态并形成钙结节。结论:地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素 C可促进 BMSc分化为成骨细胞 ,BMSc的分化和增殖是两个对立的状态。     

盐巴戟天与生巴戟天中水晶兰苷含量对比研究

目的:测定不同产地盐巴戟天与生巴戟天中水晶兰苷的含量。方法:采用HPLC法。色谱条件:色谱柱为phenomenon Cl8柱(250.0 mm×4.6 mm,5μm);甲醇-0.4%磷酸水溶液(5∶95²8.8∶71.2,15 min)为流动相;流速1 mL·min-1;检测波长237 nm;柱温30℃。结果:巴戟天盐制后水晶兰苷含量与生品比较降低15%。结论:盐制对巴戟天中的水晶兰苷含量有一定影响。     

荧光分光光度法测定巴戟天中蒽醌的含量

目的：建立荧光分光光度法测定中药巴戟天中蒽醌含量的方法,并初步比较不同产地巴戟天中蒽醌之间的含量差异性.方法：以丙酮为溶剂,1,8-二羟基蒽醌为对照品,在最大激发波长为425 nm,发射波长为513 nm处测定对照品及样品溶液的荧光强度.结果：在247.5~2970μg/L范围内,1,8-二羟基蒽醌溶液浓度与荧光强度呈现良好的线性关系（r=0.9995）;不同产地巴戟天的游离蒽醌含量范围为29.26~69.95μg/g,结合蒽醌含量为3714.59~5830.39μg/g.结论：荧光分光光度法测定巴戟天中蒽醌的含量,方法可靠、重复性好;不同产地巴戟天中游离蒽醌、结合蒽醌的含量有一定差异.     

巴戟天试管苗培养研究

本文报道了对我国著名的南药之一的巴戟天(Morinda officinalis How)试管苗培养的研究结果,为这种名贵药材的优良种苗的快速大量繁殖和抗性良种的选育提供了新途径。结果表明:(1)对巴戟天外植体(顶芽、腋芽、茎段和叶片)的较好的消毒方法是:外植体经自来水洗净→70%乙醇预处理5秒钟→0.1%HgCl_2溶液中消毒10至15分钟→无茵水漂洗5次,其消毒效果为70～75%,对外植体基本无损伤; (2)顶芽和腋芽的培养效果比茎段和叶片的培养效果好,因此应优先择选顶芽和腋芽为巴戟天试管苗的起始培养物; (3)试管苗的最佳培养程序为:经消毒的顶芽或腋芽在增殖培养基(MS+NAA0.5+BA6.0+GA。1.0+3%蔗糖,单位:mg/L.下同。)中培养40天后可分化出丛生的不定芽(分化率为86.7%),将这些不定芽转入生根培养基(1/2MS+IAA0.2+NAA0.4+1%蔗糖)中培养30天即可分化生根形成完整的巴戟天试管苗,其根分化率为84.6%。试管苗经过两周的沙培室内炼苗后即可移栽盆植,约1～2个月后即可移栽至露天土地种植,移栽成活率大干90%。     

骨髓成骨细胞在合成碳酸磷灰石表面的分化增殖研究

目的：研究骨髓基质细胞转化的成骨细胞在磷酸盐溶液浸泡法合成的碳酸磷灰石（fabricated carbonate apatite．CAp）上的分化增殖。方法：通过Ca（OH）：的碳酸化生成的CaCO3浸泡在60℃、1mol／L磷酸氢二钠盐溶液中14d后。合成具有优良机械性能的低结晶性B型CAp团块。应用骨髓成骨细胞作为实验工具,观察体外细胞在CAp及作为对照组的烧结羟基磷灰石（sintered hydroxide apatite,HAP）、CaCO3、Ca（OH）2上的生长情况,定量分析碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及骨钙素（osteocalcin,OC）在成骨过程中不同时期的表达,并通过扫描电子显微镜（SEM）对细胞形态进行观察。结果：在早期培养7h后,CAp上细胞贴壁率高于对照组;随后细胞不断增殖,在7d后生长细胞数目呈现为：烧结HAP〉CAp〉CaCO3,而成骨细胞分化的标志——ALP活性与OC水平的表达也呈同样的趋势。SEM结果显示黏附在以上三种材料上的成骨细胞形态无明显差异。结论：通过磷酸盐溶液浸泡法合成的CAp能够促进体外培养成骨细胞黏附与增殖,有利于细胞向成骨分化．促进骨形成．有望成为理想的人工骨材料．     

补骨合剂对体外培养骨髓基质细胞分化影响的观察

观察不同浓度的补骨合剂对体外培养骨髓基质细胞(MSC)分化的影响，探讨补骨合剂促进MSC分化的作用机理。检测不同浓度的补骨合剂对MSC分化过程中碱性磷酸酶(ALP)比活性和细胞内骨钙素(BGP)含量的影响，以及观察ALP和矿化结节染色情况，并与密钙息作对照。结果发现：补骨合剂有促进分化中的MSC分泌ALP、BGP的作用，从而加速MSC向成骨细胞分化，其作用原理与密钙息作用原理基本相同。     

原子力显微镜观察间充质干细胞向成骨细胞系分化过程中的表征变化

目的 通过对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stcm cell，MSC)向成骨细胞系转化过程中表征变化进行观察，以期更全面地了解MSC在体外的成骨分化过程。方法 将羊MSC进行体外诱导分化，进行组织学、免疫组化、X线衍射分析等检测及原子力显微镜观察。结果 诱导后的MSC碱性磷酸酶染色阳性率达90％以上，Ⅰ型胶原免疫组化和钙结节染色均呈阳性；诱导后细胞形成的结节样物中主要由羟基磷灰石组成；原子力显微镜观察见诱导后的MSC具有成熟的成骨细胞特性。结论 体外培养的MSC能被诱导成骨；运用原子力显微镜可以清晰地看到MSC在向成骨细胞分化过程中表征的变化。     

骨髓基质干细胞移植治疗脊髓损伤进展

脊髓损伤是脊柱骨折最严重的合并症，长期以来人们对脊髓损伤的治疗态度是悲观的，常规的治疗方法对脊髓损伤的治疗效果并不令人满意，骨髓基质细胞是骨髓内造血干细胞以外的非造血干细胞。近年研究发现这类细胞具有高分化潜能，有向神经细胞分化的能力，为脊髓神经损伤的修复提供了一条新的途径。     

巴戟天寡糖对获得性无助抑郁模型大鼠行为的影响

目的建立大鼠获得性无助模型口服给药途径评价药物抗抑郁作用的方法,并观察口服巴戟天寡糖在该模型上的抗抑郁效应.方法采用微机程序控制的大鼠穿梭箱反应仪,给予不可逃避的足底电击建立获得性无助模型,进行条件性回避反应训练,测定大鼠的逃避失败次数. 结果模型对照组动物的逃避失败次数比正常组动物显著增加(P <0.01),丙咪嗪90 mg/kg在获得性无助后第2天～第4天均显著减少动物逃避失败次数,与模型对照组比较差异显著(P <0.01或P <0.05),表明模型复制成功.在获得性无助后第3天和第4天,巴戟天寡糖100 mg/kg可以显著减少动物逃避失败次数(第3天:6.4±2.6 vs 18.3±3.2;第4天:7.0±3.1 vs 20.1±3.1,P <0.05),巴戟天寡糖50 mg/kg在第4天显著减少逃避失败次数(8.1±2.8 vs 20.1±3.1, P <0.05).结论在大鼠获得性无助模型上,可采用口服给药途径评价药物的抗抑郁作用,并且巴戟天寡糖在此模型上口服给药时具有抗抑郁活性.     

巴戟天寡糖对获得性无助抑郁模型大鼠行为的影响

目的建立大鼠获得性无助模型口服给药途径评价药物抗抑郁作用的方法,并观察口服巴戟天寡糖在该模型上的抗抑郁效应。方法采用微机程序控制的大鼠穿梭箱反应仪,给予不可逃避的足底电击建立获得性无助模型,进行条件性回避反应训练,测定大鼠的逃避失败次数。结果模型对照组动物的逃避失败次数比正常组动物显著增加(P<0. 01),丙咪嗪90mg/kg在获得性无助后第2天~第4天均显著减少动物逃避失败次数,与模型对照组比较差异显著(P<0. 01或P<0. 05),表明模型复制成功。在获得性无助后第3天和第4天,巴戟天寡糖100mg/kg可以显著减少动物逃避失败次数(第3天: 6. 4±2. 6vs18. 3±3. 2;第4天: 7. 0±3. 1vs20. 1±3. 1,P<0. 05),巴戟天寡糖50mg/kg在第4天显著减少逃避失败次数(8. 1±2. 8vs20. 1±3. 1,P<0. 05)。结论在大鼠获得性无助模型上,可采用口服给药途径评价药物的抗抑郁作用,并且巴戟天寡糖在此模型上口服给药时具有抗抑郁活性。     

补骨合剂对体外培养骨髓基质细胞的影响

为观察补骨合剂对骨髓基质细胞 ( MSC)增殖的影响 ,采用贴壁分离筛选法对 MSC进行形态学观察、生长曲线分析 ,用 MTT法检测补骨合剂对 MSC增殖的影响 ,结果发现补骨合剂刺激 MSC增殖与药物浓度有关 ,浓度为 1 0 0 μg/ml时达到最大效应 ,说明补骨合剂可以直接刺激 MSC增殖 ,使成骨细胞转化的数量增加 ,从而促进骨的形成