头孢羟氨苄分散片的人体药代动力学及相对生物利用度研究

目的:研究头孢羟氨苄(CDX)分散片的人体药代动力学和相对生物利用度.方法:选择20名男性健康志愿者,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,于紫外254 nm处测定单剂量(750 mg)口服CDX分散片试验制剂和CDX胶囊对照制剂后体内CDX的血药浓度.结果:CDX的体内动态过程呈一级吸收的一室开放模型,试验制剂和对照制剂的cmax分别为(24.16±2.79)和(23.25±2.91) μg/ml,tmax分别为(1.9±0.6)和(1.9±0.8) h,t1/2分别为(1.87±0.21)和(1.82±0.15) h,AUC0～10分别为(86.39±11.50)和(84.43±10.45) μg*h/ml,AUC0～∞分别为(89.15±12.23)和(87.33±11.43) μg*h/ml.CDX分散片的相对生物利用度为(102.10±6.00)％;选择cmax、AUC0～10和AUC0～∞进行比较,CDX分散片与CDX胶囊无显著性差异.结论:CDX分散片作为新剂型与CDX胶囊具有生物等效性.     

肾移植患者中麦考酚酸及其葡萄糖苷酸代谢物的稳态药动学

目的探讨肾移植患者中麦考酚酸(MPA)及其葡萄糖苷酸代谢物(MPAG)的药动学特征。方法12名肾移植患者口服麦考酚酸酯0.75g bid。采集术后第7-10天12h内11个时间点的血浆样本。HPLC法测定血浆中游离和总的MPA和MPAG浓度。计算MPA和MPAG的游离分数和药动学参数。结果MPA和MPAG的游离分数分别为96.50%±2%和65.40%±8%。总的和游离的MPA稳态主要药动学参数分别为tmax均为(1.92±0.95)h;cmax分别为(9.35±3.35)mg/L,(0.54±0.48)mg/L;AUC0-12分别为(20.24±6.54)mg.h.L-1,(0.73±0.52)mg.h.L-1;MRT0-12分别为(3.22±0.90)h,(3.13±0.99)h。总的和游离的MPAG稳态药动学参数:tmax均为(3.33±1.72)h;cmax分别为(97.33±32.56)mg/L,(29.92±8.46)mg/L;AUC0-12分别为(656.40±148.20)mg.h.L-1,(222.10±58.08)mg.h.L-1;MRT0-12分别为(5.52±0.42)h,(5.44±0.46)h。结论MPA个体间药动学差异大,以监测其游离浓度为佳。     

阿普唑仑血药浓度的RP-HPLC测定方法

目的建立阿普唑仑血药浓度的反相HPLC测定方法.方法固定相为ODS 色谱柱(粒径5 μm,150×3.9 mm ID);甲醇-0.02M pH=5.0的醋酸铵(60∶40)为流动相;流速为1.0 ml/min;检测波长为223 nm(阿普唑仑的最大吸收波长).结果本法最低检出浓度为5 ng/ml,线性范围为0.01～50 μg/ml,平均回收率为98.67%,日内和日间平均变异系数分别为2.44%和2.74%.结论用HPLC法测定血清中ALP的含量既简便又可行,可作为阿普唑仑血药浓度的测定方法.     

格列齐特胶囊人体生物等效性研究

目的 :采用高效液相色谱法测定格列齐特的血药浓度 ,进行两种格列齐特胶囊人体生物等效性比较研究。方法 :12位健康男性受试者采用自身交叉给药方案 ,分别单剂量口服 80mg试验品或对照品。结果 :试验品的主要药代动力学参数分别为AUC0～ 36=(10 0 .19± 10 .34) μg/ (ml·h) ,Cmax=(6 .5 9± 0 .5 9) μg/ml,Tpeak=(4 .33± 1.0 7)h ;对照品的参数分别为AUC0～ 36=(10 3 .41± 9.2 5 ) μg/ (ml·h) ,Cmax=(6 .75± 0 .6 0 ) μg/ml,Tpeak=(4 .5 8± 1.0 8)h ,两制剂的AUC0～ 36、Cmax及Tpeak均无显著性差异。试验品相对于对照品的生物利用度为 (96 .99± 6 .6 2 ) %。结论 :两制剂体内过程相仿 ,具有生物等效性     

不同剂量致敏原对小鼠过敏性哮喘模型的影响

目的:研究不同剂量致敏原对小鼠过敏性哮喘模型的影响.方法:用不同剂量的鸡卵蛋白(OVA)致敏激发BALB/c小鼠,复制哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、嗜酸粒细胞百分比,ELISA检测血清中OVA特异性抗体IgE、IgG2a和脾单核细胞培养上清中IL-4、IL-5、IL-12、IFN-γ的含量变化,常规病理切片观察肺内炎症情况.结果:10 μg组肺部炎症情况最明显,BALF白细胞总数(×105/ml)、嗜酸粒细胞百分比(％)、OVA特异性抗体IgE(U/ml)分别为(13.05±2.07,75.1±8.9和256.16±2.58),与0 μg组(2.78±0.21,0.5±0.5,3.16±0.75)、100 μg组(8.69±1.61,64.2±9.1,133.74±2.11)、1 000 μg组(4.17±0.36, 12.4±3.4, 32.07±1.96)相比差异性显著,且IL-4、IL-5升高以10 μg组明显,高剂量1 000 μg组IL-12、IFN-γ、IgG2a升高明显.结论:致敏原的剂量可能通过影响细胞因子的产生类型而影响小鼠哮喘模型表型的变化.     

RP-HPLC测定尿液中阿魏酸哌嗪的含量

目的 建立尿液中阿魏酸哌嗪含量的测定方法.方法 采用RP-HPLC法,色谱条件为:AlltechC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(35:65,pH3.8);流速1.0ml/min;检测波长310nm;柱温40℃结果阿魏酸哌嗪在0.06μg/ml-2.5μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),低、中、高三种浓度(0.5、1.0、2.0μg/ml)溶液,加样回收率分别为98.41%、99.85、98.65%,RSD分别为1.02%、0.98%、0.87%(n=5).结论 该方法能灵敏、准确的测定尿液中阿魏酸哌嗪的含量.     

格列吡嗪片人体相对生物利用度

目的 :研究格列吡嗪片在人体的药代动力学过程及其相对生物利用度。　方法 :格列吡嗪血药浓度用高效液相色谱法 (HPLC UV)检测 ,色谱柱 :LichrospherC 1 8(5 μm ,1 5 0mm× 4 .6mm) ;流动相 :甲醇∶0 .0 1mol/L醋酸盐缓冲液 (pH =4 .8) =(5 9∶4 1v/v) ;流速 :1ml/min ;检测波长 :2 2 5nm。 2 0名健康志愿者口服 1 0mg试验制剂或参比制剂。　结果 :血浆标准曲线在 2 5～ 1 0 0 0 μg/L范围内线性良好 (r =0 .9994 ) ,血样最低定量限为 2 5 μg/L ,平均绝对回收率为 89.84 % ,日内、日间变异 (RSD) <5 %。试验制剂和参比制剂的主要药动学参数为 :达峰时间Tmax分别为 (3.85± 1 .4 4 )h和 (3.76± 1 .1 3)h ;峰浓度Cmax分别为 (5 5 0 .80± 1 1 0 .1 9) μg/L和 (5 31 .1 5± 1 4 8.4 2 ) μg/L ;消除半衰期t1 /2 分别为 (3.5 7± 1 .1 1 )h和 (3.80± 1 .0 6 )h ;药时曲线下面积AUC0～ 1 5分别为 (35 0 2 .78± 6 35 .82 ) μg/ (L·h)和 (32 1 4 .2 3± 5 90 .4 6 ) μg/ (L·h) ;AUC0～∞ 分别为 (386 8.2 2± 6 99.93) μg/ (L·h)和 (35 93.94±6 38.6 0 ) μg/ (L·h)。试验制剂与参比制剂的相对生物利用度F0～ 1 5、F0～∞ 分别为 (1 1 0 .6± 1 9.8) %和 (1 0 8.8± 1 7.9) %。　结论 :试验制剂     

HPLC测定豨莶片剂中奇壬醇的含量

目的:建立豨莶片剂中奇壬醇的含量测定方法.方法:采用HPLC,色谱条件为:Phenomenex C18柱,乙腈-0.05 mol/L KH2PO4(125∶75)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长215 nm.结果:奇壬醇在0.133～2.660 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率为99.4%,RSD=2.12%;测定3批豨莶片剂中奇壬醇的含量分别为109.46,105.91,107.41 μg/片.结论:HPLC简便、准确、可控,可作为豨莶片剂的定量检测方法.     

阿托伐他汀联合二甲双胍对急性冠脉综合征患者TF的影响

目的:研究阿托伐他汀联合二甲双胍对急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者血清组织因子(tissue factor,TF)的影响?方法:首先取10名ACS患者空腹静脉血进行人单核细胞分离?培养,分别予以终浓度为0?0.1?1.0?10.0 μmol/L阿托伐他汀,0?0.1?1.0?10.0 μmol/L二甲双胍,以及联合应用1.0 μmol/L阿托伐他汀和1.0 μmol/L二甲双胍进行干预,用酶联免疫吸附试验检测培养细胞膜TF水平?其次选取48名ACS患者根据服用药物情况分为未用药物干预组,阿托伐他汀组,二甲双胍联合阿托伐他汀组,检测外周血中TF含量,同时检测患者空腹血脂?血糖?胰岛素?C肽?C反应蛋白等相关指标?结果:阿托伐他汀组在各浓度(0,0.1,1.0,10.0 μmol/L)时TF测定值分别为(5.62±1.09)pg/ml?(4.35±0.75)pg/ml?(3.70.±0.91)pg/ml?(2.68±0.67)pg/ml,二甲双胍组在各浓度(0?0.1?1.0?10.0 μmol/L)时为(5.62±1.09)pg/ml?(5.12±0.88)pg/ml?(3.97±0.46)pg/ml?(3.02±0.88)pg/ml,阿托伐他汀联合二甲双胍组在0及各1.0 μmol/L干预时TF所测浓度为(5.62±1.09)pg/ml?(1.98±0.86)pg/ml?在48名ACS患者外周中,阿托伐他汀组?联合使用二者组与未用药物干预组TF分别为(88.25±21.55)pg/ml?(57.63±23.75)pg/ml?(216.28±95.42)pg/ml,3组之间差异有统计学意义(P < 0.05),同时血糖及血脂等相关指标也有统计学差异(P < 0.05)?结论:阿托他汀或二甲双胍均可降低ACS外周血单核细胞合成TF的表达,并呈现浓度依赖性,在ACS患者中阿托伐他汀联合二甲双胍可改善血脂异常,提高胰岛素敏感性,协同降低ACS患者血循环中TF表达?     

氟氧头孢健康人体内药代动力学研究

目的:研究氟氧头孢注射剂在健康人体内的药代动力学.方法:8 名健康志愿者单剂量静脉滴注氟氧头孢1 g,采用高效液相色谱(HPLC)法测定血浆和尿中药物浓度.结果:滴注完成即刻浓度(cmax)为(56.15±13.16) μg/ml,末端相消除半衰期(t1/2β)为(1.29±0.32) h,分布容积(Vc)为(13.11±2.06) L,清除率(Cls)为(16.02±1.88) L/h,AUC为(64.86±4.93) μg*h/ml.结论:氟氧头孢体内过程符合二室开放模型,主要以原形经肾脏排出体外,8 h累积尿排百分率为(79.39±4.01)％.     

麦考酚酸对翼状胬肉成纤维细胞抑制作用的实验研究

目的研究麦考酚酸(MPA)对翼状胬肉组织成纤维细胞(PFB)活性的影响。方法体外培养PFB及Tenon囊成纤维细胞(TFB),以丝裂霉素C(MMC)为对照,MTT比色法、5-溴脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-deoxyuridine,Brdu)掺入法观察MPA对PFB的生长抑制作用,以流式细胞术等检测MPA对PFB、TFB的细胞毒性作用、细胞周期及凋亡的影响。结果 MPA可显著抑制PFB、TFB的增殖,呈时间、剂量依赖性,且不引起TFB的凋亡或坏死。MPA作用后,PFB的G0/G1期比例增加,S期及G2/M期比例减少。结论 MPA对PFB有显著的抑制作用,但不引起TFB的凋亡或坏死,且主要抑制在PFB的DNA合成期。     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠模型肾组织氧化应激的影响

目的探讨霉酚酸酯(MMF)对糖尿病大鼠模型肾组织氧化应激的影响.方法建立单侧肾切除糖尿病模型,大鼠随机分为对照组、糖尿病组与糖尿病MMF 10 mg/(kg*d),灌胃为给药组,每组 10只.8周末观察体重、肾重、肾重/体重及24 h尿白蛋白排泄率 (AER)变化,并检测肾组织与尿丙二醛(MDA)含量及肾组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)与谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性.结果 MMF给药组可明显抑制糖尿病大鼠模型肾重、肾重/体重、AER的增加(P<0.05, P<0.01).与对照组相比,糖尿病模型组肾组织及尿MDA含量明显增加(P<0.01),肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性明显下降(P<0.05, P<0.01);MMF给药组可明显降低肾组织及尿MDA含量,提高肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性(P<0.05).结论 MMF对糖尿病大鼠肾脏有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾组织氧化应激有关.     

霉酚酸对致耐受性树突状细胞延长移植肾存活效应的影响

目的探讨霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)对致耐受性树突状细胞(dendritic cells,DC)延长移植肾存活效应的影响。方法以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;在供体DC培养过程中加入3种浓度MPA,以CTLA-4Ig基因转染DC使之成为表达CTLA-4Ig的致耐受DC;观察DC形态变化并检测受体脾细胞对上述DC的刺激反应。将未处理的致耐受DC以及0.05μmol/L MPA处理DC于肾移植前72h分别注入受体(组1、组2),注入供体DC的受体为组3,未注入DC的受体为对照(组4),观察受体血肌酐变化和移植肾存活时间。结果MPA组DC形态老化延缓,脾细胞对3种浓度MPA处理的DC刺激反应均显著低于对未经MPA处理致耐受DC的刺激反应;与对照相比,组1、组2移植肾存活时间显著延长,差异有统计学意义(P<0.01),其中组2延长更为明显〔(81.1±14.6)d vs(8.9±0.8)d,P<0.001〕,组3存活时间显著缩短(5.3±0.6d,P<0.05)。术后45d后组2血肌酐水平明显低于组1。结论MPA预处理可降低致耐受DC的抗原提呈能力,提高其延长移植肾存活的效能。     

多模式部分肝移植关键技术及其临床应用

针对目前全世界肝脏移植的瓶颈问题——供肝匮乏,课题组提出了一种新的肝移植方式——部分肝移植,取得了一系列原创性成果。与国内外同类研究比较,主要有以下发现和创新点:①确立了对移植物的选择标准和右半肝移植物静脉回流的重建方式;②比较了带或不带肝中静脉的右半肝移植物的活体肝移植的术后结果,确定了带肝中静脉的右半肝移植物的安全性和必要性;③首次在国内开展劈离式肝移植治疗终末期肝病患者,并保持国内单中心最大病例数;④首次在国内开展不同血型两供一受活体肝移植并获成功,该手术方式为受体提供了更大重量的肝脏,最大限度地保证了供体的安全;⑤在国际上率先报道了中国肝移植人群免疫抑制剂霉酚酸药代动力学变化规律,首次建立了霉酚酸完全暴露的简化计算公式,并首次比较了活体肝移植和全肝移植霉酚酸药代动力学的差异。该研究成果获2010年国家科技进步二等奖。     

HPLC法测定肾脏移植患者血浆中霉酚酸浓度及其药代动力学

目的:HPLC法测定肾脏移植患者血浆霉酚酸(MPA)浓度,研究其在体内的药代动力学特征. 方法:Discover C18(250.0 mm×4.6 mm,5 μm)为分析柱,磷酸盐缓冲液∶乙腈(45∶55)为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长250 nm,柱温30℃,进样量100 μL. 根据9例肾脏移植患者口服骁悉(又霉酚酸酯,MMF),由标准曲线方程计算血浆中MPA的浓度和药代动力学参数. 结果:当测定方法线性范围为0.0995～27.8516 mg/L时,峰面积与浓度呈良好的线性关系(r=0.9997),最低检出浓度为5 μg/L,方法学平均回收率分别为96.30%,97.82%和98.62%,日内精密度和日间精密度分别为3.6%,1.8%,0.5%和5.6%,3.2%,1.3%. 药动学参数表明MPA人体过程符合单室开放模型,Tmax,Cmax和AUC(0-12 h)分别为0.93 h,10.24 mg/L和31.23 mg/(h·L). 结论:该方法简单、快速、准确,可应用于临床脏器移植患者血浆中MPA的常规监测.     

霉酚酸对21例系统性红斑狼疮患者细胞因子释放及Th细胞亚群的作用研究

目的：研究霉酚酸(MPA)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血Th细胞亚群平衡的作用。方法：分离2l例SLE患者及14例健康对照的外周血单个核细胞(PBMCs)，分别加或不加MPA培养48h，用ELISA法测培养上清中IL-10、IL-12和IFN-γ的水平，用三色流式细胞术检测培养细胞中CD4^ IFN-γ^ IL-10-T细胞、CD4^ IFN-γ-IL-10^ T细胞及CD4^ IFN-γ-IL-10^ T细胞百分率。结果：SLE患者PBMCs培养上清中IL-10、IL-12、IFN-γ等细胞因子水平显著升高，MPA可使SLE患者PBMCs自发产生或PHA刺激产生的IL-10、IL-12和IFN-γ的水平显著降低；SLE患者培养的PBMCs中CD4^ IFN-γ^ IL-10^ T细胞亚群和CD4^ IFN-γ^ IL-10^ T细胞亚群百分率显著增高，而MPA可导致用或未用PHA刺激培养的PBMCs中CD4^ IFN-γ^ IL-10-T细胞、CD4’IFN-γ-IL-10^ T细胞及CD4^ IFN-γ^ IL-10^ T细胞阳性率下降，尤其是可使SLE异常升高的CD4^ IFN-γ-IL-10^ T细胞亚群和CD4^ IFN-γ^ IL-10^ T细胞亚群百分率显著降低。结论：MPA治疗SLE的疗效作用可能与抑制IL-10、IL-12和IFN-γ等细胞因子的异常释放及抑制CD4^ IFN-γ^ IL-10-T细胞、CD4^ IFN-γ-IL-10 T细胞及CD4^ IFN-γ^ IL-10^ T细胞亚群的活化增殖有关。     

合并用药对 MPA 有限采样法公式拟合的影响

目的：考察合并用环孢素或者 FK506时,霉酚酸有限采样法公式拟合的差异。方法：采用高效液相法检测20例患者服用 MMF 后0～12h 内不同时间点 MPA 浓度,其中10例患者合并用 CsA,另外10例患者合用 FK506,分别拟合两组患者 MPA 的有限采样法公式以及总体样本的有限采样法公式,比较其差异。结果：单一样本拟合时,单个采血点的浓度与 AUC 的相关度均较差。多点拟合时,总样本中,3,1.5,6,8h 四个时间点血浆浓度拟合效果最好,其 r 2为0.989;而 CsA 组中,0.5,1.5,3三个采血点和0,0.5,1.5,3四个采血点拟合效果较好,r 2分别为0.991和0.993,FK506组,0,3,4,8四个采血点拟合效果拟合效果较好,r 2为0.993。CsA 组与 FK506组拟合差异较大。结论：合并用药对 MPA 有限采样法的公式影响较大,有限采样法拟合应注意合并用药对药物药动学的影响。     

肾移植受者霉酚酸治疗药物监测

目的研究霉酚酸酯(MMF)的代谢产物霉酚酸(MPA)的药代动力学特征,并形成简化的MPA血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)计算公式。方法64例肾移植受者均接受MMF 2 g/d联合环孢素A(CsA)和强的松的三联免疫抑制治疗。在术后2周采用HPLC法,测定服药前、服药后0.5、1、1.5、2、4、6、8、10、和12 h的血浆MPA浓度。采用药理学专用软件计算MPAAUC0-12 h,并以多元逐步回归分析的方法得出适合中国人群的MPA AUC0-12 h简化计算公式。结果64例肾移植受者的药代动力学参数有显著的个体差异。MPA AUC0-12 h平均值为(54.62±14.51)mg.h/L(24.01~02.3 mg.h/L)。MPA谷值浓度(C0)与MPA AUC0-12 h的相关性差(r2=0.03)。采用3个时间点取样(C0.5、C2、C8),得出MPA AUC的简化计算公式:AUC=10.96 0.56×C0.5 2.18×C2 7.86×C8。该公式MPA AUC的预测值与MPA AUC0-12 h的相关性好(r2=0.87);预测值的绝对误差为(7.41±6.23)%(0.27%~34.7%);在60例(93%)病人,AUC预测误差在MPA AUC0-12 h的±15%;B land和A ltm an分析显示平均预测误差为±5.24 mg.h/L。结论本组肾移植受者中,MPA的药代动力学参数呈现较大的个体差异,并有异于白种人群;根据本组临床监测数据,得出取样点少(3个时间点)、预测效果好的MPA AUC简化计算公式,并推荐应用于中国肾移植受者MPA的治疗药物检测。     

高效液相色谱荧光检测法测定人血浆中游离麦考酚酸浓度

目的　建立HPLC荧光检测法测定人血浆中游离麦考酚酸浓度。方法　血浆样品经超滤后直接进样。6名肾移植患者口服麦考酚酸酯片7d后,用高效液相色谱荧光检测法测定血浆中游离麦考酚酸浓度。结果　游离麦考酚酸血浆浓度在5～10 0 0 μg/L范围内线性关系良好。麦考酚酸的批内、批间RSD均<10 % ,最低定量浓度为5 μg/L。结论　该法快速、灵敏、准确,可用于游离麦考酚酸的体内分析及常规的治疗药物监测。